Caroline Valente dissertação de mestrado - Universidade Federal ...

5.7 IDENTIFICAÇÃO DA PUMP EM MITOCÔNDRIAS ISOLADAS DE A.
angustifolia
A PUMP é uma proteína integral de membrana que dissipa o gradiente
eletroquímico de prótons sem haver a síntese de ATP (VERCESI et al., 1995; LALOI
et al., 1997). Essa proteína é estimulada por ácidos graxos e inibida por
nucleotídeos de purina como o ATP (JESEK et al., 1996; VERCESI et al., 1998) e
tem sua expressão aumentada no estresse (LALOI et al., 1997; MAIA et al., 1998;
CALEGARIO et al., 2003; PAVENTI et al., 2005). A PUMP foi identificada em
estudos funcionais ou por imunodetecção em vários órgãos e tecidos de
aproximadamente 30 espécies de plantas superiores, incluindo mono e
dicotiledôneas e plantas C3, C4 e CAM (JEZEK et al., 1998, 2000; TRONO et al.,
2004).
A identificação da PUMP foi feita através da técnica de western blot conforme
descrito no item 4.8 de Material e Métodos. Para a verificação da ocorrência da
PUMP em mitocôndrias de células embriogênicas de A. angustifolia utilizou-se o
anticorpo policlonal de Arabidopsis thaliana (AtPUMP), o qual tem sido utilizado na
identificação da PUMP de diferentes espécies de plantas como do tubérculo de
batata (CALEGARIO et al., 2003), tomate (ALMEIDA et al., 2002) e do tubérculo de
alcachofra de Jerusalém (PAVENTI et al., 2006). A presença da PUMP em
mitocôndrias de plantas demonstra que as UCP provavelmente envoluiram de um
gene ancestral comum, divergindo entre os animais, fungos e plantas (MAIA et al.,
1998; SLUSE & JARMUSZKIEWICZ, 2002).
A Figura 12 mostra a eletroforese do extrato mitocondrial de araucária e
batata. A concentração utilizada de extrato de proteína mitocondrial de A.
angustifolia e tubérculo de batata (Solanum tuberosum L., cv. Bintje) foi 100 μg. Na
Figura 13 está demonstrado o western blot da PUMP, observa-se a PUMP de A.
angustifolia visualizada em uma única banda com peso molecular maior que 33 kDa.
A banda da PUMP de mitocôndrias de tubérculos de batata estressada pelo frio a
4°C durante 5 dias e não sujeita a estresse foram utilizadas como controles
positivos.