Caroline Valente dissertação de mestrado - Universidade Federal ...

5.4 EFEITO DA FLAVONA SOBRE O POTENCIAL ELÉTRICO DE MEMBRANA
(Δψ) EM MITOCÔNDRIAS ISOLADAS DE A. angustifolia
A passagem de elétrons pelos complexos da cadeia respiratória induz o fluxo
de prótons da matriz para o espaço intermembranas, formando um gradiente
eletroquímico de prótons, ΔμH+, que direciona a síntese de ATP, a partir de ADP e
fosfato inorgânico, através da ATP – sintase (NICHOLLS & FERGUSON, 2002). Os
experimentos anteriores de consumo de O2 (Figuras 7 e 8) demonstraram que a
flavona promove uma importante inibição no transporte de elétrons que poderá
comprometer a formação do Δψ. Com o objetivo de avaliar a intensidade deste
comprometimento, os efeitos da flavona sobre o potencial de membrana foram
determinados em mitocôndrias isoladas de células embriogênicas de A. angustifolia,
utilizando safranina O como sonda fluorescente. Em mitocôndrias não energizadas,
a safranina, que possui carga positiva, distribui-se nos dois lados da membrana
mitocondrial interna. Com a formação do potencial de membrana esse corante
desloca-se do espaço intermembranas para a matriz mitocondrial, interagindo com
os sítios aniônicos, formando paliçadas. Este fenômeno pode ser acompanhado pela
diminuição da fluorescência emitida pela safranina O, permitindo estabelecer uma
relação linear entre o valor de Δψ, resultante da energização da membrana, e a
variação da fluorescência, resultante da ligação das moléculas de safranina no
interior da mitocôndria (ÅKERMAN & WIKSTRÖM, 1976).
As Figuras 9 e 10 mostram a formação do potencial de membrana (Δψ) a
partir da energização da mitocôndria por NADH e malato/glutamato,
respectivamente. Na Figura 9A, onde o Δψ foi gerado pela adição de mitocôndrias a
um meio contendo rotenona e NADH, adições sucessivas de flavona 250 μmol.L -1
provocaram uma queda do potencial elétrico de membrana. O colapso do potencial
de membrana foi provocado pela adição de FCCP (Figura 9A). Na Figura 9B, em um
meio contendo NADH, mas sem a presença de rotenona, o Δψ também foi gerado
pela adição de mitocôndrias, adições sucessivas da flavona 250 μmol.L -1 também
causaram uma despolarização similar à mostrada em (A). Também nesse caso, o
colapso do Δψ foi promovido pela adição de FCCP. A queda do potencial de
membrana destes experimentos é referente ao efeito inibitório da flavona sobre a