Caroline Valente dissertação de mestrado - Universidade Federal ...

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À grande amiga Francine Valenga, pelos conselhos, convivência, amizade duradoura e paciência, até quando eu não me agüentava. À colega Amanda do Rocio por todo o seu carinho e atenção dedicados. Por seu ombro amigo, seus conselhos e trocas de experiências. Agradeço a todas as professoras do laboratório, pela atenção, compreensão, conselhos e pela paciência. Agradeço também aos professores, funcionários, colegas do laboratório e do departamento, especialmente aos alunos de iniciação científica Patrícia Pasqualim e Thiago Jacomasso pela ajuda durante o repique das células, isolamento das mitocôndrias e experimentos realizados. Também agradeço a aluna de doutorado Ana Claudia e ao Luciano por toda ajuda dedicada nos experimentos de western blot. Agradeço a Coordenação da Pós-Graduação em Bioquímica por todo o apoio concedido. Agradeço também o apoio financeiro da Capes e CNPq. Às professoras da graduação da PUCPR, Drª. Maria Lúcia W. Klüppel e Drª. Patrícia Maria Stuelp Campelo, por me mostrar e ensinar o maravilhoso mundo da bioquímica e pelo grande incentivo à pesquisa. E a querida técnica Cleide, sempre pronta a ajudar, obrigada por tudo. Aos meus tios Aires e Vera, minha segunda família, por seu grande afeto e amizade demonstrados durante todos esses anos. momentos. A toda a minha família que sempre me apoio e incentivou em todos os Ao Alessandro Jarabiza, pelo amor, carinho e todo apoio incondicional em todos os momentos da minha vida, só me resta agradecer.
SUMÁRIO LISTA DE TABELAS............................................................................................ vii LISTA DE FIGURAS............................................................................................. viii LISTA DE ABREVIATURAS................................................................................. x RESUMO............................................................................................................... xii ABSTRACT........................................................................................................... xiii 1 INTRODUÇÃO................................................................................................... 01 1.1 Araucaria angustifolia...................................................................................... 01 1.2 MITOCÔNDRIAS DE PLANTAS..................................................................... 04 1.2.1 NAD(P)H Desidrogenases Alternativas........................................................ 07 1.2.2 Oxidase Alternativa....................................................................................... 08 1.2.3 Proteína Desacopladora de Plantas............................................................. 10 1.3 ESTRESSE...................................................................................................... 12 1.4 FLAVONÓIDES............................................................................................... 13 2 JUSTIFICATIVAS............................................................................................... 18 3 OBJETIVOS....................................................................................................... 20 3.1 OBJETIVO GERAL.......................................................................................... 20 3.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS........................................................................... 20 4 MATERIAL E MÉTODOS................................................................................... 21 4.1 REAGENTES................................................................................................... 21 4.2 CULTIVO E MANUTENÇÃO DAS CULTURAS DE CÉLULAS EMBRIOGÊNICAS DE Araucaria angustifolia....................................................... 4.3 ISOLAMENTO DE MITOCÔNDRIAS DE Araucaria angustifolia..................... 22 4.4 ISOLAMENTO DE MITOCÔNDRIAS DE Araucaria angustifolia TRATADAS PELO FRIO E PELO CALOR................................................................................ 4.5 DETERMINAÇÃO DA CONCENTRAÇÃO DE PROTEÍNAS.......................... 23 4.6 DETERMINAÇÃO DO CONSUMO DE OXIGÊNIO......................................... 25 4.7 DETERMINAÇÃO DO POTENCIAL ELÉTRICO DE MEMBRANA (Δψ)......... 25 4.8 WESTERN BLOT............................................................................................ 26 4.8.1 Eletroforese de Proteína............................................................................... 26 4.8.2 Transferência das Proteínas......................................................................... 26 21 23
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