Caroline Valente dissertação de mestrado - Universidade Federal ...

5 RESULTADOS
5.1 DETERMINAÇÃO DO CONTROLE RESPIRATÓRIO EM MITOCÔNDRIAS
ISOLADAS DE A. angustifolia
O controle respiratório in vivo representa uma função bastante complexa e
seus valores variam entre mitocôndrias de diferentes tecidos e também em
condições metabólicas distintas para as mesmas mitocôndrias.
A adição de mitocôndrias a um sistema contendo um eletrodo de oxigênio,
capaz de monitorar variações de oxigênio do meio, permite a determinação do
consumo de oxigênio em mitocôndrias isoladas (in vitro), quando em um meio de
reação adequado contendo substratos oxidáveis.
A adição de mitocôndrias a este meio isotônico, tamponado, e na presença de
fosfato (Pi) e substrato, dá inicio a um lento consumo de oxigênio em resposta à
respiração mitocondrial (estado de repouso). A passagem de elétrons pela cadeia
respiratória permite a saída de H + através da membrana mitocondrial interna,
formando um gradiente eletroquímico de prótons, ficando esta membrana com carga
negativa internamente (Δψ) e com um gradiente de pH (ΔpH), ácido do lado externo.
A adição de ADP permite a síntese de ATP pela ATP – sintase acoplada ao retorno
de H + através da membrana interna (estado 3). Quando todo o ADP é consumido há
o retorno ao estado 4. Novas adições de ADP repetem a seqüência de eventos.
No experimento representado pela Figura 6A observa-se o consumo de
oxigênio em mitocôndrias isoladas de células embriogênicas de A. angustifolia,
adicionadas ao meio de reação padrão descrito no item 4.6 do Material e Métodos,
respirando com malato/glutamato como substrato, na presença de fosfato. A adição
de 160 nmol de ADP permitiu o cálculo do coeficiente de controle respiratório (CCR).
Este, foi determinado pela razão entre as velocidades de consumo de oxigênio,
velocidade esta que, pela adição de ADP variou de 50 nmol O2.min -1 .mg -1 (estado 3)
para 16 nmol O2.min -1 .mg -1 após o consumo de todo o ADP adicionado (estado 4).
Após novas adições de ADP foram observados novamente os estados 3 e 4 da
respiração, evidenciando a capacidade fosforilativa das mitocôndrias.