Caroline Valente dissertação de mestrado - Universidade Federal ...

diferença no coeficiente de extinção do citocromo c (red-ox) a 550 nm de 19.000
mol.L -1 . cm -1 (KEYHANI & KEYHANI, 1975).
4.11 ANÁLISES MICROSCÓPICAS DAS CÉLULAS EMBRIOGÊNICAS DE
Araucaria angustifolia
As culturas das células embriogênicas de A. angustifolia foram submetidas ao
estresse pelo frio por 24h e por 48h a uma temperatura de 4 ± 1ºC em uma sala
refrigerada, na ausência da luz e no estresse pelo calor por 4h na estufa a 43 ± 1ºC
e à 12h em uma estufa a 37 ± 1ºC. Posteriormente, estas células, e também aquelas
não submetidas a estresse foram analisadas por meio de coloração com carmim
acético (1%) e azul de Evans (0,5%) de acordo com Durzan, (1988).
Em uma pequena quantidade de massa celular contendo as células
suspensoras e embrionárias, foram adicionadas gotas de azul de Evans (0,1%)
(peso/volume) e foi deixado descansar por 2 a 3 minutos, em lamina de vidro ou
relógio.
Retirou-se o excesso de azul de Evans e foram adicionadas gotas do carmim
acético (2%) (peso/volume) pelo mesmo período de tempo. Após a retirada do
excesso de corante, parte do material foi transferido para uma lâmina, colocou-se a
lamínula, e as células foram analisadas através de um microscópico óptico Quimis,
modelo Motic BA200 nos aumentos de 4x e 10x e registradas em câmera digital
Sony Cybershot DSC-W7 7.2 megapixels.