Caroline Valente dissertação de mestrado - Universidade Federal ...

4 MATERIAIS E MÉTODOS
4.1 REAGENTES
HEPES, EGTA, EDTA, glutamato de sódio, succinato de sódio, NADH, ATP,
ADP, FCCP, rotenona, BSA, BSA essencialmente desprovido de ácidos graxos,
citocromo c, SHAM, piruvato, safranina O, cisteína, flavona, mio – inositol, ácido
nicotínico, piridoxina – HCl, glicina, tiamina – HCl, glutamina, 2,4 – D, BAP, cinetina
e caseína hidrolisada foram adquiridos da Sigma Chemical Co ® . (EUA).
Hidróxido de potássio, sacarose, cloreto de potássio, fosfato monobásico de
potássio, fosfato dibásico de potássio, ácido clorídrico e DMSO foram adquiridos da
Merck ® do Brasil.
Os demais reagentes utilizados foram do melhor grau analítico
comercialmente disponível. As soluções dos reagentes foram preparadas com água
deionizada através de sistema purificador Millipore MilliQ ® .
O anticorpo policlonal de Arabidopsis thaliana (AtPUMP) foi gentilmente
doado pelo professor Dr. Aníbal Eugênio Vercesi e Dr. Jiri Borecký do Laboratório de
Bioenergética da Faculdade de Ciências Médicas da Universidade Estadual de
Campinas.
A cultura inicial das células embriogênicas de A. angustifolia, originada a partir
do tecido de embriões zigóticos foi gentilmente cedida pelo professor Dr. Miguel
Pedro Guerra do Laboratório de Fisiologia do Desenvolvimento e Genética Vegetal
no Departamento de Fitotecnia no Centro de Ciências Agrárias na Universidade
Federal de Santa Catarina.
4.2 CULTIVO E MANUTENÇÃO DAS CULTURAS DE CÉLULAS
EMBRIOGÊNICAS DE Araucaria angustifolia
As culturas embriogênicas foram originadas a partir de tecido de embrião
zigótico de A. angustifolia, e foram cultivadas em meio de cultura básico sólido BM
(GUPTA & PULLMAN, 1991), suplementado com: mio–inositol 55 mmol.L -1 , ácido
nicotínico 8 nmol.L -1 , piridoxina–HCl 5 nmol.L -1 , glicina 50 nmol.L -1 , tiamina–HCl 6