As novas tecnologias ao serviço da medicina veterinária - Ângela ...
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“<strong>As</strong> Novas Tecnologias <strong>ao</strong> Serviço<br />
<strong>da</strong> Medicina Veterinária”<br />
<strong>Ângela</strong> Xufre<br />
Formação OMV<br />
16-17 de Outubro de 2010<br />
A Ciência <strong>ao</strong> Serviço <strong>da</strong> Medicina Veterinária
LABORATÓRIO DE REFERÊNCIA<br />
POLÍTICA DE QUALIDADE - DNATECH<br />
Equipamento Laboratorial Topo de Gama<br />
Fiabili<strong>da</strong>de e Rapidez na Execução <strong>da</strong>s Análises<br />
Rigoroso Controlo de Quali<strong>da</strong>de Interno e Externo<br />
Análises em regime de urgência:<br />
Aparelhos de “backup”<br />
Protocolo de <strong>As</strong>sistência Técnica<br />
Equipa Multidisciplinar nas diferentes Áreas de Intervenção<br />
Atendimento Técnico Especializado<br />
Maior Número de Áreas de Intervenção<br />
Eleva<strong>da</strong> Casuística (1500 análises/dia)<br />
Desenvolvimento de Novas técnicas e Metodologias de Análise<br />
Gestão do Negócio - “Laboratório-Paciente”<br />
A Ciência <strong>ao</strong> Serviço <strong>da</strong> Medicina Veterinária
LABORATÓRIO DE REFERÊNCIA<br />
VANTAGENS FINANCEIRAS - DNATECH<br />
Aquisição Equipamento Laboratorial:<br />
Contra-consumo “Upgrade” Equipamento Laboratorial<br />
Aquisição de reagentes mais vantajosas<br />
Controlo de Quali<strong>da</strong>de<br />
Contratos de Manutenção/<strong>As</strong>sistência Técnica<br />
Actualização do Stock semanal<br />
Equipa Técnica <strong>As</strong>socia<strong>da</strong> (“Know-How”)<br />
Em caso de repetição <strong>da</strong> análise o custo está associado <strong>ao</strong> laboratório<br />
Aumento Relação Comercial/ Acordos Comerciais Vantajosos<br />
A Ciência <strong>ao</strong> Serviço <strong>da</strong> Medicina Veterinária
EQUIPAMENTO LABORATORIAL - DNATECH<br />
HEMATOLOGIA BIOQUÍMICA<br />
Horiba ABX PENTRA 120<br />
120 Hemogramas/hora<br />
Aferido para as diferentes espécies<br />
Calibradores e controlos em ca<strong>da</strong> turno<br />
10% de repetições aleatórias<br />
Confirmação por esfregaço<br />
Apoio Técnico Especializado<br />
Horiba ABX PENTRA 400<br />
400 parâmetros/hora<br />
Aferido para minimizar hemolise<br />
Calibradores e controlos em ca<strong>da</strong> turno<br />
10% de repetições aleatórias<br />
Vali<strong>da</strong>ção de resultados<br />
Apoio Técnico Especializado<br />
A Ciência <strong>ao</strong> Serviço <strong>da</strong> Medicina Veterinária
EQUIPAMENTO LABORATORIAL - DNATECH<br />
MICROBIOLOGIA<br />
Vitek 2 compact - Biomérieux<br />
Laboratórios isolados com condições ambientais<br />
controla<strong>da</strong>s: Bacteriologia e Micologia<br />
Protocolos desenvolvidos para ca<strong>da</strong> tipo de<br />
amostras (Urinas, Fezes, Exsu<strong>da</strong>dos, etc.)<br />
Automatização <strong>da</strong> identificação de colónias<br />
Automatização de TSA<br />
Apoio Técnico Especializado<br />
Tosoh AIA-360<br />
ENDOCRINOLOGIA<br />
200 parâmetros/hora<br />
Aferido para as diferentes espécies<br />
Calibradores e controlos em ca<strong>da</strong> turno<br />
15-20% de repetições aleatórias<br />
Monitorização de testes de supressão e<br />
estimulação<br />
Apoio Técnico Especializado<br />
A Ciência <strong>ao</strong> Serviço <strong>da</strong> Medicina Veterinária
APOIO TÉCNICO ESPECIALIZADO - DNATECH<br />
SEROLOGIA/IMUNOLOGIA<br />
Centenas de despistes diários:<br />
Leishmaniose, Hemoparasitas<br />
FIV, FeVL e PIF<br />
Controlos vacinais e despiste:<br />
Controlo Quali<strong>da</strong>de:<br />
Esgana, Parvovirus<br />
20% de repetições aleatórias<br />
Controlo Positivo e Negativo<br />
Apoio Técnico Especializado<br />
A Ciência <strong>ao</strong> Serviço <strong>da</strong> Medicina Veterinária
REPRESENTAÇÃO DAS ÁREAS DE ACTUAÇÃO DA DNATECH<br />
Microbiologia<br />
Bioquímica<br />
Histopatologia<br />
Imunologia<br />
Investigação<br />
Científica<br />
Hematologia<br />
Biologia Molecular<br />
Citologia<br />
A Ciência <strong>ao</strong> Serviço <strong>da</strong> Medicina Veterinária
ÁREAS DE INVESTIGAÇÃO CIENTÍFICA - DNATECH<br />
Aplicação <strong>da</strong> Tecnologia do Real-Time PCR ou RT-PCR Quantitativo;<br />
Diagnóstico de Peritonite Infecciosa Felina por Imunohistoquímica;<br />
Aplicação <strong>da</strong> Tecnologia de Citometria de Fluxo à Oncologia Veterinária;<br />
A Ciência <strong>ao</strong> Serviço <strong>da</strong> Medicina Veterinária
REAL-TIME PCR OU RT-PCR QUANTITATIVO<br />
Permite identificar e quantificar uma sequência alvo de DNA/RNA;<br />
O aumento do sinal <strong>da</strong> fluorescência obtido é directamente proporcional <strong>ao</strong><br />
número de sequências amplifica<strong>da</strong>s;<br />
Leitura de resultado ain<strong>da</strong> na fase exponencial <strong>da</strong> reacção;<br />
Não necessita de análise pós reacção;<br />
Apresenta uma sensibili<strong>da</strong>de de 0.1-1 parasita/ml de amostra;<br />
A Ciência <strong>ao</strong> Serviço <strong>da</strong> Medicina Veterinária
APLICAÇÕES RT-PCR EM VETERINÁRIA<br />
Identificação e quantificação de microrganismos patogénicos<br />
Ex: Protozoários, Bactérias, Fungos e Vírus, tais como:<br />
Leishmania spp<br />
Ehrlichia spp<br />
Cryptococcus spp<br />
FIPV<br />
Mutação génica<br />
Detecção de Rim Poliquístico por mutação dos genes PKD1 e PKD2;<br />
Cardiomiopatia Hipertrofica em felinos;<br />
Quantificação <strong>da</strong> expressão de genes<br />
Identificação de translocações genéticas responsáveis por tumores;<br />
Avaliação <strong>da</strong> sua expressão no hospedeiro;<br />
A Ciência <strong>ao</strong> Serviço <strong>da</strong> Medicina Veterinária
APLICAÇÕES RT-PCR NA IDENTIFICAÇÃO E<br />
QUANTIFICAÇÃO DE MICRORGANISMOS<br />
Identificação e Quantificação de Leishmania spp:<br />
Animais jovens (sistema imunitário imaturo)<br />
Animais com terapêuticas à base de imunossupressores<br />
Animais com leishmaniose cutânea (onde a titulação raramente é superior a 1/40)<br />
Alojamento do parasita em órgãos circunscritos (ex: baço, Liquido sinovial, etc.)<br />
Animais geriátricos (sistema imunitário debilitado)<br />
Identificação e Quantificação de hemoparasitas:<br />
Babesia, Erhlichia, Rickettsia, Leptospira, etc.<br />
Permite monitorização pós-terapêutica<br />
Identificação e Quantificação de vírus:<br />
Parvovirus e Esgana<br />
FIPV<br />
Identificação e Quantificação de Leveduras:<br />
Candi<strong>da</strong> spp<br />
Cryptococcus<br />
A Ciência <strong>ao</strong> Serviço <strong>da</strong> Medicina Veterinária
DETECÇÃO DE MUTAÇÕES GÉNICAS POR RT-PCR<br />
Detecção de Rim Poliquístico por mutação dos genes PKD1 e PKD2;<br />
Detecção de Cardiomiopatia Hipertrófica;<br />
Primer Foward<br />
Primer Foward<br />
mutation<br />
Wild<br />
Primer Reverse<br />
Primer Reverse<br />
mutation<br />
A Ciência <strong>ao</strong> Serviço <strong>da</strong> Medicina Veterinária
QUANTIFICAÇÃO DA EXPRESSÃO GENÉTICA POR<br />
RT-PCR<br />
Identificação de translocações genéticas responsáveis por anormali<strong>da</strong>des<br />
hematológicas:<br />
Translocação t(8;21)(q22;q22), na qual o factor de transcrição do gene (AML)-1<br />
é fundido com o gene (MTG8) no cromossoma 8 sendo esta translocação<br />
responsável por leucemias ;<br />
Translocação t(9;22)(q34;q11), também conhecido pelo cromossoma<br />
Philadelphia onde ocorre uma justaposição <strong>da</strong> região BCR e ABL sendo a<br />
consequência um aumento <strong>da</strong> activi<strong>da</strong>de tirosina–kinase e consequentemente<br />
um aumento <strong>da</strong> proliferação <strong>da</strong> linhagem <strong>da</strong>s células brancas;<br />
Quantificação do RNAm que permite a avaliar a expressão <strong>da</strong> mutação;<br />
A Ciência <strong>ao</strong> Serviço <strong>da</strong> Medicina Veterinária
DIAGNÓSTICO DE PERITONITE INFECCIOSA<br />
FELINA POR IMUNOHISTOQUÍMICA<br />
A grande maioria dos felinos são portadores de uma estirpe de coronavirus avirulenta o<br />
coronavirus felino entérico (FECV)<br />
O FECV pode sofrer uma mutação e transformar-se no vírus <strong>da</strong> peritonite infecciosa felina (FIPV)<br />
Os testes serológicos e virológicos não distinguem a forma avirulenta FECV <strong>da</strong> forma virulenta<br />
Através de imunohistoquímica utilizamos um anticorpo monoclonal anti-FcoV que reage com o<br />
FIPV 1 e 2 é conhecido por ser específico para a nucleocapside<br />
Rim(HE40X)-Piogranulomas no<br />
parênquima renal ricos em macrófagos e<br />
neutrófilos<br />
Rim (Ac anti-FcoV, Envision, DAB, contra<br />
coloração hematoxilina de Meyer, 40x)<br />
A Ciência <strong>ao</strong> Serviço <strong>da</strong> Medicina Veterinária
APLICAÇÃO DA CITOMETRIA DE FLUXO À<br />
ONCOLOGIA VETERINÁRIA<br />
A citometria de fluxo é uma técnica que permite a identificação quantitativa e qualitativa de<br />
células ou partículas individuais numa suspensão (Ex: sangue, medula, ou fluidos celulares)<br />
Permite fazer imunofenotipagem (diferenciação de linfócitos T e B, células NK, células<br />
mielomonociticas e células plasmáticas)<br />
Esta diferenciação é feita através de antigénios de superfície<br />
Diferenciação de linfócitos benignos e neoplásicos através dos marcadores CD18 e CD45<br />
Leucemia linfoide B - antigénios CD1, CD21, CD45RA, CD90 e a classe MHC II<br />
Leucemia linfoide T - antigénios CD3, CD4, CD8, e α-β TCR e γδ-TCR<br />
A DNATECH já disponibiliza a tipificação de linfomas em tipo T e tipo B por imunohistoquímica e<br />
o material terá que ser o normalmente utilizado em histopatologia.<br />
A Ciência <strong>ao</strong> Serviço <strong>da</strong> Medicina Veterinária
angela.xufre@dnatech.pt<br />
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