AVALIAÇÃO DA INDUÇÃO DE RESISTÊNCIA NO CONTROLE DO ...

UNIVERSIDADE ESTADUAL PAULISTA “JULIO DE MESQUITA FILHO” 

FACULDADE DE CIÊNCIAS AGRONÔMICAS 

CAMPUS DE BOTUCATU 

AVALIAÇÃO DA INDUÇÃO DE RESISTÊNCIA NO CONTROLE DO 

VIRA CABEÇA DO TOMATEIRO 

LEYSIMAR RIBEIRO PITZR GUIMARÃES 

Dissertação apresentada à Faculdade de 

Ciências Agronômicas da UNESP – Campus 

de Botucatu, para obtenção do título de Mestre 

em Agronomia (Horticultura). 

BOTUCATU - SP 

Fevereiro – 2013




AVALIAÇÃO DA INDUÇÃO DE RESISTÊNCIA NO CONTROLE DO 


LEYSIMAR RIBEIRO PITZR GUIMARÃES 

Orientador: Prof. Dr. Marcelo Agenor Pavan 

Co-orientadores: Prof a . Drª Giuseppina Pace Pereira Lima 

Dr. Julio Massaharu Marubayashi 

Dissertação apresentada à Faculdade de 

Ciências Agronômicas da UNESP – Campus 

de Botucatu, para obtenção do título de Mestre 

em Agronomia (Horticultura). 

BOTUCATU - SP 

Fevereiro – 2013




CERTIFICADO DE APROVAÇÃO 

TÍTULO: AVALIAÇÃO DA INDUÇÃO DE RESISTÊNCIA NO CONTROLE DO 


ALUNA: LEYSIMAR RIBEIRO PITZR GUIMARÃES 

ORIENTADOR: PROF. DR. MARCELO AGENOR PAVAN 

CO-ORIENTADORA: PROF.ª DR.ª GIUSEPPINA PACE PEREIRA LIMA 

CO-ORIENTADOR: DR. JULIO MASSAHARU MARUBAYASHI 

Aprovado pela Comissão Examinadora 

Data da Realização: 18 de fevereiro de 2013.

Há momentos na vida em que sentimos tanto a falta de alguém que o que mais queremos 

é tirar esta pessoa de nossos sonhos e abraçá-la. 

Sonhe com aquilo que você quiser. Seja o que você quer ser, 

porque você possui apenas uma vida e nela só se tem uma chance de fazer aquilo que se quer. 

Tenha felicidade bastante para fazê-la doce. Dificuldades para fazê-la forte. 

Tristeza para fazê-la humana. E esperança suficiente para fazê-la feliz. 

As pessoas mais felizes não têm as melhores coisas. 

Elas sabem fazer o melhor das oportunidades que aparecem em seus caminhos. 

A felicidade aparece para aqueles que choram. Para aqueles que se machucam. 

Para aqueles que buscam e tentam sempre. 

E para aqueles que reconhecem a importância das pessoas que passam por suas vidas. 

O futuro mais brilhante é baseado num passado intensamente vivido. 

Você só terá sucesso na vida quando perdoar os erros e as decepções do passado. 

A vida é curta, mas as emoções que podemos deixar duram uma eternidade. 

Clarice Lispector

A Meus Pais, Adelino e Neusa 

Pela compreensão, confiança e amor. 

Obrigada pelos esforços destinados à minha formação. 

Dedico 

Aos meus irmãos Markelly, Higyson e Geysielle 

Ao querido José Anchieta 

Pela motivação nos momentos difíceis 

Pelo carinho e amor 

I 

Ofereço

AGRADECIMENTOS 

À Deus, pelo dom da vida, por eu ter conseguido realizar este trabalho, e ainda me ensinando 

sobre Fé. 

A Universidade Estadual Paulista “Julio de Mesquita Filho”, Faculdade de Ciências Agronômicas 

– Campus de Botucatu, pela oportunidade da realização do curso de mestrado. 

À Fundação de Amparo a Pesquisa de São Paulo (FAPESP) pela concessão da bolsa. 

Ao Professor Marcelo Pavan pela oportunidade e confiança depositada, pelos ensinamentos e 

orientações prestados durante a realização do trabalho. 

A Professora Giuseppina Pace Pereira Lima pela amizade, pelos ensinamentos, pelas sugestões, 

contribuições e informações valiosas para o desenvolvimento do trabalho, e todo seu grande bom 

humor. 

Ao Julio Massaharu Marubayashi, pela paciência em me ensinar a realizar as extrações e todos os 

passos para identificação de vírus, pela amizade e incentivo. 

Ao professor Dr. Maurício Ballesteiro e minha querida amiga Dra. Débora Gonzaga pela 

amizade, confiança, apoio, pelos ensinamentos, pelas vezes me acolheu no seio de sua família por 

toda ajuda nas análises, o meu muito obrigado. 

A Professora Renate Krause Sakate, pela simpatia, educação e ensinamentos prestados ao longo 

do curso. 

A Professora Julia Pavan, pela paciência e ajuda nas análises. 

À Minha Família, em especial ao meu pai Adelino Pitzr Guimarães, à minha mãe Neusa Enir 

Ribeiro Guimarães, aos meus irmãos Markelly Guimarães, Higyson Guimarães e Geysielle 

Guimarães, por todo apoio e carinho durante todas as etapas da minha vida, com certeza sem 

vocês eu não teria chegado até aqui. São vocês que me fizeram acreditar que eu era capaz de 

realizar esse sonho. 

Aos meus avós paternos, Juarez Guimarães e Maria Rosa Pitzer Guimarães, à minha avó materna 

Rosa Marcílio Ribeiro, às minhas Tias Ione Guimarães, Ivone Guimarães e Rosenir Marcílio 

Ribeiro, pelo carinho, apoio e torcida por mais uma vitória em minha vida. 

Ao querido José Anchieta Callou Júnior, pela motivação nos momentos difíceis, pela paciência 

nas horas de estresse, pela cumplicidade, carinho e amor. 

Ao Felipe Vitório e Fernanda Pagliai, ‘minha família de Botucatu’, obrigada pela amizade, 

convívio, paciência e compreensão, durante o meu trajeto. 

II

Aos meus amigos Daniela Oliveira, Mariana Silvestre, Aline Tomaz, Rafael Passos, Barbara 

Rhein, Líbia Marquione, Saulo José, pela amizade e que mesmo longe nunca me esqueceram, me 

deram apoio e incentivo para a realização desse trabalho. 

Aos amigos Ruralinos, Laís, Itaynara, Rodrigo, Keila e Deivid, que tive o prazer em conhecer, 

obrigada pela amizade, companheirismo, incentivo e principalmente por compartilhar comigo 

alegrias e tristezas. 

As companheiras e amigas do Laboratório de Bioquímica Raquel Cavasini, Marizete Cavalcante, 

Natalia Reis, Kelly Nunes e em especial a Josiane Pereira, pela amizade, companhias nas horas 

do almoço e pelas alegrias compartilhadas ao longo da nossa caminhada. 

Aos amigos do Laboratório de Virologia Denise Nosaki, Tatiana Mituti, Mônika Fecury, 

Leonardo Barbosa, Milena Leite, Bruno De Marchi, Késsia Pantoja, aos estagiários Luiz 

Fernando e Guilherme Gotardi pela amizade, companheirismo e pelos cafezinhos no corredor do 

departamento. Em especial as amigas Cristiane Melo e Letícia Moraes, pela amizade, por toda 

ajuda prestada e por me socorrerem sempre que precisei. 

Ao Senhor Paulinho, funcionário do Departamento de Produção Vegetal (Defesa Fitossanitária) 

por toda ajuda prestada. 

Aos funcionários da Fazenda de Ensino e Pesquisa, de São Manuel por toda ajuda prestada ao 

longo da execução do trabalho em campo. 

E a todos que contribuíram direta ou indiretamente para a realização deste trabalho. 

Minha sincera gratidão. 

III

SUMÁRIO 

1. RESUMO ................................................................................................................................ 1 

2. SUMMARY ............................................................................................................................ 3 

3. INTRODUÇÃO ....................................................................................................................... 5 

4. REVISÃO DE LITERATURA ............................................................................................... 8 

4.1. Importância e sintomatologia do vira-cabeça do tomateiro (Tospovirus) ........................ 8 

4.2. Mecanismos de Defesa das Plantas ................................................................................ 10 

4.3. Sinais para Indução de Resistência Sistêmica a Patógenos ............................................ 11 

4.4. Moléculas Envolvidas na Defesa das Plantas ................................................................. 13 

4.4.1. Proteínas relacionadas à patogenicidade ................................................................. 13 

4.4.2. Peroxidase ................................................................................................................ 14 

4.4.3. Polifenoloxidase ...................................................................................................... 15 

4.4.4. Poliaminas ............................................................................................................... 16 

5. MATERIAL E MÉTODOS ................................................................................................... 18 

5.1. Instalação do experimento .............................................................................................. 18 

5.2. Tratamentos realizados ................................................................................................... 19 

5.3. Incidência do vira cabeça ................................................................................................ 20 

5.4. Aspectos de produção e qualidades dos frutos ............................................................... 20 

5.5. Determinação das análises bioquímicas de folhas de tomateiro ..................................... 21 

5.6. Atividade de Peroxidase (POD) ...................................................................................... 21 

5.7. Atividade de Polifenoloxidase (PPO) ............................................................................. 22 

5.8. Teor de Proteínas Totais Solúveis .................................................................................. 23 

5.9. Poliaminas Livres ........................................................................................................... 23 

5.10. Identificação e Caracterização Molecular dos Isolados Virais ................................... 24 

5.10.1. Extração do RNA Total para Detecção de Tospovirus ........................................ 25 

5.10.2. Transcrição reversa e reação de polimerização em cadeia (RT-PCR) ................. 25 

5.10.3. Análise do PCR em Gel de Agarose .................................................................... 26 

5.10.4. Purificação do Produto de PCR e sequenciamento do fragmento viral ............... 26 

5.11. Análise Estatística ....................................................................................................... 27 

6. RESULTADOS e DISCUSSÃO ........................................................................................... 28 

6.1. Efeitos da aplicação de indutores na produção e qualidade dos frutos de tomate .......... 28 

6.2. Incidência da doença e sua relação com os indutores ..................................................... 38 

6.3. Ativação de enzimas relacionadas à indução de resistência em plantas de tomateiro .... 41 

6.3.1. Atividade de Peroxidase .......................................................................................... 41 

6.3.2. Atividade de Polifenoloxidase ................................................................................. 48 

6.3.3. Proteína Total Solúvel ............................................................................................. 53 

6.3.4. Poliaminas Livres .................................................................................................... 58 

6.4. Análises moleculares ...................................................................................................... 66 

7. CONSIDERAÇÕES FINAIS ................................................................................................ 69 

8. CONCLUSÕES ..................................................................................................................... 70 

9. REFERÊNCIAS .................................................................................................................... 71 

IV

LISTA DE FIGURAS 

Figura 1. Mudas de tomateiro cv. Saladinha Plus, tratadas e não tratadas com 

Piraclostrobina+Metiram (3 g/L H2O) + Boscalida (0,3 g/L H2O), na semeadura. A) Mudas na 

bandeja, antes do transplantio; B) Mudas em campo no momento do transplantio. ................ 29 

Figura 2. A= Pré-tratamento - Piraclostrobina+Metiram (3 g/L H2O) + Boscalida (0,3 g/L H2O) 

no momento da semeadura; B= Sem pré tratamento. 1) Piraclostrobina+Metiram 200g p. c./100L; 

2) Piraclostrobina+Metiram 400g p. c./100L; 3) Bacillus subtilis 400mL p. c./100L 4) 

Procedimento convencional (Metamidófos). ............................................................................ 34 

Figura 3. Curvas de progresso de incidência do vira cabeça (CPIVC) do tomateiro, para a 

cultivar Saladinha Plus, avaliada aos 30, 45 e 60 dias após transplantio. ................................ 40 

Figura 4. Atividade enzimática de peroxidase (∆ abs 505nm μmol H2O2 decomposto min -1 g -1 

MF) em folhas de tomateiro, cultivar Saladinha Plus, nas diferentes coletas ao longo do tempo. 

.................................................................................................................................................. 44 

Figura 5. Comportamento enzimático da atividade de peroxidase (∆ abs 505nm μmol H2O2 

decomposto min -1 g -1 MF) em folhas de tomateiro, cultivar Saladinha Plus, para os tratamentos 

que receberam aplicação de Piraclostrobina+Metiram (3 g/L H2O) + Boscalida(0,3 g/L H2O) no 

momento da semeadura e para os tratamentos que receberam aplicação dos produtos somente 

após transplantio. ...................................................................................................................... 45 

Figura 6. Atividade de peroxidase (∆ abs 505nm μmol H2O2 decomposto min -1 g -1 MF) em folhas 

de tomateiro, cultivar Saladinha Plus, ao longo dos dias de coletas, para os diferentes tratamentos. 

.................................................................................................................................................. 46 

Figura 7. Atividade enzimática de polifenoloxidase (∆ abs 395 nm μmol catecol oxidado. min -1 .g - 

1 MF) em folhas de tomateiro, cultivar Saladinha Plus, nas diferentes coletas ao longo do tempo. 

.................................................................................................................................................. 50 

Figura 8. Comportamento enzimático da atividade de polifenoloxidase (∆ abs 395 nm μmol 

catecol oxidado. min -1 .g -1 MF) em folhas de tomateiro, cultivar Saladinha Plus, para os 

tratamentos que receberam aplicação de Piraclostrobina+Metiram (3 g/L H2O) + Boscalida (0,3 

g/L H2O) no momento da semeadura e para os tratamentos que receberam aplicação dos produtos 

somente após transplantio. ........................................................................................................ 51 

Figura 9. Atividade de Polifenoloxidase (∆ abs 395nm μmol catecol oxidado. min -1 .g -1 MF) em 

folhas de tomateiro, cultivar Saladinha Plus, ao longo dos dias de coletas, para os diferentes 

tratamentos. .............................................................................................................................. 52 

Figura 10. Teor de Proteína Total Solúvel (∆ abs 595 nm μg prot. g -1 MF), em folhas de tomate, 

nas diferentes coletas ao longo do tempo. ................................................................................ 55 

Figura 11. Comportamento do teor de proteína total solúvel (∆ abs 595 nm μg prot. g -1 MF), em 

folhas de tomate, cultivar Saladinha Plus, para os tratamentos que receberam aplicação de 

Piraclostrobina+Metiram (3 g/L H2O) + Boscalida (0,3 g/L H2O) no momento da semeadura e 

para os tratamentos que receberam aplicação dos produtos somente após transplantio. ......... 56 

V

Figura 12. Média do teor de proteína total solúvel (∆ abs 595 nm μg prot. g -1 MF), em folhas de 

tomateiro, cultivar Saladinha Plus, ao longo dos dias de coletas, para os diferentes tratamentos. 

.................................................................................................................................................. 57 

Figura 13. Comportamento dos teores de Putrescina (μg. g -1 . massa fresca), em folhas de 


.................................................................................................................................................. 60 

Figura 14. Comportamento dos teores de Espermidina (μg. g -1 . massa fresca), em folhas de 


.................................................................................................................................................. 62 

Figura 15. Comportamento dos teores de Espermina (μg. g -1 . massa fresca), em folhas de 


.................................................................................................................................................. 64 

Figura 16. Padrão eletroforético em gel de agarose 0,8% com reações de RT-PCR, com amostras 

positivas de Tospovirus, utilizando os primers BR60 e BR65. (M) Marcador 1 Kb Ladder 

(invintrogen),(-) controle negativo, (+) controle positivo e (BI, BII, BIII, BIV) amostras 

selecionadas. ............................................................................................................................. 67 

Figura 17. Arvore filogenética obtida pelo programa Mega 4.0 com o valor de Bootstrap de 2000 

repetições para a região codificadora para proteína capsidial das amostras, B1, B2, B3 e B4. 

GRSV (acesso AY380780), TCSV (acesso AF521102), TSWV (acesso 1-412) e outgroup Potato 

virus Y (acesso JN711118). ...................................................................................................... 68 

VI

LISTA DE TABELAS E QUADROS 

Quadro 1. Ingrediente ativo e dose dos produtos pulverizados em plantas de tomateiro Saladinha 

Plus, em condições de campo....................................................................................................19 

Quadro 2. Oligonucleotídeos utilizados para amplificação dos vírus nas análises de RT-PCR 

...................................................................................................................................................26 

Tabela 1. Média de Produção (g) de frutos de tomateiro cultivar Saladinha Plus, para os 

diferentes tratamentos. .............................................................................................................. 30 

Tabela 2. Peso médio de frutos (g) tomateiro de 20 plantas da cultivar Saladinha Plus, para os 


Tabela 3. Número de frutos de tomateiro de 20 plantas da cultivar Saladinha Plus, para os 


Tabela 4. Percentual de frutos de tomate sem manchas e sem podridões da cultivar Saladinha 

Plus, para os diferentes tratamentos. ........................................................................................ 35 

Tabela 5. Percentual de frutos de tomateiro verdes obtidos durante a colheita da cultivar 

Saladinha Plus, para os diferentes tratamentos. ........................................................................ 36 

Tabela 6. Área abaixo da curva de progresso da doença (AACPD) do vira cabeça do tomateiro, 

para a cultivar de tomate Saladinha Plus, tratada com fungicidas e biofungicidas. Avaliação da 

incidência da doença aos 30, 45 e 60 dias após transplantio. ................................................... 38 

Tabela 7. Médias da atividade de Peroxidase (μmol H2O2 decomposto min -1 g -1 MF), em folhas 

de tomate, cultivar Saladinha Plus, para os diferentes tratamentos. ......................................... 43 

Tabela 8. Atividade enzimática de Polifenoloxidase (∆ abs 395 nm μmol catecol oxidado. min -1 .g - 

1 MF) em folhas de tomate, cultivar Saladinha Plus, para os tratamentos que receberam aplicação 

dos produtos somente após transplantio. .................................................................................. 49 

Tabela 9. Teor de Proteína Total Solúvel (μg prot. g -1 MF), em folhas de tomate, cultivar 

Saladinha Plus, para os tratamentos que receberam aplicação dos produtos somente após 

transplantio. .............................................................................................................................. 54 

Tabela 10. Putrescina (μg. g -1 . massa fresca), em folhas de tomate, cultivar Saladinha Plus, para 

os diferentes tratamentos. ......................................................................................................... 59 

Tabela 11. Espermidina (μg. g -1 . massa fresca), em folhas de tomate, cultivar Saladinha Plus, 

para os diferentes tratamentos. ................................................................................................. 61 

Tabela 12. Espermina (μg. g -1 . massa fresca), em folhas de tomate, cultivar Saladinha Plus, para 

os diferentes tratamentos. ......................................................................................................... 63 

VII

1. RESUMO 

A cultura do tomateiro apresenta grande importância econômica para o 

Brasil e está sujeita a várias doenças que, dependendo do nível de resistência genética do cultivar 

usado, podem limitar sua produção. Os Tospovirus são considerados agentes causais de uma das 

doenças mais importantes da cultura do tomateiro, o vira-cabeça, acarretando enormes prejuízos 

econômicos. Diante disso, o objetivo do trabalho foi avaliar o efeito de indutores de resistência na 

incidência de vira cabeça e na produção do tomateiro. Os experimentos foram executados na 

Fazenda Experimental da UNESP, Campus Botucatu, em área de histórico de ocorrência da 

doença. Foram utilizadas 3200 plantas de tomateiro cv. Saladinha Plus. As bandejas foram 

divididas em 2 grupos, onde a metade recebeu um pré tratamento pela aplicação de 

Piraclostrobina+Metiram (3 g/L H2O) + Boscalida (0,3 g/L H2O) na bandeja e a outra metade 

sem nenhum produto aplicado. Após o transplantio, foram aplicados os tratamentos, através da 

pulverização de Piraclostrobina+Metiram 200g p. c./100L, Piraclostrobina+Metiram 400g p. 

c./100L, Bacillus subtilis 400mL p. c./100L e o procedimento convencional no qual foi aplicado 

o produto a base de Metamidófos. As pulverizações foram realizadas em todos os tratamentos aos 

20, 35, 50 e 65 dias após o transplantio (DAT). Durante a condução do experimento foi realizada 

1

a avaliação da incidência da doença aos 30, 45 e 60 DAT, contando o número de plantas doentes. 

Com os resultados obtidos nas avaliações foi calculada a área abaixo da curva de progresso da 

doença (AACPD). Para as análises bioquímicas (atividade de peroxidase, polifenoloxidase, teor 

de proteínas totais solúveis e poliaminas), o material vegetal foi coletado aos 30, 40, 45, 55, 60, 

70 e 75 DAT. A colheita dos frutos foi realizada aos 80 DAT, sendo selecionadas 20 plantas de 

cada tratamento, a partir das quais foram realizadas análises de produção total, peso médio de 

frutos, número de frutos por tratamento, percentual do número de frutos verdes e percentual de 

frutos sem manchas e sem podridões. Os resultados obtidos demonstraram que, não houve 

diferença estatística para o progresso da doença e dessa forma, realizou-se a análise de regressão 

linear, onde os tratamentos constituídos de Piraclostrobina+Metiram apresentaram menor 

crescimento da doença quando comparados com o biofungicida Bacillus subtilis e o tratamento 

convencional. Maiores valores de peroxidase, polifenoloxidase e proteínas totais solúveis foram 

observados nos folíolos de plantas pulverizadas com o produto piraclostrobina+metiram na dose 

400g p. c./100L, sugerindo o seu provável envolvimento nos mecanismos de indução de 

resistência. Maiores teores de putrescina e espermidina foram encontradas em plantas tratadas 

com piraclostrobina+metiram na dose 400g p. c./100L, o qual pode ter promovido alterações nos 

níveis dessas moléculas, indicando uma contribuição para o aumento da resistência das 

plantas.Quanto as variáveis dos aspectos de produção e qualidade dos frutos de tomateiro os 

tratamentos constituídos de piraclostrobina+metiram demonstraram um melhor resultado quando 

comparados aos demais tratamentos, evidenciando que esse fungicida apresenta grande potencial 

na cultura do tomateiro quando instalada no período de incidência do vira cabeça. 

Palavras chave: Lycopersicon esculentum, Tospovirus, controle alternativo, peroxidase, 

polifenoloxidase, poliaminas 

2

2. SUMMARY 

EVALUATION OF THE INDUCTION OF THE RESISTANCE TO TOSPOVIRUS IN 

TOMATO. Botucatu, 2013, 92f. Dissertação (Mestrado em Agronomia/ Horticultura) – 

Faculdade de Ciências Agronômicas, Universidade Estadual Paulista. 

Author: Leysimar Ribeiro Pitzr Guimarães 

Adviser: Marcelo Agenor Pavan 

Co-Adviser: Giuseppina Pace Pereira Lima 

Julio Massaharu Marubayashi 

The tomato crop has great economic importance in Brazil and is subject of several diseases, and 

depending on the level of genetic resistance of the cultivar used, it can limit its production. The 

Tospovirus are considered causal agents of one of the most important diseases of tomato crops, 

resulting in enormous economic damage. The objective of this work was to evaluate the effect of 

resistance induction in the tomato crop, as well as the incidence of tospovirus. The experiment 

was carried out in the Experimental Farm of UNESP Botucatu, in an area of historical occurrence 

of the disease. Were used 3200 tomato plants cv. Saladinha Plus. Trays were divided into 2 

3

groups, where half received a pretreatment Pyraclostrobin+ metiram (3 g / L H2O) + Boscalida 

(0, 3 g / L H2O) in the tray and the other half didn’t receive any product. After transplanting, 

treatments were applied by spraying Pyraclostrobin + metiram 200g p. c./100L, Pyraclostrobin + 

metiram 400g p. c./100L, Bacillus subtilis 400mL p. c./100L by conventional procedure in which 

the product methamidophos was applied. The spraying was carried in all treatments at 20, 35, 50 

and 65 days after transplanting (DAT). During the experiment, an evaluation of the disease 

incidence was performed at 30, 45 and 60 DAT, counting the number of diseased plants. With the 

results obtained in the evaluations, was calculated the area under the disease progress curve 

(AUDPC). To biochemical analysis (peroxidase, polyphenoloxidase, total soluble protein and 

polyamines), the plant material was collected at 30, 40, 45, 55, 60, 70 and 75 DAT. The fruit 

harvest was performed at 80 DAT, 20 plants were selected of each treatment, and the analyses of 

total production were carried out, including average fruit weight, fruit number per treatment, 

percentage of the number of green fruits and percentage of stain’s absence in fruits per treatment. 

The results demonstrated that there was no statistical difference to check progress of the disease, 

so linear regression analysis was carried out, where the treatments Pyraclostrobin + metiram 

showed a lower development of the disease, when compared with Bacillus subtilis biofungicide 

and conventional treatment. Larger values of peroxidase, polyphenoloxidase and total soluble 

protein were observed in the leaves of plants pulverized with the product pyraclostrobin + 

metiram 400g p. c./100L dose, suggesting its probable involvement in the mechanisms of 

resistance induction. igher levels of putrescine and spermidine were found in plants treated with 

pyraclostrobin + metiram 400g p. c./100L dose, which may have promoted changes in levels of 

these molecules, suggesting a contribution to the increased resistance of plantas. In terms of the 

variables of the aspects of production and fruit quality of tomato, the treatments composed by 

pyraclostrobin + metiram demonstrated better results when compared to the other treatments, 

indicating that this fungicide presents great potential in tomato when installed during disease 

incidence period. 

Keywords: Lycopersicon esculentum, Tospovirus, alternative control, peroxidase, 

polyphenoloxidase, polyamines 

4

3. INTRODUÇÃO 

O tomateiro (Lycopersicon esculentum Mill.), planta originária dos países 

andinos, é uma das hortaliças mais cultivadas em todo o mundo (FILGUEIRA, 2008). Essa 

cultura apresenta grande importância econômica para o Brasil, assim como outras olerícolas da 

mesma família (MELO; VILELA, 2004), sendo a segunda hortaliça mais cultivada (CAMARGO 

FILHO; OLIVEIRA, 2012). 

O Brasil é um grande produtor de hortaliças. Em 2011 foram produzidos 

cerca de 17,5 milhões toneladas dessas hortícolas, a cultura do tomateiro sozinha equivaleu a 

quase um quarto do total, com uma produção de mais de 4 milhões de toneladas de frutos 

colhidos (ABCSEM, 2011; AGRIANUAL, 2013). O Estado de São Paulo é o segundo maior 

produtor do país, com uma área colhida de aproximadamente 10 mil ha e produção de cerca de 

650 mil toneladas de frutos (AGRIANUAL, 2013). 

Apesar da grande produção obtida, o tomateiro se caracteriza por ser uma 

cultura frágil e seu cultivo está sujeito a uma grande quantidade de doenças e pragas, exigindo 

intenso manejo desde o plantio até o momento da colheita (COOPERCITRUS, 2010). É um dos 

5

setores agrícolas que mais consome produtos fitossanitários, com um gasto médio de R$ 

6990,52/ha/ano (AGRIANUAL, 2013). 

Dentre as diversas doenças que causam problemas à cultura do tomateiro, 

destacam-se as viroses, responsáveis por grandes perdas de produção, devido principalmente à 

inexistência de substâncias capazes de impedir a infecção da planta pelos patógenos e, por 

consequência, impedir a ocorrência de danos ao hospedeiro (BORGES, 2006). 

O tomateiro pode ser infectado por diversos vírus, dentre os quais se 

destacam o gênero Tospovirus, onde as espécies Tomato spotted wilt virus - (TSWV), Tomato 

clorotic spot virus - (TCSV) e Groundnut ringspot virus - (GRSV) são consideradas agentes 

causais de uma das doenças mais importantes da cultura, o “vira-cabeça-do-tomateiro” no Estado 

de São Paulo. Essa doença é transmitida por espécies da ordem Thysanoptera, conhecidos 

popularmente como tripes, sendo a mais importante para o estado de São Paulo, Frankliniella 

schultzei (KUROZAWA; PAVAN, 2005). 

O controle deste vírus pelo combate ao tripes vetor é bastante difícil, pois 

uma vez as fases jovens estando infectadas, o vírus persiste nos adultos, que apresentam a 

capacidade de migrar longas distâncias e rapidamente transmitirem a doença (ULLMAN et al., 

1997). Além disso, o controle químico não oferece resultados satisfatórios e ainda aumenta a 

quantidade de resíduos tóxicos (FIGUEIRA, 2000). 

Por essa dificuldade no controle, a indução de resistência vem sendo alvo 

de estudos para o controle de doenças em plantas. A resistência pode ser química ou física, ambas 

estimuladas pela aplicação de substâncias indutoras, que podem inclusive advirem de fungicidas 

e biofungicidas já comercializados. Esse fenômeno pode ser sistêmico ou local e efetivo contra 

uma ampla gama de patógenos, incluindo bactérias, fungos e vírus (SILVA, 2007). 

As substâncias indutoras aumentam o nível de resistência da planta sem 

alterar seu genoma. Elas agem por meio da ativação de genes, de maneira não específica e 

codificam diversas respostas de defesa, incluindo compostos fenólicos e enzimas, como 

peroxidase e polifenoloxidase (HARTLEB et al., 1997). Outros metabólitos, como as poliaminas 

também parecem estar envolvidos nos mecanismos de indução de resistência, pois são afetados 

pela presença dos vírus nas plantas (BALINT; COHEN, 1974). 

O conhecimento mais aprofundado da ação de produtos já utilizados 

comercialmente como fungicidas ou biofungicidas na indução de mecanismos de resistência são 

6

fundamentais para encontrar formas alternativas de manejo para as viroses do tomateiro, que até 

o momento, com o conhecimento disponível, não podem ser controladas com eficiência. 

Portanto, os objetivos desse estudo foram: 

Verificar o comportamento do tomateiro através da eficiência dos elicitores 

Piraclostrobina+Metiram (Cabrio Top®) e do biofungicida Bacillus subtilis (Serenade) 

nos mecanismos de indução de resistência ao Vira Cabeça do Tomateiro; 

Avaliar o efeito dos produtos na indução de resistência através de análises bioquímicas 

foliares; 

Obter os aspectos de produção e qualidade dos frutos de tomateiro após aplicação dos 

tratamentos e cultivados no período de incidência da doença. 

7

4. REVISÃO DE LITERATURA 

(Tospovirus) 

4.1. Importância e sintomatologia do vira-cabeça do tomateiro 

Mais de 30 viroses podem infectar o tomateiro, sendo algumas delas 

transmitidas por nematóides, fungos, outras por insetos vetores e ainda outras mecanicamente 

(JONES et al., 1991). No Brasil, uma das principais doenças do tomateiro é o vira-cabeça. 

Os vírus causadores desta doença pertencem à família Bunyaviridae, 

gênero Tospovirus, e possuem partículas esféricas ou pleomórficas com diâmetro entre 80-110 

nm. Seu genoma é constituído por três segmentos de RNA denominados S (“small”), M 

(“medium”) e L (“large”). O S RNA apresenta duas fases abertas de leitura – ORFs (ambisense) 

que codificam uma proteína não estrutural (gene NSs) e a proteína do nucleocapsídeo (gene N). O 

M RNA também possui duas ORFs (ambisense) que codificam a proteína de movimento (NSm) e 

um precursor das glicoproteínas (G1/G2), e o L RNA apresenta uma única ORF (sendo negativo) 

que codifica a polimerase viral (gene L) ( VAN REGENMORTEL et al, 2000). 

8

No mundo já foram relatadas 13 espécies distintas Tospovirus, seis foram 

notificadas no Brasil (SILVA et al., 2001). Quatro dessas seis espécies foram descritas como 

patógenos em plantas de tomateiro, sendo diferenciadas com base nas propriedades “sorológicas 

e da composição da proteína do nucleocapsídeo (AVILA et al.,1993, NAGATA et al.,1995) 

sendo elas, Tomato spotted wilt virus (TSWV), Tomato chlorotic spot virus (TCSV), Groundnut 

ringspot virus (GRSV), Chrysanthemum stem necrosis virus (CSNV), (ÁVILA et al., 1993; 

NAGATA et al., 1998; BEZERRA et al., 1999). Elas ocorrem em diferentes regiões geográficas 

do Brasil, possivelmente relacionado a especificidade e distribuição de seus insetos vetores 

(NAGATA et al., 1995) 

O “vira-cabeça do tomateiro” apresenta grande importância nas épocas 

quentes do ano tendo sida relatada pela primeira vez no Brasil, por Costa e Forster em 1938. A 

disseminação ocorre por espécies de Tospovirus e são transmitidas através de insetos 

pertencentes à ordem Thysanoptera, comumente conhecidos como tripes, de maneira persistente. 

(MATTHEUS, 1991; KUROZAWA; PAVAN, 2005). Das espécies relatadas até hoje a mais 

importante no Estado de São Paulo e na região de Botucatu é Frankliniella schultzei.(PAVAN et 

al., 1993). A gama de hospedeiros destes vírus é extremamente ampla (PETERS, 1998) e pela 

diversidade de tripes vetores, torna-se difícil o controle da doença (PRINS; GOLDBACH, 1998). 

A variação de sintomas apresentados pela planta é determinada em função 

da espécie hospedeira, idade e estado nutricional da planta, época do ano e das condições 

ambientais (FRANCKI; HATTA, 1981). De forma geral os sintomas mais característicos são 

clorose acentuada nas folhas jovens, de cor bronzeada, seguida de uma paralisação no 

desenvolvimento da planta. Num estádio mais avançado, as folhas apresentam-se distorcidas com 

áreas necróticas no limbo e pecíolo, que tendem a formar anéis concêntricos. Lesões idênticas 

podem ocorrer na ráquis da inflorescência e no caule. Em pouco tempo todo o ponteiro pode 

necrosar e, com frequência curvar-se para um dos lados, sintoma que empresta o nome à doença. 

Quando plantas jovens são infectadas, os sintomas podem ser especialmente severos, podendo 

levá-las à morte. Frutos jovens formados após a infecção podem desenvolver manchas anelares 

necróticas ou mosqueados. Frutos maduros mostram-se vermelho-pálidos, com áreas amareladas 

contornadas por mosqueado irregular ou, ainda, manchas distintas com anéis concêntricos 

(KUROZAWA; PAVAN, 2005). 

9

Pesquisas recentes tentam realizar o controle dessa doença através do 

melhoramento genético, onde foi introduzido em variedade comerciais o gene Sw-5, identificado 

em espécies de tomateiro silvestre. Estudos posteriores confirmaram que variedades contendo o 

gene Sw-5 apresentavam resistência às principais espécies de Tospovirus que infectam o 

tomateiro no Brasil, além de não alterar a qualidade dos frutos e a produtividade das plantas 

(ESTEVES, 2010). Apesar de descobertas recentes sobre resistência, muitos estudos no controle 

do complexo vira-cabeça vêm sendo realizados. 

4.2. Mecanismos de Defesa das Plantas 

As plantas são constantemente atacadas por inimigos em potenciais, 

porém, apresentam diferentes meios para se defenderem, através do desenvolvimento de 

barreiras, como mecanismos de defesa pré e pós-formados que restringem a 

infecção/colonização. Em ambas as categorias, os fatores envolvidos na resistência podem ser 

subdivididos em estruturais ou bioquímicos. Os estruturais atuam como barreiras físicas, 

enquanto os bioquímicos atuam através da produção de substâncias tóxicas ou repelentes ao 

patógeno ou criando condições adversas ao estabelecimento deste na planta (MAZARO, 2007). 

Os mecanismos de resistência conhecidos como pré formados, passivos 

ou constitutivos, também são conhecidos como barreiras estruturais. Elas são ceras, cutícula, 

tricomas, bem como substâncias químicas envolvidas no processo de defesa. Essas substâncias, 

tais como flavonóides, glicosídeos cianogênicos, e inibidores protéicos são encontradas em altas 

concentrações antes da chegada do patógeno. (AGRIOS, 2005; SCHWAN-ESTRADA; 

STANGARLIN; PASCHOLATI, 2008). Por outro lado, as plantas também apresentam 

mecanismos de resistência pós-formados, ativos ou induzíveis, isto é, são ativados ou aumentam 

o nível de compostos pré-existentes após a infecção pelo patógeno. Esses mecanismos estão 

envolvidos na formação de barreiras estruturais, tais como halo, papila, camada de cortiça, 

lignificação, glicoproteínas ricas em hidroxiprolina, bem como na síntese de compostos que 

funcionam como barreiras bioquímicas, como espécies reativas de oxigênio, proteínas 

10

elacionadas à patogênese e fitoalexinas (AGRIOS, 2005; SCHWAN- 

ESTRADA;STANGARLIN; PASCHOLATI, 2008) 

A sequencia de eventos relacionados à indução e expressão da resistência 

ou resposta de defesa inicia-se com o reconhecimento pelo hospedeiro de alguma característica 

química ou estrutural do patógeno, ou agente de estresse ou dano associado com a invasão. Esta 

percepção resulta na produção ou liberação de um composto sinalizador que é responsável pela 

indução da resposta de defesa da planta (JOHAL et al., 1995). 

4.3. Sinais para Indução de Resistência Sistêmica a Patógenos 

Resistência Sistêmica Adquirida (RSA) e Resistência Sistêmica Induzida 

(RSI) são fenômenos distintos (STICHER et al., 1997), mas fenotipicamente semelhantes em que 

plantas, após exposição a um agente indutor, tem seus mecanismos de defesa ativados não apenas 

no sítio de indução como também em outros locais distantes, de forma mais ou menos 

generalizada. O termo “adquirido” refere-se quando o elicitor é um agente patogênico ou parasita, 

já o termo “induzido” é empregado quando esse agente é benéfico, simbionte ou abiótico 

(BARROS et al., 2009). 

A resistência da planta está correlacionada com a ativação de vários 

mecanismos de defesa. A resposta envolve ativação da transcrição de numerosos genes 

relacionados à defesa, abertura de canais de íons, modificações do status de fosforilação das 

proteínas e ativação de enzimas pré-formadas para realizar modificações nos metabolismos 

primários e secundários. Além disso, são geradas moléculas sinalizadoras para assegurar a 

coordenação da resposta de defesa tanto temporalmente quanto espacialmente, resultando em 

rápida contenção do patógeno (HAMMOND-KOSACK; JONES, 2000). 

Pesquisas recentes têm sugerido que os genes de resistência estão 

associados com o incremento do ácido salicílico (AS), ácido jasmônico (AJ) e etileno (ET) 

(BOSTOCK, 2005; JALALI et al., 2006). De modo geral, as plantas respondem mais aos 

patógenos biotróficos com a ativação da rota do AS, porém ativam a rota do etileno ou do AJ 

quando atacadas por patógenos necrotróficos ou herbívoros (KOORNNNEEF; PIETERSE, 

2008). 

11

O AS é um hormônio vegetal envolvido na germinação de sementes, 

crescimento, florescimento, respiração (KLESSING; MALAMY, 1994), fotossíntese, 

condutância estomática, e transpiração de plantas (KUHN, 2007), bem como na ativação da RSA 

e desencadeamento da reação de hipersensibilidade, produção de fitoalexinas e proteínas 

relacionadas à patogênese (SMITH; DE MORAES; MESCHER, 2009). 

O AJ e seus derivados estão distribuídos amplamente nos tecidos vegetais 

(BOSTOCK, 1999) e estão envolvidos em vários eventos fisiológicos, tais como 

desenvolvimento de frutos e flores, maturação de pólen, crescimento e senescência de raízes e 

fotossíntese (SMITH; DE MORAES; MESCHER, 2009); além de induzir os eventos tipicamente 

associados a RSA, como a síntese de proteínas-RP (β-1,3-glucanase, osmotina e defensinas) 

(JAYARAJ et al., 2004), proteínas ricas em prolina (CREELMAN; TIERNEY; MULLET, 1992), 

fenilalanina amônia-liase (GUNDLACH et al., 1992) e fitoalexinas (PRINSLOO; MEYER, 

2006). 

O etileno, por sua vez, é um hormônio vegetal gasoso envolvido na 

germinação de sementes, diferenciação de tecidos, formação de primórdios radiculares, 

alongamento de raízes, iniciação do florescimento, síntese de antocianinas, abertura de flores, 

senescência, maturação de frutos, produção de compostos voláteis (GRICHKO; GLICK, 2001), 

nodulação (NUKUI et al., 2000), além de ser requerido para a expressão de proteínas-RP 

(quitinase e β-1,3-glucanase) (YANG et al., 2005), fenilalanina amônia-liase (RIOV; 

MONSELISE; KAHAN, 1969) e glicoproteínas ricas em hidroxiprolina (MENOSSI; 

MARTÍNEZ-IZQUIERDO; PUIGDOMÈNECH, 1997). 

As diferentes formas de resistência foram descobertas recentemente, pois 

algumas plantas não respondiam bioquimicamente a indutores como a rizobactéria Pseudomonas 

fluorescens. Essas rizobactérias induzem a resistência sistêmica induzida (RSI) que é 

independente do ácido salicílico e não está associada com a ativação dos mesmos genes da RSA. 

Em substituição ao AS, a RSI requer, para a sua ativação, o aumento dos níveis de AJ e etileno 

(BOSTOCK, 2005). No entanto, independente do agente biótico indutor, a comunicação cruzada 

entre as diferentes rotas já foi demonstrada (HEIL; BOSTOCK, 2002). Sendo assim, alguns 

autores preferem a utilização do termo geral indução de resistência, para se evitar confusões 

(HAMMERSCHMIDT et al., 2001). 

12

Um dos mais eficientes mecanismos de defesa é a reação de 

hipersensibilidade, onde há a indução da produção de fitoalexinas e de várias proteínas de defesa 

codificadas por genes da planta, resultando na morte repentina de um número limitado de células 

do hospedeiro em torno dos sítios de infecção (HAMMOND-KOSACK; JONES, 1996). 

A proteção induzida é dependente do intervalo de tempo que ocorre entre 

o tratamento com o indutor e a subsequente inoculação da planta (agente desafiante). Portanto, 

essa dependência indica que mudanças específicas no metabolismo da planta, que envolvem a 

síntese e/ou acúmulo de substancias, são importantes no fenômeno da resistência induzida 

(BONALDO et al., 2005). 

Vários agentes podem induzir a produção de sinais no vegetal, disparando 

reações que culminarão em proteção duradoura contra uma ampla gama de fitopatógenos 

(SOBRINHO et al., 2005). Herms et al. (2002) demonstraram a capacidade de um tipo de 

fungicida da família F500 (Piraclostrobina) de induzir resistência ao Tobacco mosaic virus 

(TMV) e Pseudomonas syringae pv tabaci em plantas de fumo (Nicotiana tabacum cv Xanthi 

nc). Ogena et al. (2007) demonstram a eficiência do uso de moléculas sintetizadas por Bacillus 

subtilis, onde essa moléculas podem atuar como eliciadoras da indução de resistência, 

proporcionando a reação sistêmica da resposta de defesa contra patógenos. 

4.4. Moléculas Envolvidas na Defesa das Plantas 

4.4.1. Proteínas relacionadas à patogenicidade 

A infecção por vírus em diversas espécies vegetais é acompanhada da 

síntese de inúmeras proteínas, conhecidas como proteínas relacionadas à patogênese 

(“pathogenesis related” – PR), que são codificadas pela planta hospedeira. A indução das PR- 

proteínas, ou seja, a estimulação de sua síntese não é exclusividade dos vírus, podendo ser 

causada por extratos de fungos ou bactérias e uma grande diversidade de compostos químicos 

(VEGA, 1991). 

As proteínas relacionadas à patogenicidade (proteínas-PRs) foram 

descritas pela primeira vez em 1970, por Van Loon, que observou o acúmulo de proteínas 

incomuns após infecção de plantas de fumo com o vírus TMV (DURRANT; DONG, 2004). 

13

Inicialmente foram definidas como proteínas ácidas, de baixo peso molecular, resistentes a 

proteases, solúveis em ácidos e localizados nos espaços extracelulares, sendo mais tarde 

identificadas também nos vacúolos. As proteínas-PRs presentes nos vacúolos geralmente 

exercem um efeito de defesa após a descompartimentalização das células, enquanto que as 

proteínas-PRs extracelulares atuam diretamente em contato com o patógeno no processo de 

penetração do tecido (STICHER et al., 1997). Atualmente são classificadas em 17 famílias 

distintas, baseando-se na similaridade das sequencias de aminoácidos, relação sorológica ou 

atividade enzimática ou biológica (GUZZO, 2004). 

Nas plantas elas foram localizadas na epiderme de folhas, mesofilos, 

células-guarda de estômatos, vasos condutores e em zonas de abscisão (VAN LOON, et al., 

2006). Diferentemente das fitoalexinas, que são produzidas apenas em células sadias adjacentes 

ao local de infecção, as proteínas-PR também podem acumular em locais distantes desse local, 

em resposta a ativação da RSA (DELANEY, 1997). 

Além dessas proteínas específicas, relacionadas com a patogenicidade, 

uma medida bioquímica usando as proteínas solúveis pode ser usada em plantas infectadas por 

vírus, como um marcador. Os níveis de proteínas solúveis foram estudados por Schons et al. 

(2000) em diferentes cultivares de trigo infectados com o Soilborne wheat mosaic virus 

(SBWMV) e os autores notaram maior teor em plantas sadias, não infectadas. Outros estudos 

compravaram esse efeito das proteínas solúveis em plantas de trigo infectadas pelo SBWMV, 

como o relato de Souza et al. (2005) 

4.4.2. Peroxidase 

As peroxidases (POD) (EC 1.11.1.7) são enzimas amplamente 

distribuídas em todas as plantas. Apresenta papel importante por estar envolvida em diversas 

reações celulares, como a oxidação de compostos fenólicos, ligação de polissacarídeos, oxidação 

do ácido indol-3-acético, de monômeros, lignificação, cicatrização de ferimentos, defesa de 

patógenos, além de estarem fortemente relacionadas com mecanismos de defesa em relação a 

patógenos e/ou a vários estresses abióticos (LEE et al., 2001). 

14

O papel destas enzimas no processo de defesa das plantas é reforçar a 

parede celular a partir da formação de lignina, suberina, polissacarídeos ferulicolados e 

glicoproteínas ricas em hidroxiprolina (BOWLES, 1990), aumento na produção de espécies 

ativas de oxigênio que apresentam ação antimicrobiana, bem como atuam na sinalização 

incitando a formação de fitoalexinas (RESENDE et al., 2003) 

Na indução de resistência as PODs têm se mostrado muito eficientes e 

são bastante estudadas. Diversos autores verificaram aumento da enzima POD após aplicação do 

composto acibenzolar-S-metil (ASM). Conferem proteção em fumo contra o TMV, aos fungos 

Cercospora nicotianae, Phytophthora tabacina, Phytophthora parasitica e as bactérias Erwinia 

carotovora e Pseudomonas syringae pv. tabaci (FRIEDRICH et al., 1996); em Arabidopsis 

thaliana contra o fungo P. parasitica, a bactéria P. syringae pv. tomato e ao Turnip crinkle vírus 

(LAWTON et al., 1996); em tomate contra a bactéria Clavibacter michiganensis sbsp. 

michiganensis (BAYSAL et al., 2003); e Xanthomonas campestris pv. vesicatoria (SILVA, 

2002), já para a bactéria Xanthomonas perforans observou-se aumento da atividade da enzima 

após aplicação de Piraclostrobina juntamente com ASM (ITAKO et al., 2012); em cacau contra 

Crinipellis perniciosa, agente causal da vassoura de bruxa no cacaueiro (RESENDE; 

MACHADO, 2000). 

4.4.3. Polifenoloxidase 

fenóis” (SOUZA, 2009). 

O nome polifenoloxidase, significa “catalisadora da oxidação de diversos 

É uma enzima que se encontra latente, e torna-se ativa quando liberada na 

membrana dos tilacóides devido ao rompimento causado por dano, senescência, ataque de insetos 

ou patógenos (MAYER; HAREL, 1991). De acordo com Lax & Vaughn (1991), 

polifenoloxidases são encontradas nos cloroplastos, mas são sintetizadas no citoplasma. É uma 

enzima envolvida nos processos de oxi-redução (MAYER, 1987), promovendo a hidroxilação de 

monohidroxiferol para o- dihidroxifenol e a desidrogenação deste composto, formando o- 

quinonas, que ao sofrerem polimerização não-enzimática com aminoácidos ou proteínas, formam 

15

pigmentos marrom, vermelho e preto, responsáveis pelo escurecimento dos tecidos 

(UNDERHILL; CRITCHLEY, 1995). 

A atividade desta enzima pode ser aumentada ou inibida em algumas 

plantas por estresse como injúria, toxicidade de nitrogênio e ataque de patógenos (SÁNCHEZ et 

al., 2000). Em geral, a polifenoloxidase é elevada em tecidos infectados e apresenta grande 

importância para as plantas, pois está envolvida nos mecanismos de defesa e na senescência 

(AGRIOS, 2005). Além disto, a esta enzima tem sido atribuída um grande número de processos 

celulares, que inclui defesa contra pragas e patógenos, controle dos níveis de oxigênio no 

cloroplasto, síntese de compostos fenólicos e cicatrização de danos (MAYER, 1987). 

Diversos autores comprovam a eficiência da PPO na indução de 

resistência, através do aumento desta enzima. Liu et al. (2005), em tratamento pós-colheita de 

frutos de pêssego com acibenzolar-S-metil (ASM) observaram uma redução da severidade de 

Penicilium expansum em 50%. Para Pereira et al. (2008), após aplicação com ASM e filtrado de 

micélio de Rhizopus sp., houve um aumento na atividade de PPO após 72 h da pulverização, em 

tratamento de mudas de cacaueiro contra murcha-de-verticílio, e uma redução da severidade de 

Verticillium dahliae. Athayde Sobrinho et al. (2006) verificaram que em plantas de feijão caupi 

ou cowpea e infectadas com Macrophomina phaseolina, ocorreu aumento da atividade a partir 

das 72 e 84 horas, para os tratamentos com ASM. Já para a bactéria Xanthomonas perforans foi 

observado por Itako et al. (2012) incremento da atividade da enzima após aplicação de 

Piraclostrobina juntamente com ASM . 

4.4.4. Poliaminas 

As poliaminas, conhecidas pelos teores de putrescina, espermina e 

espermidina, encontram-se amplamente distribuídas na natureza, desempenhando um importante 

papel nos diversos eventos metabólicos, incluindo a síntese protéica, replicação do DNA e 

morfogênese (KUROSAKI et al., 1992). Além de participar de diversos processos fisiológicos, 

tais como a divisão e diferenciação celular, elas estão presente em condições de estresse biótico e 

abiótico, é sabido que as mesmas desempenham papel importante na regulação do crescimento 

vegetal (BASSO; SMITH, 1974; SILVEIRA et al.,2004; SANTA-CATARINA et al., 2006). 

16

Nas plantas, as poliaminas localizam-se não apenas no citosol, mas 

também nas organelas, como mitocôndrias, cloroplastos e vacúolos (KUMAR et al., 1997). Sua 

síntese inicia-se por duas diferentes vias: a Putrescina é formada diretamente a partir da ornitina 

ou indiretamente pela arginina (precursor dos intermediários agmatina e ornitina). A formação da 

espermidina ocorre pela adição de um grupo S-adenosil metionina (SAM) descarboxilado 

adicionado à putrescina. A formação da espermina ocorre pela adição de outro SAM 

descarboxilado (CORUZZI; LAST, 2000). 

Há evidências de que as poliaminas naturais estabilizam a membrana e 

retardam a senescência (SMITH, 1985). A molécula S-adenosilmetionina, também pode ser 

transformada sucessivamente em ácido aminopropil-carboxílico e etileno (SLOCUM et al.,1984), 

pelo fato das poliaminas e do etileno competirem pelo mesmo precursor, ou seja, S- 

adenosilmetionina, essa substância pode se constituir na chave metabólica para a regulação da 

senescência. 

O etileno é o hormônio vegetal, que provoca atraso no alongamento e 

promoção da senescência, enquanto as poliaminas atrasam a senescência em folhas destacadas e 

protoplastos (SMITH, 1985). As poliaminas inibem também a biossíntese de etileno em diversos 

tecidos vegetais (APELBAUM et al., 1981). Assim, um balanço entre esses dois reguladores 

vegetais é essencial para acelerar ou retardar a senescência (PANDEY et al., 2000). 

Várias investigações vêm sendo realizadas visando entender a ocorrência 

de poliaminas interagindo com diferentes viroses. Ames e Dubin, foram os primeiros a detectar a 

presença de poliaminas em partículas do TMV e no Cucumber mosaic vírus – CMV, em tecidos 

vegetais (RABITI et al., 1994). Beer; Kosuge. (1970) identificaram uma triamina, como sendo a 

espermidina em partículas de Turnip yellow mosaic virus – TYMV. 

Em plantas infectadas por diversos tipos de vírus, os teores de poliaminas 

aparecem aumentados. Balint & Cohen (1985), encontraram níveis elevados de espermina e 

espermidina em protoplastos de repolho, infectado com Turnip yellow mosaic virus - TYMV. 

Também em plantas de melancia infectadas com o Papaya ring spotted vírus - PRSV-W, houve 

alterações nos teores de poliaminas durante o desenvolvimento da cultura, não mostrando, 

entretanto uma tendência definida (SCHONS et al.,1995). 

17

5. MATERIAL E MÉTODOS 

5.1. Instalação do experimento 

O presente trabalho foi realizado no período de outubro de 2011 a janeiro 

de 2012, na Fazenda de Ensino e Pesquisa (FEP), pertencente à Faculdade de Ciências 

Agronômicas (FCA) da Universidade Estadual Paulista (UNESP), Campus Botucatu, localizado 

no Município de São Manuel, Estado de São Paulo. O local apresenta altitude de 740 m acima do 

nível do mar e as seguintes coordenadas geográficas: latitude de 22°46’ Sul, longitude 48°34’ 

oeste do meridiano de Greenwich. 

O experimento foi conduzido em área de histórico de ocorrência anual do 

vira cabeça do tomateiro, em solo classificado como Argissolo Vermelho Amarelo Distrófico, 

corrigido de acordo com a análise química coletada antes da instalação do experimento. 

Foi utilizada a cultivar de tomateiro de crescimento determinado 

‘Saladinha Plus’. Para a produção das mudas utilizou-se bandejas de poliestireno, com 128 

células, o substrato utilizado foi constituído de terra, esterco bovino peneirado e substrato 

comercial (Bioplant). 

18

A semeadura foi realizada no dia 16 de setembro de 2011 colocando uma 

semente por célula. Após a semeadura as bandejas foram cobertas com casca de arroz 

carbonizada e divididas em 2 grupos, onde a metade recebeu pré-tratamento pela aplicação de 

Piraclostrobina+Metiram (3 g/L H2O) + Boscalida (0,3 g/L H2O) na bandeja e a outra metade 

sem nenhum produto aplicado. Com 30 dias de idade, as mudas foram transplantadas para a área 

experimental. 

A área experimental total utilizada foi de 400 m² com 3200 plantas. Cada 

parcela experimental foi representada por 02 linhas com 50 plantas cada, utilizando o 

espaçamento de 0,50 m por 0, 25 m. O delineamento experimental utilizado foi uma fatorial 2 X 

4 com 4 repetições. 

5.2. Tratamentos realizados 

Vinte dias após o transplantio (DAT), as plantas receberam pulverização 

com os produtos (Quadro 1). A aplicação foi realizada com um pulverizador costal de barra, de 

pressão constante, a base de CO2. Os volumes de calda utilizados variaram de acordo com o 

necessário ao completo molhamento da parte área das plantas. 

A cada 15 dias foram realizadas as aplicações com os produtos 

(tratamentos) especificados no quadro 1. Ao longo do ciclo da cultura foram realizadas quatro 

aplicações, durante o intervalo entre as aplicações com os tratamentos foram realizadas 

pulverização semanal com clorotalonil + dimetomorfe (250 mL p.c./100 L) para o controle de 

doenças que surgiram na cultura no decorrer da condução do ensaio. 

Quadro 1: Ingrediente ativo e dose dos produtos pulverizados em plantas de tomateiro Saladinha 

Plus, em condições de campo. 

Ingrediente Ativo Nome Comercial Dose para 100L de água 

Produto Comercial 

Piraclostrobina+Metiram Cabrio Top® 200 g 

Piraclostrobina+Metiram Cabrio Top® 400 g 

Bacillus subtilis Serenade 400 mL 

Metamidófos Tamaron® 100 mL 

Fonte: Agrofit (2013) 

19

5.3. Incidência do vira cabeça 

Durante a condução do experimento, foi realizada a avaliação da 

incidência da doença contando o número de plantas doentes aos 30, 45 e 60 DAT. Com os 

resultados obtidos nas avaliações foi calculada a Área Abaixo da Curva de Progresso da Doença 

(AACPD), conforme equação proposta por Campbell & Madden (1990). 

AACPD = Σ[(Ii + Ii+1)/2.(Ti+1-Ti)] 

Onde Ii = incidência na época da avaliação i e Ti = tempo da avaliação i. Após tabulação dos 

dados de incidência, os valores de AACPD foram submetidos à análise de variância fatorial e 

separação de médias pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade 

5.4. Aspectos de produção e qualidades dos frutos 

Para avaliar os aspectos da produção e qualidade dos frutos de tomateiro, 

a colheita foi realizada manualmente aos 80 DAT, sendo selecionadas 20 plantas de cada 

tratamento. Os critérios adotados na avaliação das características relacionadas à produção foram: 

Produção total de frutos – representa a produção média de frutos por planta, expressa em 

gramas, para os diferentes tratamentos; 

Peso médio de frutos comerciais – constitui a relação entre o peso de todos os frutos colhidos 

por tratamentos, em termos médios; 

Número total de frutos - obtido pela soma do número de todos os frutos colhidos, para os 

diferentes tratamentos; 

Percentual de número de frutos verdes – representa o número total de frutos dividido pelo 

número de frutos maduros colhidos; 

Percentual de frutos sem manchas e sem podridões – representa o numero total de frutos 

dividido pelo número de frutos doentes. 

Os valores obtidos com os dados de produção e qualidade dos frutos foi realizada a análise de 

variância e as médias comparadas pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade. 

20

5.5. Determinação das análises bioquímicas de folhas de tomateiro 

Para avaliar a atividade das enzimas peroxidase, polifenoloxidase, o teor 

de proteínas totais solúveis e poliaminas livres, foram coletadas amostras do terço médio da 

planta de maneira aleatória, formando uma amostra composta de cada tratamento, as amostras 

eram embaladas em papel alumínio, etiquetadas, colocadas em caixas de isopor, transportadas até 

o Laboratório de Química e Bioquímica, do Instituto de Biociências da UNESP, Campus Rubião 

Junior, Botucatu, SP, essas amostras foram congeladas em nitrogênio líquido e mantidas a 

temperatura -20°C para posterior extração da fonte enzimática. 

Os dias de coletas dos materiais vegetais eram no quinto e no décimo dia 

após a aplicação dos tratamentos, no total foram realizadas 7 coletas aos 30, 40, 45, 55, 60, 70 e 

75 DAT. 

5.6. Atividade de Peroxidase (POD) 

A atividade da peroxidase (EC 1.11.1.7) (µmol de H2O2 decomposto. min - 

1 . g -1 . massa fresca) foi determinada pelo método descrito por Allain et al., (1974) modificado por 

Lima et al., (1999). 

O extrato enzimático foi obtido através da homogeneização de 500 mg de 

tecido foliar maceradas em nitrogênio liquido e acrescida de 5 mL de tampão acetato do sódio pH 

5,0 (gelado), seguido de centrifugação durante 10 minutos a 10.000 x g, a 4°C, 1 mL do 

sobrenadante foi usado como fonte de enzima em tubos de ensaio, juntamente com 0,5 mL de 

solução A (peróxido de hidrogênio (H2O2) à 30% + tampão fosfato de potássio pH 6,7) e 0,5 mL 

de solução B (163 mg de fenol + 81,3 mg de aminoantipirina em 100 mL de H2O). Em seguida, 

os tubos foram colocados em banho-maria a 30°C durante 5 minutos, a reação foi interrompida 

pela adição de 2 mL de álcool etílico absoluto. Após essa etapa, o extrato foi analisado a leitura 

em espectrofotômetro, no comprimento de onda 505 ƞm. 

descrita abaixo. 

A atividade da peroxidase foi calculada com o emprego da fórmula 

21

Fórmula: POD = [(L x Vt) / (6,58 x T x Ve) / P] 

Onde: POD = atividade de peroxidase 

L = leitura em espectrofotometria (Abs.) 

Vt = volume total da amostra (mL) 

T = tempo de reação (min.) 

V = volume utilizado do extrato (mL) 

P = peso da amostra (mg) 

6,58 = absortividade molar do composto colorido 

5.7. Atividade de Polifenoloxidase (PPO) 

A atividade da polifenoloxidase (EC 1.14.18.1) (μmol catecol oxidado. 

min -1 .g -1 massa fresca) foi determinada pelo método descrito por Kar & Mishra (1976); e 

modificada por Lima et al., (1999). 


tecido foliar maceradas em nitrogênio liquido e acrescida de 5 mL de tampão acetato do sódio 

pH 5,0 (gelado), seguido de centrifugação durante 10 minutos a 10.000 x g, a 4°C, 0,3 mL do 

sobrenadante foi usado como fonte de enzima em tubos de ensaio, juntamente com 1,85 mL de 

solução de catecol (pyrocathecol 0,1 M em tampão fosfato pH 6,7), os tubos foram colocados em 

banho-maria a 30°C durante 30 minutos, a reação foi interrompida pela adição de 0,8 mL de 

ácido perclórico (HClO4) 2N. Após essa etapa, o extrato foi analisado a leitura em 

espectrofotômetro, no comprimento de onda 395 ƞm. 

descrita abaixo. 

A atividade da polifenoloxidase foi calculada com o emprego da fórmula 

Fórmula: PPO = [(L / T) X 1000] / [(P x VP) / VT] 

Onde: PPO=atividade de polifenoloxidase 

L = leitura do espectrofotômetro (Abs.) 

T = tempo de reação (min) 

22

P = peso da amostra (mg) 

PV = volume da amostra pipetado (mL) 

VT = volume de tampão para homogeneização da amostra (mL) 

1000=unidade de enzima (fator) 

5.8. Teor de Proteínas Totais Solúveis 

determinado pelo método de Bradford (1976). 

O teor de proteínas totais solúveis (μg proteína. g -1 . massa fresca) foi 


tecido foliar maceradas em nitrogênio liquido e acrescida de 5 mL de tampão acetato do sódio pH 

5,0 (gelado), seguido de centrifugação durante 10 minutos a 10.000 x g, a 4°C, 0,1 mL do 

sobrenadante foi usado como fonte de enzima em tubos de ensaio, juntamente com 5 mL do 

reativo de Bradford (100 mg de Coomassie brilliant blue G + 50 mL de etanol 95% + 100 mL 

ácido fosfórico H3PO4 85% + água destilada q. s. p. 1L), seguida pela homogeneização, deixa-se 

a reação ocorre durante 15 min. Após essa etapa, o extrato foi analisado a leitura em 

espectrofotômetro, no comprimento de onda a 595 ƞm. Os valores obtidos nas leituras foram 

substituídos na equação da curva de eficiência (caseína como padrão). 

Equação da reta: [y = (0,005x + 0,031)] / Ve 

y = leitura do espectrofotômetro 

x = teor de proteína 

Ve = peso de massa fresca utilizada em relação ao volume do extrato. 

5.9. Poliaminas Livres 

O teor de poliaminas foi realizado visando-se determinar a concentração 

de putrescina, espermidina e espermina (μg. g -1 . massa fresca) de acordo com o método descrito 

por Flores & Galston (1982), adaptado por Lima et al., (1999). 


tecido foliar maceradas em nitrogênio liquido e acrescida de 3 mL de ácido perclórico gelado a 

23

5%, em seguida, as amostras ficaram em banho gelado por 1 hora. Em seguida, fez – se a 

centrifugação durante 20 minutos a 10.000 x g, a 4° C, obtendo o sobrenadante que foi coletado. 

Dansilação: Em tubos de ensaio foi adicionado 200 μL do sobrenadante 

(amostra), 200 μL de uma solução saturada de carbonato de sódio e 400 μL de cloreto de dansil (5- 

[Dimetilamino]naftaleno 1-sulfonil cloreto). Após essa etapa, os tubos foram mantidos no escuro, à 

temperatura ambiente por 16 horas. Em seguida adicionou-se 100 μL de prolina (100 mg L-1), sendo 

a mistura mantida em repouso por 30 minutos no escuro. A extração das poliaminas dansiladas foi 

realizada em 500 μL de tolueno, coletando-se a fase orgânica. 

Para a separação das poliaminas por cromatografia de camada delgada, 

foram usadas placas de vidro cromatográficas (20 x 20 cm) cobertas com sílica gel 60 G (Merck) 

(250 μm de espessura). Sobre as placas aplicou-se 30 μL do extrato dansilado. O cromatograma 

foi desenvolvido em cubas de vidro, utilizando-se clorofórmio-trietilamina (10:1, v/v) como fase 

móvel. A separação cromatográfica foi acompanhada de luz ultra-violeta. Padrões de putrescina, 

espermina e espermidina foram processados paralelamente nas mesmas condições experimentais. 

Para a análise quantitativa de poliaminas livres, as placas desenvolvidas 

na cromatografia foram secas e por comparações com os padrões, também aplicados nas placas, 

foram submetidos à leitura por espectroscopia de emissão de fluorescência (excitação em 350 ƞm 

e medida de emissão em 495 ƞm), no “Video Documentation System”, utilizando o programa 

“Software Image Máster”, versão 2.0 da “Amersham Pharmacia Biotech” 1995, 1996. 

Com os resultados, obtidos nas diferentes épocas de coleta das amostras 

foliares, foi calculada a produção dos compostos avaliados (enzimas e poliaminas), em função do 

tempo (coletas), e os dados foram submetidos à análise de variância realizada de forma 

convencional considerando modelo fixo (Steel & Torrie,1980) e as médias comparadas pelo teste 

de Tukey a 5% de probabilidade. Nos casos em que a interação foi significativa foi realizado o 

desdobramento da interação e para as análises com datas fixas (coletas) foi realizada a regressão 

polinomial sobre os dias. 

5.10. Identificação e Caracterização Molecular dos Isolados Virais 

24

Foram coletadas 16 amostras de maneira aleatória no campo de produção 

do tomateiro, cultivado no período de incidência da doença. As amostras foram identificadas e 

posteriormente levadas ao laboratório de virologia para detecção da doença. 

5.10.1. Extração do RNA Total para Detecção de Tospovirus 

Utilizou-se a metodologia para extração do RNA total. Pelo método de 

Bertheau et al.(1998) folhas de plantas de tomateiro foram trituradas (1:5 p/v) em tampão PBS 

Tween contendo PVP K25 a 2 % (p/v) e Na-DIECA 20 mM, e centrifugadas em tubos de 

microcentrífuga por 10 minutos a 13.000 rpm (Centrifuga Eppendorf 5804 R). Duzentos 

microlitros do sobrenadante foram transferidos para um novo tubo, acrescentando-se SDS a 1%. 

Após incubação a 55 °C por 15 minutos adicionou-se 100 μL de solução de acetato de potássio a 

3M e seguindo por agitação da solução. Posteriormente as amostras foram incubadas em gelo por 

5 minutos e centrifugadas por 5 minutos a 13.000 rpm. O sobrenadante foi transferido para um 

novo tubo, adicionando-se 700 L de NaI 6M e 5 μL de uma solução contendo silício. Agitou-se 

bem e manteve-se a solução por 10 minutos a temperatura ambiente. Em seguida a solução foi 

centrifugada por um minuto a 5.000 rpm, o sobrenadante foi descartado e o ‘pellet’ lavado duas 

vezes com 500 μL de Tris-HCl 20 mM pH 7,5, EDTA 1 mM, NaCl 100 mM e igual volume de 

etanol absoluto. Após centrifugação por 1 minuto a 5.000 rpm, o ‘pellet’ foi secado a vácuo 

(Speed Vaccum Eppendorf Concentrator 5301) e o RNA ressuspendido em 400 μL de água Milli- 

Q tratada com DEPC, seguido de incubação por 5 minutos a 55 °C e centrifugação por 5 minutos 

a 13.000 rpm. O sobrenadante (300 μL) foi transferido para um novo tubo e armazenado a -20°C. 

5.10.2. Transcrição reversa e reação de polimerização em cadeia (RT-PCR) 

Para a amplificação parcial da região da capa protéica de tospovirus, os 

oligonucleotídeos foram testados em RT-PCR em uma só etapa, utilizando-se o Kit PCR Master 

Mix (Gotaq). 

Para um volume de 50 μl adicionou-se 5 μL de Buffer Green Gotaq, 100 

μM de cada oligonucleotídeo, 1 unidade da transcriptase reversa AMV (Avian myeloblastosis 

virus, marca Promega a 15 unidades/μL), 2,5 μL de RNA e Nuclease Free Water para completar 

25

o volume de 50 μL . Para a detecção do TSWV utilizou-se o par de primer BR 60 e BR 65 

(conforme o Quadro2), o ciclo utilizado no termociclador (Mastercycler Gradient - Eppendorf) 

consistiu em 30 minutos a 42 °C para a etapa de transcrição reversa, seguido de 5 minutos à 95 

°C para desnaturação inicial e 40 ciclos de 95 °C de desnaturação por 1,30 minutos e finalizando 

com anelamento por 2 minutos a 48 °C. 

Quadro 2. Oligonucleotídeos utilizados para amplificação dos vírus nas análises de RT-PCR. 

Vírus Oligonucleotídeos Sequência Pares de 

Bases 

Referência 

BR 60 5’AGAGCAATCGTGTCA 3’ 871 

Tospovírus 

Eiras et al., 

BR 65 5’ ATCAAGCCTTCTGAAAGTCAT 3’ 453 2001 

5.10.3. Análise do PCR em Gel de Agarose 

Foram retirados 7 μL da reação de RT-PCR ou PCR para análise em gel 

de agarose a 0,8% em tampão TBE (0,1 M de ácido bórico, 0,02 mM EDTA pH 8,3). Utilizou-se 

o marcador 1kb Ladder Invitrogen. O gel foi corado em uma solução de Gel Red (1,5 μL/ mL), 

por 30 minutos e assim, visualizado em transluminador. 

5.10.4. Purificação do Produto de PCR e sequenciamento do fragmento viral 

Os isolados amplificados com os primers BR60 e BR65 foram 

selecionados para sequenciamento, utilizou-se diretamente o produto de PCR purificado pelo Kit 

PCR Clean-up System (Promega). Estes foram quantificados utilizando-se o marcador de peso 

molecular Low DNA Mass Ladder e 1kb Ladder Plus, ambos da marca Invitrogen. 

Os produtos foram enviados para a plataforma de sequenciamento do Centro de Estudos 

de Genoma Humano da USP. 

As amostras sequenciadas foram analisadas pelo programa ‘NCBIBLAST’ 

(http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi)” e a construção da árvore filogenética foi realizado no 

programa MEGA 4.0. 

26

5.11. Análise Estatística 

A análise estatística foi realizada previamente a verificação dos 

pressupostos da analise da variância verificando a normalidade dos dados e a homogeneidade das 

variâncias. Uma vez verificada a adequação dos dados à análise de variância (ANOVA), foi 

realizada segundo o modelo fatorial (2X4), para os tratamentos medidos uma única vez, ou seja, 

produção, peso médio, número de frutos, percentagem de números de frutos verdes durante a 

colheita, percentagem de frutos sem manchas e sem podridões. Para a análise da incidência da 

doença avaliada pela AACPD também foi utilizado esse modelo fatorial. Para esses caracteres o 

modelo usado foi fatorial no qual o primeiro fator era o pré-tratamento feito nas bandejas pela 

aplicação de Piraclostrobina+Metiram (3 g/L H2O) + Boscalida (0,3 g/L H2O), na metade das 

bandejas e a não aplicação nas demais. O segundo fator foram os tratamentos: 1) 

Piraclostrobina+Metiram 200g p. c. /100 L, 2) Piraclostrobina+Metiram 400g p. c./100 L, 3) 

Bacillus subtilis 400mL p. c./100 L, 4) Procedimento convencional no qual foi aplicado o produto 

a base de Metamidófos 100ml p. c./100 L. Dessa forma o experimento teve oito tratamentos 

formados pelas combinações dos dois fatores e quatro repetições em blocos casualizados. A 

análise da variância foi realizada utilizando o aplicativo R e MINITAB, realizou-se o teste de 

Tukey, ao nível de 5% para verificar a significância. 

Os tratamentos avaliados em diversas épocas (7datas) o modelo usado foi 

fatorial (2X4), semelhante ao descrito acima, com épocas de colheita sendo consideradas parcelas 

subdivididas. Neste caso não se considerou parcela subdividida no tempo uma vez que as 

diferenças entre as épocas de colheita eram pequenas e nos intervalos foram realizadas aplicações 

dos produtos. Dessa forma foram calculados dois erros. O erro A para testar o pré- tratamento 

aplicado às bandejas, os tratamentos e suas interações, e o erro B para testar as épocas e suas 

interações com o pré-tratamento e os tratamentos. A análise da variância foi realizada de forma 

convencional considerando modelo fixo (STEEL & TORRIE, 1980). Após a ANOVA, para as 

fontes de variação onde o teste F indicou significância, realizou-se o teste de Tukey, ambos ao 

nível de 5%. Nos casos em que a interação foi significativa foi feito o desdobramento da 

interação e para as análises com datas fixas foi realizada a regressão polinomial sobre os dias. 

27

6. RESULTADOS e DISCUSSÃO 

de tomate 

6.1. Efeitos da aplicação de indutores na produção e qualidade dos frutos 

O efeito da aplicação dos produtos na produção e na qualidade dos 

frutos de tomateiro produzidos no período de incidência do vira-cabeça foi diferente para os 

tratamentos nas condições desse experimento. Pode-se observar que a aplicação de 

Piraclostrobina+Metiram (3 g/L H2O) + Boscalida (0,3 g/L H2O) nas bandejas no momento 

da semeadura induziu alterações no metabolismo e crescimento das mudas quando 

comparadas com as não tratadas (Figura 1) tendo sido o mesmo já observado em trabalhos 

desenvolvidos por Köhle et al.,2002. 

28

Mudas Tratadas 

Mudas Não 

Tratadas 

Mudas Não 

Tratadas 

Figura 1. Mudas de tomateiro cv. Saladinha Plus, tratadas e não tratadas com Piraclostrobina+Metiram (3 g/L 

H2O) + Boscalida (0,3 g/L H2O), na semeadura. A) Mudas na bandeja, antes do transplantio; B) Mudas em 

campo no momento do transplantio. 

Estudos têm provado que as estrobilurinas, além de atuarem diretamente 

sobre o patógeno, apresentam efeitos secundários altamente benéficos à planta, tais como: a 

redução da produção de etileno, o aumento da atividade da enzima nitrato-redutase, o atraso da 

senescência, maior resistência ao estresse hídrico e o aumento do teor de clorofila (TÖFOLI et 

al., 2003). As plantas possuem o efeito fisiológico chamado “greening” que, até mesmo na 

ausência do ataque de patógenos, as plantas tratadas com estrobirulinas ficam com um verde 

intenso e parecem mais saudáveis do que plantas não tratadas com o produto (KÖEHLE et al., 

2002). 

Mudas Tratadas 

Com relação à produção total (Tabela 1) a ANOVA não indicou 

significância para o pré-tratamento, que foi a aplicação de Piraclostrobina+Metiram (3 g/L H2O) 

+ Boscalida (0,3 g/L H2O) nas bandejas no momento da semeadura (P= 0,071) e significância 

para os tratamentos que receberam aplicação dos produtos somente após transplantio (P= 

B 

A 

29

2,24x10 -5 ). A interação entre pré e aplicação dos tratamentos apenas no campo não foram 

significativas (P=0,760). Pode-se observar que os tratamentos constituídos de 

Piraclostrobina+Metiram apresentaram uma maior produção quando comparados com os demais 

tratamentos. A aplicação de Bacillus subtilis não demonstrou efeitos benéficos sobre a produção 

total de frutos de tomateiro. 

Tabela 1. Média de Produção (g) de frutos de tomateiro cultivar Saladinha Plus, para os 

diferentes tratamentos. 

Tratamentos 

Com prétratamento 

Sem prétratamento 

Médias 

Piraclostrobina+Metiram 200g 

p. c./100L 

13040,3 12043,4 12541,8 

AB 


p. c./100L 

17431,6 14152,0 15792,3 

A 

Bacillus subtilis 400mL p. 

c./100 L 

8417,9 

7479,2 7948,5 

C 

Tratamento convencional 

(Metamidófos) 

10889,2 9423,4 10156,3 

BC 

Média geral 

12444,7 a 10774,7 a 11609,7 

CV% = 21,38 

DMS = 3474,2 

Pré-tratamento: Piraclostrobina+Metiram (3 g/L H2O) + Boscalida (0,3 g/L H2O) 

Médias seguidas de letras maiúsculas iguais na coluna e minúsculas na linha, não diferem pelo teste de 

Tukey a 5%. 

Uma propriedade interessante da classe das estrobirulinas é o seu efeito 

sobre a fisiologia das plantas. A longa duração da ação da piraclostrobina, seu amplo espectro de 

ação e sua alta fungitoxicidade, são uma das principais características biológicas que permitem 

que o produto contribua para altos rendimentos (KOZLOWSKI et al., 2009). 

Köehle, (1997b), demonstra, que em parcelas onde foram pulverizadas 

produtos da classe das estrubirulinas, apresentara maior vigor e produção, quando comparadas 

com as não tratadas, o mesmo foi observado nesse ensaio. 

As estrobilurinas atuam na respiração mitocondrial bloqueando a 

transferência de elétrons pelo complexo citocrômico bc1, através da inibição da óxido-redutase 

de ubihidroquinona-citocromo c (GHINI; KIMATI, 2002), reduzindo o processo respiratório e 

30

loqueando a formação da síntese de ATP nas células do fungo e levando à sua morte 

(MACEDO, 2012). 

A estrobilurina causa pequena alteração no ponto de compensação de CO2 

das plantas. Alguns resultados indicam que um aumento transitório na rota alternativa da 

respiração (AOX) pode sobrepor à redução esperada da emissão de CO2 devido à inibição da 

respiração mitocondrial. Isso causa queda nos níveis celulares de ATP e aumento na 

concentração de prótons (H+) no citosol, resultando na ativação da nitrato redutase (KÖEHLE et 

al., 1994). 

A nitrato redutase catalisa a primeira base de absorção de nitrato do solo 

e, por isso, é considerada um aspecto relevante para o efeito do aumento na biomassa das plantas 

tratadas com estrobilurina, pois esse acréscimo requer grande assimilação de nitrogênio 

(KÖEHLE et al., 1994; KÖEHLE et al., 2002, VENANCIO et al., 2003 ). 

Com relação ao peso médio dos frutos de tomateiro, (Tabela 2) a 

ANOVA indicou significância para o pré-tratamento (P=0,034) e significância para os 

tratamentos que receberam aplicação dos produtos somente após transplantio (P=4,79x10 -5 ). A 

interação entre pré e aplicação dos tratamentos apenas no campo não foram significativas 

(P=0,986). 

Tabela 2. Peso médio de frutos (g) tomateiro de 20 plantas da cultivar Saladinha 

Plus, para os diferentes tratamentos. 

Tratamentos 



Médias 

Piraclostrobina+Metiram 200g p. 

c./100L 

64,9 60,6 62,8 B 


c./100L 

74,5 70,0 72,3 A 


c./100L 

57,9 53,3 55,6 B 



59,1 52,8 56,0 B 

Média geral 64,1 a 

CV% = 9,88 

DMS = 8,53 

59,2 b 


Médias seguidas de letras maiúsculas iguais na coluna e minúsculas na linha não diferem pelo teste 

de Tukey a 5%. 

31

Pode-se observar que os tratamentos constituídos de 

Piraclostrobina+Metiram principalmente a dose de 400g p. c./100L apresentam um maior peso de 

frutos quando comparados com os demais, indicando assim efeito benéfico desse produto sobre o 

peso dos frutos. Esse fungicida tem sido associado a um aumento no porte e no vigor, com 

consequente aumento da produção (COSTA et al., 2010), conforme demonstrou o experimento. 

Podemos verificar, que para o número de frutos de tomateiro (Tabela 3) a 

ANOVA não indicou significância para o pré-tratamento na bandeja (P=0,238) e significância 

para os tratamentos que receberam aplicação dos produtos somente após transplantio (P=1,57x10 - 

4 ). A interação entre pré e aplicação dos tratamentos apenas no campo não foram significativas 

(P=0,635). De modo geral que os tratamentos constituídos de Piraclostrobina+Metiram 

principalmente na dose de 400g p. c./100L apresentam uma maior quantidade de número de 

frutos, o produto biológico (Bacillus subtilis) aplicado não mostrou efeitos positivos sobre o 

numero de frutos. 

Tabela 3. Número de frutos de tomateiro de 20 plantas da cultivar Saladinha Plus, 

para os diferentes tratamentos. 

Tratamentos 



Médias 


c./100L 

199,5 197,0 198,3 AB 


c./100L 

235,0 201,3 218,1 A 


c./100L 

145,0 139,8 142,4 C 



181,0 176,5 178,8 BC 

Média geral 

190,1 a 178,6 a 184,4 

CV% = 14,99 

DMS = 38,69 


Médias seguidas de letras maiúsculas iguais na coluna e minúsculas na linha não diferem pelo teste e 

Tukey a 5%. 

32

Trabalhos realizados por Itako (2011) mostraram que a aplicação de 

piraclostrobina + metiram em tomateiro hibrido AP-529 diferiram dos outros tratamentos em 

massa e numero total de frutos, comprovando assim o efeito benéfico do produto, o mesmo foi 

observado nesse trabalho (Tabela 3). 

De acordo com Köehle et al. (2002), os fungicidas pertencentes ao grupo 

químico das estrobilurinas compreende uma variedade de compostos que protegem a planta com 

amplas atividades antifúngicas e possuem propriedades atuantes na fisiologia das plantas 

elevando a qualidade dos frutos e rendimento da colheita para o produtor. 

Os efeitos positivos dos produtos aplicados na cultura do tomateiro, no 

período de incidência do vira cabeça, podem ser melhor interpretados na figura 2. É nítido que os 

tratamentos que receberam aplicação de fungicidas pertencentes ao grupo das estrubirulinas 

(piraclostrobina+metiram) possuem uma maior tendência de frutos sadios, com peso e número 

em maior quantidade, além de uma maior produção. A aplicação do produto biológico (Bacillus 

subtilis) não apresentou efeitos benéficos sobre a produção e qualidade dos frutos de tomateiro. 

33

1 A 

1 B 

2 A 3 A 

2 B 

3 B 4 B 

Figura 2. A= Pré-tratamento - Piraclostrobina+Metiram (3 g/L H2O) + Boscalida (0,3 g/L H2O) no momento da 

semeadura; B= Sem pré tratamento. 1) Piraclostrobina+Metiram 200g p. c./100L; 2) Piraclostrobina+Metiram 

400g p. c./100L; 3) Bacillus subtilis 400mL p. c./100L 4) Procedimento convencional (Metamidófos). 

4 A 

34

Quando analisamos o percentual de frutos sadios (Tabela 4) a ANOVA 

não indicou significância para o pré-tratamento na bandeja (P=0,515) e significância para os 

tratamentos que receberam aplicação dos produtos somente após transplantio (P=8,90x10 -5 ), ou 

seja, existe diferença entre os produtos para o percentual de frutos sadios. A interação entre pré e 

aplicação dos tratamentos apenas no campo não foram significativas (P=0,366). 

É possível verificar uma melhora na qualidade dos frutos quando esses 

estão associados aos tratamentos constituídos de Piraclostrobina+Metiran, principalmente quando 

a dose 400g p. c./100L é aplicada, fato este que pode estar relacionado às propriedades 

fisiológicas da planta, melhorando a qualidade os frutos. 

Com relação ao percentual de frutos sadios (Tabela 4), o tratamento 

Bacillus subtilis, não trouxe efeitos positivos à produção e qualidade dos frutos, bem como no 

desenvolvimento da cultura do tomateiro implantada no período de incidência do vira-cabeça. 

Tabela 4. Percentual de frutos de tomate sem manchas e sem podridões da cultivar 

Saladinha Plus, para os diferentes tratamentos. 

Tratamentos 



Médias 


c./100L 

62,5 68,8 65,7 AB 


c./100L 

75,5 76,0 75,8 A 

Bacillus subtilis 400mL p. c./100L 

51,8 46,9 49,3 C 



Média geral 

58,1 

61,98 a 

46,9 

59,63 a 

52,5 

60,80 

CV% = 16,45 

DMS = 14,01 




BC 

35

Töfoli et al. (2003) observou que nos tratamentos onde foram 

pulverizados fungicidas pertencentes ao grupo das estrobilurinas, houve uma tendência de 

maiores números de frutos sadios e maior produção comercial, o mesmo foi observado neste 

trabalho. Estudos têm provado que as estrobilurinas, além de atuarem diretamente sobre o 

patógeno, apresentam efeitos secundários altamente benéficos à planta, tais como: a redução da 

produção de etileno, aumento da atividade da enzima nitrato-redutase, o atraso da senescência, 

maior resistência ao estresse hídrico e o aumento do teor de clorofila (GROSSMANN; 

RETZLAFF, 1997; HABERMEYER et al., 1998). 

Para avaliar o percentual da maturação de frutos de tomateiro colhidos, 

(Tabela 5) a ANOVA não indicou significância para nenhuma variável, onde o pré-tratamento na 

bandeja (P=0,062), os tratamentos que receberam aplicação dos produtos somente após 

transplantio (P=0,083). A interação entre pré e aplicação dos tratamentos apenas no campo não 

foram significativas (P=0,666). 

Tabela 5. Percentual de frutos de tomateiro verdes obtidos durante a colheita da 

cultivar Saladinha Plus, para os diferentes tratamentos. 

Tratamentos 



Médias 


c./100L 

10,02 11,86 10,94 A 


c./100L 

9,86 14,71 12,28 A 


c./100L 

13,47 14,34 13,91 A 



14,39 16,20 15,30 A 

Média geral 

11,94 a 14,28 a 13,11 

CV% = 25,64 

DMS = 4,70 




Apesar de não haver significância entre os tratamentos pode se observar 

na tabela 5 que os tratamentos constituídos de Piraclostrobina+Metiram apresentaram uma maior 

uniformidade de maturação, principalmente para aqueles que receberam aplicação no momento 

36

da semeadura. Isso sugere que a aplicação dos produtos na semeadura é benéfica não somente ao 

desenvolvimento da cultura, ajudando a planta a permanecer com folhas mais sadias, como 

também na melhoria e qualidade dos frutos de tomate. Essas qualidades benéficas foram 

observadas ao longo do desenvolvimento vegetativo à cultura, bem como no momento da 

colheita. 

Köehle et al. (1994) demonstram que a aplicação de produtos da classe 

das estrubirulinas altera os níveis de auxina, o autor sugere que isso ocorre pois há um aumento 

na produção de ácido indolil acético (IAA), o que estimula o alongamento e divisão celular, o 

desenvolvimento inicial das raízes, atraso da senescência das folhas e atraso do amadurecimento 

dos frutos. 

O fato dos tratamentos com Piraclostrobina+Metiram apresentarem uma 

menor quantidade de frutos verdes, ou seja, uma maior uniformidade de maturação pode ser 

devida ao tempo de aplicação do produto, uma vez que a ultima pulverização do produto foi aos 

65 DAT e a colheita realizada aos 80 DAT, o efeito do produto já estava em baixos níveis, dessa 

forma ocorre uma maior respiração das plantas, um aumento no nível de etileno, acelerando 

assim a maturação dos frutos. 

As estrobilurinas quando aplicadas sobre as plantas atuam na ativação da 

enzima NADH nitrato redutase, aumentando a assimilação de nitrato e sua posterior incorporação 

nas moléculas vitais da planta, como a clorofila, fazendo com que ocorra aumento na eficiência 

na assimilação de CO2, a elevação da taxa fotossintética e a redução da taxa respiratória. Outro 

efeito promissor é a redução na produção de etileno, que retarda a senescência das folhas, 

aumentando o período que a planta permanece com a fotossíntese ativa (VENÂNCIO et al., 

2003; FAGAN, 2007). 

Araújo e Carvalho (2009) observaram que em ensaio conduzido com 

tomate cultivar Santa Clara, o tratamento com Bacillus subtilis influenciou o crescimento das 

plantas em variáveis como produção de biomassa da parte aérea, massa total de frutos e número 

de frutos maduros, quando comparado com a testemunha, o mesmo não foi observado neste 

trabalho. 

37

6.2. Incidência da doença e sua relação com os indutores 

Com relação ao efeito dos produtos nas dosagens usadas, visando sua 

ação sobre o vira cabeça do tomateiro, os dados da AACPD estão apresentados na Tabela 6. Os 

valores da AACPD para o tomate Saladinha Plus, avaliados nas diferentes doses de produtos 

aplicados, não diferiram do tratamento convencional com Metamidófos. 

Tabela 6. Área abaixo da curva de progresso da doença (AACPD) do vira cabeça 

do tomateiro, para a cultivar de tomate Saladinha Plus, tratada com fungicidas e 

biofungicidas. Avaliação da incidência da doença aos 30, 45 e 60 dias após 

transplantio. 

Tratamentos 



Médias 


p. c./100L 

73,13 63,75 68,44 A 


p. c./100L 

60,00 75,00 67,50 A 

Bacillus subtilis 400mL p. 120,00 135,00 127,50 A 

c./100L 



Média geral 

116,25 153,75 135,00 A 

92,35 106,88 

99,61 

CV% = 58,54 


Médias seguidas de letras maiúsculas iguais na coluna não diferem pelo teste de Tukey a 5%. 

Para a AACPD ANOVA não indicou significância para o pré-tratamento 

na bandeja (P=0,489) e significância para os tratamentos que receberam aplicação dos produtos 

somente após o transplantio (P=0,045), ou seja, existe diferença entre os produtos e doses 

aplicadas para o controle da incidência da doença. A interação entre pré e aplicação dos 

tratamentos apenas no campo não foram significativas (P=0,884). A precisão experimental 

avaliada pelo coeficiente de variação (CV) foi de 58,54%, o alto valor encontrado foi devido 

principalmente, à presença de valores nulos obtidos nas primeiras avaliações, devido a esse 

motivo, o teste não conseguiu realizar diferença estatística entre os tratamentos. Porém pode-se 

38

observar na Tabela 6, que o tratamento com piraclostrobina + metiram 400g p. c./100L, foi o 

melhor tratamento, obtendo uma menor AACPD, seguido pelo tratamento onde foi pulverizado o 

mesmo produto, porém na dose de 200g p. c./100L. O mesmo foi observado ao longo do ciclo da 

cultura, onde as plantas que receberam pulverização de piraclostrobina + metiram, associada ao 

tratamento na bandeja no momento da semeadura, apresentavam sintomas leves ou quase 

ausentes, mas com a presença do vírus. 

Devido a não diferença estatística, para verificar o progresso da doença, 

realizou-se a análise de regressão linear. Porém para os tratamentos constituídos de 

Piraclostrobina+Metiram 200g p. c./100L, Piraclostrobina+Metiram 400g p. c./100L, a análise 

não encontrou diferença significativa (P=0,0922, P=1,00 respectivamente), enquanto que para os 

tratamentos Bacillus subtilis 400mL p. c./100L e tratamento convencional com Metamidófos a 

regressão linear apresentou significância de P=0,00113 e P= 8,27x10 -10 ) (Figura 7). 

Podemos observar na figura 3 que o tratamento constituído de 

piraclostrobina+metiram 200g p. c./100L apresenta um pequeno crescimento da doença ao longo 

das avaliações, quando comparada com o tratamento onde foi pulverizado o mesmo produto, 

porém com uma dose maior de 400g p. c./100L, esse tratamento apresenta uma evolução 

constante da doença ao longo do tempo, ou seja, o numero de plantas doentes permanece até o 

fim do ciclo da cultura. Para o tratamento onde foi pulverizado o biofungicida Bacillus subtilis, 

ocorre um aumento da doença ao longo do período de avaliação, porém o tratamento que 

apresentou o maior número de plantas doente foi o tratamento convencional, onde foi pulverizado 

inseticida do grupo químico dos Metamidófos. 

39

CPIVC 

6 

5 

4 

3 

2 

1 

0 

0 10 20 30 40 50 60 70 

Dias 

P+M 200g p. c./100L 

P+M 400g p. c./100L 

Bacillus subtilis 400 mL p. c./100L 



Figura 3. Curvas de progresso de incidência do vira cabeça (CPIVC) do tomateiro, para a cultivar Saladinha Plus, 

avaliada aos 30, 45 e 60 dias após transplantio. 

P+M = Piraclostrobina + Metiram. 

P+M 200g p. c./100L: y = 0,0207x + 1,3233 (R² = 0,8887); 

P+M 400g p. c./100L: y = 2,25 (R² = #N/A); 

Bacillus subtilis 400 mL p. c./100L: y = 0,0417x + 2,2483 (R² = 0,6786); 

Tratamento convencional (Metamidófos): y = 0,0917x + 0,2517 (R² = 0,9087). 

As doses de Piraclostrobina+Metiran utilizadas neste trabalho são aquelas 

recomendadas para o controle da pinta preta (Alternaria solani) e requeima do tomateiro 

(Phytophthora infestans) (AGROFIT, 2013), respectivamente, como não há produtos registrados 

para doenças virais, o uso desses produtos mostraram-se promissores no controle do vira cabeça 

do tomateiro, nas condições em que os ensaios foram conduzidos. A utilização do biofungicida a 

base de Bacillus subtilis neste trabalho mostrou resultado satisfatório apenas quando comparado 

ao tratamento convencional com Metamidófos utilizado. 

Conforme a tabela 6, podemos observar que as plantas que receberam o 

pré-tratamento na bandeja e posteriormente a aplicação dos tratamentos no campo, apresentam 

uma redução da incidência da doença quando comparado com os tratamentos apenas no campo, 

40

isso indica efeito benéfico da aplicação desse produto sobre a diminuição da incidência do vira- 

cabeça, bem como a possível verificação dos mecanismos de indução de resistência. 

Herms et al. (2002) demonstraram a capacidade de um tipo de fungicida 

da família F500 (Piraclostrobina) de induzir resistência ao Tobacco mosaic virus (TMV) e 

Pseudomonas syringae pv tabaci em plantas de fumo (Nicotiana tabacum cv Xanthi nc.), bem 

como verificou a diminuição da incidência das doenças. 

Vigo-Schultz (2008) demonstrou que em ensaios realizados em casa de 

vegetação, com a finalidade de avaliar o controle do crestamento bacteriano, foi observado 

redução na AACPD, após a pulverização de Piraclostrobina, bem como verificou o efeito desse 

produto nos mecanismos de indução de resistência. 

Itako (2011) mostrou em seus experimentos que a aplicação de 

piraclostrobina+metiram, em tomate hibrido AP-529 e cultivar Santa Clara, reduziu a incidência 

de Xanthomonas perforans, bem como verificou que a utilização desse produto está envolvida na 

ativação de proteínas relacionadas à patogênese em tomateiro. 

de tomateiro 

6.3.1. Atividade de Peroxidase 

6.3. Ativação de enzimas relacionadas à indução de resistência em plantas 

Com relação à peroxidase (Tabela 7) e a polifenoloxidase (Tabela 8) 

obtidas em folhas de tomateiro, cultivar Saladinha Plus, pôde-se verificar aumento na atividade 

enzimática de ambas enzimas, assim como no teor de proteína total solúvel ( Tabela 9), 

principalmente nos tratamentos constituídos de Piraclostrobina+Metiram. A atividade de enzimas 

oxidativas como peroxidases e polifenoloxidases tem sido bastante estudada em plantas como 

parte dos mecanismos de defesas induzidas, ou em condições e estresse (SÁNCHEZ et al., 2000; 

NOJOSA et al., 2003). 

41

O aumento significativo da atividade enzimática pode estar relacionado 

com a incidência da doença, verificado pelo menor valor de CPIVC (Curva de progresso de 

incidência do vira cabeça), apesar do teste de Tukey não apresentar diferença estatística, é nítido 

que o tratamento constituído de Piraclostrobina+Metiram 400g p. c./100L, apresentou um menor 

crescimento da doença quando comparado com os outros tratamentos (Tabela 6 e Figura 3). 

Para atividade enzimática da peroxidase (μmol H2O2 decomposto min -1 g - 

1 MF) a ANOVA indicou significância para o pré-tratamento que foi a aplicação de 

Piraclostrobina+Metiram (3 g/L H2O) + Boscalida (0,3 g/L H2O) nas bandejas no momento da 

semeadura (P=6,2X10 -12 ) e para os tratamentos que receberam aplicação dos produtos somente 

após transplantio (P=4,61X10 -14 ) e para a interação (P=4,38x10 -6 ). Uma vez que a interação entre 

pré-tratamento e tratamento realizado somente após transplantio foi significativa, o estudo foi 

feito utilizando uma tabela de dupla entrada. Optou-se pelo uso do teste de Tukey comparando as 

oito combinações dos tratamentos conforme pode ser observado na tabela 7. 

Na tabela 7 podemos observar que a combinação 

Piraclostrobina+Metiram 400g p. c./100L com o pré-tratamento realizado no momento da 

semeadura apresentou maior atividade da enzima. As causas das interações possivelmente podem 

ser devido pelos resultados das combinações sem tratamento realizado nas bandejas no momento 

da semeadura que não foram consistentes com os resultados das combinações dos tratamentos 

com a aplicação na semeadura. Pode se notar que sem o pré-tratamento realizado, não foram 

observadas diferenças significativas entre Piraclostrobina+Metiram 200g p. c./100L e 400g p. 

c./100L, assim como não foram observadas diferenças entre a bactéria Bacillus subtilis e o 

tratamento convencional com Metamidófos. Já nos tratamentos onde foram aplicados 


semeadura essas diferenças foram significativas. A melhor cominação Piraclostrobina+Metiram 

foi à dose de 400g p. c./100L com o pré-tratamento, o que esta de acordo com os resultados 

gerais. 

42

Tabela 7. Médias da atividade de Peroxidase (μmol H2O2 decomposto min -1 g -1 MF), em folhas 

de tomate, cultivar Saladinha Plus, para os diferentes tratamentos. 

Tratamentos 



Médias 

Piraclostrobina+Metiram 

200g p. c./100L 


0,28 b 0,24c c 0,26 B 

400g p. c./100L 


0,31 a 0,26c c 0,28 A 

c./100L 


0,27 bc 0,19d d 0,23 C 

(Metamidófos) 0,21 d 0,19d d 0,20 D 

Média geral 

0,26 A 0,22B B 0,24 

CV% a= 9,28 

CV% b= 8,99 

DMS = 0,020 


Médias seguida de letras maiúsculas iguais na coluna e minúsculas no interior da tabela não diferem pelo teste de 

Tukey a 5%. 

Médias seguidas de letras maiúsculas iguais na ultima linha não diferem significativamente pelo teste F a 5%. 

Uma vez que após cada aplicação dos tratamentos, foram feitas duas 

coletas de material vegetal, separadas pelo intervalo de 5 dias e foi realizada uma análise 

comparando os valores dos dias das coletas imediatamente após a aplicação dos tratamentos e os 

dias referentes às segundas coletas. Para essa análise, utilizou-se a técnica de contrastes 

considerando a diferença das médias dos dias (primeira e segunda coleta). O teste F não indicou 

significância para esta diferença (P=0,2865), sugerindo que não existe diferença entre as coletas 

realizadas no quinto e no décimo dia após aplicação do produto para esta enzima e que o 

comportamento da peroxidase apresenta níveis crescentes, conforme pode ser visto na figura 4. 

A atividade enzimática da peroxidase nas folhas de tomateiro da cultivar 

Saladinha Plus, nas diferentes coletas ao longo do período de avaliação. A análise de regressão 

mostrou significância para a regressão de terceiro grau, (P= 7,8x10 -42 ). Pode-se observar que 

ocorre um crescimento da atividade da enzima até os 60 dias após transplantio, essa data se refere 

ao décimo dia após a aplicação do produto, ou seja, segunda coleta, depois desse período ocorre 

um decréscimo da atividade da enzima. Foi possível observar que após esse período ocorreu uma 

43

melhora na qualidade das plantas, principalmente nos tratamentos constituídos de 

piraclostrobina+metiram, isso sugere que a peroxidase foi um indicador antecipado da qualidade 

das plantas de tomateiros. 

∆ abs 505nm μmol H 2O 2 decomposto min -1 g -1 MF 

0,4 

0,35 

0,3 

0,25 

0,2 

0,15 

0,1 

0,05 

0 

0 10 20 30 40 50 60 70 80 

Figura 4. Atividade enzimática de peroxidase (∆ abs 505nm μmol H2O2 decomposto min -1 g -1 MF) em folhas de 

tomateiro, cultivar Saladinha Plus, nas diferentes coletas ao longo do tempo. 

Equação Polinomial. y = -0,0004x 3 + 0,0579x 2 - 2,5093x + 37,15 (R² = 0,9267) 

Dias 

Como foi observada interação entre pré-tratamento realizado nas bandejas 

e dias de coleta, a analise foi desdobrada fazendo-se o estudo da regressão sobre dias nas parcelas 

que receberam o pré-tratamento e nas parcelas que não receberam. Nas parcelas que receberam o 

pré-tratamento o teste F indicou significância para a regressão de terceiro grau (P=1,39x10 -31 ) 

(Figura 5). Também foi observada interação entre os dias de coleta e a aplicação dos tratamentos 

somente em campo, onde o estudo da regressão foi realizado e o teste F indicou significância para 

a regressão de terceiro grau (P=5,01x10 -24 ). Ocorre um acréscimo da atividade das enzimas tanto 

para os tratamentos que receberam aplicação do produto Piraclostrobina+Metiram (3 g/L H2O) + 

44

Boscalida (0,3 g/L H2O) no momento da semeadura quanto para os que não receberam, porém 

apresentaram um padrão ligeiramente diferente, mas com curvas de terceiro grau com picos 

praticamente nos mesmos dias. Isso pode ser melhor observado na figura 5. 


0,45 

0,4 

0,35 

0,3 

0,25 

0,2 

0,15 

0,1 

0,05 

0 

0 10 20 30 40 50 60 70 80 

Dias 

Com trat. semeadura 

Sem trat. semeadura 

Figura 5. Comportamento enzimático da atividade de peroxidase (∆ abs 505nm μmol H2O2 decomposto min -1 g -1 MF) 

em folhas de tomateiro, cultivar Saladinha Plus, para os tratamentos que receberam aplicação de 

Piraclostrobina+Metiram (3 g/L H2O) + Boscalida(0,3 g/L H2O) no momento da semeadura e para os tratamentos 

que receberam aplicação dos produtos somente após transplantio. 

Dias com pré tratamento na semeadura: y = -0,0002x 3 + 0,0317x 2 - 1,3638x + 20,06 (R²= 0,9457); 

Dias sem pré tratamento na semeadura: y = -0,0002x 3 + 0,0262x 2 - 1,1455x + 17,09 (R² = 0,9003). 

Como foi verificada interação entre dias de coleta após aplicação dos 

produtos, com o tratamento aplicado somente após transplantio, foi realizado um estudo de 

regressão para verificar o comportamento da enzima em cada tratamento (Figura 6). Nos quatro 

casos observou-se alta significância para o polinômio de terceiro grau (P=7,86x10 -18 , P= 4,52x10 - 

25 , P= 4,66x10 -14 , P=1,13x10 -12 , para os tratamentos Piraclostrobina+Metiram 200g p. c./100L, 

Piraclostrobina+Metiram 400g p. c./100L, Bacillus subtilis 400mL p. c./100L e tratamento 

convencional com Metamidófos, respectivamente). 

45

Observa-se na figura 6 que o comportamento das enzimas nos diferentes 

tratamentos foi similar, ocorrendo um acréscimo ao longo do tempo, com o pico de atividade aos 

60 dias após transplantio, porém os tratamentos que receberam aplicação de 

Piraclostrobina+Metiram, apresentam pico maior quando comparado aos tratamentos com 

aplicação de Bacillus subtilis e Metamidófos. 


0,5 

0,45 

0,4 

0,35 

0,3 

0,25 

0,2 

0,15 

0,1 

0,05 

0 

0 10 20 30 40 50 60 70 80 

Dias 

P+M 200g p. c./100L 

P+M 400g p. c./100L 

Bacillus subtilis 400mL p. c./100 L 



Figura 6. Atividade de peroxidase (∆ abs 505nm μmol H2O2 decomposto min -1 g -1 MF) em folhas de tomateiro, 

cultivar Saladinha Plus, ao longo dos dias de coletas, para os diferentes tratamentos. 


P+M 200g p. c./100L: y = -1E-04x 3 + 0,0146x 2 - 0,6175x + 8,931 (R² = 0,9588); 

P+M 400g p. c./100L: y = -0,0001x 3 + 0,0188x 2 - 0,8151x + 11,916 (R² = 0,8712); 

Bacillus subtilis 400mL p. c./100L: y = -8E-05x 3 + 0,0125x 2 - 0,5327x + 7,8197 (R² = 0,9381); 

Tratamento convencional (Metamidófos): y = -8E-05x 3 + 0,012x 2 - 0,5441x + 8,4841 (R² = 0,9026 ). 

Os mecanismos de defesa das plantas contra fitopatógenos envolvem 

alterações metabólicas que estão correlacionadas com mudanças na atividade de enzimas-chaves 

nos metabolismos primário e secundário (ARAÚJO; MENEZES, 2009). Neste contexto o grupo 

de peroxidases representa um papel importante na defesa das plantas. Mudanças na atividade 

desta enzima têm sido frequentemente correlacionadas a resposta de resistência ou suscetibilidade 

em diferentes patossistemas (VIECELLI et al., 2010). Em nossa pesquisa, notamos que as plantas 

46

tratadas com Piraclostrobina+Metiram, principalmente na dose 400g p. c./100L e associadas ao 

tratamento na semeadura apresentaram maior atividade de peroxidase, este mesmo tratamento foi 

o que demonstrou uma melhora na produção e qualidade dos frutos de tomate. Assim, 

provavelmente, essa enzima pode ser tomada como indicador bioquímico do uso de produtos que 

causam efeitos fisiológicos positivos em plantas de tomate com vira cabeça, incitando o seu 

possível envolvimento nos mecanismo de indução de resistência. 

As peroxidases são responsáveis pela remoção de átomos de hidrogênio 

dos grupos álcoois hidroxicinâmicos, cujos radicais se polimerizam para formar a lignina. Esse 

polímero, juntamente com celulose e outros polissacarídeos que ocorrem na parede celular das 

plantas superiores, funciona como uma barreira física à penetração do patógeno. Além disso, esta 

enzima também participa da biossíntese do etileno, e na oxidação de ácido indol acético (AIA) e 

de compostos fenólicos (CAVALCANTI et al., 2005). Sobre isto, diversos trabalhos têm 

mostrado o envolvimento das peroxidases nos mecanismos de defesa das plantas, que pode ser 

comprovado nesta pesquisa em resposta a aplicação de piraclostrobina+metiram, produto que se 

mostrou mais eficiente para o controle do vira-cabeça. 

Trabalhos com piraclostrobina na defesa de plantas contra alguns 

fitopatógenos tem sido relatados por Hermes et al. (2002), na qual demonstraram que 

piraclostrobina aumentou a resistência de fumo contra a infecção causada pelo vírus do mosaico 

do fumo (TMV) e por Pseudomonas syringae pv. tabaci. Houve acumulo de acido salicílico nos 

tecidos das plantas tratadas e de PR-1 proteínas, indicando que piraclostrobina age ativando 

mecanismos de defesas nas plantas, alem da ação fungicida. Estes resultados foram semelhantes 

aos encontrados neste estudo e assim, podemos afirmar que a peroxidase foi uma forma de 

verificar antecipadamente os resultados promovidos pelo produto. 

Outros estudos também mostram aumento da atividade de algumas 

enzimas em resposta a aplicação da produtos para diminuir ou aumentar a resistência. 

Vigo-Schultz, (2008) verificou que sob efeito de acibenzolar-S-metil e 

piraclostrobina, as plantas de feijão vagem, cultivar Bragança, mostraram maiores atividades da 

polifenoloxidase e peroxidase e maior teor de proteínas solúveis totais, sugerindo seu 

envolvimento nos mecanismos de indução de resistência ao crestamento bacteriano comum, 

semelhante aos resultados aqui observados para tomateiro, sendo um indicativo que estes 

produtos, principalmente a piraclostrobina podem induzir mecanismos bioquímicos de 

47

esistência. Em folhas de tomateiro hibrido AP529, maior atividade dessas enzimas (PFO e 

POD), além da β-1,3 glucanase também foram relacionadas com a redução da severidade da 

doença, verificadas pelo menor valor da AACPD, principalmente quando tratadas com 

acibenzolar -S-metil, piraclostrobina e piraclostrobina + metiran (ITAKO et al., 2012). 

Como potenciais agentes indutores bióticos, têm sido avaliadas as 

rizobactérias promotoras do crescimento de plantas que habitam o solo e com frequência são 

isoladas da rizosfera de diversas plantas cultivadas. Dentre os mecanismos de ação das 

rizobactérias no solo a competição por nutrientes, antibiose, produção de enzimas extracelulares e 

indução de resistência são os mais citados para explicar o controle de patógenos de solo, como 

também de doenças foliares contra fitopatógenos de tomate (ARAUJO; MENEZES, 2009). 

Apesar de neste trabalho, a aplicação do biofungicida Bacillus subtilis, 

não ter demonstrado efeitos benéficos à cultura do tomateiro, cultivar Saladinha Plus, o controle 

biológico relacionado à indução de resistência já foi comprovado com rizobactérias (VAN LONN 

et al., 1998) e também já foi verificada indução de resistência em tomate proporcionado por 

bactérias residentes no filoplano (HALFELD-VIEIRA et al., 2006). 

Em relação a peroxidase e controle biológico, Araújo e Menezes, (2009), 

inocularam plantas de tomateiro com Bacillus subtilis, no solo, esta aplicação resultou em 

maiores concentrações de peroxidase em seus tecidos quando comparada com o controle ou 

plantas pulverizadas com B. subtilis na parte aérea. O mesmo aconteceu nesse experimento, 

quando as plantas de tomateiro foram pulverizadas com B. subtilis na parte aérea, ocorreu menor 

atividade de peroxidase em relação aos tratamentos com Piraclostrobina + Metiram. 

6.3.2. Atividade de Polifenoloxidase 

Para a atividade da polifenoloxidase (∆ abs 395 nm μmol catecol oxidado. 

min -1 .g -1 MF) a ANOVA indicou significância para o pré-tratamento que foi a aplicação de 


semeadura (P=1,69x10 -5 ) e para os tratamentos que receberam aplicação dos produtos somente 

48

após transplantio (P=5,49x10 -8 ). A interação entre pré-tratamento e tratamentos aplicados 

somente após transplantio não foi significativa (P=0,5937) (Tabela 8). 

O valor médio para o pré-tratamento que foi a aplicação de 


semeadura foi de 0,1597 μmol catecol oxidado. min -1 .g -1 MF, significativamente superior ao 

valor médio dos tratamentos que receberam aplicação dos produtos somente após transplantio, 

igual a 0,1477 μmol catecol oxidado. min -1 .g -1 MF. 

Isso ocorreu porque possivelmente, o boscalida complementou a ação das 

estrobilurinas, seja aplicado alternadamente, seja aplicado em conjunto. E, assim como as 

estrobilurinas, é um fungicida sistêmico que funciona preventivamente inibindo a germinação de 

esporos, e possui pouco efeito curativo. Além disso, visivelmente, ele possui os mesmos efeitos 

fisiológicos das estrobilurinas (VENTURE, 2006), causando possíveis alterações no metabolismo 

e crescimento (KÖHLE et al., 1994), o mesmo foi observado neste experimento. 

Tabela 8. Atividade enzimática de Polifenoloxidase (∆ abs 395 nm μmol catecol oxidado. min -1 .g - 

1 

MF) em folhas de tomate, cultivar Saladinha Plus, para os tratamentos que receberam aplicação 

dos produtos somente após transplantio. 

Tratamentos Médias 

Piraclostrobina+Metiram 200g p. c./100L 

Piraclostrobina+Metiram 400g p. c./100L 

0,16 B 

0,17 A 

Bacillus subtilis 400mL p. c./100L 0,15 C 



0,14 C 

Média geral 0,15 

CV% a= 10,54 

CV% b= 10,79 

DMS = 0,0085 

Médias seguidas de letras maiúsculas iguais na coluna não diferem pelo teste de Tukey a 5%. 

Após cada aplicação foram feitas duas coletas de material vegetal, 

separadas pelo intervalo de 5dias e foi realizada uma análise comparando os valores dos dias das 

49

coletas imediatamente após a aplicação dos tratamentos e os dias referentes às segundas coletas. 

Para essa analise utilizou-se a técnica de contrastes considerando a diferença das médias dos dias 

(primeiro e segunda coleta). O teste F indicou significância para esta diferença (P=1,42x10 -15 ), 

sugerindo que existe diferença entre as coletas realizadas no quinto e no décimo dia após 

aplicação do produto e que o comportamento desta enzima apresenta picos de crescimento aos 45 

e 60 dias após transplantio, depois desse período ocorre um decréscimo da atividade da enzima, 

conforme pode ser visto na Figura 7. 

O gráfico apresentado na figura 7 mostra o nível médio da atividade da 

polifenoloxidase observado nas folhas de tomateiro da cultivar Saladinha Plus, nas diferentes 

coletas ao longo do período de avaliação. A análise de regressão mostrou significância para a 

regressão de segundo grau, (P=5,53x10 -23 ). 

∆ abs 395nm μmol catecol oxidado. min -1 .g -1 MF 

0,25 

0,2 

0,15 

0,1 

0,05 

0 

0 10 20 30 40 50 60 70 80 

Figura 7. Atividade enzimática de polifenoloxidase (∆ abs 395 nm μmol catecol oxidado. min -1 .g -1 MF) em folhas de 

tomateiro, cultivar Saladinha Plus, nas diferentes coletas ao longo do tempo. 

Equação Polinomial. y = -7E-05x 2 + 0,0077x - 0,054 (R² = 0,3645) 

Dias 

50

Desde que houve interação entre pré-tratamento realizado nas bandejas e 

dias de coleta, a analise foi desdobrada fazendo-se o estudo da regressão sobre dias nas parcelas 

que receberam o pré-tratamento e nas parcelas que não receberam. Nas parcelas que receberam o 

pré-tratamento o teste F indicou significância para a regressão de segundo grau (P=1,96x10 -20 ) 

(Figura 8). Também verificou - se interação entre os dias de coleta e a aplicação dos tratamentos 

somente em campo, onde o estudo da regressão foi realizado e o teste F indicou significância para 

a regressão de segundo grau (P=2,87x10 -8 ), isso pode ser melhor observado na figura 8. Ocorre 

um acréscimo da atividade das enzimas para todos os tratamentos que receberam aplicação do 

produto no momento da semeadura quando comparado aos que não receberam isso pode ser 

melhor observado na figura 8. 


0,25 

0,2 

0,15 

0,1 

0,05 

0 

0 10 20 30 40 50 60 70 80 

Dias 

Dias com trat. semeadura 

Dias sem trat. semeadura 

Figura 8. Comportamento enzimático da atividade de polifenoloxidase (∆ abs 395 nm μmol catecol oxidado. min -1 .g -1 

MF) em folhas de tomateiro, cultivar Saladinha Plus, para os tratamentos que receberam aplicação de 

Piraclostrobina+Metiram (3 g/L H2O) + Boscalida (0,3 g/L H2O) no momento da semeadura e para os tratamentos 

que receberam aplicação dos produtos somente após transplantio. 

Dias com pré tratamento na semeadura: y = -9E-05x 2 + 0,0097x - 0,0935 (R² = 0,4628); 

Dias sem pré tratamento na semeadura: y = -5E-05x 2 + 0,0057x - 0,0146 (R² = 0,2885). 

51

Como se verificou interação entre dias de coleta após aplicação dos 


regressão para verificar o comportamento da enzima em cada tratamento (Figura 9). 

Para o tratamento com Piraclostrobina+Metiram 200g p. c./100L, Bacillus 

subtilis 400mL p. c./100L e tratamento convencional com Metamidófos, foi observada 

significância de segundo grau P=1,15x10 - 7, P=3,92x1 -11 ,P=3,29x10 -9 respectivamente. Para o 

tratamento com Piraclostrobina+Metiram 400g p. c./100L, a regressão polinomial apresentou 

significativa para terceiro grau com P=0,0374. 


0,25 

0,2 

0,15 

0,1 

0,05 

0 

0 10 20 30 40 50 60 70 80 

Dias 

P+M 200g p. c./100L 

P+M 400g p. c./100L 




Figura 9. Atividade de Polifenoloxidase (∆ abs 395nm μmol catecol oxidado. min -1 .g -1 MF) em folhas de tomateiro, 

cultivar Saladinha Plus, ao longo dos dias de coletas, para os diferentes tratamentos. 


P+M 200g p. c./100L: y = -6E-05x 2 + 0,0075x - 0,0486 (R² = 0,3791); 

P+M 400g p. c./100L: y = -2E-06x 3 + 0,0003x 2 - 0,0091x + 0,2217 (R² = 0,4099); 

Bacillus subtilis 400mL p. c./100L: y = -8E-05x 2 + 0,009x - 0,0847 (R² = 0,4029); 

Tratamento convencional (Metamidófos): y = -7E-05x 2 + 0,0078x - 0,0584 (R² = 0,3246). 

Observa-se na Figura 9 que o comportamento das enzimas apresentam se 

similares para quase todos os tratamentos, ocorrendo picos de acréscimo aos 45 DAT, com queda 

brusca aos 55 DAT e novamente um pico de atividade aos 60 DAT, porém para o tratamento 

Piraclostrobina+Metiram 400g p. c./100L, apresentam um comportamento ligeiramente diferente, 

52

onde aos 70 DAT ocorre um aumento do pico da atividade da enzima, quando comparada com os 

outros tratamentos. Neste tratamento também podemos observar maior atividade da enzima, que 

coincidentemente, foi o tratamento onde pode ser observado uma maior produção e um melhor 

aspecto da qualidade dos frutos. 

Outros estudos também correlacionam maior atividade de PFO com a 

capacidade de maior resistência ao ataque de patógenos. Orober et al. (1999) e Agrios (2005) 

constataram que geralmente ocorre maior atividade da polifenoloxidase nos tecidos infectados de 

cultivares resistentes do que em tecidos infectados de cultivares suscetíveis ou em plantas sadias. 

A importância da atividade da polifenoloxidase na resistência a doenças deve-se, provavelmente, 

à sua propriedade em oxidar compostos fenólicos para quinonas, os quais são muito mais tóxicos 

aos microrganismos do que o fenol original, e à sua ação protetora no local do ferimento. Por esta 

razão, admite-se que um aumento na atividade da polifenoloxidase resulta em altas concentrações 

de produtos tóxicos de oxidação e, portanto, maior grau de resistência à infecção (AGRIOS, 

2005; ZHENG-CUIMING et al., 1999). 

As polifenoloxidases oxidam um amplo grupo de fenóis sem a 

necessidade de H2O2, contudo peroxidases catalisam reações de oxidação utilizando o H2O2 como 

aceptor de elétrons, e atuam em vários processos metabólicos como: biossíntese de etileno, 

descarboxilação do ácido indol acético, lignificação da parede celular e respostas de estresse em 

geral (SIEGEL, 1993). No caso das polifenoloxidases, a atividade pode ser acrescida ou inibida 

em algumas plantas por estresses como injúrias, “chilling”, toxicidade de nitrogênio e ataque de 

patógenos (VAUGHN; DUKE, 1984; SÁNCHEZ et al., 2000, NOJOSA et al., 2003), na maioria 

das vezes a PPO é elevada em tecidos infectados e tem grande importância para as plantas, com 

envolvimento nos mecanismos de defesa ou na senescência (AGRIOS, 2005). 

6.3.3. Proteína Total Solúvel 

Para o teor de proteína total solúvel (μg prot. g -1 MF), (Tabela 9) a 

ANOVA não indicou significância para o pré-tratamento (P= 0,0612) que foi a aplicação de 


53

semeadura e significância para tratamentos aplicados somente após transplantio (P=7,23x10 -6 ), 

ou seja existe diferença entre os tratamentos aplicados no campo. A interação entre pré- 

tratamento e tratamentos aplicados somente após transplantio não significativa (P=0,2601). 

O valor médio para o pré-tratamento que foi a aplicação de 


semeadura foi de 1,6422 μg prot.g -1 MF, significativamente superior ao valor médio dos 

tratamentos que receberam aplicação dos produtos somente após transplantio, igual a 1,5227 μg 

prot. g -1 MF. 

Tabela 9. Teor de Proteína Total Solúvel (μg prot. g -1 MF), em folhas de tomate, cultivar 

Saladinha Plus, para os tratamentos que receberam aplicação dos produtos somente após 

transplantio. 

Tratamentos Médias 

Piraclostrobina+Metiram 200g p. c./100L 1,74 A 

Piraclostrobina+Metiram 400g p. c./100L 1,85 A 

Bacillus subtilis 400mL p. c./100L 1,36 B 

Tratamento convencional (Tamaron) 1,38 B 

Média geral 1,58 

CV%a= 28,57 

CV%b= 30,46 

DMS = 0,23 

Médias seguidas de letras maiúscula iguais na coluna não diferem pelo teste de Tukey a 5%. 

Após cada aplicação foram feitas duas coletas de material vegetal, 

separadas pelo intervalo de 5dias e foi realizada uma análise comparando os valores dos dias das 

coletas imediatamente após a aplicação dos tratamentos e os dias referentes às segundas coletas. 

Para essa analise utilizou-se a técnica de contrastes considerando a diferença das médias dos dias 

(primeiro e segunda coleta). O teste F indicou significância para esta diferença (P=0,0190), 

sugerindo que existe diferença entre as coletas realizadas no quinto e no décimo dia após 

aplicação do produto, de modo geral o segundo dia apresentou níveis mais altos de proteína. O 

comportamento do teor de proteína solúvel apresenta uma queda, que é iniciada na primeira 

coleta e vai até os 60 DAT, onde a partir desta data ocorre um aumento do teor de proteína até o 

fim do ciclo da cultura. 

54

O gráfico apresentado na figura 10 mostra o nível médio de proteína total 

solúvel, observado nas plantas durante o período de avaliação. A análise de regressão mostrou 

significância para a regressão de terceiro grau, (P=0,00019). 

∆ abs 595 nm μg prot. g -1 MF 

2,5 

2 

1,5 

1 

0,5 

0 

0 10 20 30 40 50 60 70 80 

Figura 10. Teor de Proteína Total Solúvel (∆ abs 595 nm μg prot. g -1 MF), em folhas de tomate, nas diferentes 

coletas ao longo do tempo. 

Equação Polinomial. y = -5E-05x 3 + 0,0095x 2 - 0,5317x + 10,673 (R² = 0,8062). 

Dias 

Como houve interação entre pré-tratamento realizado nas bandejas e dias 

de coleta, a analise foi desdobrada fazendo-se o estudo da regressão sobre dias nas parcelas que 

receberam o pré-tratamento e nas parcelas que não receberam. Nas parcelas que receberam o pré- 

tratamento o teste F indicou significância para a regressão de terceiro grau (P=9,70x10 -6 ) (Figura 

11). Para as parcelas que não receberam o pré-tratamento na semeadura o teste F indicou 

significância para a regressão de terceiro grau (P=0,02146), mostrando que os resultados nas 

parcelas que não receberam o tratamento na semeadura tiveram uma dinâmica de variação 

diferente dos que receberam o tratamento, conforme podemos ver na figura 11. 

55

∆ abs 595nm μg prot. g -1 MF 

2,5 

2 

1,5 

1 

0,5 

0 

0 10 20 30 40 50 60 70 80 

Dias 

com pré tratamento 

sem pre tratamento 

Figura 11. Comportamento do teor de proteína total solúvel (∆ abs 595 nm μg prot. g -1 MF), em folhas de tomate, 

cultivar Saladinha Plus, para os tratamentos que receberam aplicação de Piraclostrobina+Metiram (3 g/L H2O) + 

Boscalida (0,3 g/L H2O) no momento da semeadura e para os tratamentos que receberam aplicação dos produtos 

somente após transplantio. 

Dias com pré tratamento na semeadura: y = -9E-05x 3 + 0,0154x 2 - 0,8253x + 15,289 (R² = 0,8114); 

Dias sem pré tratamento na semeadura: y = -2E-05x 3 + 0,0037x 2 - 0,238x + 6,0569 (R² = 0,6647). 

Apesar de não ocorrer interação entre pré-tratamento e tratamentos 

aplicados somente após transplantio, é possível verificar na figura 12 o comportamento das 

proteínas solúveis nas folhas de tomateiro cultivar saladinha Plus, para os diferentes tratamentos. 

O comportamento do teor de proteína total solúvel (Figura 12) apresentou 

uma dinâmica de variação diferente para todos os tratamentos até os 60 DAT, a partir desta data 

há de notar que para todos os tratamentos ocorrem aumentos nos teores de proteínas solúveis, 

enquanto que o tratamento constituído de Piraclostrobina+Metiram na dosagem de 400g p. 

c./100L, apresenta teor mais elevado que os demais tratamentos. 

Entre as proteínas, há as relacionadas à patogênese (Proteínas-RP), as 

quais são induzidas nos tecidos vegetais em função da inoculação com 

patógenos/microrganismos, sistemicamente ou em parte destes, bem como pelo tratamento com 

agentes químicos (GUZZO, 2003). 

56

∆ abs 595nm μg prot. g -1 MF 

25,00 

20,00 

15,00 

10,00 

5,00 

0,00 

0 10 20 30 40 50 60 70 80 

Dias 

P+M 200g p. c./100L 

P+M 400g p. c./100L 


Tratamento convencional (Metamidófos) 

Figura 12. Média do teor de proteína total solúvel (∆ abs 595 nm μg prot. g -1 MF), em folhas de tomateiro, cultivar 

Saladinha Plus, ao longo dos dias de coletas, para os diferentes tratamentos. 


P+M 200g p. c./100L 

P+M 400g p. c./100L 


Tratamento convencional (Metamidófos) 

Na literatura são encontrados diversos trabalhos ressaltando o papel de 

proteínas e glicoproteínas nos mecanismos de resistência das plantas (LINTHORST, 1991; 

PASCHOLATI & LEITE, 1995; MORAES, 1998). O conteúdo de proteínas no tecido vegetal 

incitado com um patógeno ou tratado com eliciador indica a ativação dos mecanismos de defesa 

(STANGARLIN et al., 2000). 

Soares et al. (2004) mostraram diferença significativa no nível de 

proteínas totais solúveis em três cultivares de feijoeiro (Phaseolus vulgaris),com e sem 

pulverização de acibenzolar-S-methyl, sugerindo haver influência do indutor. Mesmo assim, os 

resultados não permitiram concluir se as alterações que ocorreram seriam relevantes no processo 

de resistência, pois, além das diferenças terem ocorrido somente no caule, onde os níveis de 

proteínas totais solúveis foram baixos se comparados à folha, também houve um aumento natural, 

com o tempo, dos níveis em todos os tratamentos. 

57

Kuhn (2007) verificou que a redução no teor de proteínas em plantas de 

feijão quando tratadas com Bacillus cereus, mostraram tendência contrária ao tratamento com 

acibenzolar-S-metil, demonstrando a especificidade na resposta fisiológica deste hospedeiro ao 

tratamento. O mesmo ocorreu neste trabalho, quando as plantas foram tratadas com Bacillus 

subtilis, ocorre uma redução no teor de proteínas quando comparadas com 

Piraclostrobina+Metiram. 

6.3.4. Poliaminas Livres 

As poliaminas são moléculas de baixo peso molecular encontradas em 

todos os organismos. As principais poliaminas encontradas nas plantas superiores são a 

putrescina (Put), a espermidina (Spd) e a espermina (Spm), ocorrendo na forma livre ou 

conjugada com ácidos fenólicos e moléculas de baixo peso molecular (BOUCHEREAU et al., 

1999; KUZNETSOV et al., 2006). 

Para verificar o teor de putrescina (μg. g -1 . massa fresca), a ANOVA 

indicou significância para o pré-tratamento que foi a aplicação de Piraclostrobina+Metiram (3 

g/L H2O) + Boscalida (0,3 g/L H2O) nas bandejas no momento da semeadura (P=2, 27x10 -28 ) e 


26 ), isso sugere que existe diferença entre a aplicação dos produtos no momento da semeadura e 

aplicação dos produtos somente após transplantio.Para a interação entre pré-tratamento na 

semeadura e tratamentos aplicados somente em campo o teste mostro-se altamente significativo 

(P=9,84x10 -21 ). Uma vez que a interação entre pré-tratamento e tratamento realizado somente 

após transplantio foi significativa, o estudo foi feito utilizando uma tabela das médias dos teores 

de Put. Optou-se pelo uso do teste de Tukey comparando as oito combinações dos tratamentos 

conforme pode ser observado na tabela 10. 

Na tabela 10 podemos observar que os tratamentos constituídos de 

Piraclostrobina + Metiram 400g p. c./100L e Bacillus subtilis 400mL p. c./100L, quando não 

associados ao tratamento na semeadura, apresentaram maior teor de putrescina, o mesmo seguiu 

as médias gerais, isso significa que para o teor de Put. a aplicação de Piraclostrobina+Metiram (3 

58

g/L H2O) + Boscalida (0,3 g/L H2O) nas bandejas no momento da semeadura não ocasionou 

efeitos benéficos. 

Tabela 10. Putrescina (μg. g -1 . massa fresca), em folhas de tomate, cultivar Saladinha Plus, para 

os diferentes tratamentos. 

Tratamentos Com pré 

Sem pré 

Médias 


200g p. c./100L 


400g p. c./100L 


c./100L 



tratamento 

tratamento 

0,86 Aa 0,89 Ba 0,88 B 

1,14 Ab 4,55 Aa 2,84 A 

1,11 Ab 4,11 Aa 2,61 A 

0,77 Ab 1,47 Ba 1,12 B 

Média Geral 0,97 b 2,76 a 

CV% = 34,02 


Médias seguidas de letras maiúsculas iguais na coluna e minúsculas na linha, não diferem pelo teste de Tukey a 5%. 



regressão para verificar o comportamento do teor de putrescina em cada tratamento (Figura 13). 

Para o tratamento Piraclostrobina+Metiram 200g p. c./100L, não foi possível observar diferença 

significativa (P= 0,3347), já para os tratamentos, Piraclostrobina+Metiram 400g p. c./100L, 

Bacillus subtilis 400 mL p. c./100L e tratamento convencional com Metamidófos, observou 

significância para o polinômio de segundo grau (P= 7,3389x10 -42 , P= 4,4647x10 -44 , P= 0,01360, 

respectivamente). 

O gráfico apresentado da figura 13 mostra o teor de putrescina, observado 

nas folhas de tomateiro da cultivar Saladinha Plus, nas diferentes coletas ao longo do período de 

avaliação. A análise de regressão mostrou significância para a regressão de segundo grau. Pode- 

se observar que o teor dessa diamina permanece estável, até os 60 dias após o transplantio, após 

essa data ocorre uma aumento no teor dessa poliamina para todos os tratamentos, principalmente 

59

para o tratamento que recebeu a pulverização de Piraclostrobina +Metiram 400g p. c./100L e 

Bacillus subtilis 400mL p. c./100L. 

μg . g -1 . massa fresca 

9 

8 

7 

6 

5 

4 

3 

2 

1 

0 

0 10 20 30 40 50 60 70 80 

Dias 

P+M 200g p. c./100L 

P+M 400g p. c./100L 




Figura 13. Comportamento dos teores de Putrescina (μg. g -1 . massa fresca), em folhas de tomateiro, cultivar 



P+M 200g p. c./100L: y = = 0,0005x 2 - 0,0471x + 1,861 (R² = 0,9997) 

P+M 400g p. c./100L: y = 0,0079x 2 - 0,6805x + 14,713 (R² = 0,972) 

Bacillus subtilis 400mL p. c./100L: y = 0,008x 2 - 0,694x + 14,851(R² = 0,9521) 

Tratamento convencional (Metamidófos): y = 0,0012x 2 - 0,1157x + 3,416 (R² = 0,9800). 

Para verificar o teor de espermidina (μg. g -1 . massa fresca), a ANOVA 


g/L H2O) + Boscalida (0,3 g/L H2O) nas bandejas no momento da semeadura (P=7,66x10 -6 ) e 


15 ), isso sugere que existe diferença entre a aplicação dos produtos no momento da semeadura e 

aplicação dos produtos somente após transplantio.Para a interação entre pré-tratamento na 

semeadura e tratamentos aplicados somente em campo o teste mostro-se significativo 

(P=0,00940). A interação entre pré-tratamento realizado nas bandejas no momento da semeadura 

60

e tratamento realizado somente após transplantio foi significativa, por isso foi realizado um 

estudo utilizando uma tabela das médias dos teores de Spd. Optou-se pelo uso do teste de Tukey 

comparando as oito combinações dos tratamentos conforme pode ser observado na tabela 11. 

Tabela 11. Espermidina (μg. g -1 . massa fresca), em folhas de tomate, cultivar Saladinha Plus, 

para os diferentes tratamentos. 

Tratamentos Com pré 

Sem pré 

Médias 


200g p. c./100L 


400g p. c./100L 

Bacillus subtilis 400mL 

p. c./100L 



tratamento 

0,78 

tratamento 

Cb 1,01 Ba 0,89 C 

1,35 Ab 1,54 Aa 1,45 A 

1,10 Ba 1,09 Ba 1,09 B 

1,13 Bb 1,53 Aa 1,33 A 

Média Geral 1,09 b 1,29 a 

CV% = 20,13 



Na tabela 11 podemos observar que os tratamentos constituídos de 

Piraclostrobina+Metiram 400g p. c./100L e Tratamento convencional com Metamidófos, quando 

não associados ao tratamento na semeadura, apresentaram um melhor teor de espermidina, o 

mesmo seguiu as médias gerais. 



regressão para verificar o comportamento do teor de espermidina em cada tratamento (Figura 14). 

Nos quatro casos observou-se significância para o polinômio de segundo grau (P=0,0275, 

P=0,0316, P=4,5589x10 -8 , P=2,0626x10 -10 ), para os tratamentos Piraclostrobina+Metiram 200g 

61

p. c./100L, Piraclostrobina+Metiram 400g p. c./100L, Bacillus subtilis 400mL p. c./100L e 

tratamento convencional com Metamidófos, respectivamente). 


3 

2,5 

2 

1,5 

1 

0,5 

0 

0 10 20 30 40 50 60 70 80 

Dias 

P+M 200g p. c./100L 

P+M 400g p. c./100L 




Figura 14. Comportamento dos teores de Espermidina (μg. g -1 . massa fresca), em folhas de tomateiro, cultivar 



P+M 200g p. c./100L: y = 0,0004x 2 - 0,0558x + 2,542 (R² = 0,1997); 

P+M 400g p. c./100L: y = 0,0004x 2 - 0,0459x + 2,6085 (R² = 0,0163); 

Bacillus subtilis 400mL p. c./100L: y = 0,0011x 2 - 0,1314x + 4,5805 (R² = 0,3645); 


O gráfico apresentado da figura 14 mostra o comportamento do teor de 

espermidina, observado nas folhas de tomateiro da cultivar Saladinha Plus, nas diferentes coletas 

ao longo do período de avaliação. A análise de regressão mostrou significância para a regressão 

de segundo grau. Pode-se observar que o teor dessa poliamina inicia-se alto aos 30 DAT, ocorre 

uma queda aos 45 dias, começa novamente para todos os tratamentos um aumento no teor dessa 

amina, onde ocorre um pico de teor máximo de espermidina aos 60 DAT, onde o tratamento 

Piraclostrobina+Metiram 400g p. c./100L sobressai sobre os demais e novamente ocorre uma 

queda. 

62

Apesar das poliaminas compartilharem um precursor comum (S-adenosil 

metionina) com o etileno, a função metabólica deles são diferentes. Geralmente, as poliaminas 

aparecem em baixas concentrações em tecidos senescentes e altas em verdes, o contrário do que é 

geralmente observado para o etileno e peroxidases (LIMA, 1994). Isso pode ser observado neste 

trabalho, Figuras 14 e 15. 

Para verificar o teor de espermina (μg. g -1 . massa fresca), a ANOVA não 


g/L H2O) + Boscalida (0,3 g/L H2O) nas bandejas no momento da semeadura (P=0,3465) e 

indicou significância para os tratamentos que receberam aplicação dos produtos somente após 

transplantio (P=6,50x10 -7 ), isso sugere que existe diferença somente entre os tratamentos 

aplicados em campo. Para a interação entre pré-tratamento na semeadura e tratamentos aplicados 

somente em campo o teste mostrou-se altamente significativo (P=1,50x10 -9 ). Uma vez que houve 

essa interação, foi realizado um estudo utilizando uma tabela das médias dos teores de Spm. 

Optou-se pelo uso do teste de Tukey comparando as oito combinações dos tratamentos conforme 

pode ser observado na tabela 12. 

Tabela 12. Espermina (μg. g -1 . massa fresca), em folhas de tomate, cultivar Saladinha Plus, para 

os diferentes tratamentos. 

Tratamentos Com pré Sem pré 

Médias 

tratamento tratamento 


200g p. c./100L 

5,57 Bb 11,97 Ba 8,77 A 


400g p. c./100L 


c./100L 



5,08 Ba 4,85 Aa 4,96 B 

3,99 Ba 5,19 Ba 4,59 B 

9,77 Aa 4,50 Aa 7,13 A 

Média Geral 6,10 a 6,63 a 

CV% = 49,33 



63



regressão para verificar o comportamento do teor de espermina em cada tratamento (Figura 15). 

Nos quatro casos observou-se significância para o polinômio de segundo grau (P=1,5286x10 -16 , 

P=4,0888x10 -9 , P=0,0050, P=5,4648x10 -15 ), para os tratamentos Piraclostrobina+Metiram 200g 

p. c./100L, Piraclostrobina+Metiram 400g p. c./100L, Bacillus subtilis 400mL p. c./100L e 

tratamento convencional com Metamidófos, respectivamente). 


30 

25 

20 

15 

10 

5 

0 

-5 

0 10 20 30 40 50 60 70 80 

Dias 

P+M 200g p. c./100L 

P+M 400g p. c./100L 




Figura 15. Comportamento dos teores de Espermina (μg. g -1 . massa fresca), em folhas de tomateiro, cultivar 



P+M 200g p. c./100L: y = 0,0248x 2 - 3,0356x + 92,775 (R² = 0,8072); 

P+M 400g p. c./100L: y = 0,016x 2 - 1,8832x + 55,228 (R² = 0,8928); 

Bacillus subtilis 400mL p. c./100L: y = 0,0071x 2 - 0,9143x + 31,09 (R² = 0,5759); 


64

O gráfico apresentado da figura 15 mostra o comportamento do teor de 

espermina, observado nas folhas de tomateiro da cultivar Saladinha Plus, nas diferentes coletas ao 

longo do período de avaliação. A análise de regressão mostrou significância para a regressão de 

segundo grau. Pode-se observar que o teor dessa poliamina inicia-se alto aos 30 DAT, ocorre uma 

queda aos 45 dias, após esse período ocorre novamente um leve crescimento do teor dessa 

amina para todos os tratamentos, onde ocorre um pequeno pico de crescimento aos 60 DAT, 

onde o tratamento Piraclostrobina+Metiram 200g p. c./100L sobressai sobre os demais e 

novamente ocorre uma queda. 

Os resultados desse trabalho são compatíveis com a opinião de Galston e 

Kaur-Sawhney (1990), que poliaminas de altos níveis são característicos de tecidos 

metabolicamente ativos, enquanto que os níveis baixos de poliamina são mais típicas de tecido 

vegetal quando o metabolismo desacelerou, por exemplo, folhas senescentes, isso pode ser 

melhor observado nas figuras 14 e 15. 

Acredita-se que as poliaminas têm função de retardar a senescência, elas 

geralmente são abundantes em órgãos jovens e declinam ao menor teor em órgãos senescentes 

(BOUCHEREAU et al., 1999), isso pode ser observado neste trabalho para todos os tratamentos 

(Figura 15). 

A concentração de Poliaminas (putrescina, espermidina e espermina) 

neste trabalho, apresentou maneira variável ao longo do desenvolvimento da cultura, de acordo 

com Khosroshahi et al. (2007), essa concentração pode ser regulada pela sua própria biossíntese, 

quebra, translocação e conjugação com diferentes compostos na planta. 

Nota-se que há uma provável correlação entre os teores de poliaminas e 

atividade de peroxidase neste trabalho. Outro ponto importante a ser analisado é o maior teor de 

putrescina e espermidina em folhas de tomate cultivar Saladinha Plus,quando tratados com 

piraclostrobina+metiram na dose 400g p. c./100L, este mesmo tratamento induziu os melhores 

resultados de produção e qualidade dos frutos de tomateiro, quando instalados no período de 

incidência da doença, isso sugere o seu possível envolvimento nos mecanismo de indução de 

resistência. 

Diversos estudos mostram alterações do metabolismo de poliaminas em 

plantas que expressam aumento de resistência. O tratamento das primeiras folhas de plântulas de 

cevada com metil jasmonato, levou a uma redução significativa na infecção de oídio nas folhas 

65

segundo (WALTERS et al., 2002). Esta proteção sistêmica contra o míldio foi acompanhado por 

aumento da ativação relacionado com a defesa, como fenilalanina amônia liase (PAL) e 

peroxidase, e também por um aumento significativo nos níveis de conjugados solúveis de 

putrescina e espermidina e atividade aumentada de enzimas biossintéticas e de Diamina Oxidases 

(WALTERS, 2003). Em nosso estudo, notamos maior teor de putrescina e espermidina em 

plantas tratadas com piraclostrobina+metiram na dose 400g p. c./100L, o qual pode ter 

promovido alterações nos níveis dessas moléculas, que podem contribuir para o aumento da 

resistência da planta ao vira cabeça do tomateiro. Além disso, essas aminas mostraram aumento, 

assim como as peroxidases, em resposta a esse tratamento, o que pode levar a afirmar que essas 

moléculas também podem ser utilizadas como marcadoras da indução de resistência. 

Apesar do contínuo interesse no metabolismo de poliaminas em plantas 

expostas a estresse abiótico (BOUCHEREAU et al., 1999), ou patogênico, existe pouca 

informação sobre o metabolismo de poliaminas nas interações compatíveis entre plantas e 

patógenos (WALTERS., 2003). 

6.4. Análises moleculares 

Visando a identificação da espécie de Tospovírus ocorrendo na área 

experimental, das 19 amostras coletadas provenientes da área experimental, apenas seis 

mostraram-se positivas para amplificação parcial da região codificadora para a proteína capsidial 

vírus (fragmento de aproximadamente 453bp), tendo sido quatro amostras escolhidas, cada uma 

referente a um bloco (B) experimental, (Figura 16). 

66

Figura 16. Padrão eletroforético em gel de agarose 0,8% com reações de RT-PCR, com amostras positivas de 

Tospovirus, utilizando os primers BR60 e BR65. (M) Marcador 1 Kb Ladder (invintrogen),(-) controle negativo, (+) 

controle positivo e (BI, BII, BIII, BIV) amostras selecionadas. 

As quatro amostras positivas, foram detectadas a partir de RT-PCR 

amplificados com os oligonucleotídeos BR60 e BR65. Estes pares de oligonucleotídeos anelam 

no S RNA no gene que codifica a proteína do nucleocapsídeo (gene N), o que permite a 

amplificação de pelo menos cinco diferentes espécies de tospovírus (TSWV, TCSV, GRSV, 

INSV e CSNV) (EIRAS et al., 2002). 

A maior identidade de nucleotídeos encontradas para a amostra B2 foi de 

99%, com a espécie TCSV, acesso no GenBank AF521102. Para as amostras B1, B3 e B4 as 

identidades de nucleotídeos encontradas também foram de 99% com a espécie GRSV acesso no 

GenBank AY380780. 

Pode observar na figura 17 que as amostras B3, B4 e B1 encontram-se no 

mesmo ramo filogenético quando comparadas ao GRSV, no outro ramo filogenético encontra-se 

a amostra B2 comparado ao TCSV. Até o presente momento podemos concluir por 

sequenciamento que foi encontrada 2 espécies de Tospovirus, GRSV e TCSV, porém não foi 

encontrado a espécie TSWV. 

M - + BI BII BIII BIV 

67

Figura 17. Arvore filogenética obtida pelo programa Mega 4.0 com o valor de Bootstrap de 2000 repetições para a 

região codificadora para proteína capsidial das amostras, B1, B2, B3 e B4. GRSV (acesso AY380780), TCSV 

(acesso AF521102), TSWV (acesso 1-412) e outgroup Potato virus Y (acesso JN711118). 

Nos últimos anos, diferentes espécies de tospovírus têm sido identificadas 

e caracterizadas no Brasil (BEZERRA et al., 1999, EIRAS et al., 2002). Os vírus do gênero 

Tospovírus estão entre os principais patógenos de plantas, sendo responsáveis por perdas 

significativas na produção, principalmente de solanáceas, em diferentes regiões produtoras 

localizadas no Estado de São Paulo (COLARICCIO et al., 2001, EIRAS et al., 2002). 

Neste trabalho, foi detectado, um isolado do TCSV e três isolados do 

GRSV. O TCSV é predominante no Estado de São Paulo, sendo importante em diversas culturas, 

principalmente em hortaliças pertencentes às famílias Solanaceae e Asteraceae (NAGATA et al., 

1995, EIRAS et al.,2002). O GRSV é predominante no Estado de Minas Gerais (COLARICCIO 

et al., 2001), trabalhos realizados pelo mesmo autor, mostraram que o GRSV é detectado na 

cultura do tomateiro em diferentes regiões agrícolas do Estado de São Paulo e ressalta ainda que 

isto está atribuído não somente à proximidade dessas regiões com o Sul do Estado de Minas 

Gerais, mas também à eficiência de disseminação pelas espécies de tripes vetoras de numerosas 

espécies hospedeiras. 

68

7. CONSIDERAÇÕES FINAIS 

Este trabalho abre a possibilidade do controle do vira cabeça do tomateiro 

e da geração de conhecimento básico sobre aspectos bioquímicos, uma vez que tenta através do 

uso de produtos químicos e biológico, ativar mecanismos de defesa das plantas. Atualmente as 

medidas de controle sugeridas para diminuir perdas ocasionadas por esse vírus são pouco 

eficientes e as cultivares resistentes disponíveis no mercado, são pouco aceitas, uma vez que elas 

causam as rachaduras no ombro, diminuindo a produção da cultura. Os resultados obtidos quanto 

aos aspectos de produção e qualidade dos frutos são positivos, mostrando o efeito benéfico do 

produto (Piraclostrobina+Metiram) quando a cultura é instalada no período de incidência da 

doença. Quanto aos resultados bioquímicos pode-se observar que após a aplicação dos 

tratamentos ocorre aumento da atividade de enzimas, demonstrando que o produto age ativando 

mecanismos de resistência das plantas. Obviamente, a repetição desse experimento deverá 

demonstrar de maneira mais clara a confirmação ou não desses resultados, cujos valores são 

muito próximos entre os tratamentos. Nesse sentido, se mostra importante a repetição desse 

experimento tanto em campo aberto instalado no período de incidência da doença, quanto em 

condições mais controladas, como em casa de vegetação. 

69

8. CONCLUSÕES 

Maiores valores de peroxidase, polifenoloxidase, proteínas totais solúveis, putrescina e 

espermidina, foram observados nos folíolos de plantas pulverizadas com o produto 

Piraclostrobina+Metiram na dose 400g p. c./100L, sugerindo o seu provável 

envolvimento nos mecanismos de indução de resistência. 

Com relação aos aspectos de produção e qualidade dos frutos de tomateiro, os tratamentos 

constituídos de piraclostrobina+metiram apresentaram melhores resultados quando 

comparados aos demais tratamentos, evidenciando que esse produto apresenta grande 

potencial na cultura do tomateiro quando instalada no período de incidência da doença. 

70

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