Glaucia Cristina Manço da Costa - uea - pós graduação

3.2 PREPARAÇÃO DAS AMOSTRAS PARA ISOLAMENTO
Em laboratório, as amostras de esponjas coletadas foram cortadas com
uma lâmina de bisturi estéril e separadas em sub-amostras e acondicionadas em
tubos com tampa de rosca com volume de 8 mL previamente autoclavados e
identificados, uma parte não realizou-se assepsia e a outra foi submetida a uma
assepsia superficial.
No tratamento com assepsia, foi utilizado por primeiro álcool 70% durante
1 minuto descartando em seguida, após o hipoclorito 2,5% por 1 minuto
descartando, e novamente em álcool 70%, em seguida foi utilizada água estéril
por três vezes e descartada, posteriormente foi inserida 3 mL de solução Fosfato
1%, anteriormente preparada e autoclavada por 30 minutos em todos tubos para
devida diluição, e em seguida com o auxilio de um gral e pistilo previamente
esterilizados em autoclave, retirou-se as amostras para a maceração, após a
obtenção do macerado colocou-se as amostras em novos tubos autoclavados e
identificados.
Todo o procedimento foi realizado em câmera de fluxo laminar para evitar
a contaminação das amostras.
3.3 ISOLAMENTO
Foram preparados meios de cultivo sintéticos (HIMEDIA) do tipo TSA
(Trypticase Soy Agar), TSB (Tryptose Soy Broth), AC (Amido Caseína) e NA
(Nutriente Agar). Após preparação, os meios foram autoclavados e vertidos em
placas de Petri previamente esterilizadas, utilizando câmera de fluxo laminar para
evitar contaminação.
Com o auxilio de uma pipeta automática foi retirada uma alíquota de 100
µL da amostra diluída, em seguida foi distribuída em placa de Petri contendo os
meios acima citado e espalhada com uma alça de Drigalski e vedada com filme
de PVC e identificada, após a este procedimento as placas de Petri foram
colocadas em uma estufa incubadora B.O.D ( Marconi-Incubadora MA415 ) à
26°C por 24 horas.
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