adriano penha furtado - BAIP - Universidade Federal do Pará

de ósmio, desidratados em série etanólica crescente (em concentrações entre
30% - 100% / 2 h cada) até a secagem ao ponto crítico, metalizados com ouro
e observados em microscópio eletrônico de varredura modelo LEO 1450 VP.
2.4 ESTUDO MOLECULAR
O estudo molecular foi realizado a partir da comparação entre
regiões gênicas de microfilárias circulantes (presentes nas amostras de sangue
coletadas) e vermes adultos. Estas amostras foram submetidas à extração de
DNA, PCR e seqüenciamento de DNA, seguido de estudo filogenético.
Como controle positivo, foi utilizado um filarídeo adulto fêmea,
identificado morfologicamente como D. immitis pela equipe do Laboratório de
Biologia de Helmintos “Otto Wulcherer”, Instituto de Biofísica “Carlos Chagas
Filho”, Universidade Federal do Rio de Janeiro. Este exemplar foi submetido
por nossa equipe aos métodos de estudo molecular aplicados nas amostras da
Ilha do Marajó, Estado do Pará.
2.4.1 Extração de DNA
Para a extração do DNA das microfilárias, todas as amostras
sanguíneas consideradas positivas (ou seja, que apresentaram pelo menos
uma microfilária detectável pelos métodos descritos anteriormente) foram
submetidas ao método de fenol-clorofórmio, segundo Sambrook e Russell
(2001). Amostras consideradas negativas (ou seja, que não apresentaram
microfilárias detectáveis pelos métodos descritos anteriormente) também foram
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