Investindo no Futuro: O Programa Jovens Pesquisadores - Fapesp

expressão da proteína fluorescente verde
045 (GFp) como marcador de células de origem
fetal em gestações de clones bovinos
Flavia Thomaz verechia Pereira
Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Campus Experimental de Dracena
Processo 2005/52676-1
vigência: 1/4/2006 a 31/3/2010
A utilização da proteína fluorescente verde (GFP)
como marcador de células de origem fetal nas placentas
de clones bovinos servirá de modelo inédito para estudo
morfofisiológico e imunológico da interação maternofetal,
visto que possibilitará o seu mapeamento, diferenciando
as células fetais das maternas. Tal modelo terá aplicação
direta, principalmente porque estes são animais que
apresentam problemas em relação ao seu desenvolvimento.
Com o auxílio deste modelo, pretendemos verificar,
além dos processos imunológicos, a migração de células
fetais para o epitélio uterino, apoptose, proliferação celular
e o transporte de substâncias entre a mãe e o feto. Para
tanto utilizaremos oito bovinos clonados e oito bovinos
de fertilização in vitro (FIV) e 30 bovinos de IA ou monta
natural com até 90 dias de gestação, os quais terão seu desenvolvimento
interrompido mediante abate humanitário
das receptoras e recuperação do útero gestante. Serão
coletadas as membranas fetais (âmnio, alantoide e cório),
placentônios, carúnculas e áreas intercarunculares. Uma
parte das amostras será recortada e fixada, por imersão,
em solução de paraformaldeído a 4% ou formaldeído a
10% em tampão fosfato de sódio (PBS) a 0,1M pH 7.4,
solução de Zamboni (4% de paraformaldeído, 15% de
ácido pícrico, em tampão fosfato de sódio a 0,1M pH 7.4),
metacarn (60% de metanol, 30% de clorofórmio e 10%
de ácido acético glacial), para verificação da morfologia e
realização de imunoistoquímica ou glutaraldeído a 2,5 %
PBS para microscopia eletrônica de transmissão. Uma
parte das amostras será coletada em nitrogênio líquido
para extração do mRNA e verificação da expressão do
gene Bola do MHC (homólogo ao Ped de camundongo),
e para a realização de técnica de imunoistoquímica em
cortes congelados. Os resultados obtidos serão comparados
entre bovinos clonados, FIV e IA ou monta natural
para auxílio da detecção das razões de tantas alterações
placentárias, perdas embrionárias, abortos espontâneos,
mortalidade pós-natal e síndrome do bezerro grande em
animais manipulados em laboratório.
resposta imune tecidual de Bos taurus e
046 Bos indicus à infecção aguda por Neospora
caninum – estudo comparativo
Sandra Mayumi Nishi
Faculdade de Medicina veterinária e Zootecnia
Ciências Agrárias e veterinárias
Universidade de São Paulo (USP)
Processo 2005/01659-0
vigência: 1/1/2006 a 30/4/2008
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A infecção pelo Neospora caninum é uma das principais
causas de abortamentos e de natimortalidade em rebanhos
bovinos em diversos países. Desde a sua descrição
como novo gênero e espécie em 1988, importantes avanços
foram feitos quanto à biologia e à epidemiologia do
parasita. No entanto não existem, até o momento, medidas
eficazes para o tratamento dos animais infectados e para o
controle de sua transmissão. A ativação dos mecanismos
específicos de proteção do sistema imune é capaz de diminuir
as perdas por abortamentos e diminuir a transmissão
vertical do parasita em condições experimentais. No entanto,
os programas de vacinação em condições de campo
não apresentam os níveis de eficácia esperados. Variações
de resposta individual do hospedeiro, efeito da gestação na
atividade imune e variações da patogenicidade do parasito
são as possíveis explicações para a persistência da transmissão.
A diferença de resistência entre as raças taurinas
e zebuínas a infecções por ectoparasitas e helmintos intestinais
é bem documentada, todavia não existem informações
no que diz respeito a infecções pelo N. caninum.
Sabe-se que os ectoparasitos e os helmintos induzem uma
resposta imune do tipo Th2 e a neosporose é controlada
por uma resposta imune celular do tipo Th1 mediada pelo
IFN-g. Utilizando o IFN-g como citocina de referência
para o estudo da resistência à infecção, o presente projeto
de pesquisa tem como objetivos: 1) quantificar a expressão
de genes associados a mecanismos imunes (IFN-g, TNF a,
IL-4, IL-10, TGF-b e iNOS) utilizando a técnica da Real-
Time PCR em diferentes tecidos; e 2) identificar a presença
de células imunes (linfócitos T CD4+, CD8+ e macrófagos)
pela técnica da imunoistoquímica e, dessa forma, investigar
possíveis diferenças na resposta de Bos taurus e de
Bos indicus à infecção aguda por N. caninum.
Cooperação científica multidisciplinar
047 para caracterização de lesões no cristalino:
aplicação na saúde ocular animal e humana
Andrea Antunes Pereira
Faculdade de Medicina veterinária e Zootecnia
Universidade de São Paulo (USP)
Processo 2005/00698-1
vigência: 1/12/2006 a 30/11/2010
A catarata corresponde a um dos maiores problemas
de saúde pública afetando a qualidade de vida de
indivíduos não apenas em países subdesenvolvidos, mas
também nos países industrializados. Estudos recentes têm
indicado que a catarata afeta de 12% a 50% dos indivíduos
acima dos 60 anos. O tecido biológico em questão,
o cristalino, é um elemento crucial nos sistemas de visão