Biologia e Fisiologia Celular - UFPB Virtual - Universidade Federal ...
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<strong>Biologia</strong> e <strong>Fisiologia</strong> <strong>Celular</strong><br />
a utilização de lâmpadas de mercúrio e xenônio. No entanto, ao invés da reflexão, ou absorção da<br />
luz, pelo material biológico, a fluorescência é o fenômeno que dá suporte à microscopia que leva o<br />
seu nome.<br />
E o que vem a ser o fenômeno de fluorescência? Inicialmente descrito por George Gabriel<br />
Stokes, no ano de 1852, ao estudar o mineral fluorita, a fluorescência é a propriedade que<br />
algumas moléculas apresentam em absorver luz em um determinado comprimento de onda, e<br />
emitir luz em outro comprimento de onda, menor do que o da luz absorvida, portanto, com menor<br />
energia. Os compostos que detém essa propriedade são denominados fluorocromos ou<br />
simplesmente compostos fluorescentes. Tais compostos apresentam um grupamento funcional,<br />
denominado fluoróforo, que, de forma análoga aos cromóforos, são responsáveis pela absorção e<br />
emissão da luz. A fluorescência é produzida quando um elétron absorve energia e salta para um<br />
orbital mais externo. Ao retornar para o orbital original, o elétron libera energia na forma de um<br />
fóton luminoso.<br />
O microscópio de fluorescência utiliza filtros que selecionam o comprimento de onda que<br />
irá excitar o corante (filtro de excitação) e o comprimento de onda que será visualizado pelo<br />
observador (filtro de barreira). Uma vez que o fundo é escuro, a amostra fluorescente é facilmente<br />
visualizada.<br />
Existem dezenas de corantes fluorescentes utilizados em biologia celular para a análise de<br />
diversos parâmetros celulares e moleculares, onde podemos citar: pH citosólico; conteúdo de<br />
DNA; potencial de biomembranas; concentração intracelular de íons; transporte de moléculas;<br />
entre outros. Uma técnica bastante utilizada na microscopia de fluorescência é a conjugação de<br />
corantes fluorescentes, tais como o isotiocianato de fluoresceína (FlTC) ou a ficoeritrina, com<br />
anticorpos direcionados para proteínas de superfície celular ou para proteínas intracelulares.<br />
:: PERGUNTAS?? ::<br />
O que é um anticorpo? Qual é a natureza química de um anticorpo? Como é<br />
possível, tecnicamente, fazer com que um anticorpo se ligue a uma proteína<br />
intracelular?