Biologia e Fisiologia Celular - UFPB Virtual - Universidade Federal ...

Lente Ocular
(aumento em x)
Lente Objetiva
(aumento em x)
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Biologia e Fisiologia Celular
Tabela 1.1 - Relação entre aumento total e diâmetro do campo de observação.
A resolução máxima obtida com o microscópio óptico é limitada pelo comprimento de onda
da luz no espectro do visível (entre 400 e 700 nm). Um conceito importante em microscopia é o
limite de resolução, que vem a ser a menor distância entre dois pontos que permite uma distinção
entre os mesmos (individualização dos pontos). Sob condições ótimas (comprimento de onda de
0,4 μm e abertura numérica de 1,4), o limite teórico de resolução do microscópio óptico é 0,2 μm.
Outro conceito importante em microscopia é o poder de resolução, que depende tanto do
comprimento de onda da luz quando da abertura numérica do sistema de lentes utilizado e é
inversamente proporcional ao limite de resolução, ou seja, quanto menor o limite de resolução,
maior o poder de resolução. O poder de resolução expressa à capacidade do microscópio em
detalhar, qualitativamente, uma imagem. A abertura numérica de uma lente objetiva corresponde
à sua capacidade em captar luz. Quanto maior a abertura numérica de uma lente, maior será o
seu poder de resolução. Algumas lentes requerem o uso de óleos de imersão (entre a lente e o
material a ser observado) para proporcionarem um aumento na abertura numérica e
conseqüentemente aumentarem o poder de resolução.
4.1.2. FIXAÇÃO E COLORAÇÃO
Aumento Final (x)
10 4 40 5,3
10 10 100 2,12
10 20 200 1,06
10 40 400 0,53
10 100 1000 0,21
Diâmetro do Campo de
Observação (mm)
A fixação é o processo pelo qual preservamos um material biológico para posterior análise,
sendo fundamental por impedirmos a degradação química ou microbiológica do espécime de
interesse. Durante o processo de fixação é importante preservamos as estruturas celulares o mais
próximo possível das condições naturais, mantendo assim as suas características morfológicas
originais.
A fixação pode ser obtida por processos químicos ou físicos. A fixação física mais comum
é a fixação por calor, muito utilizada na preparação de esfregaços sanguíneos utilizados nos
hemogramas. Entretanto, os processos de fixação química são os mais utilizados. A fixação
química pode ocorrer por promover a ligação cruzada entre macromoléculas, como no uso do
formaldeído ou glutaraldeído, ou por ação de agentes precipitantes/desnaturantes, como o
metanol, o etanol, a acetona e ácido acético.
A coloração é uma técnica que tem como objetivo aumentar o contraste entre os
componentes celulares, proporcionando, assim, uma melhor visualização destas estruturas. As
estruturas subcelulares apresentam uma densidade óptica muito semelhante, o que dificulta a
identificação e a visualização das mesmas sob microscopia. O emprego dos corantes na biologia
celular é bastante amplo e permite a observação de uma vasta gama de moléculas e estruturas.
No entanto, os corantes utilizados em microscopia óptica comum requerem que as células sejam