Manual de Coleta - Embrapa Gado de Leite

NORMAS PARA COLETA E ENVIO DE AMOSTRAS DE LEITE DO REBANHO PARA
DETERMINAÇÃO DOS TEORES DE GORDURA, PROTEÍNA, LACTOSE, SÓLIDOS
TOTAIS, CONTAGEM DE CÉLULAS SOMÁTICAS E CONTAGEM TOTAL DE
BACTÉRIAS
José Renaldi Feitosa Brito
Médico Veterinário – Embrapa Gado de Leite
Guilherme Nunes de Souza
Médico Veterinário – Embrapa Gado de Leite
Cristiano Gomes de Faria
Químico – Embrapa Gado de Leite
Luciano Castro Dutra de Moraes
Tecnólogo em Meio Ambiente – Embrapa Gado de Leite
1. INTRODUÇÃO
As análises para determinação dos teores de gordura, lactose, proteína e sólidos totais e para a
contagem de células somáticas (CCS) e contagem total de bactérias (CTB) no leite são
realizadas em pequenos volumes (amostras), em geral cerca de 50 ml. As amostras de leite
devem ser representativas do volume total que se pretende examinar e que pode ser de até
5.000 litros ou mais. Por isso, alguns cuidados devem ser observados.
Existem outros fatores que podem interferir com os resultados das análises e devem ser levados
em consideração. Um desses fatores é a facilidade de contaminação do leite, seguida da
multiplicação dos microrganismos em número suficiente para causar sua deterioração em
poucas horas. A contaminação do leite é propiciada pelas condições inadequadas de obtenção,
armazenamento, coleta e transporte, e é facilitada pela riqueza nutricional do leite que o torna
um meio ideal para a multiplicação microbiana.
As amostras de leite devem ser coletadas em recipientes apropriados, limpos e enviadas ao
laboratório sob refrigeração (máximo 7°C). Os procedimentos de coleta e transporte de amostras
devem ser padronizados, de acordo com normas aceitas internacionalmente, de modo que os
resultados obtidos por diferentes laboratórios possam ser comparados entre si e utilizados pelos
interessados (produtores, indústria e serviço de fiscalização).
A Instrução Normativa 51/2002 do Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (Mapa)
prevê coleta mensal de pelo menos uma amostra de leite do rebanho, a qual será analisada pela
Rede Brasileira de Laboratórios de Controle da Qualidade de Leite (RBQL).
A confiabilidade dos resultados das análises depende em grande parte da adoção de
procedimentos bem estabelecidos para a coleta e transporte das amostras, sendo importante
observar:
- Capacitação do pessoal responsável pela coleta e transporte das amostras;
- Padronização dos procedimentos;
- Escolha de materiais para a coleta e transporte das amostras, observando-se,
especialmente: o tipo de frasco, o tipo de conservante e as condições de armazenamento
das amostras;
- Tempo decorrido entre a coleta e a realização dos exames;
- Fornecimento de informações sobre as amostras e o rebanho de origem.

2.1 Responsável pela coleta de amostras
2. RECOMENDAÇÕES GERAIS
A pessoa encarregada de coletar as amostras de leite deve:
- receber treinamento e seguir os procedimentos recomendados. A descrição dos
procedimentos deve estar disponível, por escrito, de forma visível e de fácil acesso, no local
da coleta;
- receber informação sobre os riscos inerentes ao manuseio dos conservantes usados ou de
qualquer outro produto químico que possa apresentar risco à sua saúde, e à saúde dos
consumidores do leite, e ao ambiente;
- ser orientada sobre os cuidados higiênicos e sobre os riscos de contaminação do leite em
caso de má condução de suas atividades;
- dispor de tempo suficiente para proceder a coleta conforme as instruções recebidas,
especialmente quanto à homogeneização do leite antes da coleta e uso correto dos frascos e
conservantes, mesmo que haja outras atividades a serem desempenhadas.
Em algumas circunstâncias, a coleta de amostras poderá ser feita sem aviso prévio, evitando-se,
assim que o produtor mude os procedimentos de rotina de ordenha e de armazenamento do
leite, o que poderia comprometer a representatividade da amostra.
A coleta de amostras deverá ser feita na propriedade (fazenda) imediatamente antes do
recolhimento pelo caminhão (isotérmico ou não), seja o leite armazenado em tanque de
expansão ou em latões.
2.2 Material e procedimentos recomendados para coleta de amostras de leite
2.2.1 Frascos
Os frascos são de plástico, com tampas rosqueáveis. As tampas devem vedar o frasco de
maneira segura, para evitar tanto o vazamento do líquido quanto a contaminação do leite com
água, poeira ou qualquer outro produto.
Os frascos e os conservantes são fornecidos pelo laboratório responsável pelas análises. Isso
facilita e agiliza a rotina do laboratório, pois são usados frascos no tamanho e formato
adequados para o uso nos equipamentos.
Antes do uso, os frascos devem ser mantidos em ambiente seco, ao abrigo da luz, e protegidos
de qualquer contaminação (poeira, agua, insetos, etc.).
Os frascos utilizados para a coleta de amostras de leite destinadas à determinação dos
componentes e CCS possuem a tampa translúcida (mesma cor que o frasco), e já são enviados
com uma pastilha de conservante (Bronopol®) no interior.
Os frascos utilizados para a coleta de amostras destinadas a CTB possuem a tampa vermelha,
são previamente esterilizados e são conservados em sacos plásticos para protegê-los de
contaminação. Esses frascos devem ser abertos no momento da coleta para a adição da
amostra de leite e do conservante em seu interior.
Solicitar frascos ao LQL com antecedência de no mínimo 15 (quinze) dias da coleta por meio de
e-mail (mensagem eletrônica), telefone, fax ou pessoalmente;
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2.2.2 Conservantes
Os conservantes são usados para garantir que as amostras de leite mantenham sua integridade
e caracteristicas desde o momento da coleta até a realização da análise no laboratório. Existem
vários tipos que podem ser usados desde que não interfiram nos testes físicos ou químicos.
Os conservantes são tóxicos e devem ser manuseados com auxílio de luvas de látex (luvas
cirúrgicas) e não devem entrar em contato com o leite destinado ao consumo.
Os frascos usados para a coleta de amostras de leite devem ser abertos somente no momento
da coleta, sendo fechados imediatamente após.
Amostras de leite podem ser estocadas sem conservante por até 24 horas (tempo decorrido
entre a ordenha e a analise no laboratorio), desde que mantidas entre 2 e 6 o C. No caso de
serem analisadas com mais de 24 horas após a ordenha, é necessário adicionar o conservante e
deixá-lo atuar por, no mínimo, três horas antes da análise.
Os conservantes usados no laboratório são os reconhecidos pela “International Dairy Federation”
(Federação Internacional de Laticínios – IDF/FIL) e pelo Mapa:
- Bronopol® (2-bromo-2-nitropropano-1, 3-diol): a concentração final na amostra deve ser
entre 0,02 e 0,05%. É usado normalmente na forma de comprimido com 10 mg de
ingrediente ativo ou 0,05 ml (contendo 20% do ingrediente ativo) para cada 50 mL de leite.
No Brasil, Bronopol® tem sido fornecido na forma de pastilhas, sendo colocados geralmente
um por frasco, suficientes para aproximadamente 40 ml de leite. No caso da análise de
gordura, existe a recomendação de se proceder à análise no máximo cinco (5) dias após a
coleta.
-
Azidiol (azida sódica e cloranfenicol): a concentração final de azida sódica e cloranfenicol na
amostra devem estar entre 0,10 a 0,12% e 0,004 a 0,005%, respectivamente. Geralmente é
usado na forma líquida, sendo colocado duas gotas em cada frasco com volume de leite
variando de 30 a 40 ml. Além das substâncias citadas anteriormente, o conservante Azidiol
possui na sua composição o corante azul de bromofenol, que confere às amostras de leite
uma coloração azul clara.
2.2.3 Tempo e conservação da amostra entre a coleta e a análise no laboratório
As amostras de leite devem ser mantidas sob refrigeração desde a coleta até a entrega no
laboratório. Apesar das restrições da Federação Internacional de Laticínios sobre o tempo
máximo decorrido entre a coleta de amostras e realização das análises, foi observado que
amostras de leite com os respectivos conservantes e mantidas até 7°C não apresentaram
diferença nos resultados dos componentes, da CCS e CTB ao longo de sete dias.
De acordo com o Mapa, as amostras devem ser acondicionadas em caixas isotérmicas com gelo
reciclável, não ultrapassando 7°C a temperatura das amostras durante todo o período
compreendido entre a coleta e recebimento no laboratório.
As amostras devem ser mantidas em temperatura de refrigeração, no máximo a 7°C e
entregues no laboratório em até 96 (noventa e seis) horas após a coleta.
Amostras não identificadas por meio de etiquetas com código de barras, devem ser identificadas
em formulário próprio (Anexo 1) contendo o nome do solicitante, data de coleta, data de envio e
número de amostras a serem analisadas com sua respectiva identificação bem como o tipo de
análise solicitada. No entanto esse procedimento deve ser evitado, dando preferência para
identificação com etiquetas contento código de barras por meio de alteração do cadastro antes
do pedido dos frascos.
Ressalta-se que as amostras não devem ser congeladas, pois haverá alteração nos valores de
CCS e CTB.
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Atentar para a logística da coleta e envio, de modo a se evitar que as amostras cheguem ao LQL
no último dia útil da semana (considerar feriados e recessos).
Separar as amostras de acordo com o código do cliente e/ou tipo de análise para amostras
enviadas em uma mesma caixa isotérmica. Aconselha-se a utilização de sacos plásticos ou
racks para esta separação.
2.2.4 Precauções
- Os frascos e equipamentos ou utensílios (conchas, copos coletores, pescadores e baldes)
usados para a coleta de amostras devem ser protegidos de contaminação antes e durante o
uso. Estes utensílios devem ser higienizados com detergente alcalino clorado (130 ppm de
cloro), ou álcool etílico 70°GL.
- Quando for usado um coletador de amostra (concha, ou outro modelo) este deve ser mantido
limpo e seco. Recomenda-se o uso de coletador de aço inoxidável, com superfície lisa e com
todos os cantos arredondados.
- O coletor não deve ter contato com materiais ou superfícies contaminadas por moscas,
matéria orgânica, poeira, etc.
- O frasco de amostra deve ser manuseado com cuidado, evitando-se derrubar a tampa no
chão ou o contato dela ou do interior do frasco com outros materiais ou possíveis
contaminantes.
2.2.5 Coleta de amostras de leite do tanque de refrigeração
A coleta de amostra do leite do tanque requer agitação suficiente para promover a
homogeneização adequada dos componentes do leite (gordura, proteína e lactose). Caso
contrário o leite da parte superior e inferior do volume de leite a ser amostrado apresentará
valores superestimados e subestimados, respectivamente, de gordura, CCS e CTB.
Isso se deve à tendência dos glóbulos de gordura subirem para a superfície por possuirem uma
densidade menor que a da água, e com isso carrearem células somáticas e bactérias.
Em estabelecimentos com tanque de expansão direta para resfriamento do leite, recomenda-se,
antes de coletar as amostras:
- a) Observar se há qualquer anormalidade no leite. Em caso de anormalidade, registrar a
ocorrência e interromper a coleta.
- b) Medir o volume de leite. Se a régua permanece no interior do tanque, deve-se secá-la ao
nível do leite, com uma toalha de papel descartável, realizar a medida e anotar o resultado.
- c) Se a régua é mantida fora do tanque, deve-se lavá-la cuidadosamente antes de introduzila
no tanque. Depois disso, deve-se secá-la ao nível do leite, com uma toalha de papel
descartável, realizar a medida e anotar o resultado.
- d) Ligar o sistema de agitação do tanque por no mínimo cinco (5) minutos imediatamente
antes da coleta da amostra. Quando a capacidade do tanque for maior que 5.700 litros, o
tempo de agitação deve ser aumentado para dez (10) minutos, ou de acordo com a
recomendação do fabricante. Em qualquer caso, deve-se sempre coletar a amostra logo
após seja desligado o agitador.
- e) Anotar a temperatura do leite.
- f) Cuidar para nunca manter o frasco com conservante sobre o leite contido no tanque;
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- g) Usar um coletor para transferir o leite para o frasco;
- h) Não ultrapassar ¾ (três quartos) do frasco com leite (medida feita considerando-se o
frasco tampado). Isso é feito para permitir a mistura do leite com o conservante.
- i) Identificar cada frasco com a correspondente etiqueta de código de barras ou número
correspondente ao nome do produtor indicado no formulário para identificação de amostras
(Anexo 1).
- j) Colocar a amostra de leite imediatamente em uma caixa isotérmica (tipo isopor ou outra)
com gelo reciclável;
- k) Garantir que a quantidade de gelo reciclável seja suficiente para manter a temperatura
interna da caixa isotérmica em no máximo 7°C .
- l) Evitar colocar gelo comum ou gelo em sacos pláticos pois a água resultante do degelo
pode danificar a identificação das amostras, seja por meio de etiquetas de código de barras ou
por canetas .
- m) Limpar cuidadosamente o coletor.
- n) Deixar o frasco em repouso durante cinco (5) minutos e homogeneizar o leite, para que o
conservante se distribua uniformemente. O leite deverá adquirir a coloração característica do
conservante (rósea ou pêssego, no caso do Bronopol® e azulado, no caso do Azidiol)
2.2.5.2 Coleta de amostras de leite de latões
Antes da coleta da amostra, deve-se:
- a) Agitar o leite de cada latão, usando um agitador manual (agitador de latão) por no mínimo
dez (10) segundos. Para isso, deve-se misturar o leite das camadas superiores com o das
camadas inferiores, pelo menos dez (10) vezes com movimentos suaves e contínuos. O
movimento do agitador sempre deve ser na direção vertical (para cima e para baixo) .
- b) Observar se há qualquer anormalidade no leite. Em caso de anormalidade, registrar a
ocorrência e interromper a coleta.
- c) Anotar a temperatura do leite, caso seja possível.
- d) Manter o frasco com conservante longe da abertura do latão;
- e) Usar um coletor (ou um recipiente adequado) para transferir o leite para o frasco;
- f) Não ultrapassar ¾ (três quartos) do frasco com leite (medida feita considerando-se o frasco
tampado). Isso é feito para permitir a mistura do leite com o conservante;
- g) No caso de existirem vários latões, homogeneizar o volume total de leite de cada latão e
após este procedimento transferir quantidades de leite proporcionais de cada latão para um
outro recipiente e deste retirar o volume necessário para o frasco (por exemplo: se houver
dois latões, sendo um cheio e outro pela metade, retirar um litro do primeiro e meio litro do
segundo. Homogeneizar e retirar dessa mistura de 1,5 litro o volume necessário para a
amostra);
- h) Identificar o frasco com a etiqueta de código de barras correspondente ao produtor ou
número que identifique o produtor no formulário de identificação de amostras (Anexo 1);
- i) Colocar a amostra de leite imediatamente em uma caixa isotérmica (tipo isopor ou outra),
com gelo reciclável;
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- j) Garantir que a quantidade de gelo reciclável seja suficiente para manter a temperatura
interna da caixa isotérmica em no máximo 7°C;
- k) Limpar cuidadosamente o coletor;
- l) Deixar o frasco em repouso durante cinco (5) minutos e homogeneizar o leite, para que o
conservante Bronopol® se dissolva e distribua uniformemente no caso das amostras
destinadas para determinação dos componentes e CCS;
- m) Para as amostras destinadas a CTB, logo após colocar o conservante Azidiol,
homogeneizar imediatamente. O leite deverá adquirir a coloração característica do conservante
(rósea ou pêssego, no caso do Bronopol® e azulado, no caso do Azidiol).
3. ENCAMINHAMENTO DAS AMOSTRAS PARA O LABORATÓRIO
Todas as amostras encaminhadas ao laboratório devem ser acompanhadas de uma ficha com
os seguintes dados:
- Identificação do rebanho e endereço para envio dos resultados;
- Data e horário da coleta. No caso da coleta ter sido realizada em mais de um dia, a data do
primeiro dia de coleta deve ser considerado para o lote de amostras;
- Tipo de amostra enviada (se de latão ou do tanque de refrigeração);
- Temperatura da amostra no momento da coleta;
- Local da amostragem;
- Nome ou identificação do responsável pela amostragem.
Esses dados podem ser encaminhados em fichas, como o modelo anexo. Os frascos devem
conter as etiquetas de identificação da amostra por meio de código de barras coladas
verticalmente ou numerados seqüencialmente, usando-se uma tinta solúvel em álcool (do tipo
recomendado para retroprojetor), devendo-se evitar as do tipo nanquim. No entanto esse
procedimento deve ser evitado, dando preferência para identificação com etiquetas contento
código de barras por meio de alteração do cadastro antes do pedido dos frascos.
Além da numeração dos frascos, deve-se ser incluída a identificação por nome ou código do
produtor. Os dados complementares (identificação, endereço, data da coleta, etc.) são
importantes para a identificação da origem das amostras, bem como para garantir o retorno dos
resultados de maneira rápida e confiável.
4. O QUE SE DEVE EVITAR:
• Trocar frascos ou tampas no momento da coleta;
• Rasurar ou alterar a identificação das etiquetas de código de barras;
• Colar horizontalmente as etiquetas de identificação por meio de código de barras
• Usar cubos de gelo dentro das caixas isotérmicas;
• Enviar amostras com temperaturas acima de 7°C;
• Enviar amostras com mais de 96 horas após a coleta.
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Referências bibliográficas
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MARSHALL, R. T. ed. Standard methods for the examination of dairy products. 16 ed.
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SOUZA, G. N. ; FARIA, C. G.; RIOS, R.; OLIVEIRA, V. C.; SANTOS, R. R. D.; ARCURI, E. F.;
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SOUZA, G. N. ; SILVA, M. R.; SOUZA, F. S. ; COELHO, R. O.; BRITO, M. A. V. P.; BRITO, J. R.
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no leite. Arquivo Brasileiro de Medicina Veterinária e Zootecnia, v. 57, n. 6, p. 830-834, 2005.
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Anexo 1.
Laboratório de Qualidade do Leite Prof. José de Alencar
Solicitante: Data da coleta:
Propriedade: Data da análise:
Endereço:
Código do rebanho/indústria: Telefone/fax:
e-mail: Temperatura do leite: ºC
N.º do
frasco
Identificação da amostra
N.º do
frasco
Identificação da amostra
• A identificação da amostra pode ser o código/nome de produtor (para cooperativas) ou o
número/nome do animal (para fazendas).
Embrapa Gado de Leite
Laboratório de Qualidade do Leite
Rua Eugênio do Nascimento, 610, Bairro Dom Bosco – Juiz de Fora – MG
CEP.: 36038-330
Tel.: (0 – xx - 32) 3249-4826 / 4828; Fax 3249-4821
e-mail: lableite@cnpgl.embrapa.br
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