Estratégias e aplicações da Espectrometria de Massas - Fiocruz

Workshop: Avanços na Engenharia de Proteínas e Peptídeos
13h às 17h
* Estratégias e aplicações da Espectrometria de Massas
Dra. Lucilene Delazari dos Santos
UNESP, Campus Rio Claro, SP.
ldsantos@rc.unesp.br

História da Espectrometria de Massas
1886- Descoberta do Íon- Goldstein
1910- Primeiro Espectro de Massas – JJ Thomson- Ne
1918- Primeiro Espectrômetro de Massas- Dempster
1960- MALDI e ESI- Hillenkamp e Fenn (Prêmio Nobel)

O que é Espectrometria de Massas?
• Uma poderosa técnica analítica:
– Medir massa molecular de compostos
– Identificar compostos desconhecidos
– Quantificar compostos
– Revelar a estrutura de moléculas
– Determinar modificações pós traducionais em
proteínas

Alguns Usos…
• Detectar e identificar substâncias proibidas em atletas;
• Monitorar pacientes durante uma cirurgia;
• Determinar a composição de espécies encontradas no espaço;
• Localizar depósitos de petróleo;
• Monitorar processos de fermentação;
• Detecção de dioxinas em peixes;
• Determinar danos em genes;
• Estabelecer composição elementar de material semi condutor.

Análise de Biomoléculas –
Por que espectrometria de massas?
• Informação de massa molecular – Com precisão
• Identificação de proteínas usando massa molecular de
peptídeos trípticos
• Informação Estrutural
• Sequenciamento de peptídeos
• Identificar modificações pós-traducionais (fosforilação,
glicosilação e pontes de sulfeto)

Como um espectrômetro de massas trabalha?
• Uma pequena quantidade de amostra é vaporizada e
injetada no espectrômetro de massa;
• A amostra é então ionizada;
• Os íons formados podem ser positivos ou negativos;
• Fragmentos neutros não são detectados;
• Os íons são então separados de acordo com sua razão
m/z;
– m = massa; z = carga
• Os íons são então detectados.

Espectrômetro de Massas
• Requer métodos para:
– Obter amostras na fase gasosa;
– Formar íons;
– Separar os íons de acordo com sua
razão m/z
– Detectar os íons formados

Como um espectrômetro de massas trabalha?
Ionização
Source
Formação de íons
Inlet
+
• Sólida
• Liquida
• Gasosa
Introdução da amostra
100
75
50
25
00
Separação
Analyzer
1330 1340 1350
Espectro de massas
Detecção
Ion Detection
Ions detectados
Análise dos dados

Técnicas de Introdução de Amostras
• Cromatografia Líquida
– LC/MS - termicamente instáveis, compostos de
alto PM
– LC/MS adequado para proteínas e peptídeos
– Técnica “on-line”
• Sondas de inserção direta
– Amostras colocadas em uma sonda e inseridas
– Amostras podem misturadas a uma matriz
• Cromatografia Gasosa
– Amostras precisam ser voláteis

Ionização
por elétron
(EI)
Fonte de íons
Ionização
química
(CI)
Métodos agressivos
de ionização
(fragmentos podem nao ser detectados)
Eletronspray
(ESI)
MALDI
Métodos suaves
de ionização

Ionização
por elétron
(EI)
Fonte de íons
Ionização
química
(CI)
Métodos agressivos
de ionização
(fragmentos podem nao ser detectados)
Eletronspray
(ESI)
MALDI
Métodos suaves
de ionização

Métodos de ionização

Métodos de ionização
•A amostra é misturada com uma matriz que
absorva UV
•A matriz absorve energia do laser o que causa sua
volatilização junto com a volatilização da amostra
•As moléculas da matriz ionizada transferem
prótons para a amostra

Métodos de ionização
Matrizes para MALDI
I- ác ido -4-hydrox i-c yano c innam ic o
II- ác ido Sinapic o
I
II
HO
CH C
COOH
CN
H3CO
HO
OCH3
CH CH COOH

Métodos de ionização
Preparação da amostra
Ácido cinâmico

Métodos de ionização
Pulsed
Laser Beam
+
+ + +
+ + + +
+
+ + + + +
+ + + +
Accelerated
charged
particles
Strong
electric field
(5-20 kv)

Características da Técnica MALDI-TOF MS
•Ionização suave – análise de biomoléculas intactas
•Extensa faixa de massa (> 400 kDa)
•Análise de misturas - sem purificação
•Alta sensibilidade
•Fácil interpretação dos dados
•Tampões e sais tem pouco efeito
•Rápida
•Fácil uso e manutenção

Aplicaçôes MALDI-TOF
Proteinas
Medidas de Massa
Confirmar PM de
proteínas
Identificar modificações
pós traducionais
Caracterizar proteínas
Peptídeos
Medidas de massa
Confirmar
síntese
Sequenciamento
Sequenciamento
químico e
enzimático
MS/MS
Análise Proteômica
Utilizar
resultados para
pesquisa em
banco de dados
Oligonucleotideos
Medidas de massa
Confirmar síntese
Sequenciamento
Ladder sequênciaexonucleases
Genespectrometria

Métodos de ionização

Métodos de ionização

Métodos de ionização
Fonte de ionização

Métodos de ionização

Métodos de ionização
Evaporação no ESI

Métodos de ionização
Equilíbrio de estados de cargas
N-terminal amine
H
H
H
4 +
H
H
H H 4 +
H
M E H F R W G K
H
H
3 +
H
H
2 +
H
1 +
H

Métodos de ionização
Espectro de Massas ESI de peptídeos
H
H
H
4 +
H
m/z = (M r +4H)/4
Rel. I nten.
m/z = (M r +3H)/3
4 +
H
H
3 +
3 +
H
ES-MS
H
2 +
H
m/z = (M r +2H)/2
2 +
m/z
1 +
m/z = (M r +H)
1 +
H

Métodos de ionização
Espectro de Massas ESI de Proteínas

Métodos de ionização
Vantagens do ESI
1) Apropriado para compostos carregados, polares e
básicos;
2) Permite a detecção de compostos de alta massa
molecular maioria dos espectrômetros de massas;
3) Melhor métodos para análises de compostos
multicarregados;
4) Baixo ruído químico permite ótimos limites de detecção;
5) Permite o controle de fragmentações;
6) Compatível com métodos de MS/MS

MALDI-TOF ou Electrospray? Vantagens do MALDI-TOF
• Maior resolução e exatidão (comparado ao LC/MS com
quadrupolos e ion-traps);
•Intervalo de massa de ~50 - >400,000 Daltons;
•Relativa tolerância à sais, tampões;
•Fácil interpretação dos dados;
•Possibilidade de analisar amostras difíceis (Glicoproteinas,
oligonucleotideos,carbohidratos);
•De fácil uso e manutenção.

MALDI-TOF ou Electrospray? Vantagens do Electrospray
•Sistema dinâmico;
•Aplicado a moléculas pequenas, quantificação,
(particularmente triplo quadrupolo);
•Opções de MS/MS
•Massa exata de proteínas intactas.

Conclusões – Análise de Biomoléculas por MS
• Exatidão nas medidas de massa
– Caracterização de amostras sintéticas, proteínas,
peptídeos...
– Verificação de homogeneidade de amostras antes do
sequeciamento das proteínas,
– Purificação de amostras “on line”
– Mapeamento de peptídeos
• Caracterização estrutural da proteína usando CID/MS and
MS/MS
– Identificação de modificações pos traducionais;
– Sequência primária de peptídeos;
• Software eficiente na análise dos dados
– Rápida identificação da proteína utilizando pesquisas em
banco de dados.

Resolução
R= m/ m
m= m/R

% Intensity
100
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
Análise de proteínas no ESI - BSA
1846.291
1748.868
1704.449
1661.850
1620.910
1510.337
1954.345
2076.494
2143.433
2214.905
2291.345
2373.148
2461.494
2556.378
2658.149
2893.649
1453.913 3025.703
3164.460
3909.434
3690.996
3327.893
4153.774
1000 1700 2400 3100 3800 4500
Mass (m/z)
3165

% Intensity
100
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
Análise de proteínas no ESI - BSA
66424
66533
66684
66805
66000 66320 66640 66960 67280 67600
Mass (m/z)
3.9E+4
0

Resolução LC-MS-MS
Baixa resolução (700)
Intensity, cps
1.8e5
1.0e5
2.0e4
692.5
692.429
692.934
691.5 692.5 693.5 694.5
m/z, amu
693.439
694.0
Alta resolução
~13000
Precisão
~2 ppm (internal cal.)
High resolution gives you much more information &
more accurate information about what is in a sample

Analisador de Massas
Quadrupolo (depende decorrente elétrica)
Time of Flight (depende da massa)
Ion Trap (depende da corrente elétrica)
Setor Magnético (depende da voltagem)

Quadrupolo
• Consiste de 4 bastões de metal paralelos
• Os bastões opostos tem potential de mesmo sinal
•angular
y
z
x

Quadrupolo
•Voltagem aplicada aos eletrodos afeta a trajetória dos
íons com o valor de m/z de interesse, e eles viajam
dentro dos bastões
•Estes íons passam através do sistema de eletrodos
•Íons sem interesse mudam sua trajetória original e
chocam nas paredes dos quadrupolos;
•Desta maneira os íons de interesse são separado
•O espectro de massas é obtido variando a voltagem nos
bastões e monitorando quais íons passam pelo filtro

Em espectrometria de massas seqüencial
Normalmente existem 2 analisadores de massa em série
O primeiro analisador (MS1) é usado para SELECIONAR o íon que
se deseja fragmentar. O íon selecionado por MS1 é o íon pai que
pode ser o íon molecular ou qualquer outro íon resultante de uma
fragmentação primária. A DISSOCIAÇÃO ocorre na região de
fragmentação. Os íons filhos são analisados no segundo
analisador de massas e detectados no detector.
MS1
MS2

MS1, seleção do íon pai.
Região de fragmentação, existe um gás neutro ( He, Ar, N2….) O
íon selecionado interage com as moléculas de gás.A energia
cinética dos íons é transformada em energia interna, o que
permite a sua fragmentação
MS2, os íons formados são separados de acordo com sua razão
m/a e detectados no detector.

Ion
Source
MS
Q1 q2 Q3
Detector
m/z

Ion
Source
MS/MS
Q1 q2 Q3
Detector
m/z

Ion
Source
MS/MS
Q1 q2 Q3
Detector
m/z

Ion
Source
MS/MS
Q1 q2 Q3
Detector
m/z

Aminoácidos são sub unidades da proteína
side chain
ALANI NA

Aminoácidos são ligados por ligações peptídicas e
formam poli peptídeos
A polypeptide chain has two distinct ends (amino- or Nterminus
and carboxyl- or C-terminus) and it is made up
of a regularly repeating backbone and distinctive
side chains or residues (R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 )

Íons formados na fragmentação de um Peptídeo

+
H2N H 2 N +
H 2 N +
CID de um Peptídeo Tríptico
H 2 N
Relative I ntensity
K
F
b 1
y
1
b4
L
y
2
b5
b 2
b6
G L
G
b
3
y
3
F
K
COOH
+
COOH
y1
+
COOH
y2
+
COOH
y3
m/z

Nomenclatura dos fragmentos dos peptídeos

Analisador de Massas
Tempo de Vôo
•Separa os íons beseando no tempo de vôo
•Os íons são acelerados por um campo elétrico

Analisador de Massas
Tempo de Vôo
Laser
Signal processing
Detector

Analisador de Massas
Tempo de Vôo
Laser
Signal processing
Detector

Analisador de Massas
Tempo de Vôo
Laser
Signal processing
Detector

Analisador de Massas
Tempo de Vôo
Laser
Spectrum
Signal processing
Detector

Analisador de Massas
Tempo de Vôo
Laser
Spectrum
Signal processing
Detector

Analisador de Massas
Reflectron TOF Z 2

PULSED LASER
BEAM
m/z1 = m/z2
m/z 2
Signal
processing
m/z 1
DETECTOR
ION-GATE
20 kV

LASER
Signal
processing
DETECTOR
ION-GATE
20 kV

LASER
t x
Signal
processing
DETECTOR
ION-GATE
20 kV

LASER
Signal
processing
DETECTOR
ION-GATE
20 kV

LASER
m/z
Signal
processing
DETECTOR
ION-GATE
20 kV

m/z
Signal
processing
DETECTOR
ION-GATE
20 kV

m/z
Signal
processing
DETECTOR
ION-GATE
20 kV

íons b
m/z
íons y
m/z

Ac-S P D M V M K/Q G I/L K/Q I/L

N
G T I/L I/L G I/L I/L K/Q S I/L
C

Detectores
Multiplicador de elétrons
Multiplica uma corrente eletrônica, por aceleração de elétrons na
superfície de um eletrodo. A colisão libera um número de elétrons
secundários maior que o número de elétrons incidentes Os elétrons
secundários são acelerados também por um outro eletrodo que por sua
vez libera outros elétrons secundários e assim por diante, resultando em
uma amplificação do sinal.

Detectores
Placa de Micros Canais (MCP)
Um arranjo de capilares de vidro - paredes internas - material condutor
de energia elétrica - alta voltagem - íon que colidir na parede interna
dos capilares criará uma avalanche de elétrons secundários

Detectores
Placa de Micros Canais (MCP)

GRUPO LBEZ – www.rc.unesp.br/lbez
Prof. Dr. Mario Sergio Palma
Pós-Doutorandos: Bibiana Monson de Souza
Lucilene Delazari dos Santos
Doutorandos: Daniel Saidemberg
Lilian Mari Marcondes Cesas-Togneli
Nicoli Baptista Barao
Paulo César Gomes
Keity Souza Santos
Mestrandos: Fernanda Pessoa de Sales
I.C.: Virginia Ferreira
Alessandra Vaso
Jose Roberto dos Santos
Nathalia Dias

APLICAÇÕES
APLICA APLICAÇÕES ÕES
Espectrometria de Massas

Toxinas de venenos podem causar uma grande variedade de
sintomas e apresentar vários mecanismos de ação em diferentes
tipos de células
Toxinas de Venenos podem ser usadas como uma
importante ferramenta para estudos de bioatividade
Muitas destas toxinas tornam-se modelos
estruturais para o desenvolvimento de novas drogas

As toxinas de venenos animais devem
estudadas de acordo com sua natureza
química:
Compostos de baixo peso molecular;
Peptídeos e
Proteínas

O tipo de toxina depende do tipo do veneno
animal em investigação:
Aranhas
Escorpiões
Cobras
Anêmonas
Insetos
LMW + peptídeos
Peptídeos
Proteínas + peptídeos
LMW
Proteínas + peptídeos

Parawixia bistriata
HO
HO
NH
NH
NH
NH
O
Tetrahydro
betacarbolinetoxins
Bloqueadores de Receptores
Benzodiazipina
NH
NH
NH 2
NH 2
NH 2
NH 2

Acylpolyamine Amide Toxins:
72 estructuras elucidadas
Non-Competitive Glutamate
Receptor Blockers
HO
HO
OH
NH
NH
O
O
O
NH
NH
NH
O O
NH
CONH 2
O O
NH
CONH 2
O O
NH
CONH 2
NH NH NH NH NH 2
O
NH NH NH NH NH 2
O
NH NH NH NH NH 2
O
Nephila clavipes

Nephila clavipes Web
Insecto Toxins
Inseticidas
HO
NH
N
CH 3
.Fe
5-hidroximetil-2-aminometil-N-carbonilamino-2-metilpropilfenona
OH
NH
NH 2
CH 2
CH 2
CH 3
O
O
CH 3

Inflammatory factor:
Jelly Fish: Caribdea alata
OH
OH
OH
OH
O
OH
O
O
OH

Aplicações
Structural Characterization of Novel Chemotactic
and Mastoparan Peptides from the Venom of the
Social Wasp Agelaia pallipes pallipes by HPLC-
ESI-MS/MS
Maria Anita Mendes, Bibiana Monson de Souza,
Lucilene Delazari dos Santos and Mario Sergio Palma

Cromatograma de massas do extrato de veneno bruto
da vespa Agelaia pallipes pallipes

Sequências dos peptídeos determinadas por ESI-MS/MS
I/L-I/L-G-T-I/L-I/L-G-I/L-I/L-K/Q-G-I/L-NH 2
I/L-N-W-I/L-K/Q-I/L-G-K/Q-A-I/L-I/L-D-A-I/L-NH 2
I / L uso de íons fragmentos do tipo d e w
Q / K uso de reação de acetilação com anidrido acético

Distinguindo Ile e Leu
Íons “d” e “w”

Distinguindo Ile e Leu
Íons “d” e “w”

Sequência dos peptídeos determinadas por
espectrometria de massas
Protonectina (MW 1207.8 Da)
I/L-L-G-T-I-L-G-L-L-K-G-I/L-NH 2
Agelaia MP (MW 1565,0)
I/L-N-W-L-K-L-G-K-A-I-I-D-A-I/L-NH 2

Atividades Biológicas
Degranulação de Mastócitos

Atividades Biológicas
Hemólise

Atividades Biológicas
Quimiotaxia

Atividades Biológicas
Quimiotaxia

Conclusões
Poder da técnica de espectrometria de massas
Determinação de sequência primária de peptídeos;
Distinção de resíduos de amino ácido isobáricos;
-Caracterização de peptídeos envolvidos em
processo inflamatórios.
Rapid Commun Mass Spectrom 2004: 18, 639-642

MASS SPECTROMETRIC CHARACTERIZATION OF
TWO NOVELINFLAMATORY PEPTIDES FROM THE
VENOM OF THESOCIAL WASP Polybia paulista.
Bibiana Monson de Souza 1 , Mauricio Ribeiro Marques 1 ,
Daniela Maria Tomazela2, Marcos Nogueira Eberlin 2 ,
Maria Anita Mendes 1 Mario Sergio Palma 1 *
,

Determinação Estrutural
Perfil Cromatográfico do veneno bruto da vespa Polybia paulista

Determinação Estrutural
Análise de massas do peptídeos purificados
B2
A:
B:
B1

Determinação Estrutural

Determinação Estrutural

Distinguindo Ile e Leu
Íons “d” e “w”

Distinguindo Ile e Leu
Íons “d” e “w”
Tempo de retenção

Determinação Estrutural
Sequência do peptídeo
I N W L K L G K M V I D A L-NH 2
(MW 1611.98 Da)
Rapid Commun Mass Spectrom. 2004: 18

Structural and Functional Characterization of
N-Terminal Blocked Peptides Isolated from
The Venom of the Social Wasp
Polybia Paulista
Susan Pereira Ribeiro 1 , Maria Anita Mendes 1 ,
Bibiana Monson de Souza 1 , Lucilene Delazari dos Santos, Maurício
Ribeiro Marques 1 , Walter Filgueira de Azevedo Jr 2 ,
Mario Sergio Palma 1*
(1) Dept. Biology - CEIS / IBRC - UNESP - Rio Claro, SP,
(2) CEP: 13506-900 – Brazil; (2) Dept. Physics,
(3) IBILCE-UNESP, S.J.Rio Preto, SP- Brazil

RESULTADOS
Perfil cromatográfico do extrato de veneno em gradiente de 5
to 60% (v/v) MeCN .

RESULTADOS
Fração 13 apresentou potente atividade de degranulação
demastócitos.

RESULTADOS
Perfil cromatográfico da fração 13 em fase normal sob
condições isocráticas [50% (v/v) MeCN ].

Espectro de massas da Fração 13
FR 13-1
FR 13-2
B2
A:
B:
B1

Química Degradativa de Edman
Sequeciamento N-Terminal
Não houve reação de acoplamento entre os grupos
a-amino de ambos peptídeos com o reagente de
Edman (phenylisothiocyanate)
N-Terminal modificado

Espectro de Massas Sequencial (ESI-MS/MS)
Ac-S-A-D-L/I-V-K/Q-K/Q-L/I-W-D-N-P-A-L/I-NH 2

Espectro de Massas Sequencial (ESI-MS/MS)
Ac-S-V-D-M-V-M-K/Q-G-I/L-K/Q-L/I-W-P-L/I-NH 2

Uso Combinado de MS com Química de Proteínas
Distinção de resíduos de amino ácidos Isobáricos
I / L uso de íons fragmentos do tipo d e w
(com alta energia de colisão)
Q / K uso de reação de acetilação com anidrido acético

Sequência Completa dos Peptídeos
Polybine-I: Ac-S-A-D-L-V-K-K-I-W-D-N-P-A-L-NH 2
Polybine-II: Ac-S-V-D-M-V-M-K-G-L-K-I-W-P-L-NH 2
Síntese do peptídeos em fase sólida
Com e sem acetilação

Atividades Biológicas
Degranulação de Mastócitos;
Hemólise;
Quimiotaxia;
Antibiose.
Os peptídeos não apresentaram atividades
antibióticas nem hemolíticas

Degranulação de Mastócitos

Quimiotaxia de células PMNL (Polybine I)

Quimiotaxia de células PMNL (Polybine II)

CONCLUSÕES
A acetilação dos grupos -amino dos resíduos Nterminal
do Polybine-I e –II aumenta a atividade
biologica para ambos peptídeos;
Podem prevenir a ação de algumas exoproteinases
sobre os peptídeos;
Os peptídeos Polybines I e II constitutem uma nova
família de peptídeos inflamatórios encontrados no
veneno de vespas, apresentando em in vivo um
bloqueio químico no resíduo N-terminal

APLICAÇÕES
APLICA APLICAÇÕES ÕES
Espectrometria de Massa x
Análise An Análise lise Proteômica

“análise de PROTeínas expressas
por um genOMA”

separação sistemática
Identificação
quantificação
PROTEOMA
conjunto de
Proteínas
1 amostra

PROTEOMA
“análise de PROTeínas expressas
por um genOMA”

PROTEOMA
“análise de PROTeínas expressas
por um genOMA”

Há muito mais proteínas no proteoma que genes no genoma
GENOMA PROTEOMA
Representa a soma de todos os genes
de um organismo
Não é uma característica fixa no
organismo

O material genético
pode ser expresso
de várias maneiras
“Splicing” do RNAm
Modificações póstraducionais

Atualmente
PROTEOMA
1995
Todas as proteínas expressas por um
genoma
Metodologia que objetiva documentar a
distribuição geral de proteínas de uma
amostra, identificar e caracterizar
proteínas individuais e principalmente
elucidar as suas associações e funções

Estudo comparativo de venenos:
A gravidade dos acidentes
ofídicos causados por serpentes
do gênero Bothrops atrox das
regiões de Manaus e da Fronteira
Brasil- Colômbia são diferentes. O
mesmo ocorre com diferentes
espécies de aranhas do gênero
Loxosceles.
identificação de proteínas de
interesse biotecnológico e
farmacológico.

SEQUENCIAMENTO PEPTÍDICO
PEPT DICO
Espectrometria de massas e/ou Sequenciamento
Automático (Química Degradativa de Edman)

Espectrometria de Massas

BIOINFORMÁTICA BIOINFORM TICA PROTEÔMICA
Programas de Busca
(Ferramentas de Bioinformática)
Dados oriundos da Espectrometria de Massas e
Eletroforese Bidimensional
Bancos de Dados

Relatório de um Espectrômetro de Massas do tipo ToF-ToF
(Analyzer 4700 – Applied Biosystems)
130

PROTEOMA DESCRITIVO
Identificação das proteínas mais abundantes da amostra analisada, a fim de compreender
os mecanismos de ação
Proteoma da geléia real e do
veneno da abelha Apis mellifera
Proteoma do veneno de
vespa Polybia paulista

Identificação das proteínas do veneno de abelhas Africanizadas (Apis mellifera L.) imunoreativas
ao soro antiveneno por abordagem proteômica
Veneno total 92 spots
16 proteínas
identificadas:
Fosfolipases
Metaloproteases

Proteínas imunoreativas
Ácidas Básicas
210 spots 72 spots
43 spots comuns
Total: 239 spots diferentes
Proteínas não
imunoreativas
Extratos específicos para
diagnóstico e tratamento
111 spots

Gel de Eletroforese Bidimensional em SDS-PAGE 15%(m/v) do veneno da vespa social Polybia
paulista. As proteínas foram focalizadas em fitas de pI de 3 a 10, com 13 cm de comprimento.
Aproximadamente, 225 proteínas foram detectadas pela coloração com CBB.

IMUNODETECÇÃO
Soros dos pacientes sensibilizados com o veneno da vespa Polybia paulista x Veneno da vespa P. paulista
16 proteínas imunoreativas
* 1º Relato: Identificação de antígenos clássicos e suas
isoformas
Extratos específicos para
diagnóstico e tratamento

kDa
50
40
30
25
PROTEOMA DE EXPRESSÃO DIFERENCIAL
Tecido sadio e doente ou Células perturbadas por drogas ou outros estímulos
Câncer de Cabeça e Pescoço
pI 3.0 10.0 pI 3.0 10.0
Tecido Sadio Tecido Doente

Softwares para Tratamento e Análise de Géis 2D
Tecido Doente Tecido Sadio

kDa
50
40
30
25
Expressão Protéica - Doença do Cancro Cítrico
Planta Sadia Planta
Doente
pI 4.0 5.9 4.0 5.9

PROTEOMA DE MAPEAMENTO
A identificação de proteínas e suas atividades em organelas, refletindo a atuação das
mesmas (funções), o qual promove a visualização das proteínas (distribuição espacial
celular) e se elas estão ativas.
Wu et al (2000) identificou várias
classes de proteínas envolvidas na
regulação da fusão de membranas e
secreção utilizando eletroforese 2D e
Espectrometria de Massas
Obtenção de um screening
funcional entre estados
diferentes dos retículos
endoplasmáticos de glândulas
mamárias de ratos.

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