Tese Fabio Bittencourt.pdf - Caunesp

Quatro machos receberam, intraperitonealmante, uma dose única de 2,0 mg de
extrato bruto de hipófise de carpa (EBHC).kg -1 de reprodutor concomitantemente a 2ª
aplicação das fêmeas. A retirada do sêmen seguiu a metodologia descrita por Sanches et
al. (2010) e Sanches et al. (2011), onde o volume de sêmen liberado foi mensurado e,
homogeneizado dando origem a um “pool” por tratamento.
Após um período de 240 horas-grau (somatória da temperatura da água em
função do tempo – Unidades Térmicas Acumuladas - UTAs) (Ceccarelli et al., 2000), as
fêmeas foram massageadas na região ventral no sentido encéfalo-caudal e os ovócitos
liberados (não-hidratados) de cada matriz por tratamento foram coletados em beckers
(250 mL). A seguir, foi realizada a homogeneização dos ovócitos e sêmen.
As fertilizações foram realizadas sequencialmente, em recipientes de 250 mL e
amostras de ovócitos (2 mL) e sêmen (200 µL) ativados com 75 mL de água
(proveniente das incubadoras), homogeneizados por um minuto. Cinco alíquotas (20,0
mL) de cada unidade experimental foram transferidas para cinco incubadoras
experimentais (20 L). A taxa de fertilização (TF, %) por tratamento foi estimada após 8
horas do início da hidratação dos ovos (fechamento do blastóporo) (Romagosa et al.,
2001c), utilizando-se 380 ovos de cada unidade experimental. Foram descartados os
ovos com clivagem irregular ou opacos.
Para o acompanhamento do desenvolvimento embrionário, amostras foram
coletadas e fixadas em glutaraldeído a 3% e mantidas em refrigeração. Os
procedimentos de coleta foram efetuados da seguinte forma: momento da extrusão (não
fertilizado), fertilização (tempo 0), cinco, 10, 15, 30, 45, 60, 90, 120, 150 e 180 minutos
pós-fertilização e, a partir de então, os embriões de hora em hora até o momento da
eclosão.
98