Tese Fabio Bittencourt.pdf - Caunesp

et al., 1986). Os machos receberam dose única de 2,0 mg de extrato bruto de hipófise
de carpa (EBHC).kg -1 de reprodutor concomitantemente a 2ª aplicação das fêmeas. O
substrato hipofisário foi aplicado intraperitonealmante, na região da nadadeira peitoral.
A retirada do sêmen seguiu a metodologia descrita por Sanches et al. (2010) e
Sanches et al. (2011), onde o volume de sêmen liberado foi mensurado e,
homogeneizado dando origem a um “pool” por tratamento.
Após um período de 240 horas-grau (somatória da temperatura da água em
função do tempo – Unidades Térmicas Acumuladas - UTAs) (Ceccarelli et al., 2000),
as fêmeas foram massageadas na região ventral no sentido encéfalo-caudal aonde os
ovócitos liberados (não-hidratados) de cada matriz por tratamento foram coletados em
beckers (250 mL) e, colhidas três sub-amostras (0,1 mL cada) e, estimados o número
total de ovócitos liberados (por extrusão).
A seguir, foi realizada a homogeneização dos ovócitos e sêmen por tratamento.
As taxas de fertilização provenientes do material fecundante por tratamento foram
estimadas em três beckers (250 mL) (observando-se a uniformidade do diâmetro e
coloração dos ovócitos, bem como, ausência de ovócitos brancos - não-viáveis =
gorados (Romagosa et al., 1990).
As fertilizações foram realizadas sequencialmente, em recipientes de 250 mL e
amostras de ovócitos (2 mL) e sêmen (200 µL) ativados com 75 mL de água
(proveniente das incubadoras), homogeneizados por um minuto. Cinco alíquotas (20,0
mL) de cada unidade experimental foram transferidas para cinco incubadoras
experimentais (20 L ).
A taxa de fertilização (TF, %) por tratamento foi estimada após 8 horas do início
da hidratação dos ovos (fechamento do blastóporo) (Romagosa et al., 2001),
utilizando-se 380 ovos de cada unidade experimental, amostra superior a
recomendada por Zaniboni e Weingartner (2007). Foram descartados os ovos com
clivagem irregular ou opacos.
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