PCP Flex® reagent cartridge - Medcorp

Dimension ® clinical chemistry system
Flex ® reagent cartridge
Cartucho de reagente Flex ® para Despiste de
Fenciclidina na Urina
Fim a que se destina: O cartucho de reagente Flex® para Despiste de
Fenciclidina na Urina utilizado no sistema de química clínica
Dimension® fornece reagentes para um teste de diagnóstico in vitro
destinado à determinação qualitativa e semi-quantitativa de fenciclidina na
urina humana. As leituras obtidas com o método da PCP são utilizadas no
diagnóstico e tratamento do consumo ou sobredosagem de fenciclidina.
O método PCP fornece apenas um resultado preliminar analítico. Deve
ser utilizado um método químico alternativo com maior especificidade,
de forma a obter um resultado analítico confirmado. O método de
confirmação aconcelhado é a cromatografia gasosa/espectrometria de
massa (CG/EM). 1,2 Encontram-se disponíveis outros métodos de
confirmação química. A consideração clínica e a avaliação profissional
deverão ser utilizadas em qualquer resultado do teste de droga de
abuso, particularmente quando são utilizados resultados positivos
preliminares.
A fenciclidina, também conhecida por PCP e “pó de anjo”, é uma droga
sintética que foi originalmente desenvolvida pelas suas propriedades
anestésicas, mas que é agora uma droga de abuso utilizada apenas pelos
seus efeitos alucinogénicos potentes. Pode ser auto-administrada de
várias formas, incluindo a ingestão, a inalação e a injecção intravenosa. A
fenciclidina é absorvida de uma forma rápida e fácil e concentra-se no
cérebro e nos tecidos adiposos. 1 Os padrões de excreção variam
amplamente, desde algumas horas a duas semanas. A fenciclidina é
eliminada inalterada pela urina, sob a forma de metabolitos e
primariamente como compostos não identificados.
Resumo: O cartucho de reagente Flex® para PCP contém os reagentes
Syva Emit® II Plus1. O cartucho PCP é utilizado no sistema Dimension®
para fornecer uma aplicação automática deste ensaio. Baseia-se na
competição para os locais de ligação dos anticorpos entre o fármaco
presente na amostra e o fármaco marcado com a enzima glucose-6fosfato
desidrogenase (G6PDH).
Emit ® é uma marca comercial registada Syva Company - Dade Behring
Inc. San Jose, CA 95161-9013.
Princípios do procedimento: Os lotes correspondentes dos anticorpos
policlonais reactivos à fenciclidina e à fenciclidina marcada com a glucose-
6-fosfato desidrogenase são utilizados nesta metodologia Syva Emit® II
Plus. A sequência da reacção é a seguinte:
Ab+ PCP + PCP- ———> Ab-PCP + Ab-PCP-G6PDH + PCP-
G6PDH (inibida) G6PDH
(activa)
PCP-G6PDH
Glucose-6- + NAD + ————> 6-fosfogluconolactona + NADH + H +
Fosfato (activa) (absorve a 340 nm)
Onde: Ab = anticorpo reactivo à fenciclidina
PCP = fenciclidina
PCP-G6PDH = fenciclidina-glucose-6-fosfato
conjugado desidrogenase
A concentração da droga na amostra determina a quantidade do
conjugado PCP-glucose-6-fosfato desidrogenase (PCP-G6PDH) que está
ligada ao anticorpo. O conjugado não ligado catalisa a oxidação da
glucose-6-fosfato com a redução simultânea do NAD + para NADH, mais
rapidamente do que o conjugado ligado. A velocidade de aumento da
absorvância a 340 nm devido ao aumento do NADH está relacionada com
a concentração da droga presente na amostra através de uma função
matemática.
Reagentes
Poços a Forma Ingrediente Concentração b Fonte
1 Vazio
2,3 Líquido Enzima fenciclidina
conjugado b b
4 Vazio
5,6 Líquido Anticorpo policlonal b
reactivo à fenciclidina b,c Ovelha
NAD +, G6P
7 Vazio
8 Líquido Anticorpo policlonal b
reactivo à fenciclidina, b,c Ovelha
NAD +, G6P
a. Os poços são numerados consecutivamente a partir da extremidade larga
do cartucho Flex®.
b. O anticorpo e o conjugado são um par correspondente. A titulação do
anticorpo e a actividade do conjugado enzimático podem variar de lote para
lote.
c. Contém albumina de soro bovino.
PCP
REF DF94A
Precauções: As cuvetes utilizadas contêm líquidos biológicos humanos;
manipular com o devido cuidado para evitar o contacto com a pele ou a
ingestão.
Para utilização em diagnóstico in vitro
Preparação do reagente: Todos os reagentes são líquidos e estão prontos
a serem utilizados.
Instruções para armazenamento: Armazenar entre 2 e 8 °C.
Validade: Consultar a embalagem para obter a data de validade do
cartucho de reagente não aberto individual. Os reagentes dos cartuchos
selados permanecerão estáveis durante 30 dias. Depois de um poço ter
sido perfurado pelo instrumento, permanecerá estável durante 2 dias.
Colheita de amostra: 1,2,3 Para as amostras analisadas com o cartucho de
reagente Flex® para PCP podem ser utilizados os procedimentos normais
para a colheita de urina.
• A colheita das amostras de urina deve ser executada em recipientes
limpos, inquebráveis e estanques. Devem ser utilizadas amostras de
urina colhidas recentemente. Se não forem imediatamente analisadas,
as amostras deverão ser refrigeradas durante um período inferior a
24 horas. Se for necessário um armazenamento superior a 24 horas, as
amostras deverão ser congeladas.
• As amostras de urina colhidas recentemente não necessitam de
nenhum pré-tratamento especial.
• Poderão existir amostras que exibam turvação. Recomenda-se a
centrifugação dessas amostras, antes de serem analisadas.
• Não são necessários quaisquer aditivos nem conservantes.
• O ácido bórico não deve ser utilizado como um conservante.
• As amostras deverão ter um valor de pH entre 5 e 8. As amostras com
um valor de pH fora deste intervalo deverão ser ajustadas para este
intervalo através da adição de 1N de HCl ou de 1N de NaOH, antes da
análise.
• Antes da análise, as amostras deverão estar a uma temperatura de
20 a 25°C.
• A adulteração da amostra de urina poderá originar resultados erróneos.
Se houver suspeita de adulteração, efectuar a colheita de uma amostra
recente.
• As amostras de urina humanas deverão ser manipuladas e tratadas
como se fossem potencialmente infecciosas.
Concentração de compostos mostrando resultados
PCP negativos no “Cutoff” de 25 ng/ml
Cada um dos seguintes compostos foi adicionado a uma amostra de urina
sem fármaco e forneceu resultados PCP negativos com um Cutoff” de
25 ng/ml:
Composto Concentratção
Acetaminofeno 1000 μg/ml
á-Acetyl-N,N-dinormethadol (dinor LAAM) 15 μg/ml
I-á−Acetilmetadol (LAAM) 25 μg/ml
N-Acetilprocainamida (NAPA) 400 μg/ml
Ácido acetilsalicílico 1000 μg/ml
Amitriptilina 90 μg/ml
d-Amphetamina 1000 μg/ml
Benzoilecgonina 1000 μg/ml
Buprenorfina 100 μg/ml
Cafeína 1000 μg/ml
Cimetidina 1000 μg/ml
Clomipramina 2.5 μg/ml
Clonidina 1000 μg/ml
Codeína 500 μg/ml
Cotinina 100 μg/ml
Ciclobenzaprina 28 μg/ml
Desipramina 800 μg/ml
Difenidramina 1000 μg/ml
Doxepina 10 μg/ml
2-Ethilideno-1,5-dimetil-3,3-difenilpirrolidina (EDDP) 1000 μg/ml
Fluoxetina 500 μg/ml
Glutetimida 500 μg/ml
Ibuprofeno 1000 μg/ml
Quetamina 100 μg/ml
Cetorolac Tromethamina 1000 μg/ml
Lormetazepam 1 μg/ml
LSD 10 ng/ml
Meperidina 25 μg/ml
Metadona 1000 μg/ml

d-Metanfetamina 2 μg/ml
Metaqualona 1500 μg/ml
Morfina 58 μg/ml
Naproxeno 1000 μg/ml
Nortriptilina 750 μg/ml
Oxazepam 300 μg/ml
Fenitoína 1000 μg/ml
Prometazina 125 μg/ml
Propoxifeno 1000 μg/ml
Ranitidina 900 μg/ml
Escopolamina 500 μg/ml
Secoibarbital 1000 μg/ml
11-nor-Ä 9-THC-9-COOH 0.2 μg/ml
Tioridazina 15 μg/ml
Tramadol 100 μg/ml
Tiramina 100 μg/ml
Zidovudina (AZT) 2 mg/ml
Zolpidem 100 μg/ml
Teste de Interferências
Cada um dos seguintes compostos foi adicionado à urina numa
concentração de +/- 25 % do “cutoff”, não produzindo uma resposta falsa
relativamente ao “cutoff” de 25 ng/ml:
Composto Concentração
Acetona 1.0 g/dl
Ácido ascórbico 1.5 g/dl
Bilirrubina 0.25 mg/dl
Creatinina 0.5 g/dl
Etanol 1.0 g/dl
Gamma Globulina 0.5 g/dl
Glicose 2.0 g/dl
Hemoglobina 115 mg/dl
Albumina de soro humano 0.5 g/dl
Ácido oxálico 0.1 g/dl
Cloreto de sódio 1.0 g/dl
Ureia 6.0 g/dl
Riboflavina 7.5 mg/dl
Especificidade: Na tabela seguinte são apresentados os compostos
detectados por este ensaio e os níveis nos quais esses compostos têm
uma resposta aproximadamente equivalente à do “cutoff” de 25 ng/ml de
fenciclidina. Cada concentração representa o nível de reactividade para o
composto referido, quando é adicionado a uma amostra de urina negativa.
Se uma amostra contém mais do que um composto detectado pelo
ensaio, pode ocorrer a combinação de concentrações inferiores às
referidas abaixo para produzir uma taxa aproximadamente equivalente ou
superior à do calibrador “cutoff”.
Concentração dos compostos de fenciclidina que produzem um
resultado aproximadamente equivalente ao “cutoff” de 25 ng/ml da
fenciclidina
Composto Concentração
N,N-Dietol-1-fenilciclohexilamina (PCDE) 234 ng/ml
1-(4-Hodroxipiperidino)fenilciclohexana 237 ng/ml
1-(1-Fenilciclohexil)morfolina (PCM) 41 ng/ml
1-(1-Fenilciclohexil)pirrolidina (PCPy) 54 ng/ml
4-Fenil-4-piperidinociclohexarol 32 ng/ml
1-[1-(2–Tienil)-ciclohexil]morfolina (TCM) 80 ng/ml
1-[1-(2–Tienil)-ciclohexil]piperidina (TCP) 24 ng/ml
1-[1-(2–Tienil)-ciclohexil]pirrolidina (TCPy) 50 ng/ml
Concentração (μg/ml) dos compostos que produzem um resultado
aproximadamente equivalente ao “cutoff” de 25 ng/ml da
fenciclidina
Composto Concentração
Dextrometorfan 12 μg/ml
Dextrorfan 20 μg/ml
Mesoridazina 28 μg/ml
Note: Um resultado positivo proveniente de um indivíduo que tome
preparados contendo dextrometrofan deve ser interpretado
cautelosamente e confirmado por outro método.
Materiais necessários:
Cartucho de reagente Flex® para PCP, N° de Cat. DF94A
Catálogo do Calibrador de Nivel 0 Syva Emit® 9A509UL 0 ng/ml fenciclidina
Catálogo do Calibrador de Nivel 2 Syva Emit® 9A549UL 12.5 ng/ml fenciclidina
Catálogo do Calibrador de Nivel 3 Syva Emit® 9A569UL 25 ng/ml fenciclidina
Catálogo do Calibrador de Nivel 4 Syva Emit® 9A589UL 75 ng/ml fenciclidina
Procedimento: Para a execução do teste de PCP é necessário o cartucho
de reagente Flex ® para PCP, Nº de Catálogo DF94A. Este teste é efectuado
automaticamente no sistema de química clínica Dimension®, depois de o
método ter sido calibrado (consultar o Material de Referência na secção
Calibração, em baixo).
Passos do teste
A recolha da amostra, dispensação do reagente, agitação, processamento
e impressão dos resultados são realizados automaticamente pelo sistema
Dimension ®. Para obter pormenores sobre este processamento, consultar
o manual do sistema Dimension®.
NOTA: Os copos de amostra deverão ser enchidos com 1.0 ml de
amostra, controlo ou calibrador, utilizando uma pipeta automática.
Não devem ser utilizadas pipetas de distribuição plásticas. Isto ajuda
a manter uma razão superfície do copo/volume da amostra constante,
e minimiza a perda de fármaco da amostra devido à aderência dos
fármacos à superfície do copo.
Condições de teste
• Volume de Amostra: 14 μl
• Volume de Purga (água purificada): 10 μl
• Volume do reagente 1 (anticorpo,NAD,G6P): 245 μl
• Volume do reagente 2 (conjugado enzimático): 105 μl
• Temperatura do teste: 37° C
• Comprimento de onda: 340 and 600 nm
• Tipo de leitura: Taxa
• Volume de auto-diluição: 2 μl
(Modo semi-quantitativo)
*Calibração
Quando se calibrar o método PCP, deverão ser tomadas em consideração
as seguintes informações:
Concentração “Cutoff”*: 25 ng/ml
*SAMHSA-Substance Abuse Mental Health Serviced Administration
Material de referência Catálogo do Calibrador de Nível 3 Syva Emit® 9A569UL
Modo qualitativo: 25 ng/ml de fenciclidina
Material de referência Catálogo do Calibrador de Nível 0 Syva Emit® 9A509UL
Modo semi-quantitativo: 0 ng/ml de fenciclidina
Catálogo do Calibrador de Nível 2 Syva Emit® 9A549UL
12.5 ng/ml de fenciclidina
Catálogo do Calibrador de Nível 3 Syva Emit® 9A569UL
25 ng/ml de fenciclidina
Catálogo do Calibrador de Nível 4 Syva Emit® 9A589UL
75 ng/ml de fenciclidina
Intervalo de calibração: 0-75 ng/ml
Níveis de calibração sugeridos:
Modo qualitativo: 25 ng/ml (Nível de “cutoff”)
Validar a calibração através do teste de um controlo
positivo e de um negativo.
Modo semi-quantitativo: 0,12.5, 25 (Nivel de “cutoff”), e 75 ng/ml
Validar a calibração através do teste de um controlo
positivo e de um negativo.
Coeficientes iniciais:
Modo semi-quantitativo: C0: 125.0
C1: 150.0
C2: -2.5
C3: 85.0
C4: 0.5
Esquema de calibração:
Modo qualitativo: Nivel de “cutoff” (25 ng/ml) em triplicado
Modo semi-quantitativo: Niveis 0,12.5, 25 e 75 ng/ml em duplicado
Frequência da calibração: Cada lote novo de cartucho de reagente. Cada 30 dias
para qualquer lote individual.
Intervalo do ensaio
Modo semi-quantitativo: 5-75 ng/ml
Controlo de qualidade
Pelo menos uma vez em cada dia de utilização, analisar um controlo
positivo e um controlo negativo relativamente à concentração “cutoff”,
utilizando um material de controlo à base de urina adequado. Se os
resultados caírem fora dos limites aceitáveis do laboratório, seguir o
procedimento da resolução de problemas apresentado no manual do
sistema Dimension ®. Pode existir uma avaria do sistema se for observada
a seguinte precisão de 5 testes:
Concentração Desvio Padrão % CV
25 ng/ml fenciclidina > 2.5 ng/ml 10.0
25 ng/ml fenciclidina > 20 QUAL 2.0
(Unidades QUAL normalizadas)

Resultados:
Modo qualitativo: Os resultados obtidos numa análise de PCP podem ser
referidos qualitativamente como negativos ou positivos, relativamente ao
“cutoff” de 25 ng/ml para PCP. Os resultados positivos indicam que,
provavelmente, a amostra contém fenciclidina. Os resultados negativos
indicam que a amostra não contém fenciclidina ou que a fenciclidina está
presente em concentrações inferiores ao nível “cutoff” de 25 ng/ml.
Modo semi-quantitativo: Os resultados de uma análise de PCP podem ser
referidos semi-quantitativamente com um resultado expresso numa
concentração com unidade numérica (ng/ml), seguido por uma
designação negativa ou positiva. O resultado da concentração em ng/ml
representa, aproximadamente, a concentração cumulativa dos fármacos
detectados pela análise de PCP. O resultado numérico pode ser utilizado
para a semi-quantificação da amostra, para a monitorização com precisão
e para a calibração. Os resultados semi-quantitativos em ng/ml são
equivalentes à concentração do fármaco apenas quando a amostra é um
padrão contendo 0 - 75 ng/ml de fenciclidina pura.
Os resultados de PCP superiores ou iguais a 25 ng/ml devem ser referidos
como positivos. Os resultados de PCP inferiores a 25 ng/ml devem ser
referidos como negativos. Os resultados inferiores ao “cutoff” numérico
indicam que não existe fenciclidina na amostra ou que a fenciclidina está
presente em concentrações inferiores ao nível “cutoff” de 25 ng/ml.
Limitações do procedimento:
• Resultados NEGATIVOS para amostras com concentrações abaixo do
intervalo do ensaio podem ser acompanhadas por uma mensagem
“intervalo do ensaio” ou “abaixo do intervalo do ensaio”. Estes
resultados devem ser registados como NEGATIVOS.
• Resultados POSITIVOS para amostras com concentrações acima do
intervalo do ensaio podem ser acompanhadas por uma mensagem
“intervalo do ensaio” ou “acima do intervalo do ensaio”. Estes
resultados devem ser registados como POSITIVOS.
• Um resultado positivo do ensaio indica a provável presença de
fenciclidina, mas não indica nem mede o nível de intoxicação.
• A presença de fenciclidina na urina é apenas uma indicação de
exposição recente ou do consumo de fenciclidina.
• Os efeitos psicológicos e fisiológicos da fenciclidina não estão
necessariamente relacionados com a concentração urinária.
• Um resultado PCP positivo indica a provável presença da droga e dos
respectivos metabolitos. O método PCP não consegue quantificar
totalmente a concentração dos componentes individuais.
• A interpretação dos resultados deve considerar que as concentrações de
urina variam muito com a ingestão de líquidos e com outras variáveis
biológicas.
• Auto-diluição (AD): Esta característica encontra-se apenas disponível
para as amostras testadas no modo semi-quantitativo. Consultar o
manual do sistema Dimension®.
• Existe a possibilidade de outras substâncias e/ou outros factores não
referidos em cima poderem interferir com o teste e produzirem
resultados falsos, por exemplo erros técnicos ou de procedimento.
• O sistema de emissão de relatórios do instrumento contém mensagens
de erro para prevenir o operador de avarias específicas. Qualquer
relatório que contenha tais mensagens de erro deve ser retido para
seguimento. Consultar o manual do sistema Dimension ®.
Caracteristicas específicas de desempenhod
Reprodutibilidadee Média Intra-ensaio Total
Material ng/mL Desvio Padrão %CV Desvio Padrão %CV
Control Level 1
(19 ng/ml)
18 1 4.6 1 6.4
Cutoff Control
(25 ng/ml)
26 1 5.0 1 5.5
Control Level 2
(31 ng/ml)
31 1 2.1 2 6.5
d. Todos os testes de características de desempenho foram efectuados após a
realização das verificações normalmente recomendadas do controlo de
qualidade do equipamento (consultar o manual do sistema Dimension®).
e. Os controlos foram analisados em duplicado durante 20 dias. Os
coeficientes de variação intra-ensaio e os coeficientes totais (%CV) foram
calculados através do método da análise da variância, de acordo com a
Norma EP5-A do Comité Nacional de Padrões Laboratoriais Clínicos
(National Committee of Clinical Laboratory Standards) (NCCLS) (Fevereiro
de 1999).
Dade Behring Inc.
Newark, DE 19714, U.S.A.
EC
REP
Dade Behring Limited
Regus House, Atterbury
Milton Keynes MK10 9RG
United Kingdom
Resumo dos resultados dos doentes
Foram testadas 213 amostras de urina nativas com o cartucho Flex® para
PCP no sistema Dimension® (“cutoff” de 25 ng/ml) e com o método PCP
no Sistema Abbott AxSYM® (“cutoff” de 25 ng/ml). As amostras com
resultados positivos em qualquer método foram analisadas por CG/EM.
Abbott AxSYM® System
(“Cutoff” de 25 ng/ml)
+ –
Cartucho de reagente Flex®
PCP no sistema de química
clínica Dimension®
+ 42 *5
(“cutoff” 25 ng/ml) – 0 166
CG/EM
(“Cutoff” de 25 ng/mL)
+ –
Cartucho de reagente Flex®
PCP no sistema de química
clínica Dimension®
+ 44 *3
(“cutoff” 25 ng/ml) – 0 48
Amostras com resultados discrepantes (ng/ml):
Dimension® RxL AxSYM® CG/EM (Fenciclidina)
*26 15 24
*45 23 20
*27 14 25
*32 24 19
*26 16 44
Especificidade analítica
Consultar a secção “Concentração de compostos mostrando resultados
PCP negativos no “Cutoff” de 25 ng/ml”.
Sensibilidade analítica
A sensibilidade do método PCP é de 5 ng/ml, valor que representa a menor
concentração de PCP que pode ser distinguida do zero. Esta sensibilidade é
definida como a concentração dois desvios padrão acima do Calibrador de
Nível 0 Emit® 0.0 ng/ml (n=20).
*Bibliografia:
1. Emit® II Plus Phencyclidine Assay Package Insert Sheet, 2000.
2. Hawks, RL, Chiang, CN, Urine testing for drugs of abuse, NIDA Research
Monograph 73, U.S. Government Printing Office, Washington, DC
20402,1986:24-29.
3. Burtis CA, Ashwood ER. TietzTextbook of Clinical Chemistry, W.B. Saunders
Co., Philadelphia, PA 1999,Third edition pp 39–41 (Biological Hazards),
pp 1191-1193 (Drugs of Abuse).
4. Baselt RC, Cravey RH. Disposition of Toxic Drugs and Chemicals in Man. 4th
ed. Chemical Toxicology Institute; Foster City, California,1995:450.
Dimension® e Flex® são marcas registadas da Dade Behring Inc., no
Gabinete de Patentes e Marcas Registadas dos E.U., na Alemanha e em
muitos outros países.
* As secções revistas são anotadas com um asterisco.
EC REP
EXP
YYYY-MM-DD
2°C
IVD
LOT
8°C
Chave dos Símbolos
Fabricado por
Representante Autorizado
Dispositivo Médico para Diagnóstico In Vitro
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A data em “Utilizar antes de” encontra-se no
formato ano-mês-dia (AAAA-MM-DD)
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