KORRIGERT UTGAVE / CORRECTED VERSION - Patentstyret

NO/EP 2276756
171
5
10
Til en oppløsning av 81 mg (0,18 mmol) tert-butyl (2R, 5R) 2-(4-amino-3-
brombenzyl)-5-[(R)-hydroksy(fenyl)metyl]pyrrolidin-1-karboksylat (i-80b) og (2-
amino-1,3-tiazol-4-yl)eddiksyre (45 mg, 0,18 mmol) i 2,0 ml vannfri DMF ble det
tilsatt HOBt (31 mg, 0,23 mmol) fulgt av EDC (45 mg) og DIEA (0,16 ml, 0,88
mmol). Den resulterende blandingen ble omrørt ved romtemperatur under
nitrogenatmosfære i 16 t. Blandingen ble vasket med vann og ekstrahert med diklormetan
(2 x 2 ml). De organiske fasene ble kombinert, tørket over natriumsulfat, filtrert
og konsentrert under vakuum. Residuet ble renset ved Gilson reversfase HPLC ved
eluering med en gradient av 10-90% acetonitril i vann med 0,05% TFA-buffer hvilket
ga produktet (75 mg, 81%). m/z (ES) 601(M) + og 603 (M+2) + , også 623 (MNa) + og
625 (MNa+2) + .
15
Trinn B: 2-(2-Amino-1,3-tiazol-4-yl)-N-[2-brom-4-({(2R, 5R)-5-[(R)-hydroksy
(fenyl)metyl]pyrrolidin-2-yl}metyl)fenyl]acetamid
20
25
30
Til en oppløsning av 75 mg (0,124 mmol) tert-butyl (2R, 5R)-2-(4-{[(2-amino-
1,3-tiazol-4-yl)acetyl]amino}-3-brombenzyl)-5-[(R)-hydroksy(fenyl)metyl]pyrrolidin-
1-karboksylat (fra Trinn A,eksempel 313) i 2,0 ml DCM ble det tilsatt 1,0 ml TFA og
reaksjonsblandingen ble omrørt ved romtemperatur i 2 t. Azeotrop behandling med
toluen (2x) for overskytende syre. Residuet ble deretter tatt opp i acetonitril/vann/MeOH
(9:1:1) og renset ved Gilson HPLC ved eluering med en 10-90%
gradient av acetonitril/vann med 0,05% TFA-buffer. Fraksjonene inneholdende
produktet ble kombinert, frosset og lyofilisert hvilket ga et hvitt skum (56 mg, 90%).
m/z (ES) 501(M) + og 503 (M+2) + , også 523 (MNa) + og 525 (MNa+2) + .
Ved anvendelse av de biologiske analysene (β 3 AR-cAMP) som beskrevet
ovenfor ble human β3 funksjonell aktivitet av Eksempel 313 bestemt å være mellom
101 til 1000 nM.
Selv om oppfinnelsen har blitt beskrevet og illustrert med henvisning til visse
bestemte utførelsesformer derav kan for eksempel effektive doser andre enn de