KORRIGERT UTGAVE / CORRECTED VERSION - Patentstyret

NO/EP 2276756
113
5
10
Til en oppløsning av 10 mg (5:1 blanding cis/trans, 0,02 mmol) tert-butyl (SR)-
2-(4-aminobenzyl)-5-[(R)-{[rert-butyl(dimetyl)silyl]oksy}(fenyl)metyl]pyrrolidin-1-
karboksylat (i-3) og (2-amino-1,3-tiazol-4-yl)eddiksyre (3,18 mg, 0,02 mmol) i 0,5 ml
vannfri DMF ble det tilsatt en 0,5 M oppløsning av HOAt i DMF (0,04 ml, 0,02 mmol)
fulgt av EDC (5,8 mg, 0,03 mmol) og DIEA (3,5 µl, 0,02 mmol). Den resulterende
blandingen ble omrørt ved romtemperatur under nitrogenatmosfære i 16 t. Blandingen
ble vasket med vann og ekstrahert med diklormetan (2 x 2 ml). De organiske fasene ble
kombinert, tørket over natriumsulfat, filtrert og konsentrert under vakuum. Residuet ble
renset ved preparativ TLC-plate (500 uM)-ved eluering med 5% MeOH i diklormetan
hvilket ga produktet (10,3 mg, 81%). m/z (ES) 637 (MH) + , 659 (MNa) + .
Trinn B: 2-(2-Amino-1,3-tiazol-4-yl)-N-[4-({(5R)-[(R)hydroksy(fenyl)metyl]-
pyrrolidinyl}metyl)fenyl]acetamid
15
20
25
30
Til en oppløsning av 7 mg (0,01 mmol) tert-butyl (5R)-2-(4-{[(2-amino-1,3-
tiazol-4-yl)acetyl]amion}benzyl)-5-[(R)-{[tertbutyl(dimetyl)silyl]oksy}(fenyl)metyl]pyrrolidin-1-karboksylat
i 0,20 ml metanol (fra
Trinn A) ble det tilsatt 0,20 ml konsentrert HCl og reaksjonsblandingen ble omrørt ved
romtemperatur i 1 t. Azeotrop behandling med toluen (2x) for å fjerne vann. Residuet
ble tatt opp i acetonitril/vann/MeOH (9:1:1) og renset ved Gilson HPLC ved eluering
med en 0-50% gradient av acetonitril/vann med 0,05% TFA-buffer. Fraksjonene
inneholdende produktet ble kombinert, frosset og lyofilisert hvilket ga et hvitt skum
(3,3 mg, 71%). m/z (ES) 423 (MH) + . (~5:1 blanding) 1 HNMR (500 MHz, CD 3 OD) δ:
7,56 (br d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,44 (d, 7,8 Hz, 2H), 7,39 (t, J = 7,6 Hz, 2H) 7,35-7,32 (m,
0,8H) 7,32-7,29 (m, 0,2H mindre isomer), 7,26 (d, J = 8,0 Hz, 1,7H), 7,14 (d, J = 8,1
Hz, 0,3H mindre isomer) 6,67 og 6,66 (br s, 0,2/0,8H, totalt 1H). 4,72 (d, J = 8,5 Hz,
1H), 3,80-3,70 (m, 4H) 3,14 (dd, J = 6,1, 13,8 Hz, 1H), 2,95 (dd, J = 9,1, 13,8 Hz, 1H),
2,08-2,00 (m, 1H), 1,86-1,74 (m, 3H).
Ved anvendelse av de biologiske analysene beskrevet ovenfor, ble human β3
funksjonell aktivitet av Eksempel 1 bestemt til å være mellom 1 til 10 nM.