DOM6330281BE3A976A2C125785C00466FA5984BML.pdf - e-Dok

T i l b a g e t i l t o p
T i l b a g e t i l t o p
5.5.4 Sædoprensning af frisk og frossen sæd (Version: 14) Side 1 af 6
Kvindeafdeling Y - Hospitalsenhed Midt
5. Fertilitetsklinik > 5. Sæd > 4. Sædoprensning af frisk og frossen sæd
Forfatter:
Anette Lybye
Kirsten Marianne Madsen
Versionsnr.: 14
Informationstype:
Instruks
Ikrafttrædelsesdato: 27-05-2013
Revideret dato: 27-05-2013
Faglig ansvarlig:
Betina Boel Povlsen
Kvalitetsansvarlig: Anette Lybye Poulsen
Ledelsesansvarlig: Betina Boel Povlsen
Seneste rettelse:
Tilføjet sætninger ang. procedure ved check af donors tilgængelighed.
5.5.4 Sædoprensning af frisk og frossen sæd
Formål
Patientgruppe/Patientforløb/Anden målgruppe
Definition af begreber
Fremgangsmåde
GENERELT
GRADIENTOPRENSNING IUI-H OG IUI-D:
GRADIENTOPRENSNING IVF-H OG IVF-D :
GRADIENTOPRENSNING SPERMIEANTISTOFFER:
GRADIENTOPRENSNING RETROGRAD EJAKULATION:
GRADIENTOPRENSNING POSITIV HEPATITIS PATIENT:
SÆDUNDERSØGELSE VED FORUNDERSØGELSE:
Dokumentation
Ansvar
Referencer
Formål
Formålet med processen er at isolere normale, funktionsdygtige spermatozoer i en fraktion fri for sædplasma og
andre celler f.eks leucocytter.
Patientgruppe/Patientforløb/Anden målgruppe
Patienter i fertilitetsbehandling/ sundhedsfagligt personale på fertilitetsklinikken, dog særligt bioanalytikere.
Definition af begreber
Ejakuleret sperm: En viskøs væske, bestående af sekret fra testes og epididimis blandet med spermatozoer.
Dette blandes med prostatasekret produceret på ejakulationstidspunktet. Sædplasma indeholder stoffer, som kan
hæmme og forhindre fertilisation.
ROS: reaktiv oxygen species. Leukocytter og døde spermatozoer i sædvæsken er en kilde til reaktiv oxygen
species (ROS), som kan hindre en vellykket fertilisation. Når sædprøven skal forberedes er det derfor vigtigt at
skille leukocytter og døde spermier fra, så effektivt som muligt.
Retrograd ejakulation: En tilstand, hvor sædcellerne ikke ejakuleres ud i urinrøret, men på grund af en defekt i

T i l b a g e t i l t o p
5.5.4 Sædoprensning af frisk og frossen sæd (Version: 14) Side 2 af 6
blærehalsmusklen ejakuleres i blæren herved blandes sædprøven med urin. Både sædplasma og urin indeholder
stoffer, som kan hæmme og forhindre fertilisation.
Fremgangsmåde
GENERELT:
Medier og utensilier sædlab.doc
Det gælder altid at sekretæren skal henvende sig i sædlab, hvis en sædprøve der afleveres ved fremmøde i
klinikken, afleveres i et kondom. Manden skal informeres om, at prøven ikke dur og at der skal laves en ny prøve.
For par hvor det kun er den ene part, der er smittet med Hepatitis, gælder at prøven ALTID undersøges/oprenses
i smittelaboratoriet, uanset om det er kvinden eller manden der er Hepatitis positiv.
IUI-H/IVF-H:
Det er optimalt, at prøven laves i klinikken. Mener patienten ikke at kunne dette, så kan prøven alternativt laves
hjemme, hvis der ikke går længere fra ejakulation til aflevering af prøve på klinikken end 60 minutter. I alle tilfælde
skal prøven laves i en steril sædboks, som udleveres i klinikken, undtagelsesvis kan patienten købe en steril
container på apoteket.
Sædprøven til IUI-H afleveres 2 timer forud for inseminations tidspunktet. Efter oprensning må sædprøven stå 2
timer inden inseminering. Afviges fra dette aftales nærmere med laboratoriet.
Har patienten nedfrosset sæd, som skal bruges ved behandlingen, så gælder samme optøningsprocedure, som
ved IUI-D og IVF-D.
IUI-D/IVF-D:
Nedfrosset sæd er ikke oprenset inden nedfrysning, og der er tilsat cryopreserverende medie, der skal fjernes
efter optøning. Oprensningen af nedfrosne optøede sædprøver er derfor altid en gradientoprensning efter samme
princip som almindelig oprensning af gradient. Dette gælder dog ikke ready strå, hvor sæden er oprenset før
nedfrysning.
Tidspunktet for optøning/oprensning skal afpasses efter hvornår prøven skal anvendes, idet den færdige
sædprøve højest må stå en time inden inseminering.
Ud fra Karakteristik sæddonor.doc udfyldt af læge og patient ved forundersøgelsen udvælges et eller to strå fra
matchende donor (et strå til IUI med ready strå, 1 strå til IVF eller 2 strå til IUI med alm. strå).
Karakteristik sæddonor.doc udfyldes og oplysninger om firma, donor nr. og ejakulatnr. påføres dette skema
samt Spermatogram.doc.
På dagen for IUI-D skal man gå ind på donorfirmaets hjemmeside for at få oplyst, om den valgte donor stadig må
bruges; altså ikke har nået sin "kvote" på 12 graviditeter i DK.
Dette gøres ved at følge nedenstående vejledning. Siden med donorens oplysninger printes ud og lægges under
det gule faneblad sammen med sædskemaet, så det kan blive scannet ind. Har den valgte donor nået sin kvote,
så må der udvælges en ny donor.
Vejledning til kvotekontrol:
1. Gå ind på Donorsøgning: http://dk-da.cryosinternational.com/private/donorsoegning.aspx
2. Skriv donorkoden (et navn eller et nummer) for den pågældende donor i øverste venstre rudefelt. Klik knappen
Search.
Hvis donor findes: klik på linjen hvor donor vises – så åbner nedenstående billede.
3. Indtast Danmark under klinik land og anfør patientens land.
Der oplyses ”Nået” eller ”Ikke nået”. Hvis "Nået", må donor kun benyttes til søskende. Ellers vælges en anden.
4. Hvis "Ikke nået" printes siden ud og ligges i pt´s journal.
5. Hvis intet kommer frem åbnes linket til Pregnancy Quota http://dk.cryosinternational.com/clinics/pregnancyquota.aspx
, det skyldes at den valgte donor ikke længere er aktiv og til salg på markedet, login skal bruges, det
er beskrevet i donormappen. Indtast Danmark under klinik land og anfør patientens land.Tryk på search, så

5.5.4 Sædoprensning af frisk og frossen sæd (Version: 14) Side 3 af 6
fremgår det om den er tilgængelig eller tæt på kvoten, det står beskrevet nederst på deres side. Efterfølgende
åbnes: Blocked donors http://dk.cryosinternational.com/clinics/blocked-donors.aspx for at sikre denne donor
ikke er blokeret af en eller anden årsag.
GRADIENTOPRENSNING GENERELT:
IUI-H OG IVF-H:
Beklæd sædboksen med stanniol, og lad den vippe i 10 minutter, hvis prøven er lavet på klinikken.
Er prøven medbragt, kan man gå i gang umiddelbart.
Skal der benyttes nedfrosset sæd, så findes strået i fryseren og identificeres om muligt af 2 bioanalytikere.
Stråene klippes op og placeres i spidsglas - pakket ind i staniol - mærket med patientens navn og CPRnummer.
Optøningen foregår ved stuetemperatur i ca. 10 minutter.
ÍUI-D OG IVF-D:
Sædstråene findes i frysetanken og identificeres om muligt af 2 bioanalytikere.
Stråene klippes op og placeres i spidsglas - pakket ind i staniol - mærket med patientens navn og CPRnummer.
Optøningen foregår ved stuetemperatur i ca. 10 minutter.
GRADIENTOPRENSNING IUI-H OG IUI-D:
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
Prøven vurderes med henblik på antal ml, koncentration og motilitet i Makler- tællekammer
Hvis man skønner at prøven efter oprensning ikke giver en minimum koncentration på 2,5 mill motile, bedes
manden lave yderligere en sædprøve, eller der tøes yderligere sædstrå.
80 %-gradienten, mærket med parrets navne, CPR-numre og farvekode, tages ud af inkubatoren. Identiteten
sammenholdes med identiteten på Spermatogram.doc. Ovenpå lejres med en pasteurpipette forsigtigt 40
%-gradienten. Med en stangpipette lejres sæden forsigtigt ovenpå (max 3,5 ml).
Sædprøven centrifugeres ved ca. 300 G (1400 rpm) i 15 minutter.
Sug omgående supernatanten af med en pasteurpipette, så kun pellet med sædceller er tilbage. Overflyt
pellet direkte til et nyt mærket spidsglas og tilsæt 1,5-2,0 ml IVF-medie, begge gange bruges en ny
pasteurpipette.
Centrifuger ved 200 G (1100 rpm) i 10 minutter.
Fjern supernatanten og tilsæt 1,5-2,0 ml. IVF-medie. Begge gange bruges en ny pasteurpipette.
Centrifuger ved 200 G (1100 rpm) i 10 minutter.
Sug omgående supernatanten af med pasteurpipette, så kun pellet med sædceller er tilbage. Prøven tilsættes
med stangpipette 1 ml +/- 0,1 ml IVF-medie og vurderes med henblik på koncentration og motilitet. Resultatet
noteres på sædskemaet.
Hvis motiliteten er under 60% ved IUI-H laves en swim up på prøven. Alternativt kan manden bedes aflevere
en ny sædprøve. Hvis koncentrationen er under 2,5 millioner/ml skal laboratorielederen kontaktes med henblik
på om prøven kan anvendes eller der bør afleveres en ny prøve.
Er koncentrationen mindre end 5 millioner/ml og/eller motiliteten under 60% ved IUI-D optøs yderligere strå.
Sædprøven pakkes ind i stanniol. En 2 ml sprøjte med kanyle sættes i samme stativ. Prøven samt journal
stilles i det lille æglaboratorium indtil inseminering.
GRADIENTOPRENSNING IVF-H OG IVF-D :
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
Prøven vurderes med henblik på antal ml., koncentration og motilitet i Makler tællekammer.
90 %-gradienten, mærket med parrets navne, CPR-numre og farvekode, tages ud af inkubatoren. Identiteten
sammenholdes med identiteten på Spermatogram.doc Ovenpå lejres med en pasteurpipette forsigtigt 45 %-
gradienten. Med en stangpipette lejres sæden forsigtigt ovenpå (max 3,5 ml).
Sædprøven centrifugeres ved ca. 300 G (1400 rpm) i 15 minutter.
Sug omgående supernatanten af med en pasteurpipette, så kun pellet med sædceller er tilbage. Overflyt
pellet direkte til et nyt mærket spidsglas og tilsæt 1,5-2,0 ml IVF-medie begge gange bruges en ny
pasteurpipette.
Centrifuger ved 2ooG(1100 rpm) i 10 min

5.5.4 Sædoprensning af frisk og frossen sæd (Version: 14) Side 4 af 6
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
Fjern supernatanten og tilsæt 1,5-2,0 ml IVF-medie. Begge gange bruges en ny pasteurpipette.
Centrifuger ved 200 G (1100 rpm) i 10 minutter.
Sug omgående supernatanten af med pasteurpipette, så kun pellet med sædceller er tilbage. Prøven tilsættes
en passende mængde IVF-medie (max 1 ml)
Prøven vurderes med henblik på koncentration, og motilitet. Resultatet noteres på sædskemaet. Prøven
fortyndes eventuelt yderligere i nyt spidsglas med IVF-medie til en slutkoncentration på 5-7 mill/ml(IVF) 3-
5mill/ml(ICSI) Dette resultat samt beregnet volumen til evt. insiminering med 150.000 spermier påføres
sædskemaet.
Hvis motiliteten er under 60 %, laves en swim up på prøven. Alternativt kan manden bedes aflevere en ny
sædprøve.
Hvis koncentrationen i den færdige oprensning er

14.
T i l b a g e t i l t o p
5.5.4 Sædoprensning af frisk og frossen sæd (Version: 14) Side 5 af 6
GRADIENTOPRENSNING POSITIV HEPATITIS PATIENT:
Ved gradientoprensning fjernes antigenerne fra ydersiden af spermatozoerne, herved elimineres overførsel af
smitte til partner.
Ved at centrifugere sædprøven yderligere gennem en 70% gradient øges sikkerheden for, at
alle antigenerne fjernes.
Der skal IKKE laves oprensning med 70% gradient, hvis det kun er kvinden der er smittet. Dog laves alle
sædprøver på smittede par, uanset hvem der er smittet, på smittelab.
Oprensning:
Dagen før sædpreparering fremstilles en 70 % gradient ved tilsætning af 0,4 ml. IVF PLUS til 90 % gradienten.
45 %, 70 %, 90 % gradient, samt 5 ml. IVF-medie stilles i inkubator (med løs prop) i smittelab til næste dag.
Beklæd prøven med staniol og lad den vippe i 10 minutter.
I et èngangs tællekammer "Cell Vision" vurderes prøven med henblik på antal ml., koncentration og motilitet.
Når prøven er homogen, påfyldes 5 microliter sæd i kammer nr. 1. Overskydende sæd tørres væk med en kleenex
5 tællefelter svarer til koncentration i mill./ml. Der tælles 3 x 5 tællefelter, og gennemsnittet opgives som resultat.
Tællekammeret kasseres efter brug.
Fremgangsmåden for oprensning af IVF-H følges herefter, blot lejres 70% gradienten mellem 90% og 45%
gradienterne, således at sæden skal gennem alle tre.
Centrifugering på smittelab.:
1. centrifugering 300G (1700 rpm) i 15 min
1. og 2. vask 200G (1300 rpm) i 15 min
Den færdige prøve opbevares i inkubator 11 i smittelab. indtil inseminering.
Afvigelse fra normal procedure:
- Brug handsker ved håndtering af prøven.
- Oprensningen sker ved brug af 3 hold gradienter 45%, 70% og 90%
- Prøven behandles i særskilt laboratorium
SÆDUNDERSØGELSE VED FORUNDERSØGELSE:
Sædprøve undersøges, hvis lægen vurderer det hensigtsmæssigt for udredningen af patienten og for at fastlægge
den videre behandlingsplan.
Sædprøven må meget gerne tages med hjemmefra, hvis den er lavet inden for 2 timer før analyse.
Ved forudbestemt IVF eller ICSI behandling oprenses prøven normalt ikke.
Ved forudbestemt IUI behandling foretages gradientoprensning kun, hvis prøven ikke opfylder en eller flere af
følgende kriterier:
>30 mill (Total Motile Count (TMC))
>60% motile spermier
>grad 3(2)
Sædprøven oprenses efter samme procedure som for gradientoprensning IUI-H

T i l b a g e t i l t o p
T i l b a g e t i l t o p
T i l b a g e t i l t o p
5.5.4 Sædoprensning af frisk og frossen sæd (Version: 14) Side 6 af 6
Dokumentation
Patientjournal.
Ansvar
Sundhedsfagligt personale der deltager i processen.
Referencer
Aitken (1995) har vist, at leukocytter og døde spermatozoer i sædvæsken er en kilde til reaktiv oxygen species
(ROS), som kan hindre en vellykket fertilisation.