Basispracticum Biologische Chemie - Biochemistry
Basispracticum Biologische Chemie - Biochemistry Basispracticum Biologische Chemie - Biochemistry
VERSLAG OVER BLOK 3 Urinezuurbepaling - Geef in het verslag de gevonden waarden van de DDL bepaling en de zuurstofmetingen. Bereken uit deze getallen de juiste concentratie van de urinezuurstandaard en de concentratie van urinezuur in de urine. Geef aan hoe je de berekening uit hebt gevoerd. - Vergelijk de resultaten van beide bepalingsmethoden. Welke methode geeft de meest betrouwbare uitkomst? - De molaire extinctiecoëfficiënt van DDL, ε DDL (410nm) = 8 x 10 3 M -1 .cm -1 . GOT-GPT metingen - Geef de reactievergelijking van de door GOT en GPT gekatalyseerde reactie en geef aan met welke volgreactie de activiteit gedetecteerd wordt. - Geef in je verslag aan hoe je het aantal units GOT en GPT per liter serum uit gemeten extinctieveranderingen hebt berekend. (1 unit is die hoeveelheid enzym die per min 1 μmol product produceert bij 30°C). ε NADH bij 340 nm = 6.3 mM -1 .cm 1 . - Geef aan hoe je hebt gecontroleerd dat de gemeten GOT en GPT activiteit ook echt de activiteit van de GOT en GPT enzymen was en niet die van de detectie-enzymen. - Waarom is het zo belangrijk precies bij 30°C de activiteit te meten? - Bepaal het “DeRitis” quotiënt. - Welke conclusies kan je trekken uit de GOT en GPT metingen en uit de waarde van het “DeRitis” quotiënt met betrekking tot een mogelijke ziekte van de patiënt? Isoelectrisch focusseren • Presenteer een scan van de gel. • Tracht uit de samenstelling van de fosfoglucomutase reactiemix te achterhalen volgens welke reacties de activiteit van fosfoglucomutase in de agarose-gel gedetecteerd is. (Info: PMS oxideert NAD(P)H en gereduceerd PMS reduceert NBT; gereduceerd NBT is niet oplosbaar en slaat neer). • Beschrijf de uitkomst van het isoelectrisch focuseringsexperiment. Geef aan hoeveel isoenzymen er in runderspier en varkensspier worden aangetroffen. • Is het mogelijk met behulp van het fosfoglucomutase isoenzym patroon een uitspraak te doen over de aanwezigheid van rundvlees en varkensvlees in het rundergehakt? • Is de inhoud van het vleesproduct van Albert Heijn (‘slavink’) in overeenstemming met het label dat op het vleesproduct aanwezig is? (zie vorige bladzijde) Geef aan of de testmethode goed genoeg geweest is om de aangegeven samenstelling te kunnen detecteren. Realiseer je dat runderhart ook rundvlees is en dat glycogeen een belangrijke energiebron voor spiercontractie is in skeletspier maar niet in hartspier. Hartspier mag namelijk niet verzuren. - 58 -
Basispracticum Biologische Chemie: Biochemie-deel Blok 1 (in silico experimenten): - gebruik van antilichamen in detectie en analyse van eiwitten en eiwitcomplexen - opzetten van een (fluorimetrische) enzymactiviteitsmeting Blok 2: - het gebruiken van fluorescentie en lichtabsorptie bij fysiologische studies (in vivo fluorescentie, ΔG berekeningen) - het gebruik van computer graphics om het werkingsmechanisme van enzymen te bestuderen (CG) Blok3: - de detectie van (weefselspecifieke) enzymen of substraten voor het vaststellen van: jicht, een hartaanval of een levercirrose, de aan/afwezigheid van varkens/rundvlees in slavinken Blok 1 In silico experimenten: detectie van eiwitten en eiwit(enzym)compexen Isolatie en identificatie enzymcomplexen • Bepalen van de kwaliteit (titer) van een IgG oplossing • Het uitvoeren van een immunoprecipitatie • Analyse van het geprecipiteerde eiwitcomplex m.b.v proteomics (een trypsine digestie van een bandje uit een SDS gel; het bepalen van de massa’s van de peptides in het digest; het vergelijken van de massa’s met databases van eiwitten) Kwantitatieve bepaling van een eiwit • Het bepalen van een hormoonconcentratie m.b.v. de ELISA methode Het meten van genexpressie met een reporterenzym • Opzetten en in silico uitvoeren van een fluorimetrische enzymactiviteitsmeting (ß-glucuronidase in een transgene plant) Structuur IgG molecuul Het Fc-domein is de bindingsplaats voor protein A of anti-IgG (konijn) opgewekt in een geit PowerPoint paginanummer 1
- Page 9 and 10: Gegevens en rekenvoorbeelden Het mo
- Page 11 and 12: worden gebracht. Een methode is de
- Page 13 and 14: Vuistregels Begin met het gebruiken
- Page 15 and 16: De reactievergelijking is: MUG + H
- Page 17 and 18: Meten onder v MAX condities De Mich
- Page 19 and 20: Figuur 2.1 Quantum-mechanische voor
- Page 21 and 22: Het restant licht valt op de fotomu
- Page 23 and 24: Figuur 2.3 Een schematische voorste
- Page 25 and 26: tage van de intensiteit van de lich
- Page 27 and 28: Figuur 2.5 Links staat het absorpti
- Page 29 and 30: wordt het signaal dat afkomstig is
- Page 31 and 32: het sequencen van DNA de aminozuurv
- Page 33 and 34: Tabel 2.1 Effect van plaatsgerichte
- Page 35 and 36: • Meet de absorptie gedurende ong
- Page 37 and 38: Computer gegenereerde getallen (mL
- Page 39 and 40: Gebruik voor de berekening van de d
- Page 41 and 42: - Het werken met het Control panel:
- Page 43 and 44: OPDRACHTEN EN VRAGEN CG EXPERIMENT
- Page 45 and 46: Figuur 2.8 De overgangstoestand voo
- Page 47 and 48: Figuur 3.1 Kristallen van natriumur
- Page 49 and 50: Figuur 3.4 De electrode reacties va
- Page 51 and 52: Figuur 3.7 Structuur van acetylacet
- Page 53 and 54: een verhoging van de GOT activiteit
- Page 55 and 56: den worden. Dit is als volgt in te
- Page 57 and 58: HANDLEIDING VOOR HET GEBRUIK VAN HE
- Page 59: - Oplossing 2 Los 0.15 g agarose M
- Page 63 and 64: Immunoprecipitatie en proteomics St
- Page 65 and 66: De ijking van de fluorimeter met 10
- Page 67 and 68: Fluorescence (AU) 1 0.9 0.8 0.7 0.6
- Page 69 and 70: Vrije energie berekeningen (ΔGº)
- Page 71 and 72: GOT is een gekoppelde meting Glutam
- Page 73 and 74: Anode (+) pool Low pH (+) Low pH (+
<strong>Basispracticum</strong> <strong>Biologische</strong> <strong>Chemie</strong>: Biochemie-deel<br />
Blok 1 (in silico experimenten):<br />
- gebruik van antilichamen in detectie en analyse van eiwitten en<br />
eiwitcomplexen<br />
- opzetten van een (fluorimetrische) enzymactiviteitsmeting<br />
Blok 2:<br />
- het gebruiken van fluorescentie en lichtabsorptie bij fysiologische<br />
studies (in vivo fluorescentie, ΔG berekeningen)<br />
- het gebruik van computer graphics om het werkingsmechanisme<br />
van enzymen te bestuderen (CG)<br />
Blok3:<br />
- de detectie van (weefselspecifieke) enzymen of substraten voor het<br />
vaststellen van: jicht, een hartaanval of een levercirrose, de<br />
aan/afwezigheid van varkens/rundvlees in slavinken<br />
Blok 1<br />
In silico experimenten: detectie van eiwitten en<br />
eiwit(enzym)compexen<br />
Isolatie en identificatie enzymcomplexen<br />
• Bepalen van de kwaliteit (titer) van een IgG oplossing<br />
• Het uitvoeren van een immunoprecipitatie<br />
• Analyse van het geprecipiteerde eiwitcomplex m.b.v proteomics (een<br />
trypsine digestie van een bandje uit een SDS gel; het bepalen van de<br />
massa’s van de peptides in het digest; het vergelijken van de massa’s met<br />
databases van eiwitten)<br />
Kwantitatieve bepaling van een eiwit<br />
• Het bepalen van een hormoonconcentratie m.b.v. de ELISA methode<br />
Het meten van genexpressie met een reporterenzym<br />
• Opzetten en in silico uitvoeren van een fluorimetrische<br />
enzymactiviteitsmeting (ß-glucuronidase in een transgene plant)<br />
Structuur IgG molecuul<br />
Het Fc-domein is de bindingsplaats voor protein A of anti-IgG<br />
(konijn) opgewekt in een geit<br />
PowerPoint paginanummer 1