Basispracticum Biologische Chemie - Biochemistry

VERSLAG OVER BLOK 3
Urinezuurbepaling
- Geef in het verslag de gevonden waarden van de DDL bepaling en de
zuurstofmetingen. Bereken uit deze getallen de juiste concentratie van de
urinezuurstandaard en de concentratie van urinezuur in de urine. Geef aan
hoe je de berekening uit hebt gevoerd.
- Vergelijk de resultaten van beide bepalingsmethoden. Welke methode
geeft de meest betrouwbare uitkomst?
- De molaire extinctiecoëfficiënt van DDL, ε DDL (410nm) = 8 x 10 3 M -1 .cm -1 .
GOT-GPT metingen
- Geef de reactievergelijking van de door GOT en GPT gekatalyseerde reactie
en geef aan met welke volgreactie de activiteit gedetecteerd wordt.
- Geef in je verslag aan hoe je het aantal units GOT en GPT per liter serum
uit gemeten extinctieveranderingen hebt berekend. (1 unit is die hoeveelheid
enzym die per min 1 μmol product produceert bij 30°C). ε NADH
bij 340 nm = 6.3 mM -1 .cm 1 .
- Geef aan hoe je hebt gecontroleerd dat de gemeten GOT en GPT activiteit
ook echt de activiteit van de GOT en GPT enzymen was en niet die van de
detectie-enzymen.
- Waarom is het zo belangrijk precies bij 30°C de activiteit te meten?
- Bepaal het “DeRitis” quotiënt.
- Welke conclusies kan je trekken uit de GOT en GPT metingen en uit de
waarde van het “DeRitis” quotiënt met betrekking tot een mogelijke
ziekte van de patiënt?
Isoelectrisch focusseren
• Presenteer een scan van de gel.
• Tracht uit de samenstelling van de fosfoglucomutase reactiemix te achterhalen
volgens welke reacties de activiteit van fosfoglucomutase in de
agarose-gel gedetecteerd is. (Info: PMS oxideert NAD(P)H en gereduceerd
PMS reduceert NBT; gereduceerd NBT is niet oplosbaar en slaat neer).
• Beschrijf de uitkomst van het isoelectrisch focuseringsexperiment. Geef
aan hoeveel isoenzymen er in runderspier en varkensspier worden aangetroffen.
• Is het mogelijk met behulp van het fosfoglucomutase isoenzym patroon
een uitspraak te doen over de aanwezigheid van rundvlees en varkensvlees
in het rundergehakt?
• Is de inhoud van het vleesproduct van Albert Heijn (‘slavink’) in overeenstemming
met het label dat op het vleesproduct aanwezig is? (zie vorige
bladzijde) Geef aan of de testmethode goed genoeg geweest is om de
aangegeven samenstelling te kunnen detecteren. Realiseer je dat runderhart
ook rundvlees is en dat glycogeen een belangrijke energiebron
voor spiercontractie is in skeletspier maar niet in hartspier. Hartspier mag
namelijk niet verzuren.
- 58 -