Basispracticum Biologische Chemie - Biochemistry
Basispracticum Biologische Chemie - Biochemistry Basispracticum Biologische Chemie - Biochemistry
pen: De pre-focussing De pre-focussing stap vindt plaats bij ongeveer 2.5 mA (bij het gebruik van één gel) met een oplopend voltage vanaf ± 200 V naar 750 V totdat 75 Vh bereikt is. Dit duurt ongeveer 9 min. Het opbrengen van de preparaten. De sample applicatorarm gaat programmagestuurd naar beneden en bij een voltage van 200 V diffundeert het preparaat de gel in. Het totale vermogen dat gedurende dit traject (ongeveer 4.5 min) door gel wordt gestuurd is 15 Vh. Het focusseren Het focusseren vindt plaats bij een constant vermogen van 3.5 W per gel. Dit wordt bereikt met een amperage van ongeveer 2 mA en een voltage aan het begin van het experiment van 1400 V. Door een toenemende weerstand in de gel zal het voltage tijdens het focusseren oplopen. Gemiddeld is het voltage 1650 V. Na ongeveer 15 min is er 410 Vh door de gel gegaan en wordt het proces gestopt. Het beëindigen van het focusseren Door middel van een ‘piep’ wordt aangegeven dat het focusseren is afgelopen. Hierna blijft een spanning over de gel van ongeveer 100 V gehandhaafd. Dit om de diffusie van de eiwitten tegen te gaan. Om dit te bereiken is het amperage ingesteld op 0.1 mA. Om af te sluiten moet op ‘SEP start stop’ gedrukt worden en moet bevestigd worden via het indrukken van ‘do’. Tijdens het focusseren kan begonnen worden met het maken van de agarose-gel die gebruikt gaat worden voor de fosfoglucomutase activiteitsmeting. In situ ACTIVITEITSBEPALING VAN FOSFOGLUCOMUTASE De weefselspecifieke fosfoglucomutase isoenzymen in de preparaten zijn met behulp van isoelectrisch focusseren in een gel gescheiden. Dit is uitgevoerd met het Pharmacia FastSystem in een IEF 5 8 gel. Hieronder wordt de samenstelling gegeven van het reactiemengsel om de fosfoglucomutase activiteit van de preparaten in een gel te meten. Uitvoering - Tijdens de electroforese wordt een agarose-gel gemaakt waarin de reactanten voor de activiteitskleuring van fosfoglucomutase zijn opgelost. - Oplossing 1 Aan 10 mL 0.125 M Tris-HCl buffer pH 7.4 wordt toegevoegd: - 40 mg glucose 1-fosfaat - 5 mg NADP + - 15 μL glucose 6-fosfaat dehydrogenase - 0.5 mL NBT (nitro blue tetrazolium) (0.5 % oplossing in H 2 O) - 0.5 mL PMS (phenazine methosulfate) (0.2% oplossing in H 2 O) - 56 -
- Oplossing 2 Los 0.15 g agarose M op in 10 mL 0.125 M Tris-HCl buffer pH 7.4 door voorzichtig te verwarmen in vlam in de zuurkast terwijl er voorzichtig geschud wordt. - Breng de agarose-oplossing over in een waterbad van 60⁰C en voeg na enige minuten oplossing 1 toe. Meng beide oplossingen voorzichtig met behulp van een vortex mixer en giet de oplossing meteen over de hydrofiele kant van een 6*12 cm GelBond plastic blad. Deze hoeveelheid is voldoende voor twee gels. Laat de Agarose-gel stollen en bewaar de gel in het donker. - Na de electroforese wordt de electroforese gel ondersteboven, dus met de gelkant en niet het plastickant, voorzichtig op de agarose-gel gelegd. Probeer het insluiten van luchtbellen te voorkomen. - De ‘gel-sandwich’ wordt gedurende ongeveer 30 minuten in het donker gekleurd. Digitaliseer de gel via een foto of een scan. Vraag de assistent je te helpen. AH Slavinken, 3 stuks Prijs per standaard hoeveelheid: € 6.99/KG Een gekruide gehakt- vulling met daaromheen een dun lapje varkensvlees, gesneden van de varkensbuik. • Algemeen: Varkens/rundvleesproduct. • Ingrediënten: 62% varkensvlees, 18% rundvlees, tarwezetmeel, paneermeel, plantaardige olie,specerijenextracten, paprika, zout, peper, azijn,melkeiwit, maltodextrine, smaakversterker (E621),voedingszuren (citroenzuur, E262, E325), anti-oxidanten (E301, E331), stabilisator (xanthaangom). • Bereiden: Koekenpan: verhit boter en/of (olijf)oliein een koekenpan. Bak de slavinken rondom bruinen op matige temperatuur in ca. 18 minuten gaar.Regelmatig keren. • Bewaren: In de koelkast, te consumeren tot de uiterlijk vermelde datum. Geschikt om in te vriezen op de dag van aankoop, dan binnen 3 maanden gebruiken. Voor gebruik ontdooien Slavinkpreparaat en mengsel 62% hamlap en 18 % biefstuk na de eerste centrifugatiestap Nadat het weefsel (cellen) in een ‘potterbuis’ zijn stukgewreven worden de oplosbare celcomponenten gescheiden van de hele cellen, kernen en extracellulair onoplosbaar materiaal (o.a. bindweefsel). Het in de slavinken aanwezig harde vet werkt als een prop die verhindert dat de meniscus zich na het centrifugeren weer horizontaal kan instellen. - 57 -
- Page 7 and 8: GLOBAAL OVERZICHT OVER DE EXPERIMEN
- Page 9 and 10: Gegevens en rekenvoorbeelden Het mo
- Page 11 and 12: worden gebracht. Een methode is de
- Page 13 and 14: Vuistregels Begin met het gebruiken
- Page 15 and 16: De reactievergelijking is: MUG + H
- Page 17 and 18: Meten onder v MAX condities De Mich
- Page 19 and 20: Figuur 2.1 Quantum-mechanische voor
- Page 21 and 22: Het restant licht valt op de fotomu
- Page 23 and 24: Figuur 2.3 Een schematische voorste
- Page 25 and 26: tage van de intensiteit van de lich
- Page 27 and 28: Figuur 2.5 Links staat het absorpti
- Page 29 and 30: wordt het signaal dat afkomstig is
- Page 31 and 32: het sequencen van DNA de aminozuurv
- Page 33 and 34: Tabel 2.1 Effect van plaatsgerichte
- Page 35 and 36: • Meet de absorptie gedurende ong
- Page 37 and 38: Computer gegenereerde getallen (mL
- Page 39 and 40: Gebruik voor de berekening van de d
- Page 41 and 42: - Het werken met het Control panel:
- Page 43 and 44: OPDRACHTEN EN VRAGEN CG EXPERIMENT
- Page 45 and 46: Figuur 2.8 De overgangstoestand voo
- Page 47 and 48: Figuur 3.1 Kristallen van natriumur
- Page 49 and 50: Figuur 3.4 De electrode reacties va
- Page 51 and 52: Figuur 3.7 Structuur van acetylacet
- Page 53 and 54: een verhoging van de GOT activiteit
- Page 55 and 56: den worden. Dit is als volgt in te
- Page 57: HANDLEIDING VOOR HET GEBRUIK VAN HE
- Page 61 and 62: Basispracticum Biologische Chemie:
- Page 63 and 64: Immunoprecipitatie en proteomics St
- Page 65 and 66: De ijking van de fluorimeter met 10
- Page 67 and 68: Fluorescence (AU) 1 0.9 0.8 0.7 0.6
- Page 69 and 70: Vrije energie berekeningen (ΔGº)
- Page 71 and 72: GOT is een gekoppelde meting Glutam
- Page 73 and 74: Anode (+) pool Low pH (+) Low pH (+
- Oplossing 2<br />
Los 0.15 g agarose M op in 10 mL 0.125 M Tris-HCl buffer pH 7.4 door<br />
voorzichtig te verwarmen in vlam in de zuurkast terwijl er voorzichtig<br />
geschud wordt.<br />
- Breng de agarose-oplossing over in een waterbad van 60⁰C en voeg na<br />
enige minuten oplossing 1 toe. Meng beide oplossingen voorzichtig met<br />
behulp van een vortex mixer en giet de oplossing meteen over de hydrofiele<br />
kant van een 6*12 cm GelBond plastic blad. Deze hoeveelheid is<br />
voldoende voor twee gels. Laat de Agarose-gel stollen en bewaar de gel<br />
in het donker.<br />
- Na de electroforese wordt de electroforese gel ondersteboven, dus met<br />
de gelkant en niet het plastickant, voorzichtig op de agarose-gel gelegd.<br />
Probeer het insluiten van luchtbellen te voorkomen.<br />
- De ‘gel-sandwich’ wordt gedurende ongeveer 30 minuten in het donker<br />
gekleurd. Digitaliseer de gel via een foto of een scan. Vraag de assistent je<br />
te helpen.<br />
AH Slavinken, 3 stuks<br />
Prijs per standaard hoeveelheid: € 6.99/KG<br />
Een gekruide gehakt- vulling met daaromheen een dun lapje<br />
varkensvlees, gesneden van de varkensbuik.<br />
• Algemeen: Varkens/rundvleesproduct.<br />
• Ingrediënten: 62% varkensvlees, 18% rundvlees, tarwezetmeel,<br />
paneermeel, plantaardige olie,specerijenextracten, paprika,<br />
zout, peper, azijn,melkeiwit, maltodextrine, smaakversterker<br />
(E621),voedingszuren (citroenzuur, E262, E325), anti-oxidanten<br />
(E301, E331), stabilisator (xanthaangom).<br />
• Bereiden: Koekenpan: verhit boter en/of (olijf)oliein een koekenpan.<br />
Bak de slavinken rondom bruinen op matige temperatuur<br />
in ca. 18 minuten gaar.Regelmatig keren.<br />
• Bewaren: In de koelkast, te consumeren tot de uiterlijk vermelde<br />
datum. Geschikt om in te vriezen op de dag van aankoop,<br />
dan binnen 3 maanden gebruiken. Voor gebruik ontdooien<br />
Slavinkpreparaat en mengsel 62% hamlap en 18<br />
% biefstuk na de eerste centrifugatiestap<br />
Nadat het weefsel (cellen) in een ‘potterbuis’ zijn<br />
stukgewreven worden de oplosbare celcomponenten<br />
gescheiden van de hele cellen, kernen en<br />
extracellulair onoplosbaar materiaal (o.a. bindweefsel).<br />
Het in de slavinken aanwezig harde vet werkt<br />
als een prop die verhindert dat de meniscus zich na<br />
het centrifugeren weer horizontaal kan instellen.<br />
- 57 -
Change language