Basispracticum Biologische Chemie - Biochemistry

Figuur 3.7
Structuur van acetylaceton
en DDL.
verandert. De temperatuur staat op 30 ºC ingesteld. Nadat de barometerstand
(=luchtdruk) is opgezocht op het Internet (www.met.wau.nl), is
de hoeveelheid opgeloste zuurstof bij 30 ºC uit grafiek 3.6 te bepalen. De
luchtdruk wordt weergegeven in kPa. 1 kPa = 7.5 mm kwikdruk (Torr).
- Vul de reactiekamer met 2.5 mL urinezuurbepalingsmengsel. Voeg
daarna 0.1 mL onverdunde urine toe. Sluit de vloeistof af met de dop en
zorg ervoor dat alle luchtbelletjes uit het reactievaatje in het capillaire
verdwenen zijn. Volg de O 2 concentratie gedurende 5 minuten.
- Start de reactie door 0.02 mL uricase met een ‘Hamilton’ spuit door het
gaatje in de dop toe te voegen. Let op dat je geen gat in het membraan
prikt!. Volg de O 2 concentratie totdat alle urinezuur geoxideerd is.
- Herhaal de meting met 0.05 mL urine .
- Bepaal het exacte gehalte van de gebruikte urinezuurstandaard. Pipetteer
2.5 mL urinezuurbepalingsmengsel en 0.25 mL urinezuurstandaard
(± 0.4 mM) in het reactievaatje van de oxygraaf. Vervolg het experiment
zoals hierboven is aangegeven.
Samenstelling urinezuurbepalingsmengsel
Oplossing 1 Ammoniumfosfaat pH 7.0, (0.6 M) + Methanol (1.7 M) 50 mL
Oplossing 2 Acetylaceton (20 mM) 2.5 mL
Oplossing 3 Katalase 20 mg/mL (1000U/mL) 0.05 mL
- 49 -