Basispracticum Biologische Chemie - Biochemistry

is tussen de hoeveelheid toegevoegd enzym en de activiteit die gemeten
wordt.
b. Ga al tijdens het experiment na of de activiteit rechtevenredig is met de
hoeveelheid toegevoegd bladextract.
Samenstelling van de verschillende buffers
Extractiebuffer: 50 mM K fosfaat (pH 7.0), 1 mM EDTA, 0.1 % Triton X 100 (0.2
g / 200 mL), 10 mM DTT (dithiotreitol) (380 mg / 200 mL)
Reactiebuffer: 0.1 M Tris HCl (pH 8.5), 1 mM EDTA, 0.1 % Triton X 100, 1 mM
DTT
MUG: 10 mM 4-MethylUmbelliferyl- β-D-Glucuronzuur (MUG)
Verslag over blok 1
1) Verslag over het immunoprecipitatie experiment
Beantwoord de volgende vragen puntsgewijs.
- Geef aan hoe je je IgG preparaat hebt gekarakteriseerd.
- Geef de berekening van het percentage reagerende IgG moleculen met een
hoge affiniteit.
- Is de kwaliteit voldoende om het preparaat te gebruiken voor een immunoprecipitatie
van een eiwitcomplex?
- Geef aan welk peptide uit de SDS gel m.b.v. MALDI-TOF en MASCOT is geidentificeerd
en tot welk cellulair complex dit behoort.
2) Verslag over het ELISA experiment
- In het verslag moet worden aangegeven welke het percentage werkzame
antilichamen in het IgG preparaat is geweest. Laat ook de grafiek zien waarmee
dit percentage is berekend.
- Presenteer de ijklijn en de titratie waarmee de concentratie insuline in het
moster is gepaald.
- Geef aan hoe je de concentratie insuline in het monster hebt berekend.
3) Verslag over het β-glucuronidase experiment
Het verslag moet de elementen bevatten die in het deel van de website
‘wring a report’ worden aangegeven. In de resulataten paragraaf moeten de
volgende zaken worden vermeld.
- Presenteer de getallen waarmee de K M en V MAX zijn berekend.
- Laat zien dat onder de door bepaalde V MAX condities de activiteit onafhankelijk
is van de gebruikte hoeveelheden bladextract.
- Bereken uit de fluorescentieveranderingen veroorzaakt door de verschillende
hoeveelheden bladextract de β-glucuronidase activiteit per mg
blad. Druk deze activiteit uit in pmol MUB gevormd . min -1 . (mg planten
materiaal ) -1
- 1 -