(19) 대한민국특허청(KR) (12) 공개특허공보(A) - Questel

진다. 이들 3가 백신은 면역원성을 가지고 상기 세 종류의 유기 중합체에 대한 면역반응을 생성한다. 도 6
에 혼주혈청(pooled serum) Ig M을 면역접종 전 및 접종 30일 후에 분석한 결과를 나타내었다. 도 7에선 항원
특이적 혈청 Ig GG 항원 타이터의 접종 60일후를, 도 8에선 항-다당류 혈청 항체 타이터의 접종 128일 후를 각
각 보여준다. 도 6-8에서 보듯이, 단가 알긴산 PCMV 시료는 마우스에서도 면역반응을 생성한다. 다가 PCMV
면역원도 각각 별개로 합성되는 특정 PCMV들을 혼합하여 “칵테일” 백신을 형성함으로써 만들어질 수 있다.
본 명세서에 인용되고 참조된 모든 특허, 특허출원 및 특허출원 공개 및 다른 공개문헌들은, 각각의 특허, 특허
출원 및 특허출원 공개 및 다른 공개문헌이 특이적으로 그리고 개별적으로 본 명세서에 참조로서 삽입된 것과
동일한 정도로 본 명세서에 참조로서 삽입된다.
도면의 간단한 설명
도 1은 다당류와 수송단백질인 테나우스 톡소이드(tenaus toxoid)간의 접합체에 대한 접합 백신의 항-다당류 Ig
G의 무제한 면역반응 유도과정을 도식화 한 것이다. 이 모델에서, 다당류를 인식하는 항체 수용체를 가지는 B
세포만이 다당류-단백질 접합체와 결합한다. 따라서 수송단백질은 정확한 다당류 결합 특성을 가지는 B세포
표면에 결합한다.
도 2는 PCMV와 대조군의 크로스 링킹(cross-linking)을 탐지하기 위한 SDS PAGE의 웨스턴 블롯 분석 및 항-PA
항혈청의 웨스턴 블로팅 결과이다. DNI 단백질은 글루타르알데히드의 크로스 링킹 이전에 84kDa 지점에서 이
동하였다. PVCM1-PVCM3(레인 1-3)에서 분자량이 220kDa 이상의 밴드가 이동함으로써 DNI 단백질이 폭넓은 크
로스 링킹을 하고 있음을 보여준다. PGA가 없느 경우에 홀로 크로스 링킹되는 DNI 단백질 역시 높은 분자량을
보여준다(레인 5). 반대로 PGA와 혼합하고 글루타르알데히드를 처리하지는 않은 DNI 단백질은 DNI 혹은 더 작
은 분자량의 물질과 함께 이동함을 확인하였다(레인 4).
도 3은 세가지 PCMV (PCMV1-PCMV3)와 두가지 대조군 항원 4 및 5로 면역화된 마우스에서의 Ig M 및 Ig G 에 의
한 항-DNI 면역반응을 측정하기 위한 ELISA 분석 결과를 나타낸 그래프이다. DNI 단백질은 글루타르알데히드
와 크로스링크되지 않은 대조군 4를 제외한 모든 표본에서 매우 면역원성이 높았다. 그러나, 이러한 DNI에 대
한 면역반응은 전적으로 Ig G에 기초한다. 어떤 항-DNI Ig M 도 면역화 반응 7일째까지 제거되지 않는 동안
중요한 항-DNI Ig G의 반응은 PCMV로 면역화 된 마우스 및 크로스링크된 DNI로만 면역화 된 마우스 에서 17일간
관찰되었다. 4번 표본을 포함한 모든 표본에서 30일째에 DNI에 대한 강력한 면역촉진반응이 관찰되었다.
도 4는 세가지 PGMV (PGMV1-PGMV3) 및 두가지 항원 대조군 4번 및 5번으로 면역화 된 마우스에서의 Ig M에 의한
항-PGA 면역반응을 측정하기 위한 ELISA 분석 결과를 나타낸 그래프이다. 항-PGA Ig M의 반응은 캡슐 단량체
의 전형적인 형태를 보여준다. 4번 대조군은 7일째에 탐지 가능한 항-PGA Ig M 반응을 보였으나, 이 반응은
17인째 혹은 30일째에 부스팅되지 않았다. 모든 PCMV 표본은 7일째에 항-PGA Ig M의 반응을 유도하였으며, 17
일과 30일째엔 더 강력한 항-PGA Ig M의 반응을 이끌어냈다. 예상했듯이 5번대조군(크로스링크된 DNI로만 구
성된)은 Ig M 또는 Ig G 어느 것에 의한 항-PGA반응도 유발시키지 않았다.
도 5는 세가지 PGMV (PGMV1-PGMV3) 및 두가지 항원 대조군 4번 및 5번으로 면역화 된 마우스에서 Ig G가 나타내
는 항-PGA 면역 반응을 측정하기 위해 ELISA 분석을 한 결과를 나타낸 그래프이다. PCMV1-3은 17일째에 나타
나고 30일째에 명확히 부스팅하는 Ig G에 의한 강력한 항-PGA 면역반응을 보인다.
도 6은 면역화 이전과 DNI, 알지네이트(DNI-ALG C,DNI_ALG A) 및 DNI,알지네이트(ALG), 덱스트란(DEX) 및 PGA
로 구성된 one pot trivalent PCMV를 포함하는 PCMV에 의한 면역화 이후 30일째의 혈청 Ig M 항체의 농도를 나
타낸 그래프이다.
도 7은 DNI, 알지네이트(DNI-ALG C,DNI_ALG A) 및 DNI,알지네이트(ALG), 덱스트란(DEX) 및 PGA로 구성된 one
pot trivalent PCMV를 포함하는 PCMV에 의한 면역화 이후 60일째의 혈청 Ig G 항체의 농도를 나타낸
그래프이다.
도 8은 DNI, 알지네이트(DNI-ALG C,DNI_ALG A) 및 DNI,알지네이트(ALG), 덱스트란(DEX) 및 PGA로 구성된 one
pot trivalent PCMV를 포함하는 PCMV에 의한 면역화 이후 128일째의 항-다당류 Ig G 항체의 농도를 나타낸 그래
프이다.
도 9a 및 9b는 폐렴구균 다당류(S. pneumoniae pss)[American Type Culture Collection, Merk or SII(Serum
Institute of India)]를 이용한 인터루킨(IL)-6 에세이 그래프이다.
- 34 -
공개특허 10-2009-0066272