(19) 대한민국특허청(KR) (12) 공개특허공보(A) - Questel

합하여 10개의 다른 PCMV를 만든다.
PCMV에 대해 종래의 접합 백신에서 관찰되는 것처럼 마우스에서 아이소타입 항체가 Ig G 로 스위치(switch)되는
것을 유도하는 능력을 시험할 수 있다. 모든 항원은 알룸에 흡착될 수 있고 일반적으로 PCMV 시료당 5마리의
마우스가 사용된다. 마우스는 시험대상의 항원에 대한 면역반응의 기준선을 얻기 위해 미리 출혈시킨다. 마
우스는 이후 표준 IP 주사 프로토콜에 따라 3번(실험전날, 7일째, 14일째) 면역접종시키며, 1차 접종 후 10일째
20일째, 30일째, 60일째에 각각 수집한다. 마우스 혈청은 다당류 및 수송단백질에 대한 Ig G의 표준 ELISA
에세이에 의해 분석한다. 이 실험에서, 다양한 PCMV 시료의 항-다당류 Ig G를 유도하는 능력을 거의 면역원성
이 없는 비접합 다당류와 비교하여 측정하기 위해 다당류만으로 면역 접종된 마우스로 구성된 대조군을 사용한
다. 유망한 PCMV(예를 들면 다당류에 대해 많은 양의 Ig G를 유도하는)에 대해선 더 신중한 면역학적 분석을
하여 쥐에서의 PCMV에 대한 면역 반응의 속도론적 및 양적 반응의 측면을 확립한다. 또는, 유망한 PCMV와 그
들의 상응하는 대조군은 레빗 항-혈청의 생산을 위해 상업적 판매자에게 제공될 수 있다. 유사한 면역분석이
레빗에서의 면역원성, 유도된 항원의 분류 및 면역반응의 속도론을 측정하기 위해 행해진다. 이 실험에서 대
조군은 디프테리아 톡신과 연관된 비독성 변이 단백질인 CRMl 97에 결합된 7개의 각기 다른 종래의 접합 다당
류 백신의 혼합물에 흡착된 알룸의 상업적 생산품인 Prevnar이다.
PCMV에 의해 유도된 항체 반응의 기능성을 측정할 수 있다. 예를 들어, 항-다당류 항체가 포집된
(encapsulated) 폐렴연쇄상구균을 옵소닌화하여 대식세포가 식균작용을 하게 하는 능력을 측정함으로써 그 기능
성을 가늠한다. 폐렴연쇄상구균의 위협으로부터 동물을 지키는 것은 면역접종된 동물에서의 백신의 효과를 증
명하는 또다른 방법이다.
실시예 4 : PCMV와 Prevnar의 비교
Merck 을 통해 혹은 Serum Institute of India (SII)에서 직접 구한 ATCC에서 얻은 폐렴연쇄상구균 다당류
(pps) 6B, 14, 23F 의 상대적 청결성을 결정하였다. IL-6 발현은 pps의 청결성의 척도로 사용하였고, LPS는“
더러움”의 양성대조군으로 사용되었다. 도 9A에서 보듯이, Merck pps 6B, 14, 및 23F는 청결하나, 도 9B에서
보듯이 SIl의 pps 6B는 더럽다. 도 10에 나타난 바와 같이 처리 2 (1M 수산화나트륨에서 80℃로 1시간 배
양)는 SII pps 6B를 제거한다. 청결한 pps 6B를 접합 백신과 PCMV의 면역원성의 비교에 사용한다. 표 3에서
보는 바와 같이 오염물은 LPS가 아니다.
표 3
다당류의 엔도톡신 분석
다당류 엔도톡신 unit/mg 다당류
SII pps 6B-무처리 0.75
SII pps 6B-무처리 0.85
SII pps 6B-처리 2 0.24
다양한 Merck pps 0.1-0.4
도 11 및 13은 알룸 보조제인 Prevnar가 pps 6B에 대한 Ig G 항체를 유도하는 것과 알룸으로 보조되는 PCMV(BSA
와 pps 6B; 디프테리아 톡신과 pps 6B; 디프테리아 톡소이드와 pps 6B; 및 테타누스 톡소이드와 pps 6B)가
Prevnar에서 관찰되는 것보다 더 잘 유도함을 보여준다. 도 12에서 보듯이, 알룸으로 보조되는 PCMV에 대한
Ig M 의 반응은 Prevnar의 그것과 유사하다.
뿐만 아니라, 도 14-16에서 보듯이, Prevnar의 대부분의 면역원성 pps인 pps 14 에 있어, 디프테리아 톡소이드
와 pps 14 또는 테타누스 톡소이드와 pps 14를 포함하는 알룸으로 보조되는 PCMV는 대략 Prevnar과 동일한 Ig G
의 유도 효과를 보인다.
실시예 5 : 다가(Multivalent) PCMVs
다가(Multivalent) 면역원은 DNI 수송단백질과 글루타르알데히드가 크로스링크하기 전에 각각 다른 캡슐 유기
중합체를 화학적으로 혼합하는 PCMV 방법을 사용하여 만들어진다("one pot synthetic reaction"). 이들 종류
의 3가 면역원은 DNI를 수송단백질로 이용하여 3개의 유기 중합체 - PGA, 알긴산 및 덱스트란 - 로부터 만들어
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공개특허 10-2009-0066272