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al. Carbohydr. Res. 342(9): 1275- 1279 Epub (2007)), 인플루엔자간균, 나이세리아 수막염균, 스타필로코커 스 아우레우스, 살모넬라 티피, 스트렙토코커스 피오진(Streptococcus pyogenes), 대장균(Zhao et al. Carbohydr. Res. 342(9): 1275- 1279 Epub (2007)) 및 녹농균같은 박테리아로부터 채취한 것, 크립토코커스 및 칸디다같은 곰팡이로부터 채취한 것(Ovodov, Biochemistry (Mosc)) 71(9):937-954 (2006); Lee et al. Adv. Exp. Med. Biol. 491:453-471 (2001); Lee, Mol. Immunol. 24(10): 1005- 1019 (1987))을 포함한다. 예시적 인 중요 항원은 또한 자연계에 나타나지 않는 비생물학적 물질도 또한 포함된다. 백신 조성물 본 발명의 백신 조성물은 소아 백신과 같이 조합하여 사용되어질 수 있다. 뿐만 아니라, 본 발명의 백신은 예 를 들어 폐렴구균 감염, 인플루엔지간균 B 감염, 스트렙토코커스 감염(A 및 B그룹), 수막염균 감염에 대한 백신 으로 사용될 수 있고, 그람 네거티브 박테리아(예를 들어 녹농균, 야토균, 쉬겔라 종, 살모넬라 종, 아시네토박 터 종, 버크홀데리아 종 및 대장균)에 대한 백신으로 사용될 수 있다. 백신의 구성에는 바람직하게는 적어도 한 개의 수송단백질, 1개 또는 그 이상의 중요 항원 및 약제학적으로 허 용 가능한 수송체나 첨가제(예를 들어 알루미늄 포스페이트, 염화나트륨 및 살균수)를 포함한다. 백신 조성물 은 면역원성을 증가시키는 보조체계(물 속의 오일 및 그밖의 당업계에 알려진 체계 또는 약제학적으로 허용 가 능한 첨가제)가 포함될 수도 있다. 생리학적 환경에서 불용성인 수송체/항원 복합체는 대상체에 항원을 투여 한 후 천천히 방출되기 때문에 바람직하다. 이런 복합체는 바람직하게 약제학적으로 허용 가능한 첨가제를 함 유하는 현탁액에서 수송된다. 그러나, 수송체/항원 복합체는 생리학적 상태에서 가용성일 수도 있다. 전형적으로 백신은 약 0.5 mL의 부피로 피하 주사되거나, 0.1 mL 부피로 피내 주사되거나, 0.002-0.02 mL부피로 경피 투여된다. 0.5ml 의 백신은 약 2-500 μg 의 수송단백질에 포획된 2-500 μg 의 항원을 함유한다. 바 람직한 구현예에 따르면, 0.5 ml 의 투여량에, 약 10 μg 의 항원이 약 10 μg 의 수송단백질에 포획되어 있다. 항원과 수송단백질간의 몰 비율은 1:10(예를 들어 한 부분의 항원 대 두 부분의 수송체 또는 한 부분의 항원 대 세 부분의 수송체) 내지 10:1(예를 들어 세 부분의 항원 대 한 부분의 수송체 또는 두 부분의 항원 대 한 부 분의 수송체)이다. 바람직한 구현예에 따르면, 항원과 수송단백질간의 몰 비율은 1:1이다. 한편, 항원과 수 송단백질 간의 건조 중량비는 바람직하게는 1:10 내지 10:1이다(예를 들어 건조 중량 1:1). 펩타이드 또는 접합체는 위에서 분해될 수 있으므로, 백신은 바람직하게는 비경구(예를 들어 피하, 피내, 경피 또는 정맥주사)로 투여된다. 피부층을 물리적으로 관통하는 전달이 바람직하지만(예를 들어 바늘, 에어건 또 는 침식), 본 발명의 백신은 피부 흡착에 의해 투여할 수도 있다. 특히, 본 발명의 백신은 적합한 면역 보조제와 함께 근육내 주사, 피내 주사, 경피성 접종을 함우로써 대상체에 투여될 수 있다. 본 발명의 백신은 한번 또는 그 이상 투여될 수 있으며, 감염성 물질에 의한 감염을 막기 위 해 항체의 생산을 부스팅 시키는 2차 투여가 종종 포함된다. 백신 투여의 빈도 및 양은 백신의 고유의 활성 에 의해 좌우되며, 관례적인 실험에 의해 쉽게 결정된다. 예를 들어, 유아에게 있어, 접종계획은 약 4-8주 간격(생후 2개월에 시작하여)으로 0.5 ml씩 3회투여 후 4회째 투여는 생후 12-15주가 되었을때 이루어지는 것일 수 있다. 몇몇 백신에 있어서 5번째 투여는 생후 4-6년이 지났을 때 이루어지는 것이 바람직하다. 첫 번째 투여를 하는 나이는 일반적으로 생후 2개월이며, 백신은 생후 6주된 유아에게 투여될 수 있다. 관례 적인 유아 백신 접종시기가 지난 어린이에 있어서 본 발명의 백신이 아래의 스케쥴에 따라 투여될 수 있다. 첫 번째 투여 연령 투여 계획 7-11개월 총 3번의 0.5 ml 투여; 첫 두 번은 적어도 4주 간격으 로, 세 번째 투여는 두 번째 투여 후 적어도 2개월 후 투여 12-23개월 적어도 2개월 간격으로 2번 0.5 ml 투여 24개월-9년 0.5 ml 한번 투여 성인에 있어서, 0.5 ml 의 투여가 2-8주 간격으로 두 번 행해지며, 이는 장기 방어를 제공하기에 충분하다. 부스터 투여는 접종받은 적이 있는 11세 이상의 성인 및 어린이에게 10년마다 행해지는 것이 바람직하다. 단일 투여나 다중 투여를 위한 조제가 가능한데, 예를 들어 밀봉된 앰플이나 유리병에 냉동-건조하여 보관될 수 있고, 사용 직전에 즉시 살균 액상 수송액만을 첨가한다. 본 발명의 백신은 약제학적으로 허용 가능한 부형액 - 28 - 공개특허 10-2009-0066272
에서 조제될 수 있으며,알룸 하이드록사이드 겔, 보조제 시료 또는 살린이 이에 해당한다. 그런 뒤 적합한 면 역 보조제와 함께 근육내 주사, 피내 주사, 경피성 주사를 한다. 본 발명은 여기서 서술한 백신이 포함된 키트도 포함한다(예를 들어 PCMV). 본 발명의 키트는 백신 접종을 위 해 키트를 사용하는 방법의 설명서를 포함한다. 면역 접종계획의 효율성은 대상체에서 항원 타이터를 측정하는 방법에 의해서 결정될 수 있다. 일반적으로 약 1 μg/ml 인 소량의 항원 타이터(바람직하게는 Ig G 타이터)가 장기 방어면역의 지표가 된다. 항원/수송단백질 복합체는 바람직하게는 10 nm -100 μm의 직경을 가진다. 바이러스는 100 nm 의 직경을 가지 며 면역원성을 가진다. 총 박테리아 세포 1-10 μm 의 직경을 가지며 역시 면역원성을 가진다. 작은 덩어리 의 박테리아는 약 100 μm 의 직경을 가진다. 특정한 구현예에 있어서, 백신 조성물에서의 항원/수송 단백질 복합체는 바람직하게는 100 nm - 10 μm 의 직경을 가진다. 이러한 복합체는 불용성일 수 있다. 이하 본 발명을 구체적 실시예, 구현예, 특성을 통해 서술한다. 이는 발명을 설명하기 위한 목적일 뿐 발명의 범위를 제한하기 위함이 아니다. 이하의 실시예는 발명의 한정으로 해석되어서는 아니 된다. 실 시 예 실시예 1 : 백신과 대조군의 제작 캡슐형 폴리 감마-D-글루타민산(PGA)은 Vedan(Taiwan)으로부터 구입하거나 Rhie 등의 방법(Prod. natl. Acad. Sci 100: 10925-10930(2003))에 의해 정제하였다. DNI(dominent negative mutant)는 탄저균(B. anthracis)의 PA(protective antigen)의 변이형태로써 Benson 등의 방법(Biochemistry 37 : 3941-3948 (1998))에 의해 대장 균으로부터 생산되었다. PGA 및 DNI 단백질은 사용 전에 pH 7.4(SP 7.4)의 0.05 M 의 인산나트륨 완충액에 충 분히 투석하였다. DNI 스톡 용액은 30 mg/ml의 농도를 가진다. PGA 스톡용액은 134 mg/ml의 농도를 가진다. 링커 글루타르알데히드는 Pierce에서 25% 스톡액으로 구입하였다. PCMV(Protein Capsular Matrix Vaccine) 과 대조군은 반응에서 표 1과 같이 조합되었다. 표 1 PCMV 표본 1-3, 대조군 4 및 5의 제작을 위한 반응의 조합 반응# DNI PGA dH2O 25% 글루타르알데히드 ml ml ml ml 명칭 1 20 1 3 0.8 PCMV1 2 12 4 8 0.8 PCMV1 3 16 2 6 0.8 PCMV1 4 16 2 6 0 P+C대조군 5 16 0 8 0.8 P만의 대조군 상온(22℃)에서 글루타르알데히드 없이 다섯 개의 반응이 조합되었다. T=0의 조건에서 0.1 ml 의 글루타르알데 히드(G25)가 지시된 반응에 첨가하였다. 30초 후에 다시 0.1 ml의 G25를 첨가하였고 지시된 반응에 G25가 총 0.8ml를 첨가할때까지 상기 과정을 반복한다. 하기의 순서로 다양한 탁도와 불용성 젤-유사 입자(particle) 를 조성함으로써 이중작용기성 글루타르알데히드분자에 의한 DNI 분자의 크로스링크를 육안으로 관찰할 수 있 었다 : 탁도 및 젤 형성 정도의 순서가 반응1>반응2>반응3>반응4 이고 반응 5는 완전히 투명하고 가용성인 상 태이다. 1시간 뒤에, pH 9.3의 0.5 M 의 붕산염(sodium borate) 완충액(SBH)내에 혼합된 2 ml 의 보로수소화 나트륨(sodium borohydride) 1 M 을 6개의 반응 모두에 첨가시켜 DNI 분자의 아미노 측쇄와 이중작용기성 글루 타르알데히드 분자간에 형성된 쉬프 염기를 환원시켰다. 실리콘 소포제(0.01ml)를 각각의 반응에 첨가하여 반응 동안 발생하는 거품을 제어하였다. 반응물을 4℃에서 72시간동안 보관하였다. 모든 반응물을 SP7.4에 대해 48시간동안 충분히 투석하였다. 불용성 물질은 최종 생성물의 원심분리를 통해 제거하였으며 사용시까 지 4℃에서 보관하였다. 종래의 우태아혈청(BSA)과 PGA간의 접합체는 하기의 방법에 따라 수용성 카보디이미드인 EDAC(1-에틸-3-(3-디 메틸아미노프로필)카보디이미드)를 이용한 BSA의 아미노기와 PGA의 카르복실기간의 커플링을 통해 합성하였다 - 29 - 공개특허 10-2009-0066272
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