01.05.2013 Views

Klik hier om die volledige joernaal in PDF-formaat af te laai - LitNet

Klik hier om die volledige joernaal in PDF-formaat af te laai - LitNet

Klik hier om die volledige joernaal in PDF-formaat af te laai - LitNet

SHOW MORE
SHOW LESS

Create successful ePaper yourself

Turn your PDF publications into a flip-book with our unique Google optimized e-Paper software.

<strong>LitNet</strong> Akademies Jaargang 9(2), Augustus 2012<br />

is <strong>in</strong> kontak gebr<strong>in</strong>g met <strong>die</strong> nanovesels deur patogeen-gekontam<strong>in</strong>eerde wa<strong>te</strong>r deur <strong>die</strong> fil<strong>te</strong>rs<br />

met <strong>die</strong> geïmmobiliseerde nanovesels <strong>te</strong> filtreer. Die fil<strong>te</strong>rporiegroot<strong>te</strong> van 0.22 µm sluit<br />

bak<strong>te</strong>rieë uit, wat veroorsaak dat <strong>die</strong> selle op <strong>die</strong> vesels ag<strong>te</strong>rbly. Dit het dit moontlik gemaak<br />

<strong>om</strong> <strong>die</strong> effek van <strong>die</strong> nanovesels wat silwer-nanopartikels bevat, op bak<strong>te</strong>rieë selle<br />

bak<strong>te</strong>rieselle <strong>te</strong> bestudeer. ’n Negatiewe kontrole, naamlik nanovesels sonder silwernanopartikels<br />

wat ook op <strong>die</strong> fil<strong>te</strong>rs geïmmobiliseer is, is aan <strong>die</strong>selfde toetse onderwerp is.<br />

Vir <strong>hier</strong><strong>die</strong> toetse is Pseud<strong>om</strong>onas aerug<strong>in</strong>osa (Xen 5), Echerichia coli (Xen 14) and<br />

Klebsiella pneumonia (Xen 39) gebruik. Elke patogeen is oornag <strong>in</strong> 10 mL bre<strong>in</strong>-hartgroeimedium<br />

(“bra<strong>in</strong> heart <strong>in</strong>fusion”) (BHI, Biolab Diagnostics) gekweek wat met antibiotika<br />

aangevul is, op ’n ro<strong>te</strong>rende wiel by 37˚C. Die doel van <strong>die</strong> antibiotika <strong>hier</strong> is <strong>om</strong> <strong>te</strong> selek<strong>te</strong>er<br />

vir ’n re<strong>in</strong>kultuur van <strong>die</strong> <strong>in</strong>okulum deur kontam<strong>in</strong>asie <strong>te</strong> voork<strong>om</strong>.<br />

Die Xen-kulture is geneties getransformeer <strong>om</strong> weerstandig <strong>te</strong> wees <strong>te</strong>en ’n spesifieke<br />

antibiotikum. Die P.aerug<strong>in</strong>osa-<strong>in</strong>okulum is met 0,5% (v/v) <strong>te</strong>trasiklien aangevul, <strong>te</strong>rwyl<br />

E.coli en K. Pneumonia met 0,3% (v/v) kanamysien aangevul is.<br />

Selle is geöes (10 m<strong>in</strong>., 1 000 x g) van elke groeikultuur, en is drie keer gewas met s<strong>te</strong>riele<br />

fisiologiese soutoploss<strong>in</strong>g <strong>om</strong> enige oorblywende nutriën<strong>te</strong> van <strong>die</strong> groeimedium <strong>te</strong> verwyder.<br />

Wa<strong>te</strong>r-<strong>in</strong>okulum is van elkeen van <strong>die</strong> patogene voorberei deur 106 selle/mL <strong>in</strong> 250 mL<br />

s<strong>te</strong>riele gedistilleerde wa<strong>te</strong>r <strong>te</strong> <strong>in</strong>okuleer. Die <strong>in</strong>okulum is dan deur 0.22 µm-fil<strong>te</strong>rs, met óf<br />

skoon PVA-nanovesels óf PVA-vesels wat silwer-nanopartikels bevat, gefiltreer met behulp<br />

van ’n Sartorius-S<strong>te</strong>dim-fil<strong>te</strong>rhouer. Dieselfde eksperimen<strong>te</strong> is herhaal met 0.22 µm-fil<strong>te</strong>rs<br />

met óf skoon PVA-vesels óf PAN-nanovesels met silwer-nanopartikels wat op <strong>die</strong> oppervlak<br />

van <strong>die</strong> fil<strong>te</strong>r geïmmobiliseer is.<br />

Na filtrasie is <strong>die</strong> lewensvatbaarheid van <strong>die</strong> selle wat ag<strong>te</strong>rgebly het op <strong>die</strong> nanovesels, met<br />

silwer-nanopartikels ondersoek, eers<strong>te</strong>ns deur kwantifiser<strong>in</strong>g van bioliggewendheid as gevolg<br />

van <strong>die</strong> <strong>te</strong>enwoordigheid van <strong>die</strong> lux-operon <strong>in</strong> <strong>die</strong> patogene, as ’n <strong>in</strong>dikasie van<br />

lewensvatbaarheid met IVIS-visualiser<strong>in</strong>g (“In vivo imag<strong>in</strong>g sys<strong>te</strong>m”, Caliper life sciences),<br />

en tweedens deur <strong>die</strong> getal lewensvatbare selle <strong>te</strong> bepaal wat van <strong>die</strong> vesels <strong>af</strong>k<strong>om</strong> deur<br />

middel van plaat<strong>te</strong>ll<strong>in</strong>g. Dit is gedoen deur herhaaldelik <strong>die</strong> fil<strong>te</strong>roppervlak met s<strong>te</strong>riele<br />

fosfaat-gebufferde soutwa<strong>te</strong>roploss<strong>in</strong>g <strong>te</strong> spoel en dan ’n verdunn<strong>in</strong>gsreeks op selektiewe<br />

BHI-agarpla<strong>te</strong> uit <strong>te</strong> plaat. Kolonievormende eenhede is na ’n oornag-<strong>in</strong>kubasie by 37˚C<br />

bepaal.<br />

Met <strong>die</strong> bepal<strong>in</strong>g van bioliggenwendheid as ’n <strong>in</strong>dikasie van lewensvatbaarheid en <strong>die</strong><br />

bepal<strong>in</strong>g van KVE, het <strong>die</strong> selle wat op skoon nanovesels ag<strong>te</strong>r gebly het, as kontroles ge<strong>die</strong>n.<br />

Alle eksperimen<strong>te</strong> is <strong>in</strong> triplikaat uitgevoer.<br />

34

Hooray! Your file is uploaded and ready to be published.

Saved successfully!

Ooh no, something went wrong!