SodininkyStĖ ir darŽininkyStĖ 27(3)

Tiriant DNR polimorfizmą RAPD metodu, nustatyti žymenys, susieti su obelųatsparumu rauplėms (Gelvonauskienė ir kt., 2005), braškių atsparumu grybinėms ligoms(Gelvonauskienė ir kt., 2007), trešnių savisuderinamumo genais (Stanys ir kt.,2008), obelų koloninę formą nulemiančiu Co genu (Bendokas ir kt., 2007). Jie naudotijuodojo serbento veislėms identifikuoti (Gelvonauskis ir kt., 2001), bijūnų rūšių irveislių giminingumo tyrimuose (Mažeikienė ir kt., 2007).Darbo tikslas – aptarti molekulinių žymenų panaudojimo galimybes atliekantdaugiamečių sodo augalų genetinės struktūros analizę, identifikuojant rūšis ir veisles,taip pat nustatant atsparumo ligoms, vainiko formos ir savisuderinamumo donorus.Tyrimo objektas, metodai ir sąlygos. Tirti obelų, trešnių, braškių, bijūnų, serbentųrūšių ir veislių augalai iš LSDI kolekcinių ir selekcinių augynų.Izofermentai ekstrahuoti iš serbentų ir obelų pumpurų bei lapų su TRIS-GLYCbuferiniu tirpalu ir tirti elektroforezės metodu pagal modifikuotą V. Jaaskos metodiką(Jaaska, 1972).Bendroji DNR išskirta iš jaunų lapų, panaudojus heksadeciltrimetilamonio bromidobuferį (CTAB) (Doyle, Doyle, 1990). Braškių atsparumo fitoftorozei geno Rpf1žymens išskyrimui PGR būdu naudotas Van de Wego (Van de Weg, 1997) pasiūlytaspolimorfinis pradmuo OPO16. Amplifikavimo reakcijai naudoti specifiniai Co, Vfgenam pradmenys. Serbentų rūšims identifikuoti naudoti pradmenys: OPB-07; OPB-08; OPC-02; 3472-001 ir 347-002 (Operon Technologies, Inc.). Bijūnų rūšims irveislėms identifikuoti naudoti pradmenys: OPA 07; OPA 08; OPA 09; OPA 18; OPB-07; OPB-08; OPB-17; OPB-19; MP 5; MP 8. Trešnių S-aleliams identifikuoti PGRmetodu buvo panaudotos penkios pradmenų poros: EMPC2consFD-EMPC3consRD irEMPC2consFD-EMPC5consRD (Sutherland ir kt., 2004), PruC2-PruC4R (Tao ir kt.,1999), charakterizuojančios antrąjį introną, PruT2-PruC4R, charakterizuojanti abu,pirmąjį ir antrąjį, intronus (Tao ir kt., 1999) ir PaConsI-F-PaConsI-R, charakterizuojantipirmąjį introną (Sonneveld ir kt., 2003). Amplifikavimo produktų elektroforezėatlikta 1–1,4 % agarozės gelyje 1xTAE buferyje (40 mM Tris-acetato, 1 mM EDTA,pH 8,0), nudažyta etidžio bromido tirpale. DNR fragmentų dydis nustatytas panaudojusstandartinius rinkinius GeneRuler 100 bp DNA Ladder Plus, GeneRuler 1 kb DNALadder ir GeneRuler TM 100 bp DNA Ladder Mix (UAB „Fermentas“).Eksperimentiniai duomenys biometriškai įvertinti dispersinės analizės metodais(Tarakanovas, 1999) arba grupuoti pagal Dunkano kriterijų. Genetinis atstumas vertintassu „PopGene 3.2“ kompiuterine programa (Nei, 1978).Rezultatai. Siekiant nustatyti izofermentinius žymenis, susijusius su obelų atsparumurauplėms, tirtas polifenoloksidazės (PFO) izoformų spektras. Tirtose obelų veislėsestebėtas PFO fermentinės sistemos polimorfizmas. Nustatyta, kad PFO izoformųkiekis augalų vegetacijos metu keičiasi (1 pav.). Atskyrus PFO formas poliakrilamidogelyje, identifikuotos specifinės fermento izoformos ar jų kombinacijos, būdingosrauplėms jautrioms arba atsparioms obelų veislėms.38