SodininkyStĖ ir darŽininkyStĖ 28(2)

eksplantus – mikroūglius ir hipokotilius, išsiskiriančius didelėmis regeneracijos invitro potencinėmis galimybėmis. Tang su bendraautoriais vyšnioms ir trešnėms regeneruotiin vitro naudojo lapus (Tang ir kt., 2002). Kiti tyrėjai trešnėms regeneruotinaudojo sėklaskiltes (Canli, Tian, 2007). Kadangi aronija dauginasi apomiksės būdu,tai iš jos sėklų išaugę palikuonys yra genetiškai vienodi. Todėl aronijai transformuotigalima panaudoti platesnį eksplantų spektrą. Tyrimais nustatėme, kad juodavaisėsaronijos regeneracijai in vitro indukuoti būtina 6 savaites eksplantus auginti tamsoje.Matyt, tamsa, kaip faktorius, veikia eksplanto fiziologinius procesus, nukreiptus į jomorfogenezės indukciją. Nustatyta, kad esant ir nedideliam lapų apšvietimui chloroplastaiį šviesos šaltinį pasisuka plokštuma, dėl to padidėja asimiliacija, suintensyvėjaįvairių medžiagų sintezė (Полевой, 1989). Eksplantų lapų orientacija regeneracijosterpės atžvilgiu taip pat turėjo įtakos regeneracijos intensyvumui. Galbūt lapoabaksialinio paviršiaus epidermio struktūra ir jame vykstantys metabolizmo procesaipalankesni juodavaisės aronijos regeneracijai in vitro.Mūsų tyrimai parodė, kad ta pati TDZ koncentracija regeneracijos terpėje nevienodaiveikia juodavaisės aronijos skirtingų eksplantų morfogenezę ir regeneraciją in vitro.Matyt, skirtinguose eksplantuose gali būti susikaupęs nevienodas endogeninių citokininųkiekis, kuris ir nulemia egzogeninio citokinino poreikį eksplantui regeneruoti.Literatūroje yra duomenų apie kanamicino, kaip transformantų atrankos agento,sėkmingą naudojimą vėlyvosios ievos (Prunus serotina Ehrh.) (20 mg l -1 ) (Liu, Pijut,2006) ir tikrojo vynmedžio (Vitis vinifera L.) (20–40 mg l -1 ) in vitro kultūrose (Scorzair kt., 1995). Naminės obels (Malus domestica) ‘Empire‘, ‘Freedom‘, ‘Golden‘,‘Delicious‘, ‘Liberty‘, ‘McIntosh‘, ir ‘Mutsu‘ veislių bei M.7 ir M.26 poskiepių izoliuotųlapų kultūrose ir labai mažos kanamicino koncentracijos stipriai slopino ūglių regeneraciją(Yepes ir kt., 1994). Aktinidijų transformantams atrinkti naudojama 50 mg l -1kanamicino koncentracija (Vardja ir Vardja, 2004). Vienas iš augalų transformacijosetapų – transformuojamo augalo pasirinkto eksplanto užkrėtimas Agrobacterium subinariniais vektoriais. Po šios procedūros būtina agrobakteriją eliminuoti cefotaksimu.Augalų transformacijoje naudojamo cefotaksimo koncentracijos agrobakterijaieliminuoti dažniausiai priklauso nuo augalo rūšies. Mūsų tyrimais nustatyta, kadagrobakterijai eliminuoti po juodavaisės aronijos transformacijos į regeneracijos terpętikslinga dėti 250 arba 500 mg l -1 cefotoksimo. Literatūroje nurodoma, kad trešniųtransformacijos sistemoje naudojama 200 mg l -1 cefotaksimo, aktinidijų – 500 mg l -1(Vardja ir Vardja, 2004).Išvados. 1. Nustatytos optimalios sąlygos juodavaisei aronijai regeneruoti irtransformuoti in vitro. Tinkamiausi eksplantai – mikroūgliai ir hipokotiliai. Geriausiaregeneracijos terpė – MS su 0,3 µM NAR ir 10 µM TDZ priedu. Eksplantų morfogenezeiindukuoti būtinas 6 savaičių tamsos periodas.2. Juodavaisės aronijos transformuotiems regenerantams identifikuoti mažiausiaefektyvi selektyvaus agento – kanamicino – koncentracija regeneracijos terpėje –15 mg l -1 , o agrobakterijai eliminuoti geriausia 250 arba 500 mg l -1 cefotaksimo koncentracijaregeneracijos terpėje.52