SodininkyStĖ ir darŽininkyStĖ 28(2)

Transformuojant augalus Agrobacterium metodu, svarbūs veiksniai yra kanamicinas,kaip selektyvus agentas transformantams identifikuoti, ir cefotaksimas, skirtasagrobakterijai eliminuoti. Būtina nustatyti optimalias minėtų antibiotikų koncentracijasterpėje, kad išliktų didelis regeneruojančių eksplantų kiekis ir būtų eliminuotaagrobakterija bei identifikuoti transformantai.Tyrimų metu nustatyta, kad terpėse su 5 ir 10 mg l -1 kanamicino, kaip ir kontroliniamevariante, regeneravo visi pasodinti eksplantai (1 pav.). Regeneravusių ūglių lapaibuvo sodriai žali. Esant 15 mgl -1 kanamicino koncentracijai, regeneravusių mikroūgliųlabai sumažėjo. Regeneravusius ūglius kanamicinas veikė toksiškai, jų lapai buvo subaltomis chlorotinėmis dėmėmis. Variantuose, kuriuose buvo naudota 20–50 mg l -1kanamicino, regeneravusių mikroūglių kiekis iš esmės sumažėjo. Regenerantų lapaiir atskiri ūgliai buvo etioliuoti arba su baltomis chlorotinėmis dėmėmis.1 pav. Kanamicino įtaka regeneravusių juodavaisės aronijoseksplantų dažniui in vitroFig. 1. Influence of kanamycin on the frequency of regenerated aroniaexplants in vitroKanamicino kiekis, esantis regeneracijos terpėje, sąlygojo ne tik regeneravusiųeksplantų kiekį, bet ir ūglių kiekį, tenkantį vienam eksplantui. Kontroliniame variantevienas eksplantas formavo vidutiniškai 5,83 ūglio (2 pav.).Visos tirtos kanamicino koncentracijos mažino vienam eksplantui tenkantį regeneravusiųūglių kiekį. Variantuose, kuriuose kanamicino buvo 15–50 mg l -1 , vidutinisvienam eksplantui tenkantis ūglių kiekis buvo mažas (1–0,08) ir iš esmės nesiskyrė.Iš 1 ir 2 paveiksluose pateiktų tyrimo duomenų matyti, kad 15 mg l -1 kanamicino koncentracijaregeneracijos terpėje yra kritinė netransformuotų mikroūglių regeneracijaiin vitro. Galima teigti, kad transformuotiems regenerantams identifikuoti selektyvausagento – kanamicino – mažiausia efektyvi koncentracija netransformuotiems regenerantamseliminuoti yra 15 mg l -1 .49