You also want an ePaper? Increase the reach of your titles
YUMPU automatically turns print PDFs into web optimized ePapers that Google loves.
nuo žalingų laisvųjų radikalų sukeltų pažeidimų, ypač kai augimo aplinkoje ats<strong>ir</strong>andakenksmingų egzogeninių veiksnių.Pastaruoju metu farmacijos poreikiams tenkinti daug dėmesio sk<strong>ir</strong>iama biologiškaiaktyvių medžiagų augalų žaliavoje tyrimams. Augalai panaudojami kaip natūrali žaliavabiologiškai aktyvioms (Johson <strong>ir</strong> kt., 2007) medžiagoms išsk<strong>ir</strong>ti ne tik iš lapų, bet <strong>ir</strong> išuogų sėklų (polifenoliniai junginiai, riebiosios rūgštys). Vaisiuose esantys antocianinai<strong>ir</strong> fermentai, superoksido dismutazė (SOD), katalazė (CAT) <strong>ir</strong> peroksidazė (POD) –padeda pašalinti iš žmogaus organizmo jame besikaupiančius reaktyvius deguoniesradikalus, kurie yra daugelio ligų priežastis. Laikotarpis nuo vaisių <strong>ir</strong> uogų skynimo ik<strong>ir</strong>ealizavimo yra lapai trumpas, o juos ilgiau laikant prarandamas biologiškai aktyviųmedžiagų aktyvumas (Liu <strong>ir</strong> kt., 2005; Imahori <strong>ir</strong> kt., 2008).Svarbus vaidmuo detoksikuojant laisvuosius radikalus tenka fermentinėmsantioksidacinėms sistemoms. Vienas svarbesnių fermentinės kilmės antioksidantųyra fermentas superoksido dismutazė (SOD), atliekantis pagrindinį vaidmenį augalųantioksidacinėse sistemose, kurio teigiamas poveikis dažniausiai siejamas su stipriuantioksidaciniu aktyvumu.Svarbu parinkti tinkamas testavimo sistemas, kurios leistų patikimai įvertinti augaliniuoseproduktuose esančių antioksidantų aktyvumo poveikį <strong>ir</strong> jo veikimo mechanizmą.Tai pat svarbu atrinkti tas augalų veisles, kurios prisitaikiusios augti mūsų klimatosąlygomis, nes tai padidina augalo atsparumą abiotinės aplinkos veiksniams.Darbo tikslas – išt<strong>ir</strong>ti juodojo serbento Ribes nigrum L. antioksidacinės sistemosfermento SOD aktyvumą tiek augalo lapuose, tiek uoguose <strong>ir</strong> įvertinti veisles kaipnatūralių antioksidantų šaltinį.Tyrimo objektas, metodai <strong>ir</strong> sąlygos. T<strong>ir</strong>ti juodojo serbento veislių – ‘Joniniai’,‘Pilėnai’‚ ‘Almiai’, ‘Kriviai’‚ ‘Vyčiai’, ‘Gagatai’, ‘Zagadka’‚ ‘Ben Lomond’‚‘Ben T<strong>ir</strong>ran’‚ ‘Ben Alder’ – augalai. Tyrimams imami sveiki 3-as <strong>ir</strong> 4-as lapai nuovienamečio ūglio v<strong>ir</strong>šūnės. Uogos skinamos pris<strong>ir</strong>pusios. Ėminiai laikomi +4 °C temperatūroje,po to užšaldomi -20 °C temperatūroje.Superoksido dismutazė išsk<strong>ir</strong>ta tokiu būdu: SOD ekstraktui 0,5 g lapų homogenizuojamasu 1 ml Na-K fosfato (50 mM) buferiu, pH 7,8, o uogos (0,5g) homogenizuojamostokiame pat buferyje (0,5 ml), pridedant 2 % PVPP (polivinilp<strong>ir</strong>olidono), kadsurištų polifenolinius junginius. Homogenatas centrifuguojamas ,,Ependorf 5415R“centrifuga 30 min., esant 12 500 aps./min., + 4 °C temperatūroje. Supernatantas naudojamasbaltymų kiekiui nustatyti pagal Bredfordą (1976), taikant albumino kalibracinękreivę. SOD elektroforezė atliekama 4–10 % poliakrilamido gelyje (PAG) pagalLaemmli (1970), užnešant po 20–25 µl supernatanto takeliui (Laemmli, 1970). SODizofermentai indentifikuojami pagal NBT redukciją (Beauchamp, Fridovich, 1971).Bendras SOD aktyvumas nustatomas spektrofotometru, esant 560 nm bangos ilgiui.Kiekvienos serbentų veislės SOD izoformų identifikavimas kartojamas 3 kartus.Rezultatai. T<strong>ir</strong>tų veislių lapų ekstraktuose rastos dvi SOD izoformos – SOD-1<strong>ir</strong> SOD-2, kurių santykinis judrumas (Rf) yra atitinkamai 0,46 <strong>ir</strong> 0,42 (2 pav., A).‘Joninių’, ‘Pilėnų’‚ ‘Vyčių’ <strong>ir</strong> ‘Ben T<strong>ir</strong>ran’ veislių augalų lapai turi po vieną SOD-1izoformą, o ‘Almių’‚ ‘Krivių’‚ ‘Gagatų’, ‘Zagadkos’‚ ‘Ben Lomond’‚ ‘Ben Alder’veislių – po dvi SOD izoformas – SOD-1 <strong>ir</strong> SOD-2. T<strong>ir</strong>tų veislių serbentų lapuose40
Change language