Ricordare il futuro - Universita' degli Studi "Magna Graecia"

UNITA’ DI BIOCHIMICA E BIOLOGIA MOLECOLARE
Coordinatore dell’Unità: Ileana Quinto (Professore Ordinario di Biochimica SSD BIO/10)
Componenti dell’Unità di ricerca: Giuseppe Fiume, Annamaria de Laurentiis, Laura Liberto, Marilena
Pontoriero
Ruolo delle proteine della famiglia NF-κB/IκB nella regolazione della divisione e sopravvivenza
cellulare, risposta immunitaria e trascrizione del retrovirus HIV-1.
1) Meccanismo d’inibizione di HIV-1 ad opera IkB-a.
Il progetto ha come obbiettivo lo sviluppo d’inibitori della trascrizione di HIV-1 al fine d’inibire la
replicazione virale. Il gruppo di ricerca ha prodotto risultati originali inerenti l’inibizione di HIV-1
mediante espressione di un inibitore dei fattori trascrizionali NF-κB, IκB-αS32/36A, resistente alla
proteolisi. E’ stato dimostrato che l’inibizione della trascrizione di HIV-1 ad opera di IkB-a si esplica
tramite una duplice azione inibitoria delle proteine cellulari NF-κB e della proteina virale Tat, che sono
essenziali per l’attivazione ed elongazione della trascrizione di HIV-1. E’ stato inoltre dimostrato che
IkB-a inibisce Tat mediante associazione ed esporto nucleare. Il lavoro è stato oggetto di tre pubblicazioni
su The Journal of Biological Chemistry ed una pubblicazione su Retrovirology.
2) Ruolo di IkB-a nella regolazione della sintesi proteica.
IκB-a ha un’attività pro-apototica mediata dall’inibizione dei fattori trascrizionali NF-κB che attivano
l’espressione di geni anti-apoptotici. Mediante l’impiego del sistema del doppio ibrido di lievito abbiamo
dimostrato che IκB-a associa le proteine ribosomiali S15a ed S28, componenti della subunità S40 del
ribosoma umano. Mediante microscopia confocale abbiamo verificato la presenza di IkappaB-alfa a
livello della subunità S40 del ribosoma umano e la sua colocalizzazione con le proteine ribosomiali S15a
ed S28. Il progetto è ora finalizzato all’analisi del ruolo di IκB-a nella regolazione della sintesi proteica.
L’ipotesi di lavoro è che l’inibitore trascrizionale possa svolgere un ruolo di controllo della sintesi
proteica mediato da interazione con proteine ribosomiali. Il lavoro è stato oggetto di una tesi di dottorato
in Biotecnologie Mediche.
3) Ruolo di Bruton’s tyrosine kinase (Btk) nella regolazione di NF-kB.
Btk è una tirosina chinasi della famiglia Tec e ha un ruolo essenziale nella maturazione di linfociti pre-B
tramite il pre-B cell receptor (pre-BCR) e nella regolazione della sopravvivenza di linfociti B maturi
tramite il B cell receptor (BCR). Btk è prevalentemente localizzata nel citoplasma di linfociti B ed inibita
dalla proteina IBtk da noi identificata. Nel signaling innescato dall’antigene dopo legame al BCR, Btk è
attivata da chinasi associate al BCR e reclutata a livello delle zattere lipidiche di membrana dove attiva
PLC-γ che genera i secondi messaggeri DAG ed IP3 per la successiva attivazione di una cascata di eventi
che determinano l’attivazione di NF-kB. Tuttavia, la presenza di Btk nel nucleo di linfociti B suggerisce
un ruolo nucleare della protina tuttora ignoto. Per verificare tale ipotesi, abbiamo analizzato la cinetica di
distribuzione cellulare di Btk in linfociti B in risposta a stimolazione del BCR e verificato la sua rapida