n. 80 Aprile 2013

documenti
da colpita, risultavano invece indenni. Va rilevato che anche le
manifestazioni simili osservate in Grecia negli anni ’80 avevano
interessato la cv. Abate Fètel, oltre alla Passa Crassana ed alla
Santa Maria.
L’osservazione, sempre allo stereomicroscopio, di piccoli frammenti
di tessuto vegetale prelevato dalla superficie delle macchie
fogliari rivelava la presenza di fruttificazioni conidiche in
catene che, esaminate al microscopio ottico, risultavano appartenere
al genere Alternaria.
Questi esami iniziali, quindi, portavano tendenzialmente ad
escludere che si potesse trattare di comuni infezioni di Stemphylium
vesicarium o di Septoria pyricola.
Indagini di laboratorio
Per individuare con certezza l’agente eziologico delle alterazioni
osservate, si sono effettuati isolamenti e camere umide.
Per quanto concerne gli isolamenti alcune foglie ed alcuni frutti
sono stati disinfettati in ipoclorito al 1% per 5 minuti; successivamente
risciacquati sotto acqua corrente e poi fatti asciugare
sotto cappa a flusso laminare.
L’isolamento del fungo è stato effettuato prelevando dai margini
delle macchie piccole porzioni di tessuto alterato. Queste
sono state deposte su Water Agar (WA), terreno generico per
miceti che, essendo molto trasparente, permette l’osservazione,
al microscopio rovesciato, del fungo in crescita e , spesso, anche
la sua identificazione a livello generico una volta fruttificato. Le
capsule Petri con gli espianti sono state incubate con un ciclo
giornaliero di 25 °C con 12 ore di illuminazione e di 20 °C con
12 ore di buio.
Dagli isolamenti effettuati, si sono costantemente sviluppate, sia
dai frutti che dalle foglie, colonie fungine di forma circolare, ad
accrescimento abbastanza rapido, che sono state trapiantate sul
substrato di crescita Potato Dextrose Agar (PDA). Su quest’ultimo,
dopo 7 giorni, le colonie presentavano un diametro di circa
5 cm ed erano di colore tra il grigio e il marrone con sfumature
verdastre e con presenza di 4 paia di anelli concentrici di crescita
e sporulazione più o meno evidenti. L’osservazione al microscopio
rovesciato delle colture su WA, dopo 7 giorni dall’isolamento, rivelava
la presenza di abbondanti fruttificazioni ifali catenulate di
Alternaria sp. La struttura ramificata delle catene, le dimensioni
(12-47 x 5-16 µ, mediamente 25,5 x 10,3 µ) e la morfologia dei
conidi muriformi, che apparivano di colore olivaceo, verruculosi,
generalmente con 3 setti trasversali, 1 setto longitudinale e dotati
spesso di un rostro piuttosto breve, risultavano compatibili
con le caratteristiche delle fruttificazioni della specie A. alternata.
Occorreranno però ulteriori approfondimenti per confermare tale
classificazione.
Per quanto concerne le camere umide le foglie, una volta inserite
nei capsuloni ed incubate con un ciclo giornaliero di 12 ore di
illuminazione a 25 °C seguito da 12 ore di buio a 20 °C, sviluppavano
a livello delle macchie, dopo pochi giorni, abbondantissime
fruttificazioni del tutto analoghe a quelle osservate su WA.
Test di patogenicità
Per confermare la patogenicità del fungo, nel mese di settembre
2012 si sono preparate su WA delle colture monosporiche
sia dagli isolati da frutto che dagli isolati da foglia Con un’ansa
sterile si sono prelevati, da colture allestite su PDA, conidi del
fungo con i quali sono state preparate delle sospensioni in 10
ml di acqua distillata sterile. Queste sono poi state versate su
piastre di WA e lasciate riposare per 1 minuto. Successivamente
Figura 1: Sintomi fogliari
Figura 2: Sintomi su frutto
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