MQL8 1 IL-8 - Milenia Biotec GmbH

- 3 -M aterials Supplied, Storage and StabilityComponents Cat.-No. Content Preparation Storage at Shelf lifeTest Unit:membrane coated withmonoclonal (mouse) antihIL-8antibody; monoclonal(mouse) anti-hIL-8 antibodyconjugated to gold particlesChase Buffer:PBS-Buffer, pH 7.4MQSL8 20 ready to use 2 - 8 °CUseimmediatelyafter openingthe plastic bag!MQCB1 vialsà 2 mLuntil theexpiration dateready to use 2 - 8 °C until theexpiration dateMaterial Safety Data Sheets are available on request (look as well www.milenia-biotec.de).M aterials RequiredMicropipet and pipet tips for 100 µL.Specim en Collection and PreparationFor determination of interleukin 8 (IL-8) serum, plasma (EDTA, heparinized, citrated) and cell culturesupernatant can be used (avoid hemolysis!). The blood sample should be centrifuged within 4 hoursafter puncture. If a storage longer than 8 hours at room temperature is intended, samples should bealiquoted and stored frozen at -20 °C. The procedure calls for 100 µL sample volume per test.W arnings and PrecautionsAll reagents of this test kit are strictly intended for in vitro diagnostic use only. Use by staff, who isspecially informed and trained in methods which are carried out by use of in vitro diagnostics. Pleaseadhere strictly to the sequence of pipetting steps provided in this protocol.Sample material of patients (for example serum or plasma) normally used in laboratory determinationsare always classified as potentially infectious. Samples of risk patients should be specially labeled andif neccessary be handled in safety work benches (for example lamina flow bench).M ethod and Test PrincipleThe Milenia QuickLine IL-8 test is a lateral flow immunoassay designed for the semi-quantitativemeasurement of human interleukin-8 (IL-8). The sample is pipetted in the sample application. IL-8 ofthe patient sample binds to a first monoclonal anti-IL-8 antibody conjugated to gold particles. The IL-8-loaded gold particles diffuse through the membrane and overflow the test band (T). There is a secondmonoclonal antibody specific for IL-8 coated on the membrane; so gold particels were specificallybound and become visible as a red-blue band. Color intensity is directly proportional to theconcentration of IL-8 in the sample and intensives during incubation time. The surplus of gold particlescontinues to diffuse over the test device. The conjugat specific antibodies printed as a line on themembrane (control band, C) captures the rest of gold conjugate and a well visible line develops duringthe incubation time.Milenia Biotec, Versailler Straße 1, 35394 GießenMilenia QuickLine IL-8 (MQL8)

- 4 -Test Perform anceImportant notes: The test is sensitive to humidity. In the case of damaged package do not use! Before opening bring test unit and chase buffer to room temperature (18 – 28 °C). Use the test unitimmediately after opening.1. Apply 100 µL sample with a micropipet into thesample application of the test unit (see figure).2. After 15 minutes incubation add 2 drops chasebuffer directly with the bottle in the sampleapplication of the test unit.IDTCEvaluation Window3. After further 5 minutes of incubation the test resultis interpreted using the PicoScan system.Sample ApplicationThe result is automatically saved and can be directly readfrom the computer screen.The results should not be interpretedafterwards!Milenia Biotec, Versailler Straße 1, 35394 GießenMilenia QuickLine IL-8 (MQL8)

- 5 -Interpretation of ResultsThe PicoScan System allows an objective interpretation and documentation of the result.The IL-8 concentration directly correlates with the color intensity of the test band (T). The PicoScanSystem densitometrically measures the color intensity of the test band and calculates the resultaccording a stored standard curve. The calculated value is expressed in pg/mL.The PicoScan-System allows the following measurement range:Milenia QuickLine IL-8: < 50 upto 10,000 pg/mLDuring measurement the software controls, whether the results are valid. If the test is not valid, no testresult will be shown (look “Internal Quality Control”).You can find further informations in the PicoScan manual, which you can download from our websitewww.milenia-biotec.de .Positive results should be verified concerning the entire clinical status of the patient. Additionally everydecision for therapy should be taken individually.Internal Q uality ControlIn any case, the control band (C) has to appear!It is used only as functional control and can not be used for the interpretation of the test band. If thecontrol line is not detectable after 20 minutes incubation time, the result is invalide! The analysis hasto be repeated with a new test unit!Valid resultsInvalid resultsIDTCIDTCIDTCIDTCMilenia Biotec, Versailler Straße 1, 35394 GießenMilenia QuickLine IL-8 (MQL8)

- 6 -Assay CharacteristicsSample material:Incubation time:Sensitivity:Specificity:Reference values:High-Dose-Hook-Effect:serum, plasma (EDTA, heparinized, citrated), cell culture supernatant20 minutes at room temperature (18 - 28 °C)50 pg/mLhighly specific for human IL-8< 50 pg/mL in healthy blood donorsnot detectabele for samples 500,000 pg/mL IL-8Calibration: calibrated with NIBSC WHO standard 89/520Interference Factors: Lipemia no influenceBilirubin no influenceHemolysis no influence on the band interpretation;but due to erythrocyte-bound IL-8 false positive resultsare possible!Method Comparison:77 plasma samples of ICU patients were analyzed; Milenia QuickLine IL-8results were compared to the results of IMMULITE IL-8 (DPC, LosAngeles, USA); 94,9 % (75/79) show identical resultsMilenia Biotec, Versailler Straße 1, 35394 GießenMilenia QuickLine IL-8 (MQL8)

- 8 -Milenia Biotec, Versailler Straße 1, 35394 GießenMilenia QuickLine IL-8 (MQL8)

- 9 -Kitbestandteile, Lagerung und StabilitätKomponente Art.Nr. Inhalt Vorbereitung Lagerung bei HaltbarkeitTest-Einheit (Test Unit):Membran-beschichtet mitmonoklonalem (Maus) antihIL-8Antikörper; monoklonaler(Maus) anti-hIL-8Antikörper im GoldkonjugatLauf-Puffer (Chase Buffer):PBS-Puffer, pH 7,4MQSL8 20 gebrauchsfertig 2 - 8 °CSofort nachdem Öffnendes Plastikbeutelsverwenden!MQCB1 Fl.à 2 mlbis zum Verfallsdatumgebrauchsfertig 2 - 8 °C bis zum VerfallsdatumSicherheitsdatenblätter sind auf Anfrage erhältlich (siehe auch unter www.milenia-biotec.de).Erforderliche Hilfsm ittelMikropipette und Pipettenspitzen für 100 µl.Probenentnahm e und -vorbereitungDie Bestimmung des Interleukin-8 (IL-8) kann in Serum, Plasma (EDTA, Heparin, Citrat) undZellkulturüberstand durchgeführt werden (Hämolyse vermeiden!). Die Blutprobe sollte innerhalb von 4Stunden abzentrifugiert werden. Ist eine längere Lagerung als 8 Stunden bei Raumtemperaturbeabsichtigt, sollten die Proben aliquotiert und bei -20 °C tiefgefroren werden. Es werden 100 µlProbenvolumen pro Test benötigt.Hinw eise und Vorsichtsm assnahm enAlle Reagenzien dieser Testpackung dürfen ausschließlich zur in vitro-Diagnostik verwendet werden.Die Anwendung sollte durch Personal erfolgen, das speziell in Verfahren von in vitro-Diagnostikaunterrichtet und ausgebildet wurde. Die Einhaltung des vorgeschriebenen Protokolls zur Durchführungdes Tests ist unbedingt erforderlich.Untersuchungsmaterial von Patienten (z.B. Plasma- oder Serumproben), wie es fürLaboratoriumsuntersuchungen eingesetzt wird, ist stets als potentiell infektiös einzustufen. Proben vonRisikopatienten sollten stets besonders gekennzeichnet werden und ggf. in Sicherheitswerkbänken(z. B. Laminar Flow-Arbeitsplatz) bearbeitet werden.M ethodik und TestprinzipDer Milenia QuickLine IL-8 Test ist ein Lateralfluss-Immunoassay zur semi-quantitativen Bestimmungvon humanem Interleukin-8 (IL-8). Die Probe wird in den Probenauftrag des Testgehäuses pipettiert.Das IL-8 der Patientenprobe bindet an einen ersten monoklonalen IL-8-spezifischen Antikörper, der anGoldpartikel gekoppelt ist. Die mit IL-8 beladenen Goldpartikel diffundieren in der analytischenMembran über die Testlinie (T). Dort liegt ein zweiter monoklonaler IL-8-spezifischer Antikörpergebunden an die Membran vor; dadurch werden die Goldpartikel spezifisch gebunden und es wirdeine rot-blaue Bande sichtbar. Die Farbintensität ist direkt zur IL-8-Konzentration der Probeproportional und nimmt während der Inkubationszeit zu. Die im Überschuß vorhandenen Goldpartikeldiffundieren weiter über den Teststreifen. Die Konjugat-spezifischen Antikörper, die als Linie auf dieMembran aufgebracht sind (Kontroll-Bande, C), fangen das restliche Gold-Konjugat ab und bildeninnerhalb der Inkubationszeit eine gut sichtbare Linie.Milenia Biotec, Versailler Straße 1, 35394 GießenMilenia QuickLine IL-8 (MQL8)

- 10 -TestdurchführungWichtige Hinweise Der Test ist empfindlich für Feuchtigkeit. Bei Beschädigung der Verpackung Testeinheit nichtverwenden!Testeinheit und Laufpuffer vor dem Öffnen auf Raumtemperatur (18 – 28 °C) bringen. Testeinheitunmittelbar nach dem Öffnen verwenden.1. 100 µl Probe mit einer Mikroppette in denProbenauftrag der Testeinheit geben (sieheAbbildung).2. Nach 15 Minuten Inkubation 2 Tropfen Laufpufferdirekt aus dem Fläschchen in den Probenauftrag derTesteinheit geben.IDTCAuswerte-Fenster3. Nach weiteren 5 Minuten Inkubation kann der Testmittels PicoScan ausgewertet werden.ProbenauftragDas Ergebnis wird automatisch gespeichert und kann dannvom Bildschirm des Rechners abgelesen werden.Die Ergebnisse sollten nicht später beurteilt werden !Milenia Biotec, Versailler Straße 1, 35394 GießenMilenia QuickLine IL-8 (MQL8)

- 11 -Ausw ertung der ErgebnissseDas PicoScan-System ermöglicht eine objektive Auswertung sowie die Dokumentation desErgebnisses.Die IL-8-Konzentration korreliert direkt mit der Farbintensität der Testbande (T). Das PicoScan-Systemmisst densitometrisch die Farbintensität der Testbande und wertet anhand einer gespeichertenStandardkurve das Ergebnis aus. Der Ergebniswert wird in pg/ml angegeben.Das PicoScan-System ermittelt folgenden Messbereich:Milenia QuickLine IL-8: < 50 bis 10.000 pg/ml.Während der Messung wird von der Software überprüft, ob der Test gültig ist. Wenn der Test nichtgültig ist, wird kein Messwert angegeben (siehe „Interne Qualitätskontrolle“).Weitere Informationen können Sie dem PicoScan-Handbuch entnehmen, das Sie auch direkt vonunserer Website www.milenia-biotec.de herunterladen könnenPositive Resultate sollten anhand der gesamten Klinik des Patienten verifiziert werden. Darüberhinaus sollte jede Therapie-Entscheidung individuell getroffen werden.Interne Q ualitätskontrolleDie Kontroll-Bande (C) muß immer sichtbar werden!Sie dient nur als Funktionskontrolle und kann nicht zur Beurteilung der Farbintensität der Testbandeherangezogen werden. Wenn die Kontroll-Bande nach 20 Minuten Inkubationszeit nicht sichtbar ist, istdas Ergebnis ungültig! Der Test muß mit einer neuen Testeinheit wiederholt werden!Gültige ErgebnisseUngültige ErgebnisseIDTCIDTCIDTCIDTCMilenia Biotec, Versailler Straße 1, 35394 GießenMilenia QuickLine IL-8 (MQL8)

- 12 -TestcharakteristikaProbenmaterial:Inkubationszeit:Sensitivität:Spezifität:Normalbereich:Serum, Plasma (EDTA, Heparin, Citrat), Zellkulturüberstand20 Minuten bei Raumtemperatur (18 – 28 °C)50 pg/mlhochspezifische Reaktion mit humanem IL-8< 50 pg/ml in gesunden BlutspendernKalibration: kalibriert am NIBSC WHO-Standard 89/520High-Dose-Hook-Effekt:nicht nachweisbar für Proben 500.000 pg/ml IL-8Störfaktoren: Lipämie kein EinflußBilirubin kein EinflußHämolyse kein Einfluß auf die Banden-Interpretation;aber durch an Erythrozyten-gebundenes IL-8 sindfalsch-positive Ergebnisse möglich!Methodenvergleich:77 Plasmaproben von Intensivpatienten wurden untersucht; dieMilenia QuickLine IL-8-Ergebnisse wurden mit den Ergebnissen vonIMMULITE IL-8 (DPC, Los Angeles, USA) verglichen; 94,9 % derProben (75/79) ergaben identische ErgebnisseMilenia Biotec, Versailler Straße 1, 35394 GießenMilenia QuickLine IL-8 (MQL8)

- 13 -IL-8Lateral Flow Immunoassay for the semi-quantitativemeasurement of human interleukin-8 (IL-8)English: Page 1-6Lateralfluss-Immunoassay zur semi-quantitativenBestimmung von humanem Interleukin-8 (IL-8)Deutsch: Seite 7-12Test immunocromatografico per il dosaggiosemi-quantitativo dell’ interleuchina-8 umana (IL-8)Italiano: Pagine 13-18Inmunoensayo de flujo lateral para la cuantificaciónsemi-cuantitativa de la interleucina-8 humana (IL-8)Español: 19-24Immunkromatográfiás teszt a human interleukin-8 (IL-8)szemikvantitatív meghatározásáhozMagyar: Oldal 25-30Immunologiczny test w technice przepùywu poziomego dopóùiloœciowego pomiaru ludzkiej interleukiny 8 (IL-8)Polski: Strona 31-36REF:MQL8 120Milenia Biotec GmbHVersailler Straße 1D-35394 GießenGermanyTel.: +49-641- 948883-0Fax: +49-641- 948883-80E-mail: info@milenia-biotec.dehttp://www.milenia-biotec.deMilenia Biotec, Versailler Straße 1, 35394 GießenMilenia QuickLine IL-8 (MQL8)

- 14 -Milenia Biotec, Versailler Straße 1, 35394 GießenMilenia QuickLine IL-8 (MQL8)

- 15 -M ateriale fornito, conservazione e stabilitàComponenti Cat.-No. Contenuto Preparazione Conservazione StabilitàTest Card (Test Unit):membrana rivestita daanticorpo monoclonale (topo)anti-hIL-8 ; anticorpomonoclonale (topo) anti-hIL-8coniugato a particelle d’oroTampone di eluizione (ChaseBuffer):PBS-Buffer, pH 7.4MQSL8 20 pronto all’uso 2 - 8 °CUsareimmediatamentedopo l’aperturadella busta diplasticaMQCB1 flaconeda 2 mLfino alladata discadenzaPronto all’uso 2 - 8 °C fino alladata discadenzaLe schede di sicurezza sono disponibili a richiesta (consultare www.milenia-biotec.de).M ateriale richiestoMicropipetta e puntali da 100 µL.Raccolta e preparazione del cam pionePer il dosaggio dell’ interleuchina 8 (IL-8) possono essere utilizzati siero, plasma (EDTA, eparinato,citrato) e sovranatante di coltura cellulare (evitare l'emolisi!). I campioni di sangue devono esserecentrifugati entro 4 ore. Se i campioni devono essere conservati per più di 8 ore a temperaturaambiente, è necessario aliquotarli e congelarli a -20 °C. La procedura richiede 100 µL di volume dicampione per test.Avvertim enti e precauzioniTutti I reattivi di questo kit sono tassativamente da intendersi solo per uso diagnostico in vitro. Il kit vautilizzato da personale addestrato all’uso di metodologie diagnostiche in vitro . Preghiamo di seguirealla lettera lo schema di pipettaggio indicato in questa procedura.I campioni dei pazienti (ad esempio siero o plasma) usati nei test di laboratorio sono sempre daconsiderarsi come potenzialmente infetti. Campioni di pazienti a rischio vanno etichettati in modoevidente e ,se necessario, maneggiati in banchi di lavoro con dispositivi di sicurezza (per esempiobanchi con cappe a flusso laminare).M etodo e principio del testIl test Milenia QuickLine IL-8 impiega una tecnica immunocromatografica per il dosaggio semiqantitativodell’interleuchina-8 (IL-8). Il campione è pipettato nell’apposito pozzetto. La IL-8 delcampione del paziente si lega ad un primo anticorpo monoclonale anti-IL-8 coniugato a particelled’oro. Le particelle d’oro legate all’ IL-8 diffondono attraverso la membrana e raggiungono la zonadella linea del test (T). Qui è fissato sulla membrana un secondo anticorpo monoclonale specifico perl’IL-8; in modo da fissare le particelle d’oro rendendo visibile una banda di colore rosso-blu. L’ intensitàidel colore è direttamente proporzionale alla concentrazione di IL-8 nel campione ed aumenta duranteil tempo di incubazione Le particelle d’oro in eccesso continuano a diffondere lungo la membrana. Glianticorpi specifici anti-coniugato fissati sulla membrana in corrispondendìza della linea di controllo(control band, C) catturano le particelle d’oro coniugate e una linea ben visibile si sviluppa nel corsodell’incubazione.Milenia Biotec, Versailler Straße 1, 35394 GießenMilenia QuickLine IL-8 (MQL8)

- 16 -Esecuzione del testOsservazioni importanti: Il test è sensibile all’umidità. Non usare in caso di confezione danneggiata ! Prima dell’apertura portare la card e il tampone a temperatura ambiente (18 – 28 °C). Utilizzare iltest subito dopo l’apertura.1. Aggiungere 100 µL di campione con unamicropipetta a parte fornita nell’apposito pozzettoper il campione della card (vedi figura).2. Dopo 15 minuti di incubazione aggiungere2 gocce di tampone di eluizione direttamente conil flacone nel pozzetto per il campione della card.IDC TFinestra di lettura3. Dopo altri 5 minuti di incubazione il risultato deltest è misurato utilizzando il sistema PicoScan.CampioneIl risultato viene salvato automaticamente e può essereletto direttamente dallo schermo del computer.I risultati non possono essere letti successivamente!Milenia Biotec, Versailler Straße 1, 35394 GießenMilenia QuickLine IL-8 (MQL8)

- 17 -Interpretazione dei risultatiIl sistema PicoScan consente un’interpretazione oggettiva e una documentazione del risultato.La concentrazione di IL-8 nel campione è direttamente correlata all’intensità del colore della linea deltest (T).Il Sistema PicoScan misura in modo densitometrico l’intensità del colore della linea del test edeffettua il calcolo del risultato comparandolo con una curva di calibrazione memorizzata. I valori sonoespressi in pg/mL.Il PicoScan consente di misurare i valori nel seguente intervallo:Milenia QuickLine IL-8: < 50 fino a ≥ 10.000 pg/mL.Durante la misura il software controlla la validità dei dati. Se il test non è valido, non compaiono irisultati (vedi “ Controllo di qualità interno”).Ulteriori informazioni sono reperibili sul manuale PicoScan, che si può scaricare da www.mileniabiotec.de.Risultati positivi devono essere verificati prendendo in considerazione l’intero status clinico delpaziente. Inoltre ogni decisione riguardante la terapia deve essere valutata individualmente.Controllo di qualità internoIn ogni caso, la banda di controllo (C) deve essere presente!E’ utilizzato solo come controllo del funzionamento della card e non può essere utilizzato perl’interpretazione della linea del test. Se la linea di controllo non è presente dopo 20 minuti diincubazione, il risultato non è valido! L’analisi deve essere ripetuta con una nuova card!Risultati validiRisultati non validiIDTCIDTCIDTCIDTCMilenia Biotec, Versailler Straße 1, 35394 GießenMilenia QuickLine IL-8 (MQL8)

- 18 -Caratteristiche del testCampione:Tempo di Incubazione:Sensibilità:Specificità:Valori di riferimento:Effetto prozonasiero, plasma (EDTA, eparinato, citrato), sovranatante di coltura cellulare20 minuti a temperatura ambiente (18 - 28 °C)50 pg/mLaltamente specifico per IL-8 umana< 50 pg/mL in donatori saninon evidenziabile per campioni 500,000 pg/mL IL-8Calibrazione: calibrato con NIBSC WHO standard 89/520Fattori interferenti: Lipemia nessuna influenzaBilirubina nessuna influenzaEmolisi nessuna influenza sull'interpretazione della banda;ma, a causa dell'IL-8 legata agli eritrociti, sonopossibili risultati falsamente positivi!Confronto tra metodi:sono stati esaminati 77 campioni di plasma di pazienti in terapia intensiva(ICU); i risultati del test Milenia QuickLine IL8 sono stati confrontati conquelli del test IMMULITE IL-8 (DPC, Los Angeles, USA), il 94,9% (75/79)hanno dato risultati identici.Milenia Biotec, Versailler Straße 1, 35394 GießenMilenia QuickLine IL-8 (MQL8)

- 19 -IL-8Lateral Flow Immunoassay for the semi-quantitativemeasurement of human interleukin-8 (IL-8)English: Page 1-6Lateralfluss-Immunoassay zur semi-quantitativenBestimmung von humanem Interleukin-8 (IL-8)Deutsch: Seite 7-12Test immunocromatografico per il dosaggiosemi-quantitativo dell’ interleuchina-8 umana (IL-8)Italiano: Pagine 13-18Inmunoensayo de flujo lateral para la cuantificaciónsemi-cuantitativa de la interleucina-8 humana (IL-8)Español: 19-24Immunkromatográfiás teszt a human interleukin-8 (IL-8)szemikvantitatív meghatározásáhozMagyar: Oldal 25-30Immunologiczny test w technice przepùywu poziomego dopóùiloœciowego pomiaru ludzkiej interleukiny 8 (IL-8)Polski: Strona 31-36REF:MQL8 120Milenia Biotec GmbHVersailler Straße 1D-35394 GießenGermanyTel.: +49-641- 948883-0Fax: +49-641- 948883-80E-mail: info@milenia-biotec.dehttp://www.milenia-biotec.deMilenia Biotec, Versailler Straße 1, 35394 GießenMilenia QuickLine IL-8 (MQL8)

- 20 -M ateriales sum inistrados, alm acenam iento y estabilidadComponente Referencia Contenido Preparación Almacenar a Periodo devalidezDispositivo para el ensayo MQSL8 20 Listo para 2 - 8º C. Hasta la(Test Unit):membrana recubierta conanticuerpo monoclonal(ratón) anti hIL-8conjugado con partículasde orousarUtilizarinmediatamentetras la aperturadel envase deplásticofecha decaducidadTampón de detección(Chase Buffer):Tampón PBS, pH 7,4MQCB1 vialde 2 mlListo parausar2 - 8º C Hasta lafecha decaducidadLas fichas de datos de seguridad se encuentran disponibles en la página web www.milenia-biotec.deM aterial requeridoMicropipetas y puntas para 100 l.Recogida y preparación de las m uestrasEste kit puede utilizarse para la determinación de interleucina 8 (IL-8) en suero, plasma (tratado conEDTA, heparina o citrato), sobrenadante de células en cultivo (evitando la hemolisis). Las muestrasde sangre deberían centrifugarse dentro de las siguientes 4 horas tras la extracción. Si se requiere unperiodo de almacenamiento superior a 8 horas, las muestras deberían alicuotarse y almacenarse a –20ºC. La técnica está diseñada para la utilización de 100 µl de muestra para cada ensayo.Advertencias y PrecaucionesTodos los reactivos del kit están dirigidos para su uso exclusivo en el diagnóstico in vitro. Suutilización debe llevarse a cabo por el personal que haya sido informado y entrenado en métodosdiseñados el diagnóstico in vitro. Debe seguirse estrictamente los pasos de pipeteo indicados en elprotocolo.Las muestras de los pacientes (por ejemplo suero o plasma) que se utilizan normalmente en lasdeterminaciones de los laboratorios, deben siempre clasificarse como potencialmente infecciosas.Las muestras procedentes de pacientes de alto riesgo deberían identificarse específicamente y sifuera necesario manipularse en cabinas de seguridad (por ejemplo en cabina de flujo laminar).M étodo y Principio del EnsayoEl kit de Milenia QuickLine IL-8 es un inmunoensayo de flujo lateral diseñado para realizar unamedida semicuantitativa de la Interleucina 8 humana (IL-8). La muestra se deposita con una pipeta enel área de aplicación de la muestra. La IL-8 presente en la muestra del paciente se une al primeranticuerpo que está conjugado con partículas de oro. La IL-8 marcada con las partículas de oro,difunde a lo largo de la membrana y sobrepasa la banda (T) del ensayo. Hay un segundo anticuerpoespecífico para la IL-8 unido a la membrana, por lo que las partículas de oro se unenespecíficamente, haciéndose visibles como una banda de color rojo-azul. La intensidad del color esdirectamente proporcional a la concentración en IL-8 en la muestra y se intensifica durante el periodode incubación. El excedente de partículas de oro continúa con la difusión a lo largo de la membrana yse capturan en una zona lineal recubierta de anticuerpos conjugados específicamente (banda decontrol, C) que se hace visible durante el tiempo de la incubación.Milenia Biotec, Versailler Straße 1, 35394 GießenMilenia QuickLine IL-8 (MQL8)

- 21 -Realización del EnsayoConsejos a tener en cuenta: El ensayo es sensible a la humedad. ¡No utilizar en caso de que el envase haya sufridocualquier daño! Antes de abrir, permitir que los dispositivos y el tampón de captura alcancen la temperaturaambiente (18-28ºC). Utilizar cada dispositivo individual inmediatamente después de su apertura.1. Aplicar 100 µl de muestra con una micropipeta en el áreade aplicación de la muestra (ver figura).2. Después de 15 minutos de incubación, añadir 2 gotasde tampón de captura directamente con el vial sobre elárea de aplicación de la muestra.IDC TVentana de evaluación3. Después de 5 minutos de incubación el resultado deltest se interpreta usando el sistema de PicoScan.Aplicación de la muestraEl resultado se guarda automáticamente y puede leersedirectamente desde el monitor del ordenador.¡No deben interpretarse resultados transcurrido mástiempo!Milenia Biotec, Versailler Straße 1, 35394 GießenMilenia QuickLine IL-8 (MQL8)

- 22 -Interpretación de los ResultadosEl sistema PicoScan permite realizar una interpretación objetiva de los resultados.La concentración de IL-8 correlaciona directamente con la intensidad del color de la banda del test(T). El sistema PicoScan mide densitométricamente la intensidad del color de la banda del test ycalcula los resultados de acuerdo a una curva de calibración almacenada. Los resultados de lasmuestras se expresan en pg/mL.El sistema PicoScan permite hacer medidas en el siguiente rango de cuantificación:Milenia QuickLine IL-8: < 50 hasta 10,000 pg/mLDurante la cuantificación el sistema informático del equipo realiza un control sobre la validez de losresultados. Si los resultados del ensyo no son válidos, no se mostrarán (ver sección de “Control deCalidad Interno”)Para más información consultar el manual de PicoScan, que se puede obtener de la página webwww.milenia-biotec.de.Los resultados positivos deben ser verificados con el cuadro clínico completo del paciente.Adicionalmente, toda decisión para terapia debe tomarse individualmente.Control de Calidad InternoEn cualquiera de los casos debe de aparecer la banda del control (C)!Se utiliza únicamente como un control funcional y no puede utilizarse para la interpretación de labanda del test. Si no se detectase la banda del control transcurridos 20 minutos del periodo deincubación los resultados no deben considerarse como válidos. El análisis debería repetirse con unnuevo dispositivo!Resultados válidosResultados no válidosIDTCIDTCIDTCIDTCMilenia Biotec, Versailler Straße 1, 35394 GießenMilenia QuickLine IL-8 (MQL8)

- 23 -Características del ensayoTipo de muestras:Tiempo de incubación:EspecificidadValores de Referencia:Efecto gancho a dosis:Suero, plasma (EDTA, heparinizado, citratado), sobrenadante decélulas en cultivo20 minutos a temperatura ambiente (18-28ºC)Elevada especificidad para la IL-8 humana< 50 pg/ml en donantes de sangre sanos.elevadasno se detecta para muestras < 500.000 pg/ml IL-8Calibración Calibrado con el estándar NIBSC WHO 89/520Interferencias: Lipemia No influyeBilirrubina No influyeHemolisis No influye en la banda de interpretación;pero debido a la la unión de eritrocitos es posibleencontrar resultados falsos positivos para la IL-8Comparación entre MétodosSe analizaron 77 muestras de sangre de pacientes ICU y secompararon los resultados obtenidos con el kit Milenia QuickLineIL-8 con los obtenidos con el kit IMMULITE IL-8 (DPC, LosAngeles, EEUU). Se observaron idénticos resultados en el 94,9%(75/79) de los casosMilenia Biotec, Versailler Straße 1, 35394 GießenMilenia QuickLine IL-8 (MQL8)

- 24 -IL-8Lateral Flow Immunoassay for the semi-quantitativemeasurement of human interleukin-8 (IL-8)English: Page 1-6Lateralfluss-Immunoassay zur semi-quantitativenBestimmung von humanem Interleukin-8 (IL-8)Deutsch: Seite 7-12Test immunocromatografico per il dosaggiosemi-quantitativo dell’ interleuchina-8 umana (IL-8)Italiano: Pagine 13-18Inmunoensayo de flujo lateral para la cuantificaciónsemi-cuantitativa de la interleucina-8 humana (IL-8)Español: 19-24Immunkromatográfiás teszt a human interleukin-8 (IL-8)szemikvantitatív meghatározásáhozMagyar: Oldal 25-30Immunologiczny test w technice przepùywu poziomego dopóùiloœciowego pomiaru ludzkiej interleukiny 8 (IL-8)Polski: Strona 31-36REF:MQL8 120Milenia Biotec GmbHVersailler Straße 1D-35394 GießenGermanyTel.: +49-641- 948883-0Fax: +49-641- 948883-80E-mail: info@milenia-biotec.dehttp://www.milenia-biotec.deMilenia Biotec, Versailler Straße 1, 35394 GießenMilenia QuickLine IL-8 (MQL8)

- 25 -Milenia Biotec, Versailler Straße 1, 35394 GießenMilenia QuickLine IL-8 (MQL8)

- 26 -A teszthez biztosított anyagok, tárolás és stabilitásÖsszetevõk Kat.szám Mennyiség Elõkészítés Tárolás EltarthatóságTeszt egység (Test Unit):Monoklonális (egér) antihIL-8antitesttel fedettmembrán; monoklonális(egér) anti-hIL-8 antitestarany részecskékhez kötveFuttató puffer(Chase Buffer):PBS puffer: pH 7.4MQSL8 20 felhasználásrakészMQCB1 db 2 ml-esüveg2 - 8 °C a lejárati ideigA mûanyagtasakfelbontása utánazonnal felhasználandó!2 - 8 °C a lejárati ideigfelhasználásrakészAz anyagok biztonságossági adatai kívánságra hozzáférhetõek (lásd még www.mileniabiotec.de).Szükséges anyagokMikropipetta és 100 µl-es pipettahegyek.M intagyûjtés és elõkészítésAz interleukin 8 (IL-8) meghatározáshoz szérum, plazma (EDTA, heparinos, citrátos) és sejtkultúrafelülúszó használható (a hemolízist el kell kerülni!) A vérmintát a levétel után 4 órán belül le kellcentrifugálni. Amennyiben 8 óránál tovább kellene a mintákat szobahõn tárolni, azokat szét kellosztani kis adagokra, és -20 °C-ra le kell fagyasztani. A meghatározáshoz egyenként 100 µl mintaszükséges.Figyelm eztetés és elõvigyázatosságA kit minden reagense szigorúan csak in vitro diagnosztikai célra használható. A felhasználás csak amódszerek kivitelezésében tájékozott és gyakorlott személyek számára ajánlott. Szigorúanragaszkodni kell a protokollban leírt pipettázó lépések sorrendjéhez.A betegek mintái (például szérum vagy plazma), melyek a laboratóriumi meghatározások soránfelhasználásra kerülnek, potenciálisan fertõzõnek tekintendõk. Az infekciós kockázatot képviselõbetegek mintáját különleges jelzéssel kell ellátni, és szükség esetén fokozott biztonságúmunkakörülmények között kell feldolgozni (pl. lamináris box).A m ódszer és a teszt alapelveA Milenia ® QuickLine IL-8 teszt immunkromatográfiás módszer a human interleukin-8 (IL-8)szemikvantitatív mérésére. A mintát a minta-felviteli helyre kell pipettázni. A beteg mintájában levõ IL-8 hozzákötõdik az elsõ anti-IL-8 monoklonális antitesthez, amelyet arany részecskékhez konjugáltak.Az IL-8-al telített arany részecskék az analitikus membránban diffundálnak a tesztcsíkra (T). Ott egymásodik anti-IL-8 monoklonális antitest helyezkedik el a membránhoz kötve; ezek révén az aranyrészecskék specifikusan kötõdnek, és piros-kék csíkként láthatóvá válnak. A szín intenzitásaegyenesen arányos a minta IL-8 koncentrációjával, és fokozódik az inkubációs idõ alatt. A feleslegbenlevõ arany részecskék túldiffundálnak a tesztcsíkon. Azok a konjugátum specifikus antitestek,melyeket a membránon vonalként vittek fel (kontrollcsík, C), megkötik az arany konjugátummaradékát, és az inkubációs idõ alatt jól látható csík alakul ki.Milenia Biotec, Versailler Straße 1, 35394 GießenMilenia QuickLine IL-8 (MQL8)

- 27 -A teszt kivitelezéseFontos figyelmeztetések: A teszt nedvességre érzékeny. Ha a csomagolás sérült, tilos felhasználni! Felnyitás elõtt hozza a tesztkészletet és a futtató puffert szobahõmérsékletre (18-28 o C). A tesztetfelnyitás után azonnal használja fel.1. Cseppentsen mikropipettával 100l-t a mintából ateszt minta felviteli helyére (lásd ábra).2. 15 perc inkubáció után adjon 2 csepp futtatópuffert közvetlenül a palackból a teszt minta felvitelihelyére.IDTCKiértékelõ ablak3. További 5 perc inkubáció elteltével a tesztkiértékelhetõ a PicoScan-nel.Minta-felviteli helyAz eredmény automatikusan mentõdik, és közvetlenülleolvasható a computer kijelzõjén.Az eredmények késõbb nem értékelhetõk!Milenia Biotec, Versailler Straße 1, 35394 GießenMilenia QuickLine IL-8 (MQL8)

- 28 -Az eredm ények értékeléseA PicoScan készülék lehetõvé teszi az eredmény objektív értékelését és dokumentálását.Az IL-8 koncentráció egyenesen arányos (közvetlen korreláció) a tesztcsík (T) színintenzitásával. APicoScan készülék denzitometriásan méri a tesztcsík színintenzitását, és egy tárolt standard görbealapján számolja az eredményt. A számított érték pg/ml-ben jelenik meg.A PicoScan készülék a következõ mérési tartományt teszi lehetõvé:Milenia ® QuickLine IL-8 < 50 - 10.000 pg/ml-ig.A mérés alatt a software ellenõrzi, hogy az eredmények érvényesek-e. Amennyiben a teszt nemérvényes, nem jelenik meg teszteredmény. (lásd “Belsõ minõségi kontroll” c. fejezet)További információk találhatók a PicoScan kézikönyvben, amely letölthetõ a weboldalunkról:www.milenia-biotec.deA pozitív eredményeket a beteg klinikai státusza szerint kell igazolni. A továbbiakban a terápiávalkapcsolatos minden döntést egyénre szabottan kell meghozni.Belsõ m inõségi kontrollA kontrollcsíknak (C) minden esetben meg kell jelennie!A kontrollcsík csak funkcionális kontrollként alkalmazható, és nem alkalmas a tesztcsík értékelésére.Ha a kontrollcsík nem értékelhetõ 20 perc inkubációs idõ után, a teszt értékelhetetlen! A mérést megkell ismételni új teszt segítségével!Értékelhetõ eredményekÉrtékelhetetlen eredményekIDTCIDTCIDTCIDTCMilenia Biotec, Versailler Straße 1, 35394 GießenMilenia QuickLine IL-8 (MQL8)

- 29 -A vizsgálat jellem zõiMinta anyag:Inkubációs idõ:Szenzitivitás:Specificitás:Normál értékek:Kalibráció:szérum, plazma (EDTA, heparinos, citrátos), sejtkultúrafelülúszó20 perc szobahõmérsékleten (18 - 28 °C)50 pg/mlmagasan specifikus human IL-8-raegészséges véradókban < 50 pg/mla WHO 89/520 standardjával kalibrálvaMagas koncentrációk torzító hatása: 500.000 pg/ml IL-8 mintakoncentráció esetén nemtapasztalhatóBefolyásoló tényezõk: lipémia nem befolyásoljabilirubin nem befolyásoljahemolízis nem befolyásolja a csík értékelését;azonban az eritrocitákhoz kötõdött IL-8következtében fals pozitív eredménylehetséges!A módszer összehasonlítása:77 intenzív osztályon kezelt beteg plazma mintáját elemezték; aMilenia QuickLine IL-8 eredményeket IMMULITE IL-8-al(DPC, Los Angeles, USA); összehasonlítva 94,9 %-ban (75/79)azonosak voltak az eredmények.Milenia Biotec, Versailler Straße 1, 35394 GießenMilenia QuickLine IL-8 (MQL8)

- 31 -Milenia Biotec, Versailler Straße 1, 35394 GießenMilenia QuickLine IL-8 (MQL8)

- 32 -Sklad, Przechow yw anie i Trw aloœãSkùadnikiKaseta testowa (Test Unit):przeciwciaùo monoklonalneanty hIL-8 (mysie)przeciwciaùo monoklonalneanty hIL-8 opùaszczonezùotem(mysie)Bufor bezpoœredni(Chase Buffer):PBS-Bufor, pH 7.4NumerPrzygotoZawartoœãkatalogowy-wanieMQSL8 20 gotowydo u¿yciaMQCB 1 fiolka 2 mL gotowydo u¿yciaPrzechowywanieTrwaùoœã2 – 8 ºC do datyu¿yjwa¿noœcibezpoœredniopo otwarciuplastikowejtorebki2 – 8 ºC do datywa¿noœciKarta charakterystyki dostêpna jest na ¿¹danie (lub na stronie www.milenia-biotec.de).W ym agane m aterialyMikropipety o objêtoœci 100 ìL.Pobieranie i przygotow anie próbkiInterleukine-8 (IL-8) mo¿na oznaczaã w surowicy, osoczu (EDTA, heparyna, cytrynian), supernatant,(unikaã hemolysis!). Próbkê krwi nale¿y odwirowaã w pierwszych 4-ch godzinach od momentupobrania. Przechowywanie próbki materiaùu do oznaczenia IL-8 powy¿ej 8 godzin wymagatemperatury -20ºC. Procedura oznaczania IL-8 wymaga 100 ìL objêtoœci próbki na test.Úrodki ostro¿noœciTesty przeznaczone s¹ tylko i wyù¹cznie do diagnostyki in vitro. Personel u¿ywaj¹cy tych testówpowinien byã poinformowany i przeszkolony w zakresie metod diagnostyki in vitro. Testy nale¿ywykonywaã zgodnie z procedur¹ podan¹ w tej instrukcji. Ka¿dy materiaù do oznaczania pobrany odpacjenta (np.: surowica, osocze) powinien byã traktowany jako potencjalnie zakaêny. Próbki odpacjentów wysokiego ryzyka powinny byã specjalnie oznaczne.M etoda i zasady dzialania testuTest Milenia ® QuickLine IL-8 jest immunologicznym testem w technice przepùywu poziomego dopóùiloœciowego pomiaru ludzkiej interleukiny 8 (IL-8).Test Milenia ® QuickLine IL-8 zawiera dwaprzeciwciaùa monoklonalne (mysie) swoiste wobec Interleukiny-8. Jedno z nich jest znakowanezùotem. Ciekùa czêœã próbki usuwa pokryte zùotem przeciwciaùo monoklonalne anty hIL-8 z jegomatrycy. W ten sposób powstaje kompleks poœrednicz¹cy z IL-8 obecn¹ w próbce. Kompleks tenprzechodzi nastêpnie przez strefê detekcji. W okienku testowym w pozycji okreœlonej jako "T”kompleks poœrednicz¹cy tworzy kolejny kompleks z drugim przeciwciaùem monoklonalnym. Powstaùykompleks ukazuje siê w postaci zabarwionego pr¹¿ka. Próbka bez IL-8 nie tworzy takiego kompleksui dlatego nie tworzy siê pr¹¿ek w pozycji (T).Milenia Biotec, Versailler Straße 1, 35394 GießenMilenia QuickLine IL-8 (MQL8)

- 34 -W interpretacjy w ynikówCzytnik PicoScan pozwala na w peùni obiektywn¹ interpretacjê i udokumentowanie wyników.Koncentracja IL-8 w próbce bezpoœrednio koreluje z natê¿eniem koloru pr¹¿ka (T). Czytnik PicoScanmierzy metod¹ densytometryczn¹ natê¿enie pr¹¿ka (T) i wylicza wynik zgodnie z zapamiêtan¹znormalizowan¹ krzyw¹ gêstoœci. Wyniki podawane s¹ w pg/mL.Czytnik PicoScan umo¿liwia wykonanie pomiaru w zakresie:Milenia QuickLine IL-8: < 50 pg/mL do ≥ 10,000 pg/mLPodczas pomiaru system kontroli sprawdza czy wynik jest wa¿ny. Je¿eli wynik jest nie wa¿ny rezultatpomiaru nie zostanie wyœwietlony (zobacz „ Wewnêtrzna kontrola jakoœci”).Wiêcej informacji o Czytniku PicoScan mo¿na przeczytaã w instrukcji u¿ytkownika PicoScan, któr¹mo¿na pobraã ze strony www.milenia-biotec.de .Wyniki pozytywne zawsze nale¿y interpretowaã w odniesieniu do peùnego obrazu klinicznegopacjenta.Oznacza to, ¿e ka¿da decyzja o metodzie leczenia musi byã podejmowana indywidualnie.W ew nêtrzna kontrola jakoœciW ka¿dej sytuacji musi pojawiã siê pr¹¿ek kontrolny (C)!Pr¹¿ek kontrolny sùu¿y tylko i wyù¹cznie do stwierdzenia czy oznaczenie jest wa¿ne czy te¿ nie. Brakwybarwienia pr¹¿ka (C) po 20 minutach inkubacji oznacza wynik niewa¿ny. Badanie nale¿y powtórzyãprzy u¿yciu nowej kasetki testowej.Wyniki wa¿neWyniki niewa¿neIDTCIDTCIDTCIDTCMilenia Biotec, Versailler Straße 1, 35394 GießenMilenia QuickLine IL-8 (MQL8)

- 35 -Cechy charakterystyczne oznaczeniaMateriaù próbki:Czas inkubacji:Czuùoœã:Swoistoœã:Wartoœci referencyjne:Efekt Hooka:Kalibracja:surowica, osocze (EDTA, heparyna, cytrynian), supernatant20 minut w temperaturze pokojowej (18-28 ºC)50 pg/mLwysoka swoistoœã z ludzk¹ IL-8< 50 pg/mL w krwi zdrowych dawcównie wykrywalny dla próbek (oznaczeñ) ≤ 500,000 pg/mL IL-8kalibracja zgodnie ze standardem 89/520 NIBSC WHOCzynniki interferuj¹ce: Lipemia - nie wpùywaBilirubin - nie wpùywaHemolysis - nie wpùywa na interpretacjê wyniku,ale z powodu ograniczenia erytrocytów mog¹pojawiaã siê wyniki faùszywie dodatniePorównanie metod:przeanalizowano 77 próbek osocza pacjentów ICU; wyniki testówMilenia ® QuickLine IL-8 porównano z wynikami otrzymanymi zIMMULITE ® IL-8 (DPC, Los Angeles, USA); 94,9% (75/79) wynikówbyùo identycznych.Milenia Biotec, Versailler Straße 1, 35394 GießenMilenia QuickLine IL-8 (MQL8)