Rapporto annuale 2003 - Istituto di Ricerche Farmacologiche Mario ...

In the NewsInternational Women’s Day - Celebrating 100 yearsInternational Women’s Day, heldeach year on the 8 th March, is an occasionthat is marked by women in 69 countriesaround the world. It is a day when womenare recognized for their achievements,can look back on past struggles and, moreimportantly, look ahead to the untappedpotential and opportunities that awaitfuture generations of women.The origin of InternationalWomen’s Day is one steeped in thehistory of women’s age old struggles toparticipate in society on an equal footingwith men. During the turn of the century,thousands of women and girls, some asyoung at 10, were employed in factories,working long hours in sweat shopconditions for less than halfthe wages paid to men. In1908, women and girlsworking in the garmentindustry in New York held amassive protest rally todemand equal pay for equalwork, the end to child labour,and the right to vote. Theseprotesters were met with apolice force determined tostop them. The rally becameviolent as mounted policecharged, leaving manywomen dead and injured.As a recognition ofthis, and subsequent eventsinvolving women workers, in1910 at the 2 nd InternationalConference of WorkingWomen, it was proposedthat each year, in everycountry, these events wouldbe commemorated asInternational Women’s Day.Australia has a long history ofinvolvement with women’s issues. In theearly 1960’s, the emergence of feminismswept the world, and, like it or not, thoseearly “bra burningfeminists” changedthe course of historyfor Australian womenas they raisedawareness of the inequalities in oursociety, and presented a log of claims togovernment, including paid maternityleave, which has only taken some 40years to become a reality!We have come a long way sincethe days when, for example, in the 1930’smarried women were barred from theworkforce. Some may say we haveachieved it all – we are liberated, we areequal. But, the reality is that manyWomen at the turn of the century werefighting for their right to votewomen are not enjoying the freedoms ofothers. Women are still by far the majorityof victims of domestic violence. Statisticstell us that one in every four women inAustralia will experience domesticviolence at some time in their lives, withan average of 74 women being murderedby intimate partners annually. Manyyoung girls are the silent victims of sexualabuse by male members of their families.And, by far, women are the main targetsfor rape, with men defending themselvesby saying “they asked for it”.But, by and large,Australian women are free tofollow whatever path in lifethey choose, but not so of oursisters in some othercountries where baby girlsare unwelcome and oftenkilled at birth, where younggirls are sold into prostitutionby impoverished families,where girls as young as 7 aregenitally mutilated in thename of ‘chastity”, wherewomen are second classcitizens, forced into arrangedmarriages and generallydenied any semblance ofequality with men.This year marks the100 th anniversary ofInternational Women’s Day –so women of the Triangle –enjoy your special day, beproud of the achievements Australianwomen have won, but spare somethoughts for the plight of hundreds ofthousands of women across the worldwho still live miserable lives just becausethey are women.Bermagui and District Lions Clubsay farewell to one of nature’s gentlemen,lion Kenneth Barry Latitmer, who passedaway on the 12th January.Barry was born in Cobargo in 1934,but moved to Sydney to finish hiseducation. It was in Sydney that he metand married Shirley, who still lives atFairhaven.Barry worked as a factory managerat the Punchbowl Metal Spinning Works,and joined the Beverly Hills/ RoselandBermagui Lions farewell one of their ownLions Club in 1986. He transferred toBermagui and District Lions Club inSeptember 1994 when he and Shirleyreturned to the district.During his service to Lions Barryheld the positions of President,Secretary, and Treasurer for six years.He was awarded one of LionsInternational Awards - a Melvin JonesFellow from the club for his dedicationand services over the years.A quietly spoken man, hisservices to the community, werelegendary. When Barry volunteered todo a project he could always be relied tosee ot through. Such was his commitmentto what ever he took on.The members of the Lions club willremember him as a great raconteur forhis jokes and humour. One could say hewas the backbone on the Lions Club.Farewell Barry we will miss you.www.thetriangle.org.au and www.VisitCobargo.com The Triangle March 2011 page 3

IRFMNa cura di Isabella Bordognain collaborazione con il Laboratorio di Informatica Medicafinito di stampare nel maggio 20042RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNPREFAZIONEQuesto volume rappresenta un tentativo di riassumere le attività di ricerca e di formazionesvolte dall’Istituto Mario Negri di Milano e Bergamo. L’attività viene presentata su basedipartimentale e in qualche caso anche da singoli laboratori.Mentre si rimanda al testo per i dettagli dei risultati scientifici ottenuti è pertinente fare alcuneosservazioni di carattere generale.Rispetto agli anni passati si accentuano programmi di ricerca che implicano vari laboratoriall’interno dei singoli dipartimenti e in qualche caso fra dipartimenti. I temi di ricerca si sonoridotti di numero e si osserva una tendenza a focalizzare la sperimentazione per ottenere“masse critiche” di uomini e risorse su uno stesso tema.Predomina, in armonia con le tendenze odierne, un orientamento dettato dalle metodologiedella biologia molecolare soprattutto per quanto riguarda lo studio del meccanismod’azione dei farmaci.L’impiego degli studi con colture in vitro è fondamentale per approfondire l’indagine, tuttavia èancora presente un numero significativo di ricerche in vivo, l’unico modo - ancora oggi - perpoter validare le ricerche in vitro e per poter realizzare modelli sempre più vicini alle malattieumane. In questo senso è aumentato considerevolmente l’impiego di animali transgenici.I temi fondamentali di ricerca sono quelli tradizionali dell’Istituto: oncologia, neuroscienze,cardiovascolare, malattie renali, trapianti d’organo con forti componenti di immunologia, biologiacellulare, biochimica molecolare. Di significato anche gli studi che riguardano ambiente e salute.Si è accentuato lo studio delle malattie rare e dei farmaci orfani sia a livello sperimentale checlinico ed epidemiologico.In tutta la ricerca del “Mario Negri” l’ipotesi è quella di sviluppare intorno a ognuno dei granditemi citati una complessità di approcci che vada dalla ricerca di base, agli studi clinici controllati,all’analisi epidemiologica e, quando possibile, alla epidemiologia dei servizi.L’attività di ricerca necessita, come componente fondamentale, della formazione di giovaniricercatori che trovano nel lavoro di laboratorio, non solo la possibilità di esprimere le loro idee,ma anche l’opportunità di ottenere un diploma attraverso la scuola di qualificazioneprofessionale riconosciuta dalla Regione Lombardia o il titolo di Ph.D. in collaborazione con laOpen University di Londra. Di particolare interesse sono altri tipi di formazione indirizzati allastatistica biomedica, ai medici di medicina generale, ai pediatri di famiglia e agli infermieri per laricerca clinica.Infine fa parte integrante delle attività del “Mario Negri” un interesse per l’informazione a tutti ilivelli, formalizzato nel Centro di Informazione per le Malattie Rare e nel Centro Regionale diInformazione sui Farmaci.In tempi così difficili per la ricerca italiana la gratitudine dell’Istituto va a tutti gli enti pubblici eprivati, nonché a Fondazioni e a privati cittadini che hanno reso possibile, con i loro contributi,piccoli e grandi, la realizzazione delle attività riportate in questo volume. Grazie a tutti.Silvio GarattiniDirettore3RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNIstituto di Ricerche Farmacologiche“Mario Negri”MilanoRAPPORTIATTIVITA’ 2003dipartimenti e laboratori5RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMN6RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNDIPARTIMENTO DI ONCOLOGIAPERSONALECapo DipartimentoMaurizio D’INCALCI, Dr.Med.Chir.Ufficio Studi Oncologici e DocumentazioneDocumentalista ScientificoConsulenteStefania FILIPPESCHI, Per.Chim.Maria Grazia DONELLI, Dr.Sci.Biol.Laboratorio di Farmacologia AntitumoraleCapo LaboratorioUnità di BiofisicaCapo UnitàUnità di CitometriaCapo UnitàMaurizio D’INCALCI, Dr.Med.Chir.Paolo UBEZIO, Dr.Fis.Eugenio ERBA, Per.Chim.Unità di Farmacologia Clinica AntitumoraleCapo UnitàMassimo ZUCCHETTI, Dr.CTFLaboratorio di Farmacologia MolecolareCapo LaboratorioUnità di Riparazione del DNACapo UnitàMassimo BROGGINI, Per.Chim.Giovanna DAMIA, Dr. Med. Chir.Laboratorio di Biologia e Terapia delle Metastasi TumoraliCapo LaboratorioUnità di Angiogenesi TumoraleCapo UnitàRaffaella GIAVAZZI, Dr.Sci.Biol.Giulia TARABOLETTI, Dr.Sci.Biol.7RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNLaboratorio di Ricerca Clinica OncologicaCapo LaboratorioValter TORRI, Dr.Med.Chir.Unità di Biometria e Data ManagementCapo UnitàIrene FLORIANI, Dr.Sci.Biol.Unità di Clinical TrialsCapo UnitàRoldano FOSSATI, Dr.Med.Chir.Laboratorio per la Ricerca Traslazionale e di Outcome in OncologiaCapo LaboratorioGiovanni APOLONE, Dr.Med.Chir.Unità di Informatica per la Ricerca ClinicaCapo UnitàLuca CLIVIO, Dr.Ing.Unità di Outcome ResearchCapo UnitàPaola MOSCONI, Dr.Sci.Biol.8RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNINTRODUZIONE ALLE ATTIVITA' DEL DIPARTIMENTOIl Dipartimento di Oncologia è formato da tre laboratori sperimentali preclinici (Laboratorio diFarmacologia Antitumorale, Farmacologia Molecolare e Biologia e Terapia delle Metastasi) eda due laboratori indirizzati a studi di tipo clinico (Laboratorio di Ricerca Clinica Oncologica,Laboratorio di Ricerca Translazionale e di Outcome in Oncologia).In alcuni casi i progetti di ricerca sono stati attuati unicamente da singoli laboratori o unità diricerca, in altri casi sono attuati attraverso la collaborazione tra diversi laboratori dello stessodipartimento, di altri dipartimenti o di gruppi esterni all’Istituto (vedi collaborazioni nazionali einternazionali).Le aree di ricerca dei laboratori preclinici riguardano la scoperta, lo studio e lo sviluppo dinuovi farmaci antitumorali e antimetastatici e nuove combinazioni, lo studio della biologia deitumori indirizzati non soltanto ad acquisire nuove conoscenze scientifiche, ma soprattutto comebase per approcci terapeutici più selettivi e per identificare e validare modelli sperimentali adattiper scoprire e studiare farmaci o modalità terapeutiche innovative.Lo sviluppo clinico dei nuovi farmaci, che conta sia sulla forte collaborazione alle attività delSENDO (South Europe New Drugs Organization) sia sugli studi condotti dal Laboratorio per laRicerca Translazionale e di Outcome in Oncologia, è finalizzato alla valutazione degli effettidelle nuove terapie in studi di fase III comparativa e in studi di efficacia che sono condottiprevalentemente dal Laboratorio per la Ricerca Clinica Oncologica. A livello della Ricerca degliOutcome (Outcome Research), poiché questa implica l’attivazione di studi per conoscere irisultati finali di particolari pratiche sanitarie e di interventi nella pratica clinica, parecchi studiosservazionali e di esito sono stati condotti in collaborazione con Istituzioni sanitarie regionali enazionali nonché con Società Scientifiche.A livello preclinico e clinico sono stati condotti studi su differenti neoplasie umane, tuttavia lamaggior parte delle attività è stata riservata agli studi sui tumori ovarici.SCOPERTE/RISULTATI PRINCIPALIAplidina è un potente antileucemico, attivo anche in cellule leucemiche resistenti ad altrifarmaci antitumorali. Questo farmaco blocca la secrezione di VEGF interferendo con il loopautocrino VEGF-recettore per VEGF.ET-743 a concentrazioni farmacologicamente ragionevoli (nanomolari) altera i meccanismi diregolazione della trascrizione di geni inducibili. Inoltre cellule deficienti nel “NucleotideExcision Repair” sono meno suscettibili a ET-743 mentre sono ipersuscettibili ai raggi UV e adaltri farmaci antitumorali che danneggiano il DNA.La Variolina e alcuni suoi derivati hanno mostrato una rapida induzione di apoptosi in diverselinee cellulari tumorali poco suscettibili ad altri farmaci antitumorali.L’espressione di p73 dopo danno cellulare è regolata a livello trascrizionale mediantel’eliminazione dell’azione repressiva del fattore trascrizionale C-EBP alfa su un altro fattoretrascrizionale, E2F1.Clonata la regione regolatrice del gene chk1. Il gene è regolato trascrizionalmente dal fattoretrascrizionale E2F1.Il nuovo farmaco antitumorale brostallicina sinergizza in vivo con cisplatino secondo un9RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNmeccanismo predetto dal meccanismo di azione dei due farmaci.La regione C-terminale del prodotto del nuovo gene DRAGO ha un ruolo importante nellafunzione soppressiva della crescita indotta dal gene stesso.Due linee tumorali indipendenti coltivate in vitro e rese resistenti al farmaco ET-743 presentano,in un subset di geni, simili alterazioni di espressione genica rispetto alle loro linee parentali.L'agente anti-vascolare ZD6126, un nuovo composto che lega la tubulina, induce ostruzione deivasi sanguigni e necrosi dei tumori.L'inibitore fisiologico dell'angiogenesi trombospondina-1 lega direttamente e sequestra il fattoreangiogenico FGF-2.MMP9 induce il rilascio di VEGF dalle cellule di tumore ovarico stimolando la formazione diascite.I livelli plasmatici di VEGF, MMP9, TIMP1 e TIMP2 sono elevati in pazienti con carcinomaovarico. Alti livelli di TIMP-1 sono associati ad una minor sopravvivenza.L’ambiente angiogenico/tumorale è in grado di modulare l’espressione genica delle celluleendoteliali.L’efficacia terapeutica del paclitaxel è associata alla modulazione di geni specifici nel tumore.L'angiogenesi tumorale modulata dall'espressione di VEGF e FGF-2 influenza la crescitatumorale.SU6668 inibitore dei recettori tirosin cinasici VEGFR, PDGFR, e FGFR in combinazione conpaclitaxel migliora la risposta terapeutica in modelli sperimentali di carcinoma ovarico.Studio ICON4: lo studio dimostra un miglioramento della sopravvivenza nel carcinomadell'ovaio in stadio avanzato con l'utilizzo di terapia di seconda linea a base di platino derivati etaxolo.La risposta al trattamento chemioterapico è un buon indicatore surrogato della sopravvivenza inpazienti con carcinoma della cervice localmente avanzato.La chemioteraia adiuvante con lo schema di Vindesina, Mitomicina C e Cisplatino (MVP) nelcarcinoma polmonare non a piccole cellule (NSCLC) non ha prodotto un miglioramento dellasopravvivenza rispetto alla sola chirurgia.COLLABORAZIONI NAZIONALICNR IGBE, PaviaEUROPA DONNAFondazione Nerina e Mario Mattioli Onlus, MilanoFondo Edo Tempia, Laboratorio di Farmacogenomica, BiellaI.A.S.I., Roma10RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNIstituti Ortopedici Rizzoli, BolognaIstituto dei Tumori di MilanoIstituto Europeo di Oncologia (IEO), MilanoIstituto Nazionale per la Ricerca sul Cancro (IST), GenovaIstituto Regina Elena, RomaLaboratorio Cell factory, Policlinico di MilanoOspedale San Gerardo, Monza, MilanoOspedale San Matteo, PaviaUniversità Cattolica del Sacro Cuore, RomaUniversità di BariUniversità di BresciaUniversità di L’AquilaUniversità di MilanoUniversità di Modena e Reggio EmiliaUniversità di MonzaUniversità di CataniaCOLLABORAZIONI INTERNAZIONALICancer Research UK, Londra, Gran BretagnaCancerdegradome, Consortium IP 6th FP, ECEORTC, Bruxelles, BelgioEUROPA DONNAEuropean Agency for the Evaluation of Medicinal Products (EMEA), Lonfra, UKEuropean Regulatory Issues on Quality of life Assessment (ERIQA), Parigi, FranciaGenome Institute of Singapore (GIS), SingaporeIstituto Oncologico della Svizzera ItalianaJohns Hopkins University, USAMassachusetts General Hospital and Harvard Medical SchoolMetastasis Research Lab, University of Liegi, BelgioMRC, Leicester, Gran BretagnaMRC, Londra, Gran BretagnaNational Cancer Institute (NCI), Bethesda and Frederick, MD, USAOspedale San Giovanni, Bellinzona, SvizzeraSouthern Europe New Drug Organization (SENDO), Milano, ItaliaStroma Consortium, IP 6th FP ECSwiss Federal Institute of Technology, Zurigo, SvizzeraTumor Biology and Metastasis Institute of Cancer Research, Sutton, Gran BretagnaUniversity of Cincinnati, USAUniversity of Newcastle, Gran BretagnaUniversity of Pau, FranciaUniversity of Wisconsin, Madison, WI, USAKyoto University, GiapponeWeizmann Institute of Science, Israele11RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNPRESENZA IN COMITATI EDITORIALIAnnals of Oncology (Maurizio D’Incalci)Anti-cancer Drug Design (Maurizio D’Incalci)Attualità in Senologia (Paola Mosconi)British Journal of Cancer (Maurizio D’Incalci)Cancer Chemotherapy and Pharmacology (Maurizio D’Incalci)Chemotherapy (Maurizio D’Incalci)Clinical Experimental Metastasis (Raffaella Giavazzi)Current Opinion in Oncologic, Endocrine and Metabolic Drugs (Maurizio D’Incalci)European Journal of Cancer (Maurizio D’Incalci, Raffaella Giavazzi)Health and Quality of Life Outcomes (Giovanni Apolone, Paola Mosconi)International Journal of Biological Markers (Raffaella Giavazzi)International Journal for Quality in Health Care (Giovanni Apolone)Journal of Ambulatory Care and Management (Giovanni Apolone)Journal of B.U.ON. (Maurizio D’Incalci)Journal of Experimental Therapeutics and Oncology (Raffaella Giavazzi)Journal of Medicine and the Person (Giovanni Apolone)Journal of Preventive Medicine anf Hygiene (Giovanni Apolone)Molecular Cancer Therapeutics (Maurizio D’Incalci)Oncology Research (Maurizio D’Incalci)Tumori (Maurizio D’Incalci)www.senology.it (Paola Mosconi)ATTIVITA' DI REVISIONEAmerican Journal of Pathology, Annals of Oncology, Anticancer Drug Design, Anti-cancerDrugs, Biochemical Pharmacology, British Journal of Cancer, British Journal of Pharmacology,British Medical Journal, Cancer Chemotherapy and Pharmacology, Cancer Detection andPrevention, Cancer Letters, Cancer Research, Carcinogenesis, Chemico-Biological Interactions,Clinical & Experimental Metastasis, Clinical Cancer Research, Cytometry, European Journal ofCancer, Gynecologic Oncology, Health and Quality of Life Outcomes, Intensive Care Medicine,International Journal of Biological Markers, International Journal of Cancer, InternationalJournal for Quality in Health Care, Journal of Ambulatory Care and Management, Journal ofBiological Chemistry, Journal of Biological Markers, Journal of Cell Biochemistry, Journal ofClinical Oncology, Journal of Experimental Therapeutics and Oncology, Journal of Medicineand the Person, Journal of Preventive Medicine and Hygiene, Journal of the National CancerInstitute, Leukemia, Molecular Cancer Therapeutics, Nature Reviews, PharmacoEconomics,Quality of Life Research, Science, TumoriPRESENZA IN COMMISSIONI NAZIONALI E INTERNAZIONALIComitato Etico Centro di Riferimento Oncologico, Aviano, PNComitato Etico Ente Ospedaliero San Paolo, MilanoComitato Etico Istituto Europeo di Oncologia, MilanoComitato Etico Istituto Neurologico Carlo Besta, Milano12RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNMarzo – 1 Aprile 2003, Alghero.Meeting: Sigma-Tau Interdisciplinary approach to cancer treatment in the new millennium,“New cytotoxic compounds acting as inhibitors of Kinases”, 8-9 Maggio 2003, Roma.Congresso: 5th Milan BC Conference, “Prevention and detection in high risk women”, 12Giugno 2003 Milano.Simposio: Novel Approaches for the Discovery of Anticancer Agents, “Marine anticancercompounds” 18-20 Giugno Freiburg, Germania.Simposio: Novel Approaches for the Discovery of Anticancer Agents, “Inhibitors ofangiogenesis and combination therapy in preclinical models”, 18-21 Giugno 2003, Freiburg,Germania.Congresso: XXXI Congresso Nazionale della Società Italiana di Farmacologia, “Antitumorcompounds from marine invertebrates”, 26-29 Giugno 2003, Trieste.Workshop: ASL 12 – la qualità nelle aziende sanitarie, “L’introduzione del sistema di customersatisfaction nell’ASSL di Lodi”, 27 Giugno 2003, Orta (NO).Conferenza: 7th Biennial International Conference. Angiogenesis: Basic Science and ClinicalApplications “Multiple Approaches in anti-angiogenis: combination with chemotherapy”, 3-8Luglio 2003 Creta, Grecia.Congresso: 2° Incontro Regionale dei Giovani Oncologi Meeting ASCO 2003: Le novità, “Leterapie target-oriented: i nuovi meccanismi d’azione”, Viterbo, 4-5 Luglio.Meeting: AACR 94th Annual Meeting, “Role of nucleotide excision repair pathway in Yondelis(ET-743) mechanism of action”, 11-14 Luglio 2003, Washington, USA.Meeting: AACR 94th Annual Meeting “Distribution and urinary excretion of the novel taxanederivative IDN 5390 after single intravenous or protracted oral administration in mice”, 11-14Luglio 2003, Washington, USA.Meeting: AACR 94th Annual Meeting, “Cell cycle perturbations and apoptosis induced byVariolin B. Involvement of p53 status in the cytotoxicity, apoptosis and cell cycle phaseperturbations induced by Variolin B”, 11-14 Luglio 2003, Washington, USA.Meeting: 94th Annual Meeting AACR, "Vascular-targeting activity of the tubulin binding agentZD6126", 11-14 Luglio 2003, Washington, USA.Meeting: 94th Annual Meeting AACR, "Identification of a novel gene modulated by the tumorenvironment in endothelial cells", 11-14 Luglio 2003, Washington, USA.Convegno: Thrombosis and Hemostasis Issues in Cancer, "ZD6126, a tubulin binding vasculartargetingagent", 19-21 Settembre 2003, Bergamo.Meeting: Thrombosis and Hemostasis Issues in Cancer, "Endothelium and Cancer:Identification of a novel gene modulated by the tumor environment ", 19-21 Settembre 2003,Bergamo.14RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNMeeting: Thrombosis and Hemostasis Issues in Cancer, “Issues on Vascular Targeting”, 19-21Settembre 2003.Congresso: 37° Convegno Cardiologia 2003, “Malattie cardiache e conseguenze psicosociali:quali sono le principali determinanti della qualità della vita”, 23 Settembre 2003, Milano.Forum: Building partnerships in breast cancer 2003, “Developments from the advocate’sperspective: local perspective in Italy”, 25 Settembre Copenhaghen, Danimarca.Workshop: “Differential Equations in Biology and Medicine”, “Unraveling the complexity ofcell cycle effects of anticancer drugs”, 29 Settembre – 3 Ottobre 2003, Bedlewo, Polonia.Seminario: I cittadini, la salute comunicata ed i mass media: proposte e valutazioni per lacostruzione di un sistema di qualità, “La salute comunicata dalle istituzioni, ordini professionali,associazioni”, 8 ottobre 2003, Roma.Congresso: VIII Congresso SIPO Società Italiana di Psico-Oncologia, “Esperienze eorganizzazione del volontariato in Italia e all’estero”, 9 ottobre 2003, Catania, Italia.Workshop: Master universitario di II livello in epidemiologia valutativa, “Razionale, metodi eapplicazione della misura della qualità della vita correlata alla salute”, 10 Ottobre 2003, Verona.Workshop: I percorsi diagnostici e terapeutici delle malattie neurologiche dell’adulto e delbambino, “La partecipazione e il nuovo ruolo del malato”, 23 Ottobre 2003, Milano.Congresso: European School of Haematology. Third Interdisciplinary Euroconference onAngiogenesis, "Vascular endothelial growth factor (VEGF) is realeased by matrixmetalloproteinases (MMP-9 and MMP-2) in ovarian carcinoma: implications for ascitesformation", 24-27 Ottobre 2003 Dublino, Irlanda.Congresso: XLV Congresso della Società Italiana di Cancerolgia. "Tumor shed membranevesicles act as carriers of angiogenic factors", 9-12 novembre 2003, Bergamo.Congresso: XLV Congresso della Società Italiana di Cancerologia. "Gene expression profilingreveals differences associated with endothelial cells from different sources andmicroenvironments” 9-12 Novembre 2003, Bergamo.Workshop: “Mathematical Models of Cell Proliferation and Cancer Chemotherapy”,“Heterogeneity of the response of tumor cell populations to drug treatment in vitro”, 10-14Novembre 2003, Mathematical Biosciences Institute (MBI) at Ohio State University, Columbus,Ohio, USA.Meeting: AACR-NCI-EORTC Molecular Targets and Cancer Therapeutics, “Combination ofYondelis (ET-743) and oxaliplatin in experimental ovarian cancer”, 17-21 Novembre 2003,Boston, USA.Meeting: AACR-NCI-EORTC Molecular Targets and Cancer Therapeutics, “Gene expressionprofile of human chondrosarcoma cell line Cs-1 and a variant Cs-1 cell line resistant toYondelis® (ET-743)”, 17-21 Novembre 2003, Boston, USA.Meeting: AACR-NCI-EORTC Molecular Targets and Cancer Therapeutics, “Mechanism ofaction of Variolin B (PM 01220) and its derivate deoxy-Variolin B (PM01218)”, 17-2115RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNNovembre 2003, Boston, USA.Meeting: AACR-NCI-EORTC Molecular Targets and Cancer Therapeutics, “In vitropharmacodynamics of Yondelis (ET-743) and its analogue PM00128”, 17-21 Novembre 2003,Boston, USA.Meeting: AACR-NCI-EORTC Molecular Targets and Cancer Therapeutics, “Enhancement of invivo antitumor activity of cisplatin by combination with the glutathione-interacting DNA minorgroove binder brostallicin: Role of glutathione-S-tranferase expression”, 17-21 Novembre 2003,Boston, USA.Meeting: AACR-NCI-EORTC Molecular Targets and Cancer Therapeutics, “Role ofglutathione-S-transferase in determining the activity of brostallicin in human prostate cancercells”, 17-21 Novembre 2003, Boston, USA.Meeting: AACR-NCI-EORTC Molecular Targets and Cancer Therapeutics, “Molecular andhistopathological evaluation of lack of pixantrone indiced cardiotoxicity as compared todoxorubicin in mice”, 17-21 Novembre 2003, Boston, USA.Meeting: AACR-NCI-EORTC Molecular Targets and Cancer Therapeutics, “Definition of theleast toxic sequence (LTS) and optimal therapeutic dose of Yondelis TM (ET-743; trabectidin)in combination with doxorubicin (doxo) in patients with untreated metastatic soft tissuesarcomas (STS) and advanced pre-treated anthracycline - naive breast cancer patients (ABC)”,17-21 Novembre 2003, Boston, USA.CONTRIBUTI E CONTRATTIAmgem SpA, MilanoAssociazione Italiana per la Ricerca sul Cancro (AIRC)ASL PadovaASL Provincia di LodiAstra Zeneca SpAAstra Zeneca UKBracco Imaging SpA, MilanCentro Cochrane ItalianoChiesi Farmaceutici SpAConsiglio Nazionale delle Ricerche (CNR)CNR-MIURCompagnia San Paolo, TorinoCyclacel Ltd.Eli Lilly Italia SpAElsevier Science Ltd.European Commission -6th Framework ProgrammeEuropean Organization for Research and Treatment of Cancer (EORTC)Fondazione Italiana per la Ricerca sul Cancro (FIRC)Fondazione Nerina e Mario Mattioli OnlusFondo Edo TempiaFondo per gli Investimenti della Ricerca di Base (FIRB)Formenti-Grunenthal, Milano16RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNGlaxoSmithKline, VeronaIndena SpAInnoPept Inc.Institut de Recherche Pierre FabreIstituto Superiore di SanitàKomen Italia OnlusMedacMerck Sharp & DomeMinistero della SanitàNCI –SAIC FrederickNovartis Farma SpANovuspharma SpAPeptichemio AGPfizer Global Research and DevelopmentPharma Mar, SAPharma Mar USA, Inc.Pharmacia Italia SpAPoliclinico di Padova / C.O.R.PTC Pharma AGRegione VenetoSara Bet, RomaSENDO-Tech SrlSigma-Tau SpAUniversità degli Studi di PadovaSELEZIONE PUBBLICAZIONI SCIENTIFICHE APPARSENELL'ANNO 2003Broggini M, Marchini S, Galliera E, Borsotti P, Taraboletti G, Erba E, Sironi M, Jimeno J, Faircloth G, Giavazzi R,D'Incalci MAplidine, a new anticancer agent of marine origin, inhibits vascular endothelial growth factor (VEGF) secretion andblocks VEGF-VEGFR-1 (flt-1) autocrine loop in human leukemia cells MOLT-4.Leukemia 2003; 17: 52-59Gambacorti Passerini C, Zucchetti M, Russo D, Frapolli R, Verga M, Bungaro S, Tornaghi L, Rossi F, Pioltelli P,Pogliani E, Alberti D, Corneo G, D'Incalci MAlpha 1 acid glycoprotein binds to imatinib (STI571) and substantially alters its pharmacokinetics in chronic myeloidleukemia patients.Clin Cancer Res 2003; 9: 625-632Biroccio A, Gabellini C, Amodei S, Benassi B, Del Bufalo D, Elli R, Antonelli R, D'Incalci M, Zupi GTelomere dysfunction increases cisplatin and Ecteinascidin-743 sensitivity of melanoma cells.Mol Pharmacol 2003; 63: 632-638Erba E, Serafini M, Gaipa G, Tognon G, Marchini S, Celli N, Rotilio D, Broggini M, Jimeno J, Faircloth G, BiondiA, D'Incalci MEffect of aplidin in acute lymphoblastic leukaemia cells.Br J Cancer 2003; 89: 763-773Pratesi G, Laccabue D, Lanzi C, Cassinelli G, Supino R, Zucchetti M, Frapolli R, D'Incalci M, Bombardelli E,Morazzoni P, Riva A, Zunino FIDN 5390: An oral taxane candidate for protracted treatment schedules.Br J Cancer 2003; 88: 965-97217RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNMeco D, Colombo T, Ubezio P, Zucchetti M, Zaffaroni M, Riccardi A, Faircloth G, Jose J, D'Incalci M, Riccardi REffective combination of ET-743 and doxorubuucin in sarcoma: preclinical studies.Cancer Chemother Pharmacol 2003; 52: 131-138Donald S, Verschoyle R D, Greaves P, Gant T W, Colombo T, Zaffaroni M, Frapolli R, Zucchetti M, D'Incalci M,Meco D, Riccardi R, Lopez-Lazaro L, Jimeno J, Gescher A JComplete protection by high-dose dexamethasone against the hepatotoxicity of the novel antitumor drug yondelis(ET-743) in the rat.Cancer Res 2003; 63: 5902-5908Mondello C, Chiesa M, Rebuzzini P, Zongaro S, Verri A, Colombo T, Giulotto E, D'Incalci M, Franceschi C, NuzzoFKaryotype instability and anchorage-independent growth in telomerase-immortalized fibroblasts from twocentenarian individuals.Biochem Biophys Res Commun 2003; 308: 914-921D'Incalci M, Colombo T, Ubezio P, Nicoletti I, Giavazzi R, Erba E, Ferrarese L, Meco D, Riccardi R, Sessa C,Cavallini E, Jimeno J, Faircloth G TThe combination of Yondelis and cisplatin is synergistic against human tumor xenografts.Eur J Cancer 2003; 39: 1920-1926Zaffaroni M, Mucignat C, Pecere T, Zagotto G, Frapolli R, D'Incalci M, Zucchetti MHigh-performance liquid-chromatographic assay for the determination of aloe emodin in mouse plasma.J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci 2003; 796: 113-119D'Incalci M, Jimeno J.Preclinical and clinical results with the natural marine product ET-743.Expert Opin Investig Drugs 2003; 12: 1843-1853Marabese M, Vikhanskaya F, Rainelli C, Sakai T, Broggini MDNA damage induces transcriptional activation of p73 by relieving C-EBPalfa repression on E2F1.Nucleic Acids Res 2003; 31: 6624-6632Sabatino M A, Colombo T, Geroni C, Marchini S, Broggini MEnhancement of in vivo antitumor activity of classical anticancer agents by combination with the new, glutathioneinteractingDNA minor groove-binder, brostallicin.Clin Cancer Res 2003; 9: 5402-5408Carrassa L, Broggini M, Vikhanskaya F, Damia GCharacterization of the 5' flanking region of the human chk1 gene. Identification of E2F1 functional sites.Cell Cycle 2003; 2: 604-609Amico D, Barbui A, Barbui A M, Erba E, Rambaldi A, Introna M, Golay JDifferential response of human acute myeloid leukaemia cells to gemtuzumab ozogamicin in vitro: Role of Chk1 andChk2 phosphorylation and caspase 3.Blood 2003; 101: 4589-4597Fratelli M, Minto M, Crespi A, Erba E, Vandenabeele P, Del Soldato P, Ghezzi PInhibition of nuclear factor-B by a nitroderivative of flurbiprofen: a possible mechanism for antiinflammatory andantiproliferative effect.Antioxid Redox Signal 2003; 5: 229-235Mazzini G, Ferrari C, Erba EDual excitation multi-fluorescence flow cytometry for detailed analyses of viability and apoptotic cell transition.Eur J Histochem 2003; 47: 289-298Bertuzzi, A., Faretta, M., Gandolfi, A., Sinisgalli, C., Starace, G., Valoti, G., and Ubezio, P. (2002) Kineticheterogeneity of an experimental tumour revealed by BrdUrd incorporation and mathematical modelling.Bull. Math. Biol., 64:355-384Tomasoni, D., Lupi, M., Bekkal Brikci, F. and Ubezio, P. (2003) Timing the changes of cyclin E cell content in G1 inexponentially growing cells.Exp Cell Res.; 288: 158-16718RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNMeco, D, Colombo., T., Ubezio, P., Zucchetti, M., Zaffaroni, M., Riccardi, A., Faircloth, G., Jose, J., D'Incalci, M.,Riccardi, R. (2003) Effective combination of ET-743 and doxorubuucin in sarcoma: Preclinical studies.Cancer Chemother Pharmacol; 52: 131-138Broggini M, Marchini S, Galliera E, Borsotti P, Taraboletti G, Erba E, Sironi M, Jimeno J, Faircloth GT, Giavazzi R,D'Incalci M. Aplidine, a new anticancer agent of marine origin, inhibits vascular endothelial growth factor (VEGF)secretion and blocks VEGF-VEGFR-1 (flt-1) autocrine loop in human leukemia cells MOLT-4. Leukemia 17: 52-9,2003Micheletti G, Poli M, Borsotti P, Martinelli M, Imberti B., Taraboletti G., Giavazzi R. Vascular-targeting activity ofZD6126, a novel tubulin binding agent.Cancer Res. 63: 1534-1537, 2003Manenti L, Paganoni P, Floriani I, Torri V, Buda A, Taraboletti G, Landoni F, Labianca R, Belotti D, Giavazzi R.Vascular endothelial growth factor, matrix metalloproteinases 2& 9 and tissue inhibitor of metalloproteinases 1& 2 inplasma of patients with ovarian carcinoma.Eur J Cancer, 39: 1948-1956, 2003Giavazzi R., Sennino B., Coltrini D., Garofalo A., Dossi R., Ronca R., Molinari Tosatti M.P., Presta M. Distinct Roleof Fibroblast Growth Factor-2 and Vascular Endothelial Growth Factor on Tumor Growth and Angiogenesis.Am. J. Pathol., 162: 1913-26, 2003Garofalo A., Naumova E., Manenti L., Ghilardi C., Ghisleni G., Caniatti M., Colombo T., Cherrington J.M.,Scanziani E., Nicoletti M.I., Giavazzi R. The Combination of the Tyrosine Kinase Receptor Inhibitor SU6668 withPaclitaxel Affects Ascites Formation and Tumor Spread in Ovarian Carcinoma Xenografts Growing Orthotopically.Clin Cancer Res, 9:3476-3485, 2003Belotti D., Paganoni P., Manenti L., Garofalo A., Marchini S., Taraboletti G., Giavazzi R. Matrix metalloproteinases(MMP9 and MMP2) induce the release of vascular endothelial growth factor (VEGF) by ovarian carcinoma cells:implications for ascites formation.Cancer Res 63: 5224-5229, 2003.Margosio B., Marchetti D., Vergani V., Giavazzi R., Rusnati M., Presta M., and Taraboletti G. Thrombospondin-1 asa scavenger for matrix-associated fibroblast growth factor-2.Blood 102: 4399-4406, 2003.Marchetti M., Vignoli A., Bani M.R., Balducci D., Barbui T. & Falanga A. All-trans retinoic acid modulatesmicrovascular endothelial cells hemostatic properties. Haematologica, 88: 895-905, 2003.Nicoletta Colombo, David Guthrie, Mahesh Parmar, Wendi Qian, Ann Marie Swart, Valter Torri, ChristopherWilliams, writing committee for ICON1 collaborationInternational Collaborative Ovarian Neoplasm Trial 1: A randomised trial of adjuvant chemotherapy in women withearly-stage ovarian cancerJ Natl Cancer Inst 2003; 95: 125-132Olmi P, Crispino S, Fallai C, Torri V, Rossi Francesca, Bolner A, Amichetti M, Signor M, Taino R, Squadrelli M,Colombo Alessandro, Ardizzoia A, Ponticelli P, Franchin G, Minatel E, Gobitti C, Atzeni G, Gava A, Flann M,Marsoni S.Locoregionally advances carcinoma of the oropharynx: Conventional radiotherapy vs. accelerated hyperfractionatedradiotherapy vs. concomitant radiotherapy and chemotherapy. A multicenter randomized trialInt J Radiat Oncol Biol Phys 2003; 55: 78-92M K B Parmar, J A Ledermann, N Colombo, A du Bois, J-F Delaloye, G B Kristensen, S Wheeler, A M Swart, WQian, V Torri, I Floriani, G Jayson, A Lamont, C Tropé, writing committee for ICON4 collaborationPaclitaxel plus platinum-based chemotherapy versus conventional platinum-based chemotherapy in women withrelapsed ovarian cancer: The ICON4/AGO-OVAR-2. 2 TrialLancet 2003; 361: 2099-2106Scagliotti G V, Fossati R, Torri V, Crinò L, Giaccone G, Silvano G, Martelli M, Clerici M, Cognetti F, Tonato M.Randomized study of adjuvant chemotherapy for completely resected stage I, II, or IIIA non-small-cell lung cancerJ Natl Cancer Inst 2003; 95: 1453-146119RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNVercellini P, Aimi G, Busacca M, Apolone G, Uglietti A, Crosignani P GLaparoscopic uterosacral ligament resection for dysmenorrhea associated with endometriosis: Results of arandomized, controlled trialFertil Steril 2003; 80: 310-319Mosconi P, Apolone G, Cattaneo G, Pomodoro L, Garattini SEthics Committees in Italy: A survey on a sample of oncologistsTumori 2003; 89: 189-192Apolone G, Mosconi PKnowledge and opinions about clinical research. A cross-sectional survey in a sample of italian citizensJ Ambul Care Manage 2003; 26: 83-87Melchionda N, Marchesini G, Apolone G, Cuzzolaro M, Mannucci E, Grossi E, Quovadis Study GroupThe Quovadis Study: Features of obese Italian patients seeking treatment at specialist centersDiabetes Nutrition Metabolism 2003; 162: 115-124Mosconi P, Apolone GFixed and dynamic health-related quality of life measurementsJournal Headache Pain 2003; 4: S31-S34Apolone G, Cavuto S, Torri V, La Vecchia CEffectiveness of adjuvant fluorouracil in elderly colon cancer patients: The internal and external validity ofnonrandomized research designJ Clin Oncol 2003; 21: 1892La Vecchia C, Franceschi S, Apolone GDrug distribution and expenditure: The issue of epoetin in ItalyEuropean Journal Public Health 2003; 13: 367Mosconi P, Fossati R, Confalonieri C, Apolone GBreast cancer and quality of life: Controversal points of viewTumori 2003; 2 Suppl.: S53-S54Apolone GClinical and outcome research in oncology. The need of an integrationhttp://www.hglo.com/content/1/1/3 2003Fossati R, Confalonieri C, Apolone G, Cavuto S, Garattini SWhose 'wish bias'? Reply toAnn Oncol 2003; 14: 1154-1155Apolone G, Lattuada LHealth coverage in ItalyJ Ambul Care Manage 2003; 26: 378-382Domenighetti G, D'Avanzo B, Egger M, Berrino F, Perneger T, Mosconi P, Zwahlen M.Women's perception of the benefits of mammography screening: Population-based survey in four countriesInt J Epidemiol 2003; 32: 816-821Remuzzi A, Ene-Iordache B, Mosconi L, Bruno S, Anghileri A, Antiga L, Remuzzi GRadial artery wall shear stress evaluation in patients with arteriovenous fistula for hemodialysis accessBiorheology 2003; 40: 423-430Ene-Iordache B, Mosconi L, Antiga L, Bruno S, Anghileri A, Remuzzi G, Remuzzi ARadial artery remodeling in response to shear stress increase within arteriovenous fistula for hemodialysis accessEndothelium 2003; 10: 95-102Mosconi P, Italian Forum Europa DonnaDeclaration of competing interests is rare in Italian breast cancer associationsBMJ 2003; 327: 34420RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNSELEZIONE PUBBLICAZIONI DIVULGATIVE APPARSENELL'ANNO 2003Polato F, Broggini M.Microsatellite instability and genetic in ovarian cancerMinerva Ginecol 2003; 55: 129-138Mosconi P, Groth N, Apolone G, Niero M, Oprandi N, Belloli A, Mannino SSviluppo e validazione di un questionario di rilevazione della soddisfazione dell'utenza ospedalieraAnn Ig 2003; 15: 341-362Apolone G.Come valutare lo stato di salute soggettivoIn: Stressati o felici? Disagio psicologico e qualità della vita, stato di salute e ambiente di lavoro, Atti Convegno,Milano, 28 febbraio 2003. 2003 : 7-8Mosconi P.Qualità della vitaIn: I tumori del tratto gastroenterico. Masson Italia, Milano; 2003 : 405-412Carducci A, Calamusa A, Mosconi P, Gruppo Leggere Ascoltare la SaluteLa comunicazione di massa sulla salute. Proposta di un sistema di valutazione della qualità del processo diproduzione dell'informazione sulla saluteEducazione Sanitaria e Promozione della Salute 2003; 26: 67-79Mosconi P.Europa Donna: the Italian storyCancer Futures 2003; 2: 227-228ATTIVITA' DI RICERCALaboratorio di Farmacologia AntitumoraleMeccanismo d'azione delle EcteinascidineUn progetto che sta andando avanti da diversi anni riguarda la caratterizzazione dei prodottinaturali di origine marina che posseggono attività antitumorale. In particolare nel 2003 si sonocontinuati gli studi sulla Ecteinascidina-743 (ET-743) e sono iniziati gli studi di alcuni suoiderivati che sono strutturalmente analoghi. Questi studi ci hanno fornito informazioni sullanatura delle relazioni struttura-attività di queste molecole e dall’altra parte ci hanno consentitodi valutare alcune proprietà farmacologiche di potenziale interesse clinico che riguardanodifferenze di meccanismo d’azione e di attività di alcuni analoghi rispetto al compostoparentale.Sono iniziati studi sugli effetti dell’ET-743 e di alcuni suoi derivati sulle perturbazioni indottenel ciclo cellulare in cellule difettive in alcuni meccanismi di riparo al danno al DNA.L’unità ha ottenuto diverse linee cellulari resistenti a questi farmaci di cui si stannocaratterizzando meccanismi molecolari e cellulari.Meccanismo d'azione delle DidemnineUn’altra classe di composti naturali di origine marina studiati di recente sono le didemnine, inparticolare la Diidrodidemnina B (Aplidina). Questo composto ha mostrato di avere una forteattività inibitoria della crescita e una rapida attivazione di apoptosi in cellule di leucemielinfatiche umane. In collaborazione con il laboratorio di farmacologia molecolare e con il21RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNlaboratorio di biologia e terapia delle mestastasi si è scoperto come questo depsipeptide possabloccare il “loop” autocrino VEGF/FLT1 presente in cellule leucemiche. L’induzionedell’apoptosi, almeno in alcune linee cellulari derivate da leucemie umane, sembrerebbe causatodalla mancanza della attivazione del pathway di VEGF la cui secrezione verrebbe bloccata dalfarmaco. Mentre si stanno chiarendo i meccanismi di azione di Aplidina a livello cellulare emolecolare si è condotto uno studio su cellule di leucemia linfoblastica acuta pediatrica,coltivate su un supporto stromale. In queste condizioni Aplidina ha mostrato di essere uncomposto attivo a concentrazioni tra 0.5 e 5 nM, anche in casi resistenti alle terapieconvenzionali. Questi studi hanno fornito il razionale per studi clinici di Aplidina nelle leucemielinfatiche, che si stanno pianificando.Meccanismo d'azione delle VariolineQuesti composti inducono rapidamente apoptosi in diversi tipi cellulari con un meccanismoancora da chiarire. Inoltre causano perturbazioni del ciclo cellulare con un blocco delle cellulenelle fasi G1 e G2 probabilmente dovuti all’inibizione di CDK. E’ di interesse la scoperta chequesti farmaci sono attivi anche su cellule resistenti ad altri prodotti naturali, ad esempio per laiperespressione della proteina Pgp responsabile della “Multidrug resistance”. Da poco sonoiniziati studi che utilizzano tecniche di analisi d’immagine mediante microscopia confocale perindividuare la localizzazione cellulare della Variolina. Sono in corso studi con l’intento diottenere linee cellulari resistenti alle Varioline.Combinazione tra farmaci naturali di origine marina e altri farmaciantitumoraliLe sostanze naturali che si stanno studiando sono state combinate con farmaci noti qualicisplatino e doxorubicina e si sta valutando se vi siano potenziali effetti sinergici, attraversoun’analisi che viene condotta in collaborazione con l’Unità di Biofisica. E’ in programma divalutare combinazioni con inibitori della riparazione del DNA e con nuove sostanze cheagiscono al livello della transduzione del segnale.Il contenuto di DNA nei tumori umani dell’ovaio: correlazioni con la clinicaSono stati pubblicati risultati controversi sul significato prognostico della aneuploidia del DNAnel carcinoma ovarico avanzato (stadio III o IV). Il nostro laboratorio ha riportato uno deglistudi più numerosi della letteratura scientifica indicando che l’aneuploidia nel carcinomaovarico avanzato non è un fattore prognostico indipendente.Sembrerebbe invece che nei tumori ai primi stadi della malattia (I e II), alla ploidia possa essereassegnato un fattore prognostico importante per la prognosi.In un grosso numero di casi di tumori dell’ovaio al I e II stadio verrà misurato, mediantecitometria a flusso, il contenuto di DNA. I dati ottenuti (contenuto di DNA (ploidia) e lapercentuale di cellule nella fase S del ciclo cellulare) verrano correlati, mediante analisimultivariata, con i dati clinici per stabilire l’importanza della ploidia come fattore prognosticonei tumori al I e II stadio dell’ovaio.Elaborazione di dati del ciclo cellulare e di combinazione di farmaciIl gruppo è impegnato in studi teorici e metodologici mirati alla valutazione critica delle attualitecniche di analisi degli effetti farmacologici su popolazioni cellulari eterogenee. Sono staticostruiti diversi algoritmi di calcolo atti a simulare la proliferazione cellulare a differenti livellidi indagine (dalle interazioni molecolari alla crescita dei tumori solidi in vivo) insieme aiprocessi di misura.Il metodo che consente una misura quantitativa degli effetti citostatici e citotossici,separatamente, nelle fasi G1, S e G2M del ciclo cellulare ha ormai raggiunto un maturo stadio disviluppo e può essere applicato fornendo una nuova prospettiva sulle dinamiche della rispostacellulare ai trattamenti farmacologoci.22RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNSono in corso collaborazioni con altri gruppi di ricerca, in cui l’unità si occupa del disegnosperimentale e dell’analisi dei dati in studi in vitro di combinazione di farmaci. In questosettore, sono stati sviluppati diversi programmi di calcolo che consentono un’analisicomparativa dei risultati con i più comuni modelli di interazione farmacologica.Misura delle variazioni del contenuto cellulare di specifiche proteine,durante la progressione nella fase G1, in cellule in crescita esponenzialeE’ stato sviluppato un metodo per misurare il contenuto di particolari proteine in singole celluledurante l’attraversamento della fase G1. Nello studio sono stati misurati i livelli di ciclina E, mala procedura è applicabile a qualsiasi proteina rilevabile in modo specifico con procedure diimmunoistochimica. La sequenza degli eventi in G1 è misurata in cellule in crescitaesponenziale, evitando le problematiche e gli artefatti indotti dalle procedure disincronizzazione.Il metodo si basa su: i) esposizione delle cellule per pochi minuti a bassissime concentrazioni dibromodeoxyuridina (BrdUrd), seguita da raccolta e fissazione delle cellule a diversi tempi; ii)misura contemporanea del contenuto di DNA, BrdUrd e ciclina E mediante citometria a flussomultiparametrica; iii) analisi dei dati basata sulla teoria della proliferazione di popolazioniasincrone, con durata della fasi variabile.Modelling molecolare: variabilità della posizione della transazione G1/SLa durata del ciclo cellulare e delle singole fasi non é fissa, anche all’interno di popolazioni dicellule geneticamente omogenee in condizioni ambientali ottimali per la crescita. In questoprogetto è stata elaborato un modello della transizione tra la fase G1 e la fase di sintesi delDNA. Il modello matematico può essere posto in relazione con alcuni dati sperimentali dicitometria a flusso.Applicazione di modelli matematici nei tumori in vivo: eterogeneità dellacinetica di proliferazione in un tumore sperimentaleIn questo progetto collaborativo, è stato sviluppato un metodo per l’analisi della cinetica diproliferazione cellulare in tumori sperimentali in vivo, basata su dati di citometria a flussobiparametrica DNA-BrdUrd, ricavati a diversi tempi successivamente a una somministrazionei.p. di BrdUrd e interpretati con modelli matematici.Farmacocinetica e legame alle proteine plasmatiche del glivecL’unità ha messo a punto diverse metodologie analitiche sensibili e specifiche mediante HPLC eHPLC accoppiata a spettrometria di massa per lo studio metabolico e farmacocinetico di nuovifarmaci antitumorali. Questi metodi sono stati applicati per valutare in cellule tumorali l’uptake,la ritenzione e l’efflusso di farmaci, sia per valutare la distribuzione tissutale e i parametrifarmacocinetici in animali portatori di tumore e sia in liquidi biologici ottenuti da pazienti chepartecipano alle iniziali sperimentazioni cliniche di questi farmaci.Fra i farmaci studiati vi è Glivec, l’inibitore tirosino chinasico con specificità per Abl e c-kit.Questo farmaco ha indubbiamente rappresentato un grande progresso terapeutico per la terapiadella leucemia mieloide acuta e per il sarcoma gastrointestinale. Vi sono però evidenzesperimentali, più di recente anche cliniche, secondo le quali i livelli plasmatici della proteina difase acuta alfa1 glicoproteina acida (AGP) siano rilevanti nell’influenzare l’uptake tissutale e lafarmacocinetica del farmaco. In studi preclinici è stato possibile identificare dei potenzialimetodi per aumentare la quota libera, non legata ad AGP, di Glivec (attraverso l’impiego diantibiotici che legano AGP con alta affinità), quindi potenzialmente aumentarne l’attivitàantitumorale.Questi metodi potrebbero portare a delle applicazioni cliniche.23RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNFarmacocinetica di ET-743 e aplidinaIn stretta collaborazione con altri gruppi del laboratorio si sono condotti studi metabolici efarmacocinetici di due prodotti marini quali ET-743 e Aplidina. Per questi due composti si sonostudiati l’uptake cellulare in linee sensibili resistenti e la distribuzione tissutale in xenografts.Inoltre in collaborazione con diversi gruppi clinici che in Europa e in Canada stannosperimentando questi due farmaci si sta valutando la farmacocinetica clinica di questi dueprodotti. Sia a livello preclinico che a livello clinico si stanno valutando le interazionifarmacocinetiche fra questi farmaci e farmaci correntemente utilizzati nella terapia dei tumori,quali antracicline e composti di coordinazione del platino.Farmacocinetica di nuovi derivati taxaniciSi sono condotti diversi studi a livello preclinico che riguardano dei nuovi derivati taxanici chesi differenziano da quelli convenzionali sia dal punto di vista chimico che per la loro attivitàbiologica. Per due di questi composti si sono valutate le proprietà di biodisponibilità doposomministrazione orale. Essi hanno mostrato attività biologica anche in tumori poco suscettibiliad altri taxani che suggeriscono un potenziale interesse clinico. La possibilità che questi farmaciagiscano attraverso un meccanismo d’azione antiangiogenetico, messo in luce dal Laboratorio diBiologia e Terapia delle Metastasi, richiede necessariamente la valutazione farmacocinetica efarmacodinamica di schemi di trattamento cronici dopo prolungata somministrazione.Farmacocinetica clinica di gimatecanUno studio condotto in collaborazione con il SENDO ci ha portato a definire le proprietà difarmacocinetica clinica di un nuovo derivato della camptotechina (Gimatecan). Gli studi ancorain corso mostrano che questo composto è rapidamente assorbito dopo somministrazione oralecon una lunga emivita che può garantire un’esposizione molto lunga al farmaco. Dati difarmacocinetica saranno correlati con i dati di tipo clinico (tossicità e attività antitumorale) percomprendere le proprietà di questo nuovo farmaco. Sono in corso studi relativi al metabolismodi Gimatecan con l’obiettivo di identificare e quantificare metaboliti del farmaco e caratterizzarela loro attività farmacologica.Attività antitumorale di nuovi farmaci e di combinazioni di farmaciValutazione dell’attività antitumorale e della tossicità di nuovi farmaci antitumorali “targetspecifici” ( es. inibitori della CDK) farmaci antitumorali convenzionali e combinazioni difarmaci in tumori del topo e del ratto e in tumori umani trapiantati in topi immuno-deficenti.Laboratorio di Farmacologia MolecolareOncosoppressori p53 a p73La proteina p73, è noto essere presente in diverse isoforme, derivanti da splicing alternativi acarico della parte C-terminale. Oltre a queste isoforme, ne esiste una, chiamata DNp73, chemanca invece del dominio di transattivazione situato nella parte N-terminale della proteina.Questa forma DN, ha la caratteristica di essere trascritta e tradotta da un promotore diverso daquello utilizzato dalla forma intera di p73 (TAp73). I meccanismi di regolazione delle dueisoforme, quindi sono differenti. Poiché la forma DN di p73 ha funzioni antagonizzanti quelle dip53 e p73, e poiché in diversi tumori umani si ritrovano livelli elevati di questa particolareisoforma, abbiamo generato sistemi cellulari isogenici contenenti la forma DNp73 sotto ilcontrollo di un promotore inducibile. Partendo da una linea di carcinoma del colon esprimenteuna p53 wt (HCT116) abbiamo ottenuto due cloni, DN3 e DN14, che in condizioni basaliesprimono bassissimi livelli di DNp73, mentre dopo aggiunta di tetraciclina, raggiungono livelli10 (DN3) e 80 (DN14) volte superiori. Per gli esperimenti successivi è stato anche ottenuto unclone controllo, HCT8, che è stato ottenuto transfettando le cellule con gli stessi costrutti ma24RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNsenza il cDNA codificante per DNp73.I cloni, come atteso, esprimono anche la forma DNp73 a livello proteico dopo induzione e intest di attività funzionale hanno mostrato la capacità di bloccare l’attività trascrizionale di p53. Itre cloni (DN3, DN14 e HCT8), crescono in vitro, sia in assenza che in presenza di tetraciclinain maniera simile, e quindi rappresentano un modello particolarmente valido per studiare glieffetti della forma DN sulla risposta ai farmaci e sulla crescita in vivo.Meccanismo di azione di nuovi farmaci antitumoraliE’ stata valutata l’attività antitumorale di un nuovo composto in grado di legare il solco minoredel DNA (brostallicina) in combinazione con altri farmaci antitumorali. Brostallicina ha lacaratteristica particolare di essere attivata dopo legame con glutatione in una reazionecaratterizzata dalla glutatione-S-transferase, in particolare dalla forma pi. Questa caratteristica,che la differenzia da molti farmaci antitumorali convenzionali (che spesso in presenza diGST/GSH riducono la loro attività) può rappresentare un vantaggio nei trattamenti dicombinazione. Infatti per alcuni dei farmaci antitumorali attualmente impiegati in clinica, lapresenza di alti livelli di GST/GSH è associata a una detossificazione degli stessi e quindi a unadiminuzione dell’attività antitumorale. Alcune cellule tumorali sviluppano resistenza a questifarmaci proprio attraverso un aumento dei livelli di GST/GSH. Inoltre, alcuni farmaci come peresempio il cisplatino, sono in grado di indurre un aumento dei livelli di GST. Abbiamoverificato che in cellule coltivate in vitro il trattamento con cisplatino fosse in grado di indurre ilivelli di GST e abbiamo osservato che dopo 48 dal trattamento si ha un significativo aumentodi RNA e proteina. Sono quindi stati disegnati due protocolli di combinazione in vivo tracisplatino e brostallicina, uno che prevedeva un trattamento con cisplatino seguito, dopo 48 ore(tempo in cui i livelli di GST sono più elevati) da brostallicina (schema A) e l’altro in cuibrostallicina veniva somministrata prima di cisplatino (schema B).I risultati ottenuti mostrano che mentre con lo schema B si ha un effetto additivo di attività, conlo schema A si è ottenuto un significativo aumento di attività, superiore alla somma delleattività dei singoli farmaci.Sono anche state sperimentate combinazioni in vivo di brostallicina con altri farmaciantitumorali come taxotere, CPT-11 e doxorubicina, e in tutti i casi abbiamo osservato unabuona tollerabilità della combinazione (senza additività di tossicità) e un effetto di attivitàantitumorale almeno uguale o superiore alla somma delle attività dei singoli farmaci.G2 checkpoint del ciclo cellulareIl passaggio dalla fase G2 del ciclo cellulare alla mitosi è governato da proteine checkpoint cheverificano che non siano avvenuti errori prima della divisione cellulare. Le principali proteinecoinvolte in questi meccanismi sono chk1 e chk2. Queste serin-treonin chinasi, devono essereattivate da sensori del danno al DNA mediante modificazioni post-traduzionali. Un altroimportante meccanismo di regolazione è a livello trascrizionale. Uno dei progetti svolti nelcorso del 2003 ha riguardato proprio la caratterizzazione funzionale della trascrizione del genechk1. E’ stato isolato e sequenziato un frammento di DNA genomico comprendente la parte in5’ rispetto all’inizio di trascrizione ed è stata valutata l'attività promotrice della trascrizione ditale frammento. Dati precedenti del nostro laboratorio hanno evidenziato che esiste un loopregolatorio tra p53 e chk1. In particolare, come meccanismo di ripristino del ciclo cellulare doporiparazione del danno, p53 induce una down-regolazione del gene chk1.Abbiamo quindi valutato se il frammento genomico contenente il promotore di chk1 fosseresponsivo a p53 e siamo riusciti a identificare un frammento genomico minimo che vieneregolato negativamente da p53. L’analisi dell’intero frammento genomico di 10Kb ci hapermesso anche di evidenziare come la trascrizione di chk1 sia sotto il controllo di un altroimportante fattore trascrizionale come E2F1, che è fondamentale per la trascrizione di geniimportanti per la fase S del ciclo cellulare e, tra gli altri, per la trascrizione di p73. Il promotoredi chk1 contiene almeno 4 siti per E2F1 e il nostro studio ha permesso di verificare che, in25RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNcellule, E2F1 è uno dei principali fattori che regolano la trascrizione di E2F1, e cellule cheesprimono E2F1 mutato hanno una attività trascrizionale di chk1 ridotta. Questo potrà avereimportanti implicazioni per la modulazione di chk1 e fa presumere che non solo ci sia un looptra p53 e chk1, ma che vi possa anche essere un meccanismo di regolazione comune tra p73 echk1.Caratterizzazione di nuovi potenziali geni oncosoppressoriSono continuati gli studi di caratterizzazione del gene DRAGO attraverso la costruzione dimutanti di delezione sia nella parte carbossi che amino terminale. Il gene DRAGO codifica peruna proteina di 393 aminoacidi. Sulla sequenza di cDNA sono stati costruiti per delezionesuccessiva di circa 12-13 aminoacidi, 6 deleti al N terminale e 6 al C terminale. I diversi deletisono stati clonati sia in vettori di espressione batterici che in vettori di espressione eucariotici.In cellule batteriche, dove non si riesce ad avere espressione della proteina totale, abbiamodimostrato che le proteine mancanti dei primi o degli ultimi aminoacidi potevano essereespresse senza causare effetti di soppressione della crescita. Analogamente, transfettando idiversi costrutti codificanti per questi mutanti in cellule di carcinoma ovarico umano, abbiamopotuto evidenziare che i deleti mancanti degli ultimi 26 aminoacidi possono essere espressi incellule umane, indicando che la parte C-terminale della proteina potrebbe avere una importantefunzione di regolazione o interazione con altre proteine, fondamentale per la funzione dellaproteina stessa. Sulla base della comparazione della sequenza proteica di DRAGO umano conquella di altre specie, sono inoltre stati evidenziati dei dominii particolarmente conservatidurante l’evoluzione e si sta cercando di generare e caratterizzare la funzione di questi dominiinon riscontrabili in atre proteine note.Analisi di espressione genicaLo studio di espressione genica in cellule trattate con il farmaco ET-743 è stato indirizzato allavalutazione dell’espressione genica in cellule selezionate per la resistenza al farmaco stesso. Dadue diverse linee cellulari, le Igrov-1 di derivazione ovarica e le CS-1 derivate dacondrosarcoma, sono state ottenute due linee resistenti a ET-743, entrambe con un fattore diresistenza di 4-5. In queste cellule è stato valutato come era modificato il pattern di espressionegenica tra cellule resistenti e cellule parentali sensibili e il pattern ottenuto nelle due lineecellulari confrontato. L’analisi di espressione genica si è focalizzata sull’identificazione di queigeni o di quei pattern molecolari che presentavano una simile alterazione di espressione nelledue linee resistenti rispetto alle loro linee parentali. Da questa analisi è emerso che vi sono 70geni con espressione alterata in entrambe le linee di cui circa 20 presentano una espressionemaggiore nelle linee resistenti rispetto alle parentali e 50 una espressione inferiore. Stiamoattualmente caratterizzando questi geni per capire se e quali possono essere rilevanti per ilmeccanismo di azione di questo promettente farmaco antitumorale.Caratterizzazione molecolare del carcinoma dell’ovaioE’ partito un importante studio volto a caratterizzare il profilo di espressione genica in pazienticon carcinoma ovarico stadio I. Il numero di pazienti con questo tipo di tumore a questo stadio èrelativamente basso ed è difficile ottenere un numero di campioni sufficienti, principalmenteperché questo tipo di tumore viene spesso diagnosticato quando è in stadi più avanzati. Graziealla collaborazione decennale con il gruppo di chirurghi dell'ospedale di Monza diretto dal prof.Mangioni, abbiamo potuto raccogliere circa 80 casi di pazienti con tumore allo stadio I e sulpezzo operatorio ottenuto abbiamo estratto RNA che è stato utilizzato per l’analisi diespressione genica, valutando per ciascun campione ottenuto da singolo paziente l’espressionedi 12000 geni. I dati sino ad ora ottenuti su una casistica di circa 50 pazienti indicano che vi èuna relativa omogeneità di pattern di espressione genica tra i diversi pazienti e che una primaanalisi di cluster evidenzia alcuni pazienti che presentano profili di espressione diversi. Questidati, analizzati con programmi in grado di gestire e confrontare un così alto numero di dati,26RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNverranno analizzati e valutati insieme alle caratteristiche cliniche dei pazienti da cui i tumorisono stati prelevati. Lo studio si prefigge di evidenziare quei profili di espressione che possonoaiutare a definire lo stato di rischio del paziente e a definire le modalità di trattamento (senecessarie).Laboratorio di Biologia e Terapia delle Metastasi TumoraliRegolazione fisiologica dell'angiogenesiL’angiogenesi, la formazione di vasi sanguigni da vasi preesistenti, gioca un ruolo rilevantenella progressione tumorale. Questo processo è regolato da un delicato bilancio tra fattori proedanti-angiogenici. Ci occupiamo da tempo dello studio dei fattori endogeni che regolanol'angiogenesi. Nel 2003 abbiamo proseguito nello studio della trombospondina-1 (TSP-1), uninibitore endogeno dell'angiogenesi, il cui legame diretto ai fattori angiogenici, in particolareFGF-2, ne inibisce l'interazione con la matrice extracellulare, alterandone la biodisponibilità el'attività. In particolare ci occupiamo dello studio del rapporto struttura-funzione dei diversi sitiattivi della TSP-1.Abbiamo inoltre continuato lo studio sul ruolo delle metalloproteinasi della matrice (MMPs),nell'angiogenesi e nella progressione tumorale, dimostrando che MMP9 induce il rilascio diVascular Endothelial Growth Factor (VEGF), un fattore che stimola l’angiogenesi e lapermeabilità dei vasi, e che questo fenomeno è legato alla formazione di ascite associata allaprogressione del carcinoma ovarico. Ora lo studio proseguirà per identificare da un lato ilmeccanismo del rilascio di VEGF mediato da MMPs da parte di cellule tumorali e dall’altro lacapacità di VEGF di stimolare l’espressione di geni coinvolti nei processi invasivi e metastatici.Infine, sempre nell'ambito delle MMPs, intendiamo studiare il ruolo del rilascio di MMPs comecomponenti di vescicole di membrana, nel mediare l'angiogenesi tumorale.Espressione genica nell’endotelio associato ai tumori: ruolo svolto dalmicroambienteCapire le differenze qualitative e funzionali tra le cellule endoteliali (EC) dei vasi tumorali e deivasi normali potrebbe consentire l’identificazione di marcatori selettivi dell’endotelio vascolareassociato a stati patologici e/o di nuove molecole bersaglio per lo sviluppo di interventifarmacologici. Abbiamo analizzato il profilo di espressione genica di cellule endoteliali isolateda carcinomi ovarici e da ghiandole surrenali, esposte o no ad un ambiente"angiogenico/tumorale" ricostituito in vitro. Tutto ciò utilizzando la tecnologia dei microarray(Affymetrix HG U95A) che ci ha pemesso di studiare l'espressione di circa 12000 geni. Nel2003 il proseguo dello studio ha comportato la valutazione dei risultati e l’estensione ad altrepreparazioni di EC. Abbiamo confermato che i) l’ambiente è in grado di modulare l’espressionegenica; ii) che questo effetto è indipendente dall’origine delle EC; iii) che le EC isolate datumore differiscono dalle EC isolate da tessuto normale.Modelli preclinici: ruolo di fgf2 e vegf nella crescita e vascolarizzazionedel tumoreL’angiogenesi tumorale è controllata da molteplici fattori prodotti dal tumore stesso edall’ospite. Sono state generate cellule di carcinoma dell’endometrio umano (HEC-1-B) chedifferiscono per espressione FGF2 (la cui espressione è sotto il controllo del promotoretetraciclina-sensibile, tet-off) e/oVEGF (transfettate con cDNA antisenso per VEGF).L'espressione simultanea di FGF2 e di VEGF dà origine a tumori a rapida crescita nel toponudo, caratterizzati da alta densità vascolare. La ridotta espressione di FGF2 provocaun’inibizione significativa della crescita tumorale, associata a diminuzione nel numero edimensioni dei vasi sanguigni. La mancata espressione di VEGF provoca non solo una simileriduzione di densità vascolare, ma questa è associata a diminuzione della maturazione e27RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNfunzionalità vascolare con conseguente riduzione del carico tumorale, aumento d’ipossia enecrosi. Questi risultati dimostrano che FGF2 e VEGF stimolano la vascolarizzazione in modosinergico ma con effetti distinti sulla funzionalità del vaso e sulla sopravvivenza del tumore.Successivamente è stato visto che l’aggiunta di chemioterapici inibisce ulteriormente la crescitadel tumore. Sono pertanto in corso studi volti a valutare il ruolo dell’espressione dei diversifattori di crescita nella risposta a terapie di combinazione con chemioterapici e inibitori selettividell’angiogenesi.Terapia antiangiogenica e antivascolareTerapie antineoplastiche dirette contro il sistema vascolare dei tumori possono essere disegnateseguendo due diverse strategie. La terapia antiangiogenica è volta a prevenire la formazione deinuovi vasi, mentre la terapia antivascolare ha lo scopo di distruggere selettivamente i vasi giàformati nei tumori. Nel 2003 abbiamo proseguito nello studio di composti anti-angiogenici, conparticolare interesse per l'analisi del meccanismo di azione del taxano IDN 5390, un compostoanalogo al paclitaxel. Tra i composti anti-vascolari abbiamo studiato le proprietà di ZD6126, uncolchinolo che causa la depolimerizzazione dei microtubuli. ZD6126 in vitro causa ilriarrangiamento del citoscheletro e la retrazione delle cellule endoteliali ed altera l’integrità distrutture simili a capillari. In vivo, ZD6126 danneggia la rete di capillari in un modellosperimentale di neoangiogenesi. Il trattamento con ZD6126 induce necrosi della massa tumoralein modelli di neoplasie sperimentali, a conferma della sua attività antivascolare e quindipotenzialmente antineoplastica.Terapia antiangiogenica in combinazione alla chemioterapiaSi ritiene che trattamenti basati su inibitori dell’angiogenesi possano dare il miglior risultato incombinazione con terapie convenzionali. Quest’aspetto è stato esplorato con SU6668, uninibitore dei recettori tirosin cinasici VEGFR2, FGFR1 e PDGFR in combinazione conpaclitaxel, su modelli di carcinoma ovarico umano. Il trattamento con SU6668 inibiva laformazione d’ascite e la disseminazione del tumore nella cavità peritoneale del topo nudo. Larisposta era accompagnata da una diminuzione dei fattori di crescita solubili. L’aggiunta diquesto trattamento al paclitaxel ne migliorava in modo significativo l’indice terapeutico, anchecon dosaggi bassi-non tossici del chemioterapico. Questi risultati confermano il razionale perl'evoluzione clinica di terapie di combinazione rivolte a bersagli molteplici in questo tipo dineoplasia.Marcatori tumorali circolanti in pazienti con carcinoma ovaricoUna delle applicazioni cliniche emergenti è la misura di proteine circolanti associateall’angiogenesi ed il loro utilizzo come marcatori di prognosi o come end-points nelle terapiecon farmaci anti-angiogenici. Abbiamo misurato i livelli di VEGF, MMP2, MMP9, TIMP1 eTIMP2 nell’ascite e nel plasma di pazienti affette da carcinoma ovarico, patologieginecologiche benigne e volontari sani. Tali parametri sono stati correlati con diversi parametriclinici. I risultati ottenuti mostrano che i livelli plasmatici di VEGF, MMP9, TIMP1 e TIMP2nelle pazienti con carcinoma ovarico sono significativamente più alti che negli individui sani onelle pazienti con patologie ginecologiche benigne. Inoltre alti livelli di TIMP1 sono associatiad una minor sopravvivenza.Alterazioni molecolari in risposta alla terapiaComprendere le basi molecolari della risposta terapeutica riveste un’importanza fondamentaleper lo sviluppo di nuovi interventi farmacologici. Sono stati utilizzati modelli sperimentali dicarcinoma ovarico sensibili/resistenti al paclitaxel per studiare alterazioni dell’espressionegenica causate dal chemioterapico. Utilizzando la tecnologia di cDNA microarray (metodica cheoffre il vantaggio di valutare l’espressione di migliaia di geni contemporaneamente) abbiamoosservato che, nei tessuti tumorali che rispondevano alla terapia, la somministrazione del28RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNfarmaco modifica il livello di espressione di geni coinvolti in varie funzioni biologiche, qualiregolazione del ciclo cellulare, proliferazione, apoptosi, trascrizione genica, trasduzione delsegnale e metabolismo cellulare. La modulazione di due geni rappresentativi è stata valutata,tramite analisi di Northern blot, in una serie di tumori sperimentali con differente grado disensibilità al paclitaxel. I risultati ottenuti hanno confermato che la loro modulazione correlacon la sensibilità al paclitaxel. Inoltre abbiamo osservato che la modulazione di uno di tali geniera in accordo con la perturbazione del ciclo cellulare che si osservava dopo lasomministrazione del farmaco.Laboratorio di Ricerca Clinica OncologicaCarcinoma del colon-rettoGilda è uno studio randomizzato di confronto tra follow-up intensivo e follow-up minimalistanel carcinoma colorettale (stadio B2-C di Dukes mod. sec. Aster e Coller) dopo trattamento conintenti curativi. Al momento sono entrati in studio oltre 1000 pazienti. Si prevede la chiusura alraggiungimento di 1200 pazienti.Carcinoma ovaricoICON5: è un trial randomizzato che confronta il trattamento standard carboplatino+paclitaxelcon quattro diversi schemi di trattamento: triplette di farmaci (gemcitabina o doxorubicinaliposomale con carboplatino e paclitaxel) o combinazioni sequenziali di doppiette di farmaci(gemcitabina o topotecan con carboplatino seguite da carboplatino e paclitaxel) in pazienti concarcinoma epiteliale dell’ovaio. Il disegno adottato è il più efficiente per condurre unavalutazione sistematica e simultanea di una serie di regimi chemioterapici promettenti,eliminando la necessità di confronti indiretti tra studi. Lo studio è in corso negli Stati Uniti, inAustralia, Nuova Zelanda ed in Europa, dove è coordinato dal Medical Research Council in UKe dall’Istituto ‘Mario Negri’ in Italia.In questo studio, attualmente in pieno svolgimento, verranno randomizzate circa 5000 pazienti.Cervice uterinaLo studio SNAP02 ha l’obiettivo di verificare l’attività e il profilo di tossicità della doppiettaPaclitaxel-Cisplatino (TP), nei confronti del braccio di riferimento Paclitaxel-Ifosfamide-Cisplatino (TIP). Obiettivo primario di questo studio è la valutazione dell'attività dei trattamentiproposti (TIP vs TP), nelle pazienti affette da cervicocarcinoma epidermoide localmenteavanzato, in termini di risposte patologiche complete (CR) o parziali ottimali (PR1). Lo studiosi è recentemente concluso e si attendono per la fine dell’anno i primi dati sulla rispostaterapeutica.Carcinoma dell'endometrioLo studio ILIADE è uno studio multicentrico a più protocolli sulla modulazionedell’isterectomia, sul ruolo della linfadenectomia e la terapia adiuvante nel trattamento delcarcinoma dell’endometrio.Una coorte di pazienti affette da carcinoma endometriale operabile è seguita prospetticamente ea tali pazienti è offerto di partecipare a uno o più studi controllati. Sono previsti quattro studidiversi: 1) Chirurgia: confronto tra due diverse modalità di isterectomia (PIVER1 vs. PIVER2)con lo scopo di compararne il profilo rischio/ beneficio. 2) Chirurgia: confronto tra utilizzo omeno della linfadenectomia per verificare il ruolo terapeutico della rimozione estensiva esistematica dei lonfonodi retroperitoneali 3) Chemioterapia: pazienti con presenza di fattori dirischio elevato per la recidiva possono essere randomizzate a radioterapia+chemioterapia vs.sola radioterapia. 4) Radioterapia: pazienti con presenza di fattori di rischio intermedio per larecidiva possono essere randomizzate a radioterapia vs. follow-up. Gli studi sono ancora incorso e termineranno alla fine del 2003.29RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNCarcinoma mammarioIl laboratorio è responsabile del coordinamento e dell’analisi statistica di due studi. Il primo èuno studio osservazionale di pazienti con tumore della mammella operato. L’obiettivo è ottenereinformazioni generali su prognosi e pattern di recidiva di queste pazienti osservate in ospedaliitaliani. Inoltre si otterranno dati sulle modalità di stadiazione, trattamento e follow-up dellepazienti seguite in italia.Il secondo è un trial controllato sulla prima linea di trattamento di pazienti con tumoremammario metastatico. Si confronterà il letrozolo da solo vs. letrozolo successivo a una lineachemoterapica vs. il letrozolo concomitante a una chemoterapia. Lo studio, internazionale, èattualmente in corso in Australia e in vari Paesi europei.Laboratorio di Ricerca Translazionale e di Outcome in OncologiaAnemia nei pazienti anzianiDurante il 2003 è stato attivato uno studio per valutare la prevalenza e l’impatto dell’anemia neisoggetti anziani con o senza tumore. Scopo principale dello studio è definire l’impattodell’anemia su diversi indicatori di Outcome riportati dal paziente, ad esempio gli aspetticognitivi e funzionali, valutare la qualità della vita e il tipo di trattamento farmacologicoprescritto e il suo effetto sullo stato di salute. Durante il 2003 sono stati contattati 7000 dei 9000soggetti eleggibili residenti a Biella. Circa il 40% dei soggetti ha partecipato alla prima fase cherichiedeva un esame del sangue, mentre circa 400 soggetti hanno accettato di sottoporsi adun’intervista vis-à-vis in una seconda fase, al fine di valutare il differente impatto dell’anemia.Lo studio, che sarà completato nel 2004, è condotto in collaborazione con il laboratorio diNeuropsichiatria Geriatrica (dr. Ugo Lucca).Il dolore nei malati di cancroUna percentuale variabile tra il 60% e l’80% dei pazienti con tumore in stadio avanzatonecessita di terapie del dolore. Contrariamente alla disponibilità di efficaci trattamentiantidolorifici così come codificati dal WHO, parecchi studi documentano uno scarso trattamentodel dolore, soprattutto in Italia dove diversi ostacoli limitano l’uso di oppiacei. Al fine diincrementare la qualità e l’efficacia delle terapie del dolore nei malati di cancro, nel 2003 è statodelineato un progetto di ricerca a diverse fasi. Lo studio implica tre attività: a) programmiinformativi ed educativi per pazienti e medici sulla conoscenza e consapevolezza del temadolore e sui relativi trattamenti, b) conduzione di studi di valutazione farmacologica per megliocaratterizzare il profilo farmacocinetico degli oppioidi, c) valutazione attraverso uno studioclinico randomizzato delle differenti strategie farmacologiche su differenti misure di Outcome,nel contesto di un disegno “comprehensive cohort” che accresca la generalizzazione dello studioclinico. Le fasi a) e b) saranno completate nel 2004, mentre l’avvio della fase c) è prevista per lafine dell’anno.Costruire un’alleanza strategica tra associazioni di pazienti e cittadini ecomunità medico scientificaNel giugno 2003 è stato varato un progetto riguardante un programma di ricerca che coinvolge iconsumatori e le loro associazioni. Il progetto, che raggruppa in uno sforzo collaborativol’Istituto Mario Negri, il Centro Cochrane Italiano (www.cochrane.it) e l’agenzia di giornalismoscientifico Zadig (www.zadig.it) ha come obiettivo l’aumento della qualità e la quantitàdell’informazione basata sull’evidenza per pazienti e cittadini, al fine di incrementare il ruolodei cittadini nella ricerca e nelle decisioni cliniche. Al momento, un Comitato Scientificomultidisciplinare è stato organizzato per discutere esaurientemente i differenti stadi del progetto.Molti incontri sono stati organizzati e sono iniziate due fasi, indipendenti ma complementari. La30RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNprima fase riguarda un’indagine che vuole valutare se e quanto le associazioni di pazienti e leloro federazioni siano coinvolte in programmi di ricerca e nelle attività educative con le societàscientifiche e il sistema sanitario. La seconda fase prevede la messa a punto di un portale rivoltoai cittadini e alle loro associazioni.Progetto Europa DonnaEuropa Donna raccoglie gli interessi delle donne europee e sviluppa iniziative con le autoritàlocali e nazionali, puntando l’attenzione sul bisogno di aumentare i programmi e i servizisanitari essenziali nella lotta contro il tumore al seno. Europa Donna raccoglie le esperienze e leconoscenze di 32 paesi europei impegnati nella lotta al tumore al seno, ridistribuendo leinformazioni acquisite. Durante il 2003 le attività sono state finalizzate alla presentazione del“rapporto finale sul tumore al seno nell’unione europea (2002/2279 a5-0159/2003)”,all’organizzazione del 6° congresso pan-europeo dal titolo “uguali standard di qualità per tutti”e del terzo corso di aggiornamento rivolto a rappresentanti di associazioni. Inoltre è statacoordinata dall’Istituto Mario Negri un’indagine sui membri delle associazioni facenti capo aEuropa Donna e a Reach to Recovery (questa associazione aiuta le donne colpite da tumore dapiù di 30 anni).Gruppo italiano di lavoro per la diagnosi anticipata (gilda) nel tumorecolorettaleAll’interno dello studio randomizzato multicentrico gilda coordinato dal laboratorio di ricercaclinica oncologica e in parte gestito dal laboratorio per la ricerca translazionale e di outcome inoncologia, è proseguita l’attività di monitoraggio della valutazione della qualità di vita deipazienti. i dati raccolti saranno oggetto di analisi economico-sanitarie in accordo con ilprotocollo dello studio. alla fine del 2003 sono stati randomizzati 980 pazienti e la chiusuradello studio è prevista per la fine del 2004.Altre attivitàNel corso del 2003 sono progredite altre attività riguardo la ricerca translazionale in oncologia.L’attenzione si è sviluppata sul processo di trasferimento delle informazioni dalla ricercapreclinica alla pratica clinica. La maggior parte delle attività ha implicato la raccolta dimateriale biologico e di dati da esso derivati e la loro archiviazione in database complessi;inoltre sono state sviluppate altre applicazioni informatiche per rendere possibile il controllo dinumerosi dati sia biologici sia clinici rispettando norme e regole sulla sicurezza e riservatezza.tali attività sono state condotte in collaborazione con il laboratorio di epidemiologia dell’istitutomario negri, il Laboratorio di Farmacogenomica tumorale presso il Fondo Edo Tempia di Biellae il Sendo di Milano.31RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMN32RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNDIPARTIMENTO AMBIENTE E SALUTEPERSONALECapo DipartimentoRoberto FANELLI, Dr.Sci.Biol.Laboratorio di Biochimica AnaliticaCapo LaboratorioChiara CHIABRANDO, Dr.Sci.Biol.Laboratorio di Chimica e Tossicologia dell’AmbienteCapo LaboratorioEmilio BENFENATI, Dr.Chim.Laboratorio di Spettrometria di MassaCapo LaboratorioEnrico DAVOLI, Dr.Sci.Prod.Anim.Laboratorio di Tossicologia MolecolareCapo LaboratorioLuisa AIROLDI, Dr.Farm.Centro di Salute Ambientale “Gennaro Paone” (Consorzio Mario Negri Sud)Capo LaboratorioDomenico ROTILIO, Dr.Chim.Unità del DipartimentoUnità di Tossicologia degli AlimentiCapo UnitàEttore ZUCCATO, Dr.Med.Chir.33RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNINTRODUZIONE ALLE ATTIVITA' DEL DIPARTIMENTOIl Dipartimento Ambiente e Salute è stato creato per coordinare l'attività e le interazioni tracinque laboratori e una unità, le cui attività riguardano vari aspetti della ricerca ambientaleall'interno dell'Istituto Mario Negri e del Consorzio Mario Negri Sud. Le attività delDipartimento hanno come scopo comune lo studio di fattori ambientali rilevanti per la saluteumana. Ciò si realizza utilizzando approcci e metodologie molto diversificate in quattro areeprincipali: 1) valutazione dell'esposizione umana a composti tossici attraverso lo sviluppo el'uso di metodi di epidemiologia molecolare, e l'individuazione di nuovi biomarkers; 2) studi diproteomica e caratterizzazione strutturale e funzionale di proteine, come mezzo per megliocomprendere i processi biologici che stanno alla base di fenomeni di tossicità o patologia; 3)valutazione del rischio da fattori ambientali attraverso l'applicazione delle procedure esistenti asituazioni reali, e lo sviluppo di nuovi modelli predittivi; 4) caratterizzazione della presenzaambientale di composti tossici attraverso lo sviluppo e l'uso di tecniche innovative di chimicaanalitica,strumentazione, software e modellistica.L'epidemiologia molecolare è un'integrazione dell'epidemiologia classica e prevede l'impiego diuna serie di indicatori biologici che permettono di definire la relazione tra esposizione umana acomposti tossici e malattia. Questa disciplina ha lo scopo di identificare, a livello individuale,fattori genetici e/o ambientali capaci di influenzare il rischio per la salute ed individuarestrategie di prevenzione. Gli strumenti dell'epidemiologia molecolare includono: indicatori diesposizione (livelli urinari o plasmatici di composti esogeni e/o dei loro metaboliti); indicatoridi dose biologicamente attiva (addotti al DNA o alle proteine del sangue di composti esogeni);indicatori di effetti biologici (aberrazioni cromosomiche, scambio di cromatidi fratelli,micronuclei); indicatori di suscettibilità (studio dei genotipi che caratterizzano il polimorfismodi enzimi coinvolti nel metabolismo dei composti tossici e/o cancerogeni). L'attività delDipartimento in questo settore è rivolta principalmente alla misura degli indicatori diesposizione, di dose biologicamente attiva e di suscettibilità individuale alle malattie.La proteomica, attualmente in espansione esplosiva, è un campo che riguarda l'identificazione,la descrizione e la quantificazione delle proteine in tessuti o cellule intere. Le proteine sono iprodotti funzionali principali della cellula e l'analisi di espressione a livello della proteina(analisi del proteoma) è un mezzo potente per capire i meccanismi che regolano i processicellulari normali e patologici. L'analisi differenziale del proteoma permette di studiare qualiproteine siano espresse in modo diverso e/o modificate nella loro struttura in seguito adeterminati stimoli. Oltre a definire le reti cellulari di geni/proteine che rispondono a stimoli,queste informazioni possono contribuire ad identificare i bersagli molecolari di agenti tossici onuovi bersagli terapeutici, e nuovi indicatori di tossicità o di patologia.Accanto all'approccio di proteomica, nel Dipartimento sta emergendo un'area di ricerca cheriguarda l'analisi e la caratterizzazione di proteine di particolare interesse biomedico mediantespettrometria di massa. Il principale scopo di questa attività è la verifica –in particolaricondizioni sperimentali o cliniche– del livello di espressione di determinate proteine e delle loroeventuali modificazioni post-translazionali funzionalmente rilevanti. Questi studi spessorichiedono la messa a punto di nuovi metodi analitici per isolare in modo specifico le proteine diinteresse dai campioni biologici, allo scopo di permetterne la successiva caratterizzazionestrutturale e, possibilmente, la determinazione quantitativa mediante spettrometria di massa.Le procedure di Analisi di Rischio tossicologico ed ecotossicologico hanno assunto sempremaggiore importanza in Europa e negli U.S.A. come strumento di supporto alla gestioneambientale. Nell' “Environment and Climate RTD Programme” della UE (1996) è stato stabilito34RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNdi indagare aspetti tecnici e scientifici del problema dei siti contaminati. In questo ambito i varinetworks hanno rappresentato un supporto scientifico fondamentale alla politica comunitaria incampo ambientale. Questi networks hanno promosso lo sviluppo e l’applicazione del concettodel Risk Assessment e della sostenibilità ambientale come pilastri di una corretta gestionedell’ambiente e del territorio. Per tali motivi, e per dare una riposta efficace alla crescenterichiesta di chiarimenti da parte dei soggetti interessati a conoscere il rischio correlato adeterminate situazioni reali, l'attività di valutazione del rischio sanitario ed ecotossicologico sista espandendo all’interno del Dipartimento.Alla luce del sempre più largo impiego che i composti chimici trovano in ogni ambitoproduttivo, è intuibile come sia fondamentale conoscere meglio il loro impatto ecotossicologicosulla fauna, la flora e l’ambiente in generale. La determinazione sperimentale della ecotossicitàe tossicità condotta su tutti i composti chimici richiederebbe risorse economiche immani e tempilunghissimi. Il Dipartimento da anni studia metodi basati su approcci computazionali, cheoffrono un’interessante soluzione, dato che analizzano enormi quantità di informazioni,derivandone nuove conoscenze. Le molecole vengono descritte tramite frammenti o descrittoriglobali, e si impiegano quindi sistemi di data mining e ingegneria della conoscenza, quali retineurali, sistemi esperti, algoritmi genetici, e vari algoritmi di classificazione e analisimultivariata.La valutazione dell'esposizione umana a composti tossici viene effettuata mediante lacaratterizzazione della loro presenza non solo nell'ambiente (aria, acqua, suolo) ma anche neglialimenti, poichè questi rappresentano la principale fonte di esposizione per inquinantiambientali di interesse prioritario, come PCB e diossine.Lo studio di inquinanti ambientali emergenti include la valutazione della presenza di farmaci,che possono accumularsi nell'ambiente (dopo l'utilizzo umano o veterinario, o come residuidella produzione industriale), e inquinanti “non convenzionali” quali sostanze chimiche coneffetti sul sistema endocrino, o derivanti dall'introduzione in agricoltura di organismigeneticamente modificati (OGM), o dall'impiego dell'agricoltura biologica.Un'altra area di ricerca del Dipartimento riguarda il biorisanamento di aree inquinate dafitofarmaci con impiego di batteri capaci di degradare sostanze tossiche presenti nel suolo enelle acque. Inoltre, si stanno studiando i meccanismi di detossificazione in modelli battericimediante tecniche di genetica dei batteri.Tutte le attività del Dipartimento in campo ambientale sono supportate da un'attività di sviluppodi a) metodologie analitiche avanzate, b) strumentazione, e c) nuovi software per l'acquisizioneed il trattamento dei dati in campo ambientale.SCOPERTE/RISULTATI PRINCIPALIIl polimorfismo di enzimi coinvolti nella riparazione del DNA modifica la presenza di addottidel benzo(a)pirene nel DNA linfocitario umano.La formazione di addotti del 4-aminobifenile nel DNA di tumori della vescica aumenta con ilgrado di invasività del tumore ed è più elevata nei fumatori.Valori di riferimento delle frequenze alleliche e genotipiche di diversi geni metabolici in una35RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNpopolazione di 15000 soggetti controllo.Il polimorfismo del CYP1A1 modifica il rischio di tumore del polmone.Gli addotti al DNA linfocitario sono modificati in piccola misura dai polimorfismi dei genicoinvolti nel metabolismo della 2-amino-1-metil-6-fenilimidazo[4,5-b]-piridina.Identificazione del polimorfismo del gene CYP2C9 come causa di grave risposta avversa allafenitoina.Caratterizzazione del profilo di proteine epatiche in ratti esposti a TCDD.Valutazione di un biomarker periferico di stress ossidativo (isoprostano 8-epi-PGF2alfa) nellamalattie di Alzheimer.Sviluppo di nuovi metodi in spettrometria di massa per la misura selettiva di desamethasoneplasmatico, ed inquinanti ad attività endocrina, compresi i loro coniugati.Le policlorodibenzo-p-diossine e i policloro dibenzofurani nei sedimenti del fiume Poaumentano a valle dell'immissione del fiume Lambro.I livelli di TCDD nel suolo a Seveso non influenzano le concentrazioni atmosferiche di taleinquinante.Cancerogenicità, mutagenicità e tossicità acuta nel mammifero, e tossicità negli organismiacquatici possono essere predetti da modelli con utilizzo di reti neurali, algoritmi genetici, datamining, fuzzy logic.Una nuova metodologia per la caratterizzazione degli odori ambientali, che permette diidentificare, in situazioni complesse, la fonte delle emissioni odorigene o il processoresponsabile.Il consumo alimentare di quantitativi medio-elevati di pesce può causare il superamento deilimiti di sicurezza per l’assunzione giornaliera di PCB e sostanze diossino-simili.Uno stesso alimento può contenere concentrazioni di PCB e sostanze diossino-simili diverse indifferenti paesi dell’UE.Dimostrazione dei rischi associati all’inquinamento ambientale da farmaci.Identificazione di specifiche leggi che regolano l’inquinamento ambientale da farmaci (caricoambientale, bilancio di massa).ARPA VenetoASL di BresciaCNR – IRSAFondazione 'S. Maugeri'COLLABORAZIONI NAZIONALI36RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNIstituto Neurologico 'C. Besta'Istituto Superiore di SanitàMinistero dell'AmbientePolitecnico di MilanoPolitecnico di TorinoProvincia di VercelliProvincia PordenoneUniversità degli Studi di CagliariUniversità degli Studi di GenovaUniversità degli Studi di Napoli "Federico II"Università degli Studi di PalermoUniversità degli Studi di Roma "La Sapienza"Università degli Studi di TorinoUniversità dell’Insubria, VareseCOLLABORAZIONI INTERNAZIONALIBASF Agricultural Centre, Limburgerhorf, GermanyCentral Science Laboratory, York, UKDanish Institute of Agricultural Sciences, Research Centre Foulum, Tjele, DenmarkDepartment of Analytical and Pharmaceutical Chemistry, The Royal Danish School ofPharmacy, DenmarkDepartment of Anatomy and Cell Biology, University of Oulu, Oulu, FinlandDepartment of Analytical and Pharmaceutical Chemistry, The Royal Danish School ofPharmacy, Denmark.Department of Chemistry, University of Florida, Gainesville, FLDepartment of Computer Science and Enginnering, University of Galati, RomaniaDepartment of Electrical and Computer Engineering, University of Patras, GreeceDepartment of Environmental Health, National Public Health Institute, Kuopio, FinlandDepartment of Inland Fisheries, Institute of Freshwater Ecology and Inland Fisheries, Berlin,GermanyDepartment of Microbiology, Università di Münster, GermanyDepartment of Molecular Biology, University of Bergen, Bergen, NorwayDepartment of Organic Chemistry, Universidad de Cadiz, SpainDivision of Endocrinology, Department of Internal Medicine, Sahlgrenska University Hospital,Goteborg, SwedenEnvironmental Chemistry, IIQAB-CSIC, Barcelona, SpainEnvironmental Hygiene and Chemistry Department, Institute of Environmental Medicine andHospital Epidemiology, University of Freiburg, GermanyEnvironmental Hygiene and Chemistry Department, Institute of Environmental Medicine andHospital Epidemiology, University of Freiburg, GermanyFaculté de Médicine et de Pharmacie, Université de Mons-Hainaut, Mons, BelgiumFaculty of Veterinary Medicine, Utrecht University, Utrecht, The NetherlandsForschungzentrum Jülich Gmbh, Jülich, GermanyGruppo Collaborativo sulla Suscettibilità Genetica ai Cancerogeni Ambientali (GSEC)Institute of Environmental Medicine. Karolinska Institute, Stockholm, SwedenInstitute of Phytomedicine, Biological Control, Horticulture and Nematology, Wien, AustriaInstitute of Soil Science and Plant Cultivation, Pulawy, PolandInteruniversitaeres Forchunginstitut fuer Agrarbiotechnologie, Tulln, Austria37RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNIstituto di Chimica di São Carlos, Università di São Paulo, BrasileKnowledgeMiner Software, Berlin, GermanyLaboratory of Chemometrics & Bioinformatics, University of Orléans, Orléans, FranceLithuanian Institute of Agricultrure, Vilnius, LithuaniaLiverpool John Moores University, Liverpool, United KingdomNational Institute of Chemistry, Kemijski Institut Ljubljana, Ljubljana, SloveniaNatural Resources Research Institute, University of Minnesota, Duluth, MNPesticide Safety Directorate, York, UKPlant Protection Institute, Hungarian Academy of Sciences, Budapest, HungarySchool of Biomedical Sciences, University of Ulster, Coleraine, Northern IrelandSyngenta Crop Protection AG, Basel, SwitzerlandUFZ Leipzig, GermanyUniversity of Tartu, Tartu, EstoniaPRESENZA IN COMITATI EDITORIALIJournal of Environmental Science and Health, Part B (Emilio Benfenati), Journal ofEnvironmental Science and Health, Part C (Emilio Benfenati).ATTIVITA' DI REVISIONEAnalytical Bioanalytical Chemistry, Cancer Epidemiology Biomarkers & Prevention,Chemosphere, International Journal of Biological Markers, Internet Electronic JournalMolecular Design, Quantitative Structure Activity Relationship, Water ResearchPRESENZA IN COMMISSIONI NAZIONALI E INTERNAZIONALICCPF – Commissione Consultiva Prodotti Fitosanitari (Ministero della Salute, Ministerodell'Ambiente)CCTN – Commissione Consultiva Tossicologica Nazionale (Ministero della Salute)ECCO – European Commission CoordinationEFSA – European Food Safety AgencyEMEA – European Agency for the Evaluation of Medicinal products.IGQ - Commissione Ambiente e SicurezzaPARTECIPAZIONE AD EVENTI CON CONTRIBUTI DELDIPARTIMENTO13th Annual Meeting, SETAC Europe, Hamburg, Germany, 27 April, 1 May 2003.IMAGETOX Second School, Tartu, Estonia, 2-4 Giugno 2003.38RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNThe 2003 International Conference on Artificial Intelligence, June 23-26 2003, Las Vegas,Nevada, USA.Third Indo-US Workshop on Mathematical Chemistry, Duluth, Minnesota, 2-7 Agosto 2003.41st Congress of the European Societies of Toxicology, Eurotox 2003, Firenze, Settembre –October, 2003.Ninth International Waste Management and Landfill Symposium, Sardinia 2003, Cagliari, 6-10Ottobre 2003.Envirpharma, European Conference, on Human and Veterinary Pharmaceuticals in theEnvironment, Lyon, Francia, Aprile 2003.Joint Meeting Rempharmawater, Italian Research Program on Pharmaceuticals, Napole, Ottobre2003.CONTRIBUTI E CONTRATTIACEGAS S.p.A, TriesteARPAVAssociazione Italiana Ricerca sul CancroCentro di Informazione sul PVC, MilanoComune di TernateConsorzio Quadrifoglio S.p.A.ECODECO, PaviaEuropean Commission (GEN-AIR; COMET; IMAGETOX; MEBFOOD; FATEALLCHEM;DEMETRA; EUFRAM; OpenMolGRID; COST 282; EASYRING; HERBICBIOREM;BONETOX)Ferrero, Alba (Cuneo)FIAT Auto S.p.A.Fondazione Italo Monzino, MilanoMinistero dell'Istruzione, dell'Università e della Ricerca, ItaliaMinistero della Salute – Ricerca Finalizzata 2002Ministero della Salute, ItaliaMinistero dell'Ambiente, ItaliaProvincia di PordenoneProvincia di VercelliSO.GE.NU.S. S.p.A.SELEZIONE PUBBLICAZIONI SCIENTIFICHE APPARSENELL'ANNO 2003Magagnotti C, Pastorelli R, Pozzi S, Andreoni B, Fanelli R, Airoldi LGenetic polymorphisms and modulation of 2-amino-1-methyl-6-phenylimidazo[4,5-b]pyridine (PhIP)-DNA adductsin human lymphocytes.Int J Cancer 2003; 107: 878-88439RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNVineis P, Veglia F, Benhamou S, Butkiewicz D, Cascorbi I, Clapper M L, Dolzan V, Haugen A, Hirvonen A,Ingelman-Sundberg M, Kihara M, Kiyohara C, Kremers P, Le Marchand L, Ohshima S, Pastorelli R, Rannug A,Romkes M, Schoket B, Shields P, Strange R C, Stucker I, Sugimura H, Garte S, Gaspari L CYP1A1 T3801 Cpolymorphism and lung cancer: A pooled analysis of 2,451 cases and 3,358 controls.Int J Cancer 2003; 104:650-657Citerio G, Nobili A, Airoldi L, Pastorelli R, Patrono ASevere intoxication after phenytoin infusion: a pharmacogenetic preventable adverse reaction.Neurology 2003; 60: 1395-96Chiabrando C, Fanelli R, Lucca UPeripheral biomarkers of oxidative damage in Alzheimer's disease.Ann Neurol 2003; 53: 419-420Benedetti S, Pirola B, Poliani PL, Cajola L, Pollo B, Bagnati R, Magrassi L, Tunici P, Finocchiaro GDexamethasone inhibits the anti-tumor effect of interleukine 4 on rat experimental gliomas.Gene Ther 2003; 10: 188-192Benfenati E, Porazzi E, Bagnati R, Forner F, Pardo Martinez M, Mariani G, Fanelli ROrganic tracers identification as a convenient strategy in industrial landfills monitoring.Chemosphere 2003; 51: 677-683Mazzatorta P, Benfenati E, Neagu C-D, Gini GTuning neural and fuzzy-neural networks for toxicity modeling.J Chem Inf Comput Sci 2003; 43: 513-518Pintore M, Piclin N, Benfenati E, Gini G, Chrétien JRDatabase mining with adaptive fuzzy partition (AFP): Application to the prediction of pesticide toxicity on rats.Environ Tox Chem 2003; 22: 983-991Pintore M, Piclin N, Benfenati E, Gini G, Chrétien JRPredicting toxicity against the fathead minnow by adaptative fuzzy partition.QSAR 2003; 22: 210-219Fattore E, Di Guardo A, Mariani G, Guzzi A, Benfenati E, Fanelli R Polychlorinated dibenzo-p-dioxins anddibenzofurans in the air of Seveso, Italy, 26 years after the explosion.Environ Sci Technol 2003; 37: 1503-1508Benfenati E, Gini G, Piclin N, Roncaglioni A, Varì MRPredicting LOGP of pesticides using different software.Chemosphere 2003; 53: 1155-1164Mazzatorta P, Vracko M, Jezierska A, Benfenati EModeling toxicity by using supervised Kohonen neural networks.J Chem Inf Comput Sci 2003; 43: 485-492Benfenati E, Barcelò D, Johnson I, Galassi S, Levsen KEmerging organic contaminats in leachates from industrial waste landfills and industrial effluentTrends in Analytical Chemistry 2003; 22: 757-765Mazzatorta P, Benfenati E, Lorenzini P, Vighi MA QSAR approach to evaluate pesticide toxicity: an overview of modern local classification techniques.J Chem Inf Comput Sci 2004; 44: 105-112Tavazzi S, Benfenati E, Barceló DAccelerated Solvent Extraction then Liquid Chromatography Coupled with Mass Spectrometry for Determination of4-t-Octylphenol, 4-Nonylphenols, and Bisphenol A in Fish Liver.Chromatographia 2004; 56 463-468Lalumera GM, Calamari D, Galli P, Castiglioni S, Crosa G, Fanelli RPreliminary investigation on the environmental occurrence and effects of antibiotics used in acquaculture in ItalyChemosphere 2004; 54: 661-66840RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNTurci R, Mariani G, Marinaccio A, Balducci C, Bettinelli M, Fanelli R, Nichetti S, Minoia CCritical evaluation of a high-through analytical method for polychlorinated biphenyls in human serum: Whichdetector for the establishment of the reference values?Rapid Commun Mass Spectrom 2004; 18: 421-434Fattore E, Di Domenico A, Pastorelli G, Facchetti S, Bertazzi P A, Fanelli RAssessment of exposure to dioxins of the Seveso (Milan, Italy) area inhabitantsOrganohalogen Compounds 2003; 64: 124-127Bosetti C, Negri E, Fattore E, La Vecchia COccupational exposure to polychlorinated biphenyls and cancer riskEur J Cancer Prev 2003; 12: 251-255Negri E, Bosetti C, Fattore E, La Vecchia CEnvironmental exposure to polychlorinated biphenyls (PCBs) and breast cancer: A systematic review of theepidemiological evidenceEur J Cancer Prev 2003; 12: 509-516Davoli E, Gangai ML, Morselli L, Tonelli DCharacterisation of odorants emissions from landfills by SPME and GC/MSChemosphere 2003; 51: 357-368Giordano L, Calabrese R, Davoli E, Rotilio DQuantitative analysis of 2-furfural and 5-methylfurfural in different Italian vinegars by headspace solid-phasemicroextraction coupled to gas chromatography-mass spectrometry using isotope dilutionJ Chromatogr A 2003; 1017: 141-149Castiglioni S, Fanelli R, Calamari D, Bagnati R and Zuccato EMethodological approaches for studying pharmaceuticals in the environment by comparing predicted and measuredconcentrations in River Po, Italy.Regul Toxicol Pharmacol 2004; 39: 25-32.Calamari D, Zuccato E, Castiglioni S, Bagnati R, Fanelli RStrategic survey of therapeutic drugs in the rivers Po and Lambro in northern Italy.Environ Sci Technol 2003; 37: 1241-1248Esposito E, Rotilio D, Di Matteo V, Di Giulio C, Cacchio M, Algeri S.A review of specific dietary antioxidants and the effects on biochemical mechanisms related to neurodegenerativeprocesses.Neurobiol. of Aging 2002; 23: 719-735Amodio R, De Ruvo C, Di Matteo V, Poggi A, Di Santo A, Martelli N, Lorenzet R, Rotilio D, Cacchio M, Esposito ECaffeic acid phenethyl ester blocks apoptosis induced by low potassium in cerebellar granule cells.Int J Dev Neurosci 2003; 21: 379-89Giordano L, Calabrese R, Davoli E, Rotilio DQuantitative analysis of 2-furfural and 5-methylfurfural in different Italian vinegars by headspace solid-phasemicroextraction coupled to gas chromatography-mass spectrometry using isotope dilution.J Chromatogr A 2003; 1017: 141-9Erba E, Serafini M, Gaipa G, Tognon G, Marchini S, Celli N, Rotilio D, Broggini M, Jimeno J, Faircloth GT, BiondiA, D'Incalci MEffect of Aplidin in acute lymphoblastic leukaemia cells.Br J Cancer 2003; 89: 763-73Celli N, Motos-Gallardo A, Tamburro A, Favaloro B, Rotilio DLiquid chromatography-electrospray mass spectrometry study of cysteine-10 S-glutathiolation in recombinantglutathione S-transferase of Ochrobactrum anthropi.J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci 2003; 787: 405-13Del Boccio P, Di Deo A, De Curtis A, Celli N, Iacoviello L, Rotilio DLiquid chromatography-tandem mass spectrometry analysis of oleuropein and its metabolite hydroxytyrosol in rat41RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNplasma and urine after oral administration.J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci 2003; 785: 47-56SELEZIONE PUBBLICAZIONI DIVULGATIVE APPARSENELL'ANNO 2003Senese V, Benfenati E, Genah D, e Finizio A. Definizione di un indice per la classificazione del rischioecotossicologico derivante dalla diffusione di inquinanti presenti nei percolati di discariche.Rifiuti Solidi 2003; 3: 167-178.Fattore EIl problema dell'inquinamento da diossineRicerca & Pratica 2003; n. 112: 151-160Negri E, Bosetti C, Fattore E, La Vecchia CEsposizione ambientale ai bifenili policlorurati (PCB) e tumore della mammella: una revisione sistematicadell'evidenza epidemiologicaIn: Ingegneria e chimica per l'ambiente, Atti 1 Convegno, Milano, 26-27 novembre. 2003 : 267-282Bosetti C, Negri E, Fattore E, La Vecchia CEsposizione eccupazionale ai Bifenili Policlorurati e rischio di cancroIn: Ingegneria e chimica per l'ambiente, Atti 1 Convegno, Milano, 26-27 novembre. 2003 : 23-31Davoli EApproccio strumentale alla caratterizzazione dell'inquinamento olfattivoLaboratorio 2000 2003; 17: 70-72Davoli E, Galimberti E, Mascherpa A, Riservato M, Rolla ASviluppo e applicazioni di una metodologia innovativa per la misura di 1,3-butadiene nell'ariaRivista dei Combustibili 2003; 57: 117-125Zuccato E, Fanelli RProcesso ai cibi OGM.Le Scienze 2004; 425: 56-63ATTIVITA' DI RICERCALaboratorio di Tossicologia MolecolareEpidemiologia MolecolareL'attività del laboratorio è da tempo focalizzata sulla misura degli indicatori di dosebiologicamente attiva e di suscettibilità ai tumori. In particolare viene studiata la formazione diaddotti al DNA linfocitario o alle proteine del sangue di alcuni cancerogeni ambientaliappartenenti alla classe degli idrocarburi policiclici aromatici (benzo(a)pirene), delle amminearomatiche (4-aminobifenile), o delle ammine aromatiche eterocicliche (2-amino-1-metil-6-fenilimidazo[4,5-b]-piridina) in soggetti esposti a tali composti attraverso l'inquinamentoatmosferico, il fumo passivo o la dieta. L'analisi quantitativa degli addotti è eseguita utilizzandotecniche analitiche altamente sensibili e specifiche quali la gas cromatografia o la cromatografialiquida accoppiate alla spettrometria di massa. I livelli di addotti sono messi in relazione allapresenza di polimorfismi di geni che codificano per enzimi coinvolti nel metabolismo dei42RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNcancerogeni in esame, inclusi gli enzimi di fase I (citocromi P450), gli enzimi di fase II(epossido idrolasi, N-acetiltrasferasi, glutatione trasfersi, sulfotrasferasi) ed enzimi diriparazione del DNA. I polimorfismi genetici più frequenti nel genoma umano sono variazioni alivello di un singolo nucleotide (single nucleotide polymorphisms, SNPs) che sono usati semprepiù spesso come indicatori molecolari capaci di predire le variazioni individuali nella risposta acomposti esogeni tossici o cancerogeni. I genotipi vengono misurati mediante l'analisi deipolimorfismi dei frammenti di restrizione (RFLP) dopo amplificazione di specifiche sequenzenucleotidiche dei geni in esame mediante la reazione a catena della polimerasi (PCR).L'importanza dei fattori genetici nel determinare la suscettibilità umana agli agenti cancerogeniambientali, ha promosso una cooperazione a livello internazionale avente come scopo direperire dati di riferimento sulla frequenza dei polimorfismi genetici più comuni per gli enzimimetabolici in popolazioni di controllo.Proteomica in tossicologiaSono iniziati e sono tuttora in corso studi mirati alla caratterizzazione di modificazioni delprofilo proteico indotte da composti tossici ambientali. I cambiamenti del proteoma nei tessuti eorgani bersaglio di animali trattati con TCDD (ad esempio il fegato di ratto) sono messi inrelazione con eventuali cambiamenti funzionali che determinano l'effetto tossico. Modificazioniqualitative e quantitative del proteoma in risposta a composti tossici sono analizzate anche inaltri sistemi biologici, incluse le urine, allo scopo di identificare una relazione tra effetto tossicoed eventuali markers proteici. Un'accurata analisi del proteoma ha richiesto la messa a punto dicondizioni sperimentali ottimali comprendenti la preparazione del campione biologico, specificaper ogni tipo di tessuto o fluido biologico, la solubilizzazione delle proteine e la loroseparazione mediante elettroforesi bidimensionale su gel di poliacrilamide. L'identificazionedella proteina o la determinazione della sequenza aminoacidica dei peptidi è stata ottenutamediante spettrometria di massa (MALDI-TOF-MS, MALDI-TOF-PSD-MS, nanoESI-MS/MS)dei prodotti di digestione con proteasi specifiche delle proteine separate.FarmacogeneticaI singoli individui rispondono alle terapie farmacologiche in modo eterogeneo. Lo studio delgenoma umano ha permesso di stabilire che buona parte di questa variabilità è determinatageneticamente. La conoscenza delle basi genetiche del metabolismo, trasporto, eliminazione emeccanismo d'azione di un farmaco dovrebbe renderne possibile la scelta e la determinazionedel dosaggio in relazione alle capacità individuali di metabolizzare, rispondere ed eliminare ilcomposto. Le variazioni individuali nella risposta ai farmaci sono determinate mediante l'analisidegli SNPs. Lo studio di questi indicatori è di grande utilità non solo per determinare la correttadose di farmaco, ma anche e soprattutto per prevenire risposte avverse gravi.Laboratorio di Biochimica AnaliticaProteomicaIl principale scopo della proteomica è quello identificare proteine o insiemi di proteine espressein modo differenziale in varie condizioni fisiopatologiche, oppure a seguito di esposizione acomposti tossici, ad agenti biologici, o a farmaci. La tecnica più diffusa per lo studio delproteoma è l'identificazione mediante spettrometria di massa di proteine separate mediante gelelettroforesi bidimensionale (2-DE). L'uso di banche dati è un supporto essenziale a questaattività. Il Laboratorio è attivo nella ottimizzazione delle tecniche correlate, sia quelle cheriguardano la spettrometria di massa (varie tecniche complementari quali MALDI-TOF-MS,nanoESI-MS/MS and LC-MS/MS), che quelle che riguardano la preparazione del campione (es.purificazione e arricchimento di proteine poco abbondanti), e la caratterizzazione dimodificazioni post-translazionali.43RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNIdentificazione e caratterizzazione di proteine mediante spettrometria dimassaIl laboratorio è impegnato nella messa a punto di diverse tecniche analitiche e strumentali perl’identificazione e la caratterizzazione strutturale di proteine in campioni biologici. Questaattività è mirata principalmente a 1) caratterizzare le diverse isoforme di proteine che risultanosignificativamente modificate in studi di proteomica differenziale dopo elettroforesibidimensionale, 2) ottenere profili proteici in fluidi biologici per l’individuazione di nuovibiomarkers di interesse fisiopatologico o tossicologico, 3) identificare e caratterizzare proteinericombinanti e loro isoforme, 4) isolare in modo altamente selettivo (mediante microtecniche diimmunoaffinità) proteine di particolare interesse biomedico e identificazione delle loroeventuali modificazioni post-translazionali mediante spettrometria di massa (LC-MS/MS).Sviluppo di metodologie analitiche in spettrometria di massaSono stati sviluppati nuovi metodi di analisi per la misura di farmaci e di loro metaboliti incampioni biologici, utilizzando la tecnica della spettrometria di massa accoppiata allacromatografia liquida (HPLC-MS). Questa tecnica permette la determinazione di molecolepolari e ad alto peso molecolare con alta sensibilità e, attraverso la frammentazione degli ionipseudo-molecolari, lo studio della struttura di eventuali metaboliti e prodotti di degradazione. Ifarmaci maggiormente studiati sono stati: ectenaiscidina (ET743), una sostanza estratta da unorganismo marino e attiva contro alcuni tumori del fegato; desametasone e altri corticosteroidi;testosterone, diidrotestosterone e altri steroidi collegati da vie metaboliche. Questi studi si sonoavvalsi dell'uso di spettrometri di massa a triplo quadrupolo e a trappola ionica, equipaggiati consorgenti di ionizzazione electrospray (ESI) e a ionizzazione chimica a pressione atmosferica(APCI).Laboratorio di Chimica e Tossicologia dell'AmbienteUnità di igiene industriale e ambientale - Studio di emissioni di inquinantiin atmosferaLe ricerche sono rivolte allo studio delle emissioni di inquinanti in atmosfera. Lo studioriguarda sia il campionamento in aree circostanti la fonte di emissione, sia le analisi chimiche,sia la modellazione del trasporto in considerazione delle condizioni meteorologiche edell'orografia, sia l'analisi del rischio sulla popolazione e l'ambiente. Le analisi di inquinantiorganici vengono svolte in spettrometria di massa, utilizzando la tecnica GC-MS, con tecnichein alta risoluzione (ad esempio per diossine) che in ionizzazione negativa (ad esempio per PCB).Si effettuano sia ricerche identificative, che analisi quantitative.Sviluppo e utilizzo di metodologie analitiche per indagini dicontaminazioni di acque, suolo, biota, campioni umani di popolazioneespostaLe ricerche sono rivolte allo sviluppo e applicazione di metodi analitici per lo studio diinquinanti ambientali in situazioni quali: ecositemi acquatici, suoli, discariche, siti contaminati.Le analisi di inquinanti organici vengono svolte in spettrometria di massa, utilizzando la tecnicaGC-MS, LC-MS, LC-MS/MS. Si effettuano sia ricerche identificative, che analisi quantitative.Gli analiti includono: diossine, PCB, PAH, analoghi polibromobifenileteri, pesticidi, compostiad attività endocrina, inquinanti industriali, etc.Studio delle proprietà ambientali, tossiche ed ecotossiche degli inquinantiLe ricerche sono rivolte allo studio delle proprietà degli inquinanti, reperendo le informazioni da44RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNletteratura, confrontando e valutando le diverse fonti, e, soprattutto, sviluppando modellipredittivi per sopperire alla mancanza di dati sperimentali. Infatti, nella maggior parte degliinquinanti ambientali, si assiste a una mancanza di dati. I modelli che vengono sviluppati,quindi, partono dalla sola formula chimica. La ricerca calcola e valuta i diversi tipi di descrittorie frammenti chimici relativi ai composti, ottenuti con diversi software specifici. Quindi, sisviluppano modelli utilizzando algoritmi quali reti neurali, fuzzy logic, algoritmi genetici,classificatori, analisi multivariata, etc. I vari metodi sono comparati e integrati in una strutturaorganica.Analisi del rischio associato a inquinantiLe ricerche sono rivolte allo studio dell'analisi del rischio associato all'esposizione acontaminanti per la popolazione e l'ambiente. A tal fine si eseguono studi di modellazione deltrasporto e diffusione degli inquinanti, per giungere a una concentrazione prevista nel contestospazio-temporale. Tale attività si combina con quelle sopra esposte relative alle analisi chimichedi inquinanti e caratterizzazione della tossicità ed ecotossicità, giungendo a un costruttoorganico e articolato.Laboratorio di Spettrometria di MassaInquinamento da particolatoLe evidenze epidemiologiche mostrano come un numero sempre crescente di patologie, siaacute che croniche, siano associate all'inquinamento da particolato urbano. Questo riguarda nonsolo malattie legate al sistema respiratorio, ma anche al sistema cardiovascolare. Vengonosviluppate metodologie per il campionamento e l'analisi di particolato, al fine di caratterizzaresia le sostanze adsorbite e veicolate, sia l'esposizione cui si é soggetti in differenti situazioniambientali.Sviluppo di metodologie e strumentazione in campo ambientaleVengono sviluppate metodologie analitiche e strumentazioni dedicate a specificheproblematiche ambientali. Generalmente la strumentazione sviluppata, sempre basata sullaspettrometria di massa, mira ad avere sensibilità elevate per la misura di inquinanti in tracce edultratracce, o ad essere trasportabile per effettuare analisi in campo, o ad essere automatizzataper effettuare monitoraggi.Caratterizzazione dell'inquinamento olfattivoLe problematiche legate all'inquinamento olfattivo, problema sempre più sentito dallapopolazione generale, sono legate alla complessità sia della percezione degli odori, che allaformazione degli odori ambientali. Questi sono spesso il risultato della interazione di diversesostanze odorigene che, tutte insieme, e a bassissime concentrazioni, partecipano allaformazione dell'odore. La base per lo studio dell'inquinamento olfattivo é la conoscenza dellediverse sostanze presenti in ambienti "inquinati". Sono quindi necessarie sia metodologieanalitiche che permettano di identificare e misurare gli "odoranti" presenti, che metodologiechemiometriche necessarie per ricostruire informazioni utili per l'identificazione della causaprincipale della molestia olfattiva.Unità di Tossicologia degli AlimentiPCB e diossine negli alimentiPCB e diossine sono inquinanti ambientali prioritari. Differenti nell’origine, le due classi disostanze hanno molte caratteristiche comuni, compreso l'accumulo lungo la catena alimentare.45RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNL’alimentazione rappresenta quindi un fattore importante nell'esposizione dell'uomo a questicomposti. L'Unità ha studiato l’esposizione del consumatore a PCB (e in particolare ai PCBdiossino-simili) tramite gli alimenti, per stimare il rischio correlato. E' stato valutato il contenutodi PCB in alcune classi di alimenti rappresentativi in quattro differenti nazioni, per stimare ledifferenze nell’esposizione ai PCB nel consumatore europeo. Importante conclusione di questostudio è che l’esposizione tramite lo stesso tipo di alimento può essere differente, talora inmisura sostanziale, nei diversi Paesi, e che il consumo di pesce in quantitativi medio-elevatiapprossima e supera i limiti di sicurezza stabiliti dalla Commissione Europea. Questi risultatipossono servire sia a definire il rischio effettivo per il consumatore sia a identificare misure perridurlo, analizzando i motivi alla base delle così grandi differenze nei contenuti di PCB deglialimenti nei differenti Paesi studiati.Farmaci nell’ambienteI farmaci rappresentano uno dei più recenti inquinanti ambientali identificati. Spesso i farmaci,escreti in parte come tali dopo l'utilizzo umano o veterinario, superano inalterati i processidepurativi dei reflui civili e si riversano quindi nell’ambiente. A ciò si aggiunge lo smaltimentoimproprio di farmaci inutilizzati o scaduti, e di quelli derivanti dalle produzioni industriali. Ifarmaci tendono così ad accumularsi nell’ambiente e possono poi ritornare all’uomo, attraversole acque potabili o le vie alimentari. Nel 2003 sono proseguite alcune campagne di misurazionedi farmaci nelle acque di alcuni fiumi italiani, allo scopo di meglio definire il problema estudiare i rischi correlati. Lo studio ha avuto numerose utili ricadute. E' stato infatti utile per 1)definire le metodologie per l’organizzazione di successive campagne di monitoraggio,identificando il principio della “lista degli inquinanti prioritari” da monitorare (farmaci conelevato carico di vendita e bassa percentuale di metabolizzazione); 2) stabilire chel’inquinamento da farmaci non è un evento “casuale” o puntiforme, ma un fenomeno continuo,governato da leggi studiabili con metodi scientifici (carichi ambientali, bilanci di massa); 3)stabilire che le concentrazioni ambientali di numerosi farmaci superano stabilmente i valoriconsiderati di sicurezza, indicando così la necessità di studiare adatti processi avanzati per iltrattamento delle acque. Tali processi di trattamento vengono studiati in collaborazione conalcune Università Italiane.Metodi agronomici e inquinanti emergentiI metodi di coltivazione recentemente introdotti in agricoltura hanno ampliato il già vastoorizzonte degli inquinanti ambientali, introducendo possibili inquinanti “non convenzionali”.L’introduzione degli OGM in agricoltura pone infatti potenziali rischi non solo per l’ambiente,ma anche per l’uomo che si nutre di alimenti modificati. L’uso dell'agricoltura biologicaproduce altri inquinanti non convenzionali potenzialmente rischiosi sia per l’uomo che perl’ambiente, quali pesticidi naturali e altri prodotti originati delle piante (fitochimici) emicotossine. Questi rischi sono tuttora ignoti e necessitano quindi di studi approfonditi. Lanostra attività consiste per ora in un approccio “esplorativo” sui rischi degli OGM edell’agricoltura biologica. Le conclusioni di una vasta revisione della letteratura sui possibilirischi per la salute umana, sono che attualmente non sono identificabili rischi connessi alconsumo alimentare di piante da OGM, ma che esistono dei dubbi sull’affidabilità delle attualimetodiche, sperimentali ed epidemiologiche, a rilevare potenziali effetti a bassa incidenza e alungo termine. Per contribuire a risolvere questo problema, sono state poste le basi teoriche diun progetto sullo sviluppo di nuove tecnologie per la valutazione della sicurezza d’uso dellepiante da OGM in alimentazione. Il progetto prevede l’impiego di tecniche di genomicafunzionale e di proteomica per rilevare potenziali modificazioni indotte in sistemi viventi daglialimenti OGM. Per quanto riguarda i rischi dell’agricoltura biologica, sono state poste le basiper un progetto per la valutazione della formazione e della tossicità di alcune tossine naturalidelle piante (gli allelochemicals), in relazione ai diversi metodi di produzione agricola46RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNimpiegati.Contributo alle attività regolatorieE' proseguita la valutazione di monografie di prodotti fitosanitari per incarico del Ministerodella Sanità a fini della registrazione Europea (inclusione nell’Annex I). La valutazione hariguardato l’analisi dei residui negli alimenti e del “risk assessment” per l'uomo dei fungicidiMetiram e Maneb. L’analisi è stata condotta in collaborazione con altri gruppi che hannoanalizzato un’altra molecola della stessa famiglia, il Mancozeb. I risultati sono successivamentestati discussi nell’ambito di alcuni Peer review meeting organizzati dalla Commissione Europea,e verranno utilizzati per le decisioni riguardanti l’inclusione nell’Annex I di questi prodottifitosanitari.Centro di Salute Ambientale "Gennaro Paone"Inquinamento ambientale e alimentare da fitofarmaciViene studiata in particolare la contaminazione da fitofarmaci utilizzando come indicatori ilivelli nelle falde acquifere, nel suolo e in diversi prodotti agroalimentari (vino, olive ed oliod’oliva, carni e latte). I monitoraggi ambientali delle acque interne, di falda e marine sonoeseguiti mediante l’utilizzo di bioindicatori, oltre che con metodi chimici e microbiologici.BiorisanamentoViene studiato il biorisanamento di aree inquinate da fitofarmaci, con impiego di batteri capacidi degradare sostanze tossiche presenti nel suolo e nelle acque. Vengono isolati ed identificaticeppi batterici prelevati da campioni di suolo contaminati da pesticidi. Si studiano i meccanismidi detossificazione in modelli batterici mediante tecniche di genetica dei batteri.Controllo ambientale del territorioDa alcuni anni il Centro ha attivato un Programma pilota per il controllo della qualità dell’aria,dell’acqua e del suolo del territorio della provincia di Chieti. Tale programma rientranell’ambito di una convenzione stipulata con l’Amministrazione Provinciale, in base alla qualeil Centro gestisce la rete di monitoraggio dell’inquinamento atmosferico. Questa è costituita datre centraline fisse, da un mezzo mobile e da una stazione di raccolta ed elaborazione dei dati. Irisultati vengono riportati quotidianamente sul sito Internet del Centro. Nell’ambito dellecollaborazioni con la Provincia di Chieti, sono stati avviati monitoraggi dei fiumi e delle acquecostiere provinciali, ed uno studio sulle emissioni dei mezzi di trasporto pubblico alimentati conBiodiesel.Ricerche in campo agroalimentareE' stato condotto uno studio per l'identificazione e l'analisi quantitativa delle diverse classi dipolifenoli presenti nei vini e negli oli abruzzesi e molisani, allo scopo sia di valutarne gli effetti,sia di caratterizzare determinati prodotti agricoli non solo da un punto di vista organolettico, maanche da quello nutrizionale. Le analisi qualitative e quantitative sono state effettuate conmetodiche che utilizzano la gas cromatografia, la cromatografia liquida, l’elettroforesi capillare,la spettroscopia di assorbimento atomico e la spettrometria di massa.Ricerche in campo biomedicoSono in corso ricerche in vivo ed in vitro sulla cinetica e sugli effetti di sostanze antitumorali disintesi e/o naturali. Lo studio delle biomolecole (peptidi, proteine ed acidi nucleici) viene svoltosia per mezzo delle metodiche tradizionali che con l’ausilio della spettrometria di massa conionizzazione a pressione atmosferica.47RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMN48RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNDIPARTIMENTO DI NEUROSCIENZEPERSONALECapo DipartimentoGianluigi FORLONI, Dr.Sci.Biol.Laboratorio di Biologia delle Malattie NeurodegenerativeCapo LaboratorioGianluigi FORLONI, Dr.Sci.Biol.Laboratorio di Infiammazione e Malattie del Sistema NervosoCapo LaboratorioMaria Grazia DE SIMONI, Dr.Sci.Biol.Laboratorio di Malattie NeurologicheCapo LaboratorioEttore BEGHI, Dr.Med.Chir.Laboratorio del Metabolismo dei FarmaciCapo LaboratorioSilvio CACCIA, Dr.Farm.Laboratorio di Neurobiologia MolecolareCapo LaboratorioCaterina BENDOTTI, Dr.Farm.Laboratorio di Neurologia SperimentaleCapo LaboratorioAnnamaria VEZZANI, Dr.Sci.Biol.Laboratorio di Neuropsichiatria GeriatricaCapo LaboratorioUgo LUCCA, MScUnità di Epidemiologia e Psichiatria SocialeCapo UnitàBarbara D’AVANZO, Dr.Filo.Unità di Epidemiologia GeriatricaCapo UnitàUnità di Farmacologia GeriatricaCapo UnitàMauro TETTAMANTI, Dr.Sci.Biol.Emma RIVA, Dr.Med.Chir.Unità di Valutazione della Qualità dei Servizi per l’AnzianoCapo UnitàAlessandro NOBILI, Dr.Med.Chir.49RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNUnità del DipartimentoUnità di Farmacologia ComportamentaleCapo UnitàUnità del Comportamento CognitivoCapo UnitàUnità di Microdialisi IntracerebraleCapo UnitàLuigi CERVO, Per.Chim.Mirjana CARLI, Per.Chim.Roberto William INVERNIZZI, Dr.Sci.Biol.50RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNINTRODUZIONE ALLE ATTIVITA' DEL DIPARTIMENTOIl Dipartimento di Neuroscienze è strutturato in sette Laboratori e tre Unità di Dipartimento, leattività di ricerca riguardano lo studio delle malattie neurologiche e psichiatriche affrontato dalpunto di vista delle basi biologiche, di alcuni aspetti clinici e della valutazione dei servizisanitari. Accanto a queste attività, nel Dipartimento sono presenti competenze più generali, nonriconducibili esclusivamente all'ambito neurologico, che riguardano la farmacocinetica,l'informazione sull'uso dei farmaci e l'elaborazione di trial clinici e di studi epidemiologici.Tradizionalmente una parte del Dipartimento si è dedicata alla creazione di modelli sperimentaliper lo studio dei meccanismi patogenetici e dei possibili interventi terapeutici che riguardino lemalattie neurodegenerative, come Alzheimer e malattie da prioni, neurologiche come l'epilessiao psichiatriche come la depressione. Più recentemente si sono sviluppati e consolidati progetti diricerca per lo studio della sclerosi laterale amiotrofica (SLA), l'ictus cerebrale e le sostanzed'abuso. Per quanto riguarda gli aspetti clinici diverse di queste patologie sono oggetto di studiepidemiologici come epilessia, SLA e Alzheimer e di clinical trial per la valutazionedell'efficacia di trattamenti farmacologici. Le attività del Dipartimento mirano a un'integrazionedelle diverse competenze per lo sviluppo di progetti multidisciplinari. L'obiettivo è di darerisposte integrate sul piano della conoscenza, della terapia e della pratica clinica alle complessetematiche, in gran parte irrisolte, proposte dalle malattie del sistema nervoso.SCOPERTE/RISULTATI PRINCIPALIIn pazienti con forme familiari di malattia di Alzheimer è stata identificata una mutazione sulgene che codifica per PEN 2, una proteina coinvolta nella produzione di beta amiloide, ilpeptide che si accumula a livello cerebrale nei pazienti Alzheimer.Una mutazione sul gene che codifica per la proteina nicastrina, anch'essa coinvolta nellaproduzione di beta amiloide, sembra essere un fattore di rischio per lo sviluppo della malattia diAlzheimer.Alcune tetracicline sono in grado di ridurre l’infettività da prioni e di rendere la proteina prionpatologica meno resistente alla digestione con proteinasi K.In modelli cellulari è stato dimostrato che alfa-sinucleina a basse concentrazioni svolge un ruoloprotettivo nei confronti della cellula nervosa. Questo effetto, al contrario di quello neurotossico,dipende dalla porzione C-terminale della proteina.II tassi di prevalenza della demenza sembrano crescere in modo abbastanza lineareall’aumentare dell’età dei soggetti anche nei grandi anziani (80+).Alti livelli di omocisteina nel plasma e relativamente bassi livelli di folati nel siero sonoassociati a un elevato rischio di malattia di Alzheimer e di demenza vascolare. Basseconcentrazioni di folati sono inoltre associate anche a mild cognitive impairment (studiotrasversale).Migliore efficienza organizzativa e gestionale delle strutture con Nucleo Alzheimer rispetto allestrutture che ne sono prive.51RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNMiglioramento dello stress e del carico assistenziale del caregiver del malato di demenza inseguito a un intervento di counseling.Il numero di malati oncologici terminali che richiede l’eutanasia è molto basso.La diagnosi di disturbo di personalità, scarso funzionamento globale, difficoltà di relazioni nellafamiglia, attitudine della famiglia rispetto ai servizi sono fattori predittivi del ricovero instruttura residenziale psichiatrica.In pazienti con patologie psichiatriche sono scarsi e insoddisfacenti gli esiti a sei mesi deltrattamento residenziale e semiresidenziale in particolar modo nelle relazioni sociali.Sempre in ambito psichiatrico, c’è la necessità di utilizzo di indicatori di soddisfazione degliutenti e dei famigliari nella pianificazione degli studi di efficacia.L’attività lavorativa e i rapporti personali sono risultati fattori fortemente favorenti nel percorsodi guarigione con gravi patologie psichiatriche in via di miglioramento.I pazienti con epilessia presentano una maggiore morbidità rispetto a quanto atteso nellapopolazione generale. La differenza è però da ascrivere a eventi medici correlati al ripetersidelle crisi. In pazienti con epilessia in buon controllo farmacologico il rischio di malattiaequivale a quello della popolazione generale.I costi dell'epilessia in Italia variano significativamente sulla base del tempo intercorso dalladiagnosi e della risposta ai trattamenti.Pazienti con epilessia di sesso femminile in età fertile presentano un elevato rischio didepressione e una qualità di vita peggiore di quanto atteso nella popolazione generale. Amaggior rischio depressivo sono la disoccupazione, la presenza di una compromissionefunzionale e l'insoddisfacente controllo delle crisi.Una familiarità per disturbi vascolari è significativamente più frequente tra i genitori e i nonni dibambini con emicrania rispetto a quanto atteso nella popolazione generale.Disturbi ticcosi sono presenti nel 3% dei bambini in età compresa tra 6 e 11 anni.Pazienti con epilessia refrattaria a una monoterapia rispondono in ugual misura a unamonoterapia alternativa o all'aggiunta di un secondo farmaco.L’introduzione di geni “terapeutici” nel cervello del roditore è in grado di inibiresignificativamente e per lungo tempo l’attività convulsiva e di ritardare i processi diepilettogenesi. Queste prime evidenze precliniche dimostrano in linea di principio l’applicabilitàdelle terapia genica per la cura dell’epilessia farmacoresistente.E’ stato evidenziato un possibile ruolo neuroprotettivo delle proteine di transporto dei farmaciche vengono espresse dalle cellule gliali e neuronali nel tessuto epilettico farmacoresistente.Le stesse proteine espresse dalle cellule endoteliali dei capillari cerebrali potrebbero inveceavere un ruolo significativo nei meccanismi di farmacoresistenza estrudendo dal cervello ifarmaci antiepilettici.Evidenze farmacologiche e topi geneticamente modificati hanno dimostrato che IL-1 e TNF-alfa52RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNcontribuiscono significativamente all'attivita’ epilettica e al danno neuronale a essa associato,quindi potrebbero rappresentare dei bersagli farmacologici per nuove strategie terapeuticheantiepilettogene.Il sistema del complemento e quello del contatto/chinine hanno un ruolo importante nel dannocerebrale da ischemia/riperfusione.Il trasferimento genico di IL-4 mediante vettore virale riduce il danno ischemico.La proteina neuronale citoplasmatica Rai(Shc C) regola il sistema di segnalazione PI3K/Akt eprotegge dal danno da ischemia/riperfusione.La proteina P-38 MAPK è un nuovo marcatore delle inclusioni proteiche intracellulari tipichedella SLA.L’associazione di acetilcarnitina con riluzolo dimostra una maggior efficacia rispetto ai duecomposti singoli nel rallentare la progressione della malattia e nel prolungare la sopravvivenzadei topi SOD1G93A, modello sperimentale di SLA.Farmaci con attività agonista parziale o antagonista sui recettori dopaminergici D3 sono ingrado di modulare, negli animali da esperimento, il comportamento di ricerca della sostanzad'abuso alla comparsa di stimoli ambientali associati all'assunzione di cocaina.L'iperforina contribuisce all'azione dell'estratto idrometanolico di Hypericum perforatum L. inun modello animale predittivo dell'attività antidepressiva.I trattamento cronico con farmaci antidepressivi desensibilizza gli autorecettori serotoninergicie/o noradrenergici.La stimolazione dei recettori 5-HT2c aumenta il rilascio di GABA nella Substantia NigraReticolata (SNR) e migliora i deficit cognitivi.Gli antagonisti dei recettori NK1 prevengono il rilascio di catecolamine corticali indotto dastress mentre il blocco dei recettori NMDA aumenta il rilascio di glutammato e serotonina.Il blocco dei recettori 5-HT2A o la stimolazione dei 5-HT1A nella corteccia prefrontalemigliora l’attenzione.I recettori 5-HT2A e 5-HT2C della serotonina giocano un ruolo importante nell’impulsività,mentre i recettori D2 della dopamina sembrano essere coinvolti nei processi che regolanol’inibizione degli atti compulsivi.La stimolazione dei recettori 5-HT2C della serotonina è in grado di migliorare il deficitattenzionale e l’impulsività causata dalla stimolazione dei recettori GABAergici nel nucleosubtalamico.COLLABORAZIONI NAZIONALIAssociazione per la Ricerca Neurogenetica, Lamezia Terme (CS) e ASL 6, Regione Calabria53RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNAgenzia di Sanità Pubblica della Regione Lazio, RomaASL di TrentoClinica IRCSS S. Maria Nascente, MilanoClinica Neurologica III Università di Milano, Azienda Ospedaliera S. Paolo, MilanoClinica S. Maria, Castellanza (VA)Consorzio Ricerche Luigi Amaducci, CRIC, Arcugnano (Vc)DIBIT, San Raffaele Scientific Insitute, Milano.Dipartimento di Chimica Biologica, Università di PadovaDipartimento di Chimica, Università egli Studi di FirenzeDipartimento Endicronologia, Università di MilanoDipartimento Farmaco Chimico Tecnologico, Università di SienaDipartimento di Neurologia Università di Milano, Ospedale Luigi Sacco.Dipartimento di Neuroscienze e Riabilitazione, Azienda Ospedaliera “Santa Maria dellaMisericordia”, UdineDipartimento di Neuroscienze, Università di Parma, ParmaDipartimento di Salute Mentale di TriesteDipartimento di Salute Mentale dell’Azienda Ospedaliera Salvini di GarbagnateDipartimento di Salute Mentale dell’Azienda Ospedaliera San Gerardo di MonzaDipartimento di Salute Mentale dell’Azienda Ospedaliera di Milano NiguardaDipartimento di Salute Mentale dell’Azienda Ospedaliera di Milano San CarloDipartimento Scienze Neurologiche, Università di Genova, GenovaDipartimento Scienze Neurologiche, Ospedale Maggiore Policlinico di MilanoDirezione Generale Famiglia e Solidarietà Sociale, Regione Lombardia, MilanoDivisione Neurologica, Università di BolognaFederazione Alzheimer Italia, MilanoFondazione Clelio AngelinoFondazione Floriani, MilanoFondo Edo TempiaHospice “Domus Salutis”, BresciaHospice “via di natale”, Aviano (PN)IRCSS "Casa Sollievo della Sofferenza", San Giovanni RotondoIRCSS Neuromed, Pozzilli, IserniaIRCSS "San Raffaele", MilanoIstituto Europeo di Oncologia, IRCCS, MilanoIstituto di Farmacologia e Farmacognosia, Università di UrbinoIstituto di Farmacologia, Universita' di MilanoIstituto di Economia Sanitaria, MilanoIstituto Nazionale Neurologico “Carlo Besta”, MilanoIstituto Neurologico "Casimiro Mondino", PaviaIstituto "Stella Maris", IRCCS, Calambrone (PI)Istituto Superiore di Sanità, RomaIstituto Zooprofilattico Piemonte Liguria Val D'Aosta,TorinoLega Italiana per la Lotta contro i TumoriOspedale Regionale Ca Fondello, TrevisoOspedale "Molinette", TorinoPio Albergo Trivulzio, MilanoPolo Oncologico, ASL 12, BiellaUnione Nazionale delle Associazioni per la Salute Mentale (UNASAM), MilanoUnità di geriatria, Ospedale Maggiore IRCCS, Università di MilanoUniversità degli Studi di FoggiaUniversità Cattolica del Sacro Cuore di RomaUniversità del Piemonte Orientale, Novara54RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNUniversità di Milano, IRCCS Ospedale Maggiore, MilanoUniversità Milano-Bicocca, MonzaCOLLABORAZIONI INTERNAZIONALIAlbert Eistein College of Medicine, Bronx, NY, USAAtomic Energy Commission, Service de Neurovirologie, Fontenay-aux-Roses, FranceBeaumont Hospital, Dublin, IrelandCentre for Neuroscience Research and Division of Biomolecular Sciences, GKT School, King’sCollege, London, UKCentro per lo Studio delle Malattie Dismetaboliche e delle Iperlipidemie, Ospedale della BeataVergine, Mendrisio, SwitzerlandChorley & South Ribble General Hospital, Chorley, UKColumbia Univ, Haverstraw, NY, USADepartment of Cell Biology, Washington University, St Louis, USADepartment of Chemistry,The Australian National University, Canberra City, AustraliaDepartment of Experimental Psychology, University of Cambridge, UKDepartment of Mental Health and Substance Dependence WHO Geneve, SwitzerlandDepartment of Pathology and Infectious Diseases Royal Veterinary College, London, UKDepartment of Pharmacology, Division of Neuroscience, University of Birmingham, UKDepartment of Psychiatry, Medical Center University of Mississippi, Jackson, USADepartment of Veterinary Pathology, Glasgow University Veterinary School, Glaskow, UKDivision of Medical Genetics, CHUV Lausanne, SwitzerlandEuropean Union of Family Associations of People with Mental Illness (EUFAMI)IBCM, University of Lausanne, Lausanne, SwitzerlandImperial College School of Medicine, Rheumatology Section, London, UKInserm Unite 549, Paris, FranceInstitut de Génétique Humaine du CNRS, Montpellier, FranceJefferson Med Coll, Philadelphia, USAKarolinska Institutet, Stockholm, SwedenNational Research and Development Centre for Welfare and Health (STAKES), FinlandNeuroprion, Network of Excellence, WP VI, ECNorthern Illinois University, DeKalb, IL, USANovartis Pharma, Basel, SwitzerlandPublic Health and Consumers’ Protection (Directorate General), Brusselles, European UnionRoyal Manchester Children's Hospital, Manchester, UKSergievsky Center, Columbia University, New York, NY, USAServizio di Geriatria, Ospedale della Beata Vergine, Mendrisio, SwitzerlandThe Scripps Research Institute, La Jolla, California, USAUniv of California at Irvine, Irvine, CA, USAUniversity of Cardiff, United KingdomUniv of Colorado, Denver, USAUniversity Hospital, London, ON, CanadaUniv of Innsbruck, Innsbruck, AustriaUniv of Maryland, Baltimore, USAUniversity of Maastricht, the NetherlandUniversity of Melbourne, Austin and Repatriation Medical Centre Heidelberg, Melburne,AustraliaUniversity of Rijeka Medical School, Rijeka, Croatia55RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNUniversité Victor Segalen, Bordeaux, FranceWalton Hospital, Liverpool, UKWAPR (World Association for Psychosocial Rehabilitation)Virtanen Institute for Molecular Sciences, University of Kuopio, FinlandVrije Universiteit Medical Center, Amsterdam, The NetherlandPRESENZA IN COMITATI EDITORIALIBiochemical Journal (Forloni)Brain aging (Forloni)Clinical Drug Investigation (Beghi)Cochrane Collaboration, Epilessia (Beghi)Drugs in the R&D (Beghi)Epidemiologia e Prevenzione (Lucca)Epilepsy Currents (Vezzani)Inpharma (Beghi)International Journal of Mental Health (Barbato)Journal of Neurochemistry (Bendotti)Neuroepidemiology (Beghi)Psichiatria di Comunità (Barbato)Acta Pharmacologica SinicaAmerican Journal of Human GeneticsAmerican Journal of PathologyAnnals of NeurologyAnnals of PharmacotherapyBiochemical JournalBiochemistryBrain ResearchBrain Res BulletinBritish Journal of PharmacologyClinical Drug InvestigationClinical PharmacokineticsClin Pharm TherCNS DrugsDrugsEpilepsiaEpilepsy & BehaviorEuropean Journal of ImmunologyEuropean Journal of NeuroscienceEuropean Journal of PharmacologyEuropean Journal of Public HealthFASEB JournalFundamental Clinical PsychopharmacologyGiornale di Neuropsichiatria dell’Età EvolutivaATTIVITA' DI REVISIONE56RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNJournal of Cell. BiologyJournal of Chemical NeuroanatomyJournal of Histochemistry and CytochemistryJournal of NeurochemistryJournal of NeuroimmunologyJournal of Neurology, Neurosurgery and PsychiatryJournal of NeuroscienceJournal of Neuroscience MethodsJournal of Pharmacy and PharmacologyJournal of Psychosomatic ResearchJournal of Structural BiologyMedica Science MonitorNeurologyNeurological SciencesNerobiology of AgingNeurobiology of DiseasesNeuropsychopharmacologyNeuroscienceNeuroscience LettersPharmacological ResearchProc Natl Acad Sci, USAPsychopharmacologySynapseThe Annals of PharmacotherapyTrends Molecular MedicinePRESENZA IN COMMISSIONI NAZIONALI E INTERNAZIONALIAgenzia Europea di Valutazione dei Medicinali (EMEA)Associazione Italiana di Neuroepidemiologia (E. Beghi, Presidente)Associazione Italiana per la Ricerca sull’Invecchiamento Cerebrale (AIRIC, G. Forloni,Presidente)Commissione sulla Health Care Policy della Lega Internazionale contro l’Epilessia (ILAE)Commissione ministeriale per lo studio delle problematiche concernenti la diagnosi, la cura el’assistenza dei pazienti affetti da sclerosi laterale amiotrofica.Comitato Ordinatore del Master in "Tecnologie Avanzate Applicate alle PatologieNeurodegenerative", Università di MilanoCommittee for Proprietary Medicinal Products (CPMP) presso L’EMEAConsiglio Direttivo AIRICDirettivo della Lega Italiana contro l’Epilessia (LICE)Esperto Commissione Unica del Farmaco – Ministero della SaluteGruppo di Studio sull’Epilessia della Società Italiana di Neurologia (SIN)Gruppo di Studio sulla Qualità della Vita della Società Italiana di Neurologia (SIN)Gruppo di Studio sulla Sclerosi Laterale Amiotrofica della Società Italiana di Neurologia (SIN)Gruppo di coordinamento Neuroprion NoE, ECInternational Committee su “Epilepsy and the Law”Medical Research Council Strategic Grant ApplicationNeurobiology Commission of the International League Against EpilepsyNeuroepidemiology Sezione della American Academy of Neurology (E. Beghi, Presidente)57RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNWord Association For Psychosocial Rehabilitation (A. Barbato, Presidente)ORGANIZZAZIONE DI EVENTICorso sull’uso critico degli psicofarmaci30 maggio, 3 e 12 giugno 2003, Dipartimento di Salute Mentale della ASL di TrentoGiornata di studio sulla malattia di Alzheimer5 aprile 2003, Ateneo Veneto, VeneziaSimposio Internazionale su ALS/MND, 17-19 Novembre 2003, MilanoSezione Annuale della Associazione Italiana di Neuroepidemiologia, XXXIV ConvegnoNazionale della Società Italiana di Neurologia, Roma 11-15 ottobre 2003PARTECIPAZIONE AD EVENTI CON CONTRIBUTI DELDIPARTIMENTOConvegno: Frontiers of neurodegeneration: ALS/MND. Meeting of the European ALS/MNDgroupPersistent activation of p38 mitogen-activated protein kinase in a mouse model of familialamyotrophic lateral sclerosis correlates with disease progression.30 gennaio – 1 Febbraio, 2003, Reisenburg, GermaniaStroke: Pathophysiology, Neuroprotection and Clinical Practice. Satellite meeting of theAustralian Neuroscience Society.The role of complement in ischemia/reperfusion injuryFebruary 1st, 2003, Adelaide, AustraliaRegional North American Annual Meeting of the World Federation of Neurology – ResearchGroup on Neuroepidemiology. 1. Long-term Remission of Epilepsy is Unaffected by Treatmentof the First Seizure. 2. The Reliability of the Diagnostic Criteria of Dystonia.April 4, 2003 Honolulu, USA8th Congress of The European Association of Palliative CareThe Nursing Staff Change with time of “awareness” of dying in patients and their families.Prospective study on attitude and request for euthanasia in three Italian hospices.2-5 aprile 2003, The Hague, OlandaRiunione Annuale G.I.R.N.I.A. (Gruppo Italiano di Ricerca in Neuroscienze dell’Infanzia edell’Adolescenza).Nuove frontiere della ricerca in campo epilettologico7 aprile 2003, PaviaCongresso Nazionale World Association for Psychosocial Rehabilitation Brasile (AMRP)Frontiers of psychiatric rehabilitation58RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMN24-26 aprile 2003, Salvador de Bahia, BrasileMolecular mechanisms of neurodegeneration: from treplet repeat expansions to protein toxicity.Characterization of cytoplasmic aggregates in a murine model of amyotrophic lateral sclerosis.Role of the ubiquitin/proteasome pathway in the degeneration of motorneurons in a murinemodel of familial amyotrophic lateral sclerosis.2-4 maggio, 2003, MilanoAggiornamento Continuo in Neuroscienze. Invecchiamento cerebrale e demenzeEpidemiologia delle demenze8-10 maggio 2003, CataniaIII Workshop sulla Sclerosi Laterale Amiotrofica.L’uomo: un possibile modello sperimentale.16-17 maggio 2003, TorinoJahresversammlung der Schweizerischen gesellschaft für Inner MedizinSuivi d’un gruppe de patients dements et de leurs soignants a six et douze mois.Chutes en milieu hospitalier aigu: une analyse en geriatrie et en medicine interne21-23 Maggio 2003, Basilea, Svizzera2° Convegno Nazionale di Farmacoeconomia.I costi dell’epilessia nel soggetto adulto in Italia.21-22 maggio 2003, MilanoCongresso Nazionale Annuale della Lega Italiana Contro l’Epilessia. Epilessia e qualità di vita:aspetti clinici e scale di valutazione.28-31 maggio 2003, Chia LagunaCorso di aggiornamento “Il paziente con crisi di perdita di coscienza. Approccio diagnostico eterapeutico sulla base della Evidence-Based Medicine”.13-14 giugno 2003 SassariConvegno Europeo World Association for Psychosocial Rehabilitation “Problemi insoluti dellapsichiatria comunitaria”Psichiatria comunitaria sfide e controversie14 giugno 2003, RomaWHO Scientific meeting on evidence-based psychosocial interventions in severe mentaldisordersEffectiveness of psychosocial interventions in severe mental disorders: key conceptual issues18-21 giugno 2003, GrenadaEuropean Epilepsy Academy. International Course: From Basic Knowledge To RationalPrescribing in Epilepsy.The Epidemiological Methods to Assess Treatment Outcomes.To Treat or not to Treat.10-19 luglio 2003, VeneziaCongresso: Sixth IBRO World Congress of Neuroscience,Early and persistent activation of p38 mitogen-activated protein kinase in a mouse model offamilial amyotrophic lateral sclerosis.59RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNMechanisms of motor neuron degeneration in transgenic SOD1G93A mouse, a model offamilial Amyotrophic Lateral Sclerosis10-15 Luglio 2003, Praga, Repubblica CecaVIII Congresso mondiale World Association for Psychosocial RehabilitationFactors associated to probability of admission to community psychiatric residential facilities inthe mental health services of Lombardy, ItalyQualitative approach to the issue of recovery from severe psychiatric problemsEvidence-based mental health and psychosocial rehabilitation: are you ready for an endlessjourney ?3-5 agosto 2003, New York, USAAnnual Meeting European Society for Behavioral PharmacologySerotonin 5-HT2A receptors in the mPFC modulate attention and executive function deficitsinduced by blockade of prefrontocortical NMDA receptors first Prize at the poster section)6-9 September, 2003, Anversa, BelgioGiornata Mondiale AlzheimerEpidemiologia dei deficit cognitivi nei grandi anziani residenti nella bassa Valle Olona: risultatipreliminari dello studio Monzino (80+)20 settembre 2003, Marnate, VareseColloques médicauxL’évaluation neuropsychologique dans la pratique clinique. Profil cognitif de sujects normaux,avec démence incertaine et démence légère24 settembre 2003, Ginevra. SvizzeraConvegno “Evidence Based Medicine in Epilessia”. Epilessia: dai miti alle prove.27 settembre 2003, TriesteAzienda Ospedaliera Niguarda Ca’ Granda, convegno “Il tempo della cura nelle residenzepsichiatriche”I costi delle strutture di un dipartimento di salute mentaleStudio caso-controllo sui predittori di invio a struttura residenziale nelle Unità Operative diPsichiatria della Lombardia3 ottobre 2003, MilanoThe First International Congress on Brain AgingProtein Misfolding and Neurodegenerative Disorders3-8 Ottobre Bucarest, RomaniaTavola Rotonda: Sclerosi Laterale Amiotrofica. Malattia degli Sportivi?.4 ottobre 2003 Castellanza, VareseCongresso “Mental Health in Europe: challenges and opportunities”Barbato AAn assessment of European projects for mental health promotion and prevention9-11 ottobre 2003, Bilbao, SpagnaXXXIV Congresso della Società Italiana di Neurologia Roma,Principali risultati e validità dei modelli animali nella comprensione della sclerosi lateraleamiotrofica60RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNMarkers biologici in AlzheimerIl comportamento dei neurologi italiani di fronte al paziente con epilessia.Prognosis of epilepsy in newly diagnosed patients by initial treatment11-15 ottobre 2003, RomaInternational Epilepsy Congress.How to Reduce the Burden of Epilepsy.12-16 ottobre 2003, Lisbona, PortogalloWorkshop on Prion DiseasesNeurotoxicity of prion protein16-19 ottobre, Troina, EnnaXIV Congresso dell’Associazione Italiana Neuroimmunologia,Immune-mediated mechanisms in cerebrovascular disorders22-25 ottobre, 2003, Taormina, MessinaCorso di Aggiornamento sulla Terapia delle Epilessie.Il trattamento della prima crisi epilettica e la ricaduta dopo la sospensione della terapia.23 ottobre 2003, Ancona120th ENMC International Workshop:European Minocycline in ALS (EUMINALS)Inflammatory mechanisms in ALS: Animal models24 – 26 ottobre 2003, Naarden, OlandaXLIII Congresso Nazionale Società Italiana di Psichiatria, “La conoscenza e la cura”Recovery: concetto, esperienza, esigenza nella ricerca qualitativa e quantitativa19-24 ottobre 2003, BolognaLe Demenze. Incontri di aggiornamento 2003Epidemiologia della demenza nei “grandi vecchi” della Valle Olona21 ottobre 2003, Castellanza, VareseCongresso sezione di Madrid della World Association for Psychosocial RehabilitationLa rehabilitaciòn psicosocial hoy23-24 ottobre 200, Madrid, SpagnaXXIV Corso Nazionale AINT di aggiornamento professionale per Tecnici diNeurofisiopatologia. Epilessia.29-30 ottobre 2003, Rignano Garganico, FoggiaVI Congresso Nazionale della Società Italiana di Epidemiologia PsichiatricaI pazienti con diagnosi di schizofrenia nelle strutture residenziali psichiatriche della LombardiaMeglio tardi che mai: studio prospettico su una coorte di pazienti con schizofrenia uscitidall’ospedale psichiatrico6-8 novembre 2003, Sirmione, BresciaI° Corso di Aggiornamento per Informatori Scientifici e Medici della Lombardia. Comeinterpretare un trial clinico.8 novembre 2003 Monza, Milano33rd Annual Meeting of Society for Neuroscience, SB-277011-A, a selective dopamine D361RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNreceptor antagonist, reduces cocaine-seeking behavior in response to drug-associated stimuli inrats”8-12 November 2003 New Orleans, USA14th International Symposium on ALS/MND. 17-19 novembre 2003, Milano- The Role of Epidemiology in Research and Care Provision.- Studies on mutant SOD-1 accumulation and ubiquitin/proteasome pathway in a murine modelof amyotrophic lateral sclerosis.- Activation of p38MAPK, but not JNK, in motor neurons of SOD1 mutant mice is associatedwith upregulation of TNF receptor 1.- Modulation of cytokine activity by a new 2-aminotetraline derivative (ST1214) prolongs thesurvival of SOD1G93A transgenic mice.- Morphological and chemical heterogeneity of intracytoplasmic aggregates in the spinal cord ofa murine model of amyotrophic lateral sclerosis- The extracellular matrix nets of spinal motor neurons is altered in transgenic SOD1G93A mice- Mutant SOD1G93A increases mitochondrial dysfunction after inhibition of electron transportchain in a cell culture model of FALS.- Decreased stability of the glial glutamate transporter glt-1 in a cellular model of familialamyotrophic lateral sclerosis (ALS)- Molecular basis for motor neuron selective damage induced by SOD1 mutants: distribution ofthe G93Amutant of SOD1 in mitochondria and mitochondrial structural alterations in motorneuron-like and non-neuronal cellular models of ALS.Congresso Società di Ricerca in PsicoterapiaMedicina basata sulle evidenze e psicoterapia20-23 novembre 2003, MilanoEuropean Commission Meeting on mental health policySome remarks on researech in mental health in Europe25-26 novembre 2003, LussemburgoXIII Convegno Nazionale della Società Italiana di Neurogeriatria. Revisione critica della terapiadelle demenze.27-29 novembre 2003, NapoliCongresso Nazionale UNASAM Il punto sulla salute mentale”seminario Percorsi di ripresa27-29 novembre 2003, RomaRiunione Regionale Lega Italiana contro l’Epilessia. Corso Teorico-Pratico di Aggiornamentoin Epilettologia: “Le convulsioni febbrili. L’epilessia del lobo temporale”. Prognosi (fattori dirischio, storia naturale) e terapia.29 novembre 2003, RagusaIl percorso clinico assistenziale nell’anziano fragile con declino cognitivo: dalla diagnosi allecureLa valutazione neuropsicologica4-6 dicembre 2003, NovaraCongresso “Psychiatry 2003 – Facing the global challenges”Innovative approaches to outcome assessment in psychosocial rehabilitation5-6 dicembre 2003, Vienna, Austria62RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMN“Ictus Cerebrale Ischemico: Attualità e Prospettive”.Aspetti Epidemiologici dell’Ictus Cerebrale.5-6 Dicembre 2003 San Severo, FoggiaAzienda Ospedaliera Niguarda Ca’ Granda, Giornata di studio “Appropriatezza e costi deitrattamenti nelle residenze psichiatriche della Regione Lombardia”Studio prospettico sui pazienti in trattamento residenziale e semiresidenziale in tre Dipartimentidi Salute Mentale della Lombardia10 dicembre 2003, MilanoCONTRIBUTI E CONTRATTIAmgen, MilanoAssociazione per la Ricerca Neurogenetica, Lamezia terme (CS)Azienda “Santa Maria della Misericordia”, UdineAzienda Ospedaliera San Gerardo, MonzaBoehringer Ingelheim, GermanyDyaxDipartimento di Salute Mentale dell’ASL di TrentoDipartimento di Salute Mentale dell’Azienda Ospedaliera di Milano NiguardaDipartimento di Salute Mentale dell’Azienda Ospedaliera di Milano San CarloDipartimento di Salute Mentale dell’Azienda Ospedaliera San Gerardo di MonzaFIRB, Ministero della Ricerca ScientificaFederazione Alzheimer, MilanoFondazione CariploFondazione MarianiFondazione MonzinoGlaxo-SmithKline, ItaliaHospice “via di Natale”, Aviano (PN)Human Frontiers Science ProgrammeIstituto Superiore di SanitàIndena SpALundbeck, DenmarkMinistero della SaluteMinistero della Ricerca ScientificaMotoneuron Diseases AssociationNeuroprion, NoE, ECNewronOspedale “Casa Sollievo” di San Giovanni RotondoProgetti Strategici IRCCS - Ministero della SalutePharmacia ItaliaPio Albergo Trivulzio, MilanoPfizer Italia, RomaRegione Lombardia, Assessorato alla famiglia e Solidarietà Sociale, MilanoRimoldi e BergaminiSELECTA MEDICA, PaviaSigma-Tau SpASTAKES (National Research and Development Centre for Welfare and Health, Finland)63RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNTelethonTourette Syndrome Association, USAUCB-PharmaUNASAM, MilanoSELEZIONE PUBBLICAZIONI SCIENTIFICHE APPARSENELL'ANNO 2003Assini, A. Terreni, L. Borghi, R., Giliberto, L., Piccini, A., Loqui, D. Fogliarino, S. Forloni, G. and Tabaton, M. Purespastic paraparesis associated with a novel presenilin-1 R278K mutation.Neurology 60: 150-151 (2003)Bahadi R, Farrelly PV, Kenna BL, Kourie JI, Tagliavini F, Forloni G, Salmona M.Channels formed with a mutantprion protein PrP(82-146) homologous to a 7-kDa fragment in diseased brain of GSS patients. Am J Physiol CellPhysiol. 285: C862-72 (2003)Balducci C, Nurra M, Pietropoli A, Samanin R, Carli MReversal of visual attention dysfunction after AMPA lesions of the nucleus basalis magnocellularis (NBM) by thecholinesterase inhibitor donepezil and by a 5-HT(1A) receptor antagonist WAY 100635 Psychopharmacology (Berl) ;167: 28-36 (2003)Balduini W, Mazzoni E, Carloni S, De Simoni MG, Perego C, Sironi L, Cimino M. Prophylactic but not delayedadministration of simvastatin protects against the long-lasting cognitive and morphological consequences of aneonatal hypoxic-ischemic brain injury, reduces IL-1_ and TNF a mRNA induction and does not affect endothelialnitric oxide synthase expression. Stroke, 34: 2007-2012 (2003).Barret, A., Tagliavini, F., Forloni, G., Salmona M., Colombo, L., De Luigi A., Limido, L. Suardi S., Rossi G. Auvré,F., Adjou, K.T , Salès, N., Bate, C., Williams, A., Lasmézas C. Deslys J.P. Evaluation of quinacrine treatment forprion diseases. J. Virology 77: 8462-8469 (2003)Bendotti C., M. Bao-Cutrona., C. Cheroni, L.Conforti, G. Grignaschi, M. Tortarolo, P. Veglianese, E. Zennaro.Pincipali risultati e validita’ dei modelli animali nella comprensione della sclerosi laterale amiotrofica.Neurological Sciences,24, S558-S562, (2003)Campiani G, Butini S, Trotta F, Fattorusso C, Catalanotti B, Aiello F, Gemma S, Nacci V, Novellino E, Stark JA,Cagnotto A, Fumagalli E, Carnovali F, Cervo L, Mennini T.Synthesis and pharmacological evaluation of potent and highly selective D3 receptor ligands: inhibition of cocaineseekingbehavior and the role of dopamine D3/D2 receptors.J Med Chem. 46(:3822-39 (2003).Cantoni L, Rozio M, Mangolini A, Hauri L, Caccia S. Hyperforin contributes to the hepatic CYP3A-inducing effectof Hypericum perforatum extract in the mouse. Toxicol Sci. 75: 25-30 (2003)Casarsa C, De Luigi A, Pausa M, De Simoni MG, and Tedesco F. Intracerebroventricular injection of the terminalcomplement complex causes inflammatory reaction in the rat brain. Eur J Immunol, 33: 1260-1270 (2003)Casini A, Caccia S, Scozzafava A, Supuran C T. Carbonic anhydrase activators. The selective serotonin reuptakeinhibitors fluoxetine, sertraline and citalopram are strong activators of isozymes I and II. Bioorganic MedicinalChemistry Letters 13: 2765-2768 (2003)Cervo L, Carnovali F, Stark JA, Mennini T.Cocaine-seeking behavior in response to drug-associated stimuli in rats: involvement of D3 and D2 dopaminereceptors.Neuropsychopharmacology. 28):1150-9 (2003)Chiabrando C, Fanelli R, Lucca U. Peripheral biomarkers of oxidative damage in Alzheimer’s disease. Annals ofNeurology 53: 419-420. (2003)64RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNChiesa R, Piccardo P, Quaglio E, Drisaldi B, Si-Hoe SL, Takao M, Ghetti B, Harris DA.Molecular distinctionbetween pathogenic and infectious properties of the prion protein. J Virol. 77: 7611-22.(2003)Citerio G, Nobili A, Airoldi L, Pastorelli R, Patruno A. Severe intoxication after phenytoin infusion: a preventablepharmacogenetic adverse reaction. Neurology 60: 1395-1396 (2003)Colovic M, Caccia S. Liquid chromatographic determination of minocycline in brain-to-plasma distribution studies inthe rat. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci 791: 337-343 (2003)Confaloni., A., Terreni L., Piscopo P., Crestini A., Malvezzi Campeggi I. Sala Frigerio C., Blotta I., Perri M., DiNatale M., Maletta R.,Marcon G., Bruni AC., Forloni, G. Cantafora A. Nicastrin gene in familial and sporadicalheimer’s disease. Neurosci Lett 253:61-65 (2003)Conforti, L., C. Dell’Agnello, N. Calvaresi, M. Tortarolo, A. Giorgini, M.P. Coleman And C. Bendotti Kif1b_isoform is enriched in motor neurons but does not change in a mouse model of amyotrophic lateral sclerosis. JNeurosci Res. 71:732-9 (2003).D'Avanzo B, Barbato A, Barbui C, Battino N, Civenti G, Frattura L: Discharges of patients from public psychiatrichospitals in Italy between 1994 and 2000. Int J Soc Psychiatry 49:27-34 (2003),D'Avanzo B, La Vecchia C, Negri E: Mortality in long-stay patients from psychiatric hospitals in Italy. Results fromthe Qualyop Project. Soc Psychiatry Psychiatr.De Simoni MG, Storini C, Barba M, Catapano L, Arabia AM, Rossi E, Bergamaschini L. Neuroprotection bycomplement (C1)-inhibitor in mouse transient brain ischemia. J Cereb Blood Flow Metab, 23: 232-239 (2003)Domenighetti G, D’Avanzo B, Egger M, Berrino F, Perneger T, Mosconi P, Zwahlen M: Women’s perception of thebenefits of mammography screening: population-based survey in four countries. Int J Epidemiol 32:816-821 (2003).Drisaldi B, Stewart RS, Adles C, Stewart LR, Quaglio E, Biasini E, Fioriti L, Chiesa R, Harris DA.Mutant PrP isdelayed in its exit from the endoplasmic reticulum, but neither wild-type nor mutant PrP undergoes retrotranslocationprior to proteasomal degradation. J Biol Chem. 278: 21732-43 (2003)Farrelly, PV., Kenna, BL.,Laohachai, KL.,Bahadi, R., Salmona, M., Forloni, G. Kourie, JI. Quinacrine blocksPrP(106-126)-formed channels. J. Neurosci Res. 74:934-41 (2003)Lin, E-J. D. C. Richichi, D.Young, K.Baer, A. Vezzani and M.J. During “Recombinant AAV-mediated expression ofgalanin in rat hippocampus suppresses seizure development” Eur J Neurosci, 18:1-6 (2003)Pozzi, P, C. Bendotti, S. Simeoni, F. Piccioni, V. Guerini, L. Martini and A. Poletti. Androgen 5alpha-reductase type2 is highly expressed and active in spinal cord motor neurons. Journal of Neuroendocrinology, 15,882-887 (2003)Richards D A, Manning J P A, Barnes D, Rombola L, Bowery N G, Caccia S, Leresche N, Crunelli V.Targetingthalamic nuclei is not sufficient for the full anti-absense action of ethosuximide in a rat model of absense epilepsy.Epilepsy Res 54: 97-107 (2003)Rizzi M, Perego C, Aliprandi, Richichi C, Ravizza T, Colella D, Veliskova J, Solomon L, Moshe S L, De SimoniMG and Vezzani A. Glia activation and cytokine increase in rat hippocampus by kainic acid-induced statusepilepticus during postnatal development. Neurobiol Disease, 14: 494-503 (2003).Salmona, M., Morbin, M., Massignan, T., Colombo, L., Mazzoleni, L., Capobianco L. , Diomede, L., Thaler, F.,Mollica L., Musco, G., Kourie JJ., Bugiani, O., Sharma D., Inouye, H., Kirschner, DA., Forloni G. Tagliavini F.Structural properties of Gerstmann-Sträussler-Scheinker disease amyloid protein J. Bbiol. Chem. 278: 48146-53(2003)Sievers C, Platt N, Perry VH, Coleman MP, Conforti L.,Neurites undergoing Wallerian degeneration show anapoptotic-like process with Annexin V positive staining and loss of mitochondrial membrane potential. Neurosci Res.46(2):161-9 (2003)Soriano FX., Galbete JL. and Forloni, G.Effect of beta-amyloid on endothelial cell lack of direct toxicity,enhancement of MTT-induced cell death and intracellular accumulation. Neurochem International 43: 251-261(2003)65RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNTerreni L, Fogliarino S, Quadri P, Ruggieri RM, Piccoli F, Tettamanti M, Lucca U, Forloni G. Tumor necrosis factoralfa-polymorphism C-850T is not associated with Alzheimer’s disease and vascular dementia in an Italian population.Neurosciences Letters 344: 135-137 (2003)Tortarolo M., Veglianese P, Calvaresi N. , Botturi A., Rossi C., Giorgini A. Migheli A. and Bendotti C. Persistentactivation of p38 mitogen-activated protein kinase in a mouse model of familial amyotrophic lateral sclerosiscorrelates with disease progression. Mol Cell Neurosci.23:180-92 (2003)Viviani, S. Bartesaghi, F. Gardoni, A. Vezzani, M. M. Behrens, T Bartfai, M. Binaglia, E. Corsini, M. Di Luca, C.L.Galli, M. Marinovich “Interleukin-1beta enhances NMDA receptor-mediated intracellular calcium increase throughactivation of the src family of kinases. J. Neurosci, 23: 8692-8700 (2003)Zanusso, G., Casalone, C. Acutis, P., Bozzetta, E., Farinazzo, A., Gelati, M., Fiorini, M. Forloni, G., Sun Sy, M.,Monaco, S. and Caramelli M. Molecular analysis of iatrogenic scrapie in Italy. J. Gen. Virology 84: 1047-1052(2003)SELEZIONE PUBBLICAZIONI DIVULGATIVE APPARSENELL'ANNO 2003Barbato A, D’Avanzo A, Rocca G, Amatulli A, Lampugnani D. Come stanno i pazienti dimessi in struttureresidenziali dopo la chiusura dell’ospedale psichiatrico di Mombello? I risultati di uno studio prospettico. Psichiatriadi Comunità 2003, II(3): 145-15.Beghi E, M. Leone. La ricerca sull’outcome nell’epilessia. In: Qualità della Vita in Neurologia e nelle patologiemuscolo-scheletriche. Metodologia applicata. L. Padua, R. Padua (eds). CIC Edizioni Internazionali, Roma 2003,pp.147-154.Bendotti C. Sclerosi laterale amiotrofica: una malattia neurodegenerativa rara. Ricerca &Pratica,19,103-114,2003Bendotti C.: SCIENTIFIC HIGHLIGHTS from the 13th International Symposium on MND.Amyotroph Lateral Scler Other Motor Neuron Disord. 2003 Jun;4(2):118-20Bendotti C.La proteina p38MAPK. Notiziario AISLA: n.3,pag.5, 2003Forloni G. I markers biologici nella Malattia di Alzheimer. Syllabus, Neurological Sciences 24 Supplement S702-705(2003)Lucrezio L, Caccia S. Gli antipsicotici. In: Interazioni tra farmaci. Gli psicofarmaci. Una valutazione della lororilevanza clinica. Selecta Medica, Pavia; 2003 : 51-63Mennini T, Caccia S. Le benzodiazepine In: Interazioni tra farmaci. Gli psicofarmaci. Una valutazione della lororilevanza clinica. Selecta Medica, Pavia; 2003 : 27-35Invernizzi R, Caccia S. Gli antidepressivi. In: Interazioni tra farmaci. Gli psicofarmaci. Una valutazione della lororilevanza clinica. Selecta Medica, Pavia; 2003 : 37-50Nobili A, Garattini S. Interazioni tra farmaci: interazioni con il cibo. Aggiornamento Medico 2003; 27: 33-36.Nobili A, Garattini S. Interazioni tra farmaci: la pillola anticoncezionale. Aggiornamento Medico 2003; 27: 104-108.Nobili A, Garattini S. Interazioni tra farmaci: prodotti a base di erbe. Aggiornamento Medico 2003; 27: 184-187.Nobili A, Garattini S. Interazioni tra farmaci: farmacogenetica. Aggiornamento Medico 2003; 27: 274-277.Nobili A, Garattini S. Interazioni tra farmaci: farmaci e succo di pompelmo. Aggiornamento Medico 2003; 27: 333-366.Nobili A, Piana I, Balossi L, Tettamanti M, Lucca U, Tarantola M, Matucci M. Il ruolo dei nuclei Alzheimer nelleRSA lombarde per l’assistenza al malato di demenza: i risultati di uno studio di valutazione della qualità. Demenze66RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMN2003; VI: 27-38.ALTRE PRODUZIONI EDITORIALI PUBBLICATE NEL CORSO DEL2003Garattini S, Nobili A. Interazioni tra farmaci. Gli psicofarmaci. Una valutazione della loro rilevanza clinica. Pavia:SELECTA MEDICA Ed., aprile 2003.Garattini S, Nobili A. Interazioni tra farmaci: una valutazione della loro rilevanza clinica. Il CD-ROM. Pavia:SELECTA MEDICA Ed., aprile 2003.ATTIVITA' DI RICERCALaboratorio di Biologia delle Malattie NeurodegenerativeMalattia di Alzheimer: studi geneticiIn collaborazione con il Laboratorio di Neuropsichiatria Geriatrica è stata creata una bancadi campioni di sangue, da cui si estrae il DNA, di pazienti Alzheimer (AD) in forma sporadica(SAD) o familiare (FAD) o con demenza di tipo vascolare, diagnosticati secondo criteririconosciuti a livello internazionale. Alla fine del 2003 il numero di campioni AD sporadici hasuperato le 500 unità mentre quelli FAD sono circa 180. Gli studi genetici sono finalizzatiall'identificazione di fattori causali nelle forme familiari o fattori di rischio nelle formesporadiche. In entrambe le popolazioni sono stati effettuati studi sul gene che codifica pernicastrina, una proteina di recente identificazione coinvolta nella fisiopatologia di AD. Usandola tecnica di dHPLC sono stati identificati alcuni polimorfismi e una mutazione che induce lasostituzione dell'aminoacido asparagina con tirosina a livello del codone 417. La mutazione èmolto più frequente nei soggetti AD rispetto ai controlli costituendo quindi un possibile fattoredi rischio per lo sviluppo della malattia. E’ stato studiato anche il gene che codifica per PEN 2,una proteina anch’essa potenzialmente coinvolta nella fisiopatologia di AD. Anche in questocaso è stata identificata una rara mutazione in un soggetto FAD e il suo potenziale ruolopatogenetico è attualmente verificato. E’ inoltre proseguito lo screening dei campioni FAD per igeni che codificano per presenilina 1 e 2 (PS-1 e PS-2) e proteina precursore dell'amiloide(APP), i tre geni identificati fino a ora con mutazioni missenso associate ad AD.Malattia di Alzheimer: studi precliniciL'accumulo di beta proteina (BA) nel parenchima cerebrale e sulle pareti vascolari è ilfenomeno patologico più precoce in AD, ad esso numerosi studi hanno attribuito un ruolocausale nello sviluppo della malattia. L'eliminazione di BA è diventato quindi un obiettivoterapeutico fortemente perseguito attraverso molteplici approcci: gli interventi a livello deglienzimi di sintesi e di degradazione del peptide, quelli in grado di regolare l'espressione delprecursore o il suo metabolismo ecc. Nel laboratorio da diversi anni si persegue l'idea di poteraggredire i depositi di BA attraverso un intervento diretto di tipo anti-amiloidogenico sugliaggregati capace impedirne la formazione o di eliminarli una volta formati. Per analogiachimica con le antracicline che avevano attività anti-amiloidogenica ma il cui quadrotossicologico impediva qualsiasi sviluppo terapeutico in AD, abbiamo studiato le tetracicline.67RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNGli studi sperimentali hanno messo in luce il potenziale ruolo curativo di queste molecole chedovrà ora essere testato in ambito clinico. In collaborazione con il Dipartimento di Biochimica eFarmacologia Molecolare, nel 2003 sono state testate altre molecole capaci di legare gliaggregati di amiloide con la doppia finalità di individuare molecole anti-demenza e possibilimarker diagnostici.Malattie da prioni: studi in vitroLe encefalopatie spongiformi (ES) sono malattie neurodegenerative di origine sporadica ogenetica ma anche trasmissibili, hanno manifestazioni cliniche e neuropatologiche differenti mainvariabilmente caratterizzate dall’accumulo cerebrale di un forma alterata della proteina prion(PrPsc). ES sono malattie rare ma la possibile trasmissione di una forma bovina della malattia(BSE) all'uomo ha creato grande allarme sanitario prima in Inghilterra e poi in tutta Europa.Come è noto PrPsc oltre a essere coinvolta nella patogenesi della malattia è anche componenteessenziale dell’agente infettivo. Nel laboratorio si sono sviluppati diversi progetti percomprendere il meccanismo molecolare che associa la presenza della PrPsc allo sviluppo delprocesso neurodegenerativo. Sono stati studiati gli effetti biologici di peptidi omologhi a largheporzioni della proteina prion e in particolare del peptide PrP 82-146 sintetizzato originariamentenel laboratorio di Biochimica e Chimica delle Proteine. Questo peptide, omologo a unframmento di PrP ritrovato nei depositi cerebrali in pazienti con ES, si struttura in foglietti betae ha attività neurotossica. Il ruolo funzionale e patologico della PrP è stato studiato in unmodello cellulare “inducibile” capace cioè sotto il controllo di doxiciclina di esprimere formemutate e native di PrP in linee cellulari PC12. Le forme mutate sia di tipo inserzionale, con 9extra octapeptidi, che puntiformi, con mutazione acido aspartico/asparagina al codone 178,entrambe associate a forma familiari di ES.Malattie da prioni: studi in vivoDa qualche anno il laboratorio è dotato delle strutture necessarie per lo scrapie sperimentale, glianimali da esperimento, topi e criceti, sono inoculati con omogenato di tessuto cerebrale infetto.L’analisi istopatologica dell’encefalo di questi animali mette in evidenza i depositi di PrPsc, ildanno neuronale, la gliosi e la caratteristica spongiosi a livello corticale e talamico. L’attivitàanti-amiloidogenica delle tetracicline è stata testata anche in questo contesto sperimentale, lasoluzione con l’agente infettante viene incubata con tetraciclina o doxiciclina prima di essereinoculata negli animali. L’inoculo è stato diluito a tre diverse concentrazioni e il trattamento contetraciclina prolunga in maniera progressiva la sopravvivenza degli animali. L’effetto positivodella tetracicline con questo approccio ex-vivo verrà confermato con un trattamento vero eproprio degli animali. Inoltre altre molecole sono attualmente allo studio per verificare lacapacità curativa.Oltre allo scrapie sperimentale nel laboratorio è presente, sviluppato dal dr. Chiesa negli StatiUniti, un altro modello in vivo per lo studio delle ES, si tratta di topi transgenici che esprimonola forma mutata della proteina prion (PG14). Questi animali, nella forma omozigote, sviluppanodai tre mesi di vita delle alterazioni motorie sempre più gravi e arrivano a morte intorno ai seimesi. Da un un punto di vista neuropatologico, i topi PG14 presentano un danno cerebellaremolto evidente a carico delle cellule granulari, mentre nelle altre aree cerebrali non ci sonoevidenti alterazioni. Nel tessuto cerebrale è presente una forma di proteina scrapie parzialmenteresistente alla digestione con proteasi K e insolubile, con caratteristiche simili a PrPsc.Apparentemente questa proteina PG14 ha caratteristiche intermedie tra la forma cellulare equella patologica della proteina prion, tuttavia l’inoculo di estratto cerebrale PG14 non è infetto.Utilizzando tessuti cerebrali di questi animali a diverse età, è attualmente in corso uno studio diproteomica per identifcare nuovi fattori coinvolti nella patogenesi delle ES.68RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNMorbo di Parkinson: studi geneticiIl morbo di Parkinson è la seconda più diffusa malattie neurodegenerativa, anche in questo casola patogenesi è ancora ignota, tuttavia le terapie a disposizione, pur rimanendo in un contestosintomatologico, sono diversamente articolate e con un buon livello di efficacia. La valutazionedell'influenza genetica è sempre stata tenuta ai margini degli studi sull'eziologia di PD chehanno tradizionalmente privilegiato la componente ambientale per la presenza di tossine la cuiesposizione era in grado di indurre un quadro clinico simile a PD. Gli studi di geneticamolecolare, svolti negli ultimi anni, hanno invece aperto una nuova prospettiva identificandomutazioni di due geni che codificano per alfa-sinucleina e parkina associate, in entrambi i casi, aforme giovanili di PD. Sempre in collaborazione con diversi centri neurologici, è stata attivata laraccolta di campioni di sangue provenienti da soggetti PD di origine sporadica o famigliare.Mentre le mutazioni associate a PD del gene che codifica per alfa-sinucleina sono un eventoestremamente raro - solo tre fino a ora identificate (A30P, A53T e E46K) - le mutazioni diparkina sono molto numerose sia in forma puntiforme che di delezione. Anche nella nostrapopolazione abbiamo identificato mutazioni di parkina associata a PD in omozigosi. Tuttavia inalcuni soggetti PD giunti alla nostra attenzione è stata riscontrata la presenza di mutazioni diparkina in forma eterozigote. E' quindi allo studio l'ipotesi che in forma eterozigote, lemutazioni di parkina, siano un fattore di rischio per PD, mentre acquisiscono un ruolo causale inomozigosi.Morbo di Parkinson: studi in vitroL’identificazione di mutazioni specifiche associate al morbo di Parkinson (PD) ha fornitoinformazioni fondamentali per la comprensione della malattia e ha permesso lo sviluppo dimodelli cellulari per lo studio della sua patogenesi. In passato, nel laboratorio, è stato dimostratoil potenziale effetto tossico di alfa-sinucleina utilizzando un peptide sintetico omologo alframmento fibrillogenico 61-95 di alfa-sinucleina (NAC). Successivamente, grazie allacollaborazione con il Dipartimento di Biochimica dell’Università di Padova (dr. Negro) sonostati realizzati dei vettori contenenti cDNA codificanti le sequenze mutate e native di alfasinucleina.La transfezione di queste sequenze in cellule PC12 si è dimostrata, in particolaricondizioni, dannosa per le cellule ospiti. Più recentemente è stata messa a punto una nuovatecnica che prevede il legame alfa-sinucleina con un sequenza aminoacidica TAT capace diveicolare all’interno della cellula la proteina. In questo modo è possibile controllare meglio laconcentrazione intracellulare della proteina. A dosi alte, in un range micromolare α-sinucleina siconferma tossica, ma a basse dosi, in un range nanomolare, risulta neuroprotettiva nei confrontidi stress ossidativi provocato alle cellule con acqua ossigenata. Il doppio effetto, protettivo –tossico, a secondo della concentrazione, è stato confermato anche in un modello cellulare“inducibile”. In PC12 ingenierizzate l’espressione di alfa-sinucleina è controllatadall’applicazione esterna di doxiciclina, se alfa-sinucleina viene mantenuta a bassi livelli lecellule diventano resistenti allo stress ossidativo. Questo fenomeno appare indipendente dallapresenza di mutazioni nella sequenza di alfa-sinucleina.Laboratorio di Malattie NeurologicheStudi epidemiologici sulla sclerosi laterale amiotrofica (SLA)Vi sono inclusi studi su incidenza, fattori di rischio e mortalità della SLA. Le informazioni sonoderivate da un registro regionale di malattia istituito nel 1998 e comprendente tutti i pazienti connuova diagnosi di SLA identificati in 8 province lombarde. Utilizzando simili protocolli diindagine, informazioni analoghe sono raccolte in due altri registri regionali (piemontese epugliese) ai quali il registro lombardo è associato. I dati provenienti dal registro lombardo e dapazienti esaminati nel contesto di collaborazioni con il Gruppo Italiano della SLA sono stati69RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNanche utilizzati per una verifica della validità e della riproducibilità dei criteri diagnostici dellaSLA e di alcune scale funzionali. Sulla base dei dati acquisiti, l’incidenza annua della SLA èrisultata sovrapponibile a quanto documentato in altri paesi occidentali in cui sono stati attivatiregistri di malattia, attestandosi intorno ai valori più elevati della letteratura (1,7 casi per100.000). Anche la mortalità è risultata comparabile ai risultati degli studi di popolazionianaloghe condotti con metodi più rigorosi. La validazione dei criteri diagnostici per la SLAattualmente in uso (classificazione di El Escorial) ha permesso di affermare che tali criteri sonovalidi e riproducibili solo dopo opportuno addestramento degli esaminatori.Il Laboratorio di Malattie Neurologiche ha recentemente istituito un gruppo collaborativoeuropeo sui registri della SLA (EURALS) al quale partecipano i titolari di registri regionali enazionali della malattia per la creazione di un database comune. Con la collaborazione di gruppiInglesi e Irlandesi (titolari di registri di popolazione), è stato elaborato un protocollo comune perl’esecuzione di uno studio caso-controllo per la valutazione dei fattori di rischio professionale ealimentare nella SLA.Studi sui marcatori biologici della SLACampioni ematici di pazienti con SLA arruolati nel registro regionale lombardo o provenienti daaltre casistiche appartenenti a membri del Gruppo Italiano della SLA sono utilizzati allo scopodi dosare il Tumor Necrosis Factor (TNF), il Vasoendotelial Growth Factor (VEGF), e l’InsulinGrowth Factor (IGF). Tali studi sono condotti in collaborazione con il Laboratorio diFarmacologia Recettoriale e il Laboratorio di Neurobiologia Molecolare. Il materiale ematico èanche utilizzato per lo studio del metabolismo e del trasporto del glutammato nel contesto diuna collaborazione con la Clinica Neurologica dell’Università di Milano-Bicocca.Studi sui costi e sulla qualità della vita nella SLAE’ in corso uno studio osservazionale volto a verificare la qualità della cura ai pazienti con SLAcomparando due diversi modelli assistenziali, il primo realizzato da centri dedicati e il secondoda strutture neurologiche generali. I parametri esaminati comprendono la rilevazione delladisabilità, dei costi assistenziali, della qualità di vita e dell’indice di gradimento espresso dalpaziente. L’indagine è coordinata dall’Istituto Neurologico di Milano. L’elaborazione dei datiraccolti è tuttora in corso.Studi sulle complicanze dell’epilessiaAlcune complicanze dell’epilessia sono state esplorate utilizzando disegni di studio diversi. Ilprimo è costituito da uno studio di coorte condotto su pazienti con epilessia e su controlliappaiati reclutati in 8 Paesi europei allo scopo di esaminare la morbilità e il rischio di incidentiattribuibili all’epilessia. Pubblicati i risultati generali dello studio, sono stati esaminati alcunidettagli riguardanti la tipologia delle malattie e degli incidenti e le relative complicanze. Perogni malattia o incidente sono state esaminate le conseguenze, gli interventi medici (inclusi iricoveri) e le assenze dal lavoro o da scuola. E’ in esame la mortalità di una coorte di soggettireclutati alla prima crisi epilettica tonico-clonica generalizzata in diversi centri italiani peressere ammessi a un trial terapeutico e sottoposti a follow-up a decorrere dal 1988. Uno studiocaso-controllo è stato completato per la valutazione della depressione in un campione di donnecon epilessia e in un gruppo di controllo designato all’interno di una casistica arruolata daneurologi attivi sul territorio nazionale. Sulla base degli studi di cui sopra, è stato dimostrato chei pazienti con epilessia presentano un rischio solo lievemente superiore a quello dellapopolazione generale di ammalare o avere incidenti e che la tipologia e la gravità di malattie eincidenti sono lievemente diverse nei pazienti rispetto alla popolazione generale. La mortalità dipazienti con una prima crisi epilettica non provocata è superiore a quella della popolazionegenerale, ma il rischio è significativamente superiore solo per le fasce di età più giovani. Ledonne con epilessia presentano un elevato rischio di depressione. La depressione appare70RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNcorrelata alla tipologia e alla gravità della malattia.Costi dell’epilessiaUna coorte di pazienti con epilessia, reclutati sul territorio nazionale da 14 istituzioni di secondoe di terzo livello, e osservati prospetticamente per un anno è stata esaminata per la valutazionedei costi diretti (costi sanitari relativi alla malattia). I soggetti ammessi sono stati suddivisi insottogruppi (prime diagnosi o epilessie croniche, le ultime stratificate in base alla gravità dimalattia) per verificare l’impatto della tipologia del caso sui costi dell’epilessia. Dal confrontodei diversi sottogruppi è emerso che i costi dell’epilessia variano sulla base della durata dimalattia e dalla risposta al trattamento antiepilettico (variando da un minimo di 412 € per leepilessie in remissione a un massimo di 2198 € per le epilessie croniche farmacoresistenti).Strategie terapeutiche innovative in pazienti con epilessiaNel contesto di uno studio multicentrico nazionale, una coorte di pazienti con una prima crisiepilettica non provocata, randomizzati a decorrere dal 1988 a trattamento immediato o ad attesadella ricorrenza di crisi per l’inizio del trattamento, è stata riesaminata dopo prolungamento delfollow-up per verificare l’impatto delle due strategie terapeutiche sulla prognosi a lungo terminedell’epilessia (definita dalla probabilità di remissione delle crisi per almeno 5 anni). Allo scopodi verificare se il primo trattamento antiepilettico possa essere effettuato con basse dosi difarmaco, pazienti con epilessia di nuova diagnosi non trattati sono stati randomizzati a untrattamento con dosi standard dei farmaci in uso o con la metà delle stesse dosi in diversi centriitaliani. Entrambi i gruppi terapeutici sono stati quindi sottoposti a follow-up fino acompletamento di due anni di remissione o fino a un massimo di 5 anni. La raccolta dei dati èstata recentemente conclusa ed è in corso l’analisi dei risultati. Per stabilire se la mancatarisposta a due farmaci antiepilettici sia sufficiente per indicare una condizione difarmacoresistenza nel bambino, soggetti in età pediatrica giudicati refrattari a due farmaciantiepilettici sono stati randomizzati a introdurre un terzo farmaco oppure a ottimizzare iltrattamento assegnato e seguiti per un massimo di 3 anni. Il beneficio terapeutico è definito dalraggiungimento di almeno sei mesi consecutivi di completo controllo delle crisi. Lo studio èstato condotto in collaborazione con l’IRCCS “Stella Maris” di Calabrone (PI). Nei pazienti conprima crisi non provocata si è dimostrato che la prognosi a lungo termine delle crisi èsovrapponibile nei casi trattati immediatamente e nei casi trattati in occasione della ricorrenza,confermando che il trattamento dell’epilessia dovrebbe iniziare solo in occasione dellaricorrenza di crisi. Anche i bambini trattati con un terzo farmaco non hanno presentato unadiversa probabilità di remissione rispetto ai bambini che hanno continuato il trattamento con ifarmaci già assegnati. Ciò suggerisce che una condizione di farmacoresistenza nell’epilessia puòessere già definita dopo il fallimento di due farmaci.Indicatori e di insuccesso di insuccesso della chirurgia dell’epilessiaNel contesto della Cochrane Collaboration, è stata condotta una revisione sistematica dellaletteratura sulla prognosi di pazienti sottoposti a chirurgia dell’epilessia allo scopo diidentificare i principali predittori di successo e di insuccesso terapeutico. L’indagine, realizzatacon la collaborazione di ricercatori italiani e di 4 paesi stranieri (Stati Uniti, Regno Unito,Canada, Croazia), ha riguardato l’esame di 55 pubblicazioni soddisfacenti precisi criteri diselezione. Dallo studio è emerso che il successo della chirurgia è stato influenzato positivamentedalla presenza di convulsioni febbrili, neoplasia cerebrale, concordanza tra EEG e RMNencefalica, ed estensione della resezione chirurgica. Fattori prognostici negativi sono risultatiinvece la presenza di reperti patologici alla RMN e di anomalie epilettiformi postoperatorie e ilricorso al monitoraggio intracranico.71RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNStudi epidemiologici sulla prevalenza e sui fattori di rischio di cefaleecroniche primarieIn collaborazione con la Neuropsichiatria Infantile dell’Università di Pavia, uno studio casocontrolloè stato condotto allo scopo di verificare se tra i soggetti con emicrania (con e senzaaura) vi fosse una maggiore prevalenza di familiari (di primo e secondo grado) con malattievascolari (ictus cerebri, ipertensione, infarto miocardico, diabete) rispetto alla popolazionegenerale. I bambini con emicrania sono stati confrontati con una popolazione di controllorappresentata da bambini con altre malattie neurologiche non correlate a cefalea e a malattievascolari. In collaborazione con la Clinica Neurologica dell’Università di Parma è statorecentemente concluso uno studio sulla prevalenza della cefalea a grappolo. L’indagine è stataeffettuata sottoponendo a screening (mediante compilazione di un questionario ad-hoc) gliassistiti di 5 medici di medicina generale (per un totale di 10.071 individui). In parallelo, ledomande inserite nel questionario sono state valutate sottoponendo a intervista pazienti concefalea a grappolo, con emicrania e con cefalea di tipo tensivo allo scopo di testarne validità eriproducibilità per la diagnosi di cefalea a grappolo, con riferimento ai criteri della InternationalHeadache Society.Una familiarità per malattie vascolari è risultata più frequente tra i soggetti con emicraniarispetto al gruppo di controllo, suggerendo una predisposizione genetica per malattie vascolaritra i soggetti emicranici. Risultati preliminari dello studio di validazione dei criteri diagnosticidella cefalea a grappolo hanno dimostrato che i sintomi che meglio separano la malattia dallealtre forme di cefalea cronica primaria comprendono la presenza di prolungati intervalli liberi dacrisi, di movimenti compulsivi e di attacchi di breve durata. La prevalenza “lifetime” dellacefalea a grappolo è risultata di 2,8 casi per 1.000.Strategie terapeutiche in bambini con cefalea cronica primariaIn collaborazione con la Neuropsichiatria Infantile dell’Università di Pavia è stato completatouno studio randomizzato pragmatico sulla utilità di un breve ricovero ospedaliero rispetto allagestione ambulatoriale di bambini con cefalea cronica primaria. Il successo delle due modalitàdi gestione è stato misurato verificandone l’impatto sulle crisi cefalalgiche nel follow-up e sualtri misuratori indiretti di beneficio assistenziale (consumo di farmaci, soddisfazione dellafamiglia e del curante). Un altro studio randomizzato, promosso dalla Neuropsichiatria Infantiledell’Università di Pavia e condotto in collaborazione con altri gruppi nazionali, è stato iniziatoallo scopo di verificare l’impatto della presa in carico psicologica rispetto ad un trattamentoconvenzionale di bambini con cefalea cronica primaria. Lo studio è tuttora in corso.Il ricovero ospedaliero è risultato significativamente superiore alla gestione ambulatoriale dellacefalea, come dimostrato dalla riduzione del numero, dell’intensità e della durata degli attacchi,dal minor consumo di analgesici e dal maggior gradimento dei medici e dei familiari. L’utilitàdel ricovero può essere giustificata da una più approfondita gestione dei problemi alla base dellapatologia in esame.Prevalenza e fattori di rischio vascolare e genetici della malattia diAlzheimerUno screening della malattia di Alzheimer è stato intrapreso in due aree geografiche dellaprovincia di Foggia (nel comprensorio della città di Foggia e a San Giovanni Rotondo) perdefinirne la prevalenza e i fattori di rischio vascolare e per stabilire il genotipo ApoE in uncampione casuale di soggetti residenti. L’indagine prevede l’esame di circa 5000 soggetti in etàsuperiore a 64 anni identificati nelle liste anagrafiche delle due aree in esame. Lo screeningcomprende due fasi: la prima condotta al domicilio del soggetto e consistente in un’intervistastrutturata volta a definire la presenza di demenza e a ricercare i fattori di rischio vascolare e ilprofilo neuropsicologico del soggetto; la seconda per la definizione dell’eziologia e per72RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNl’inquadramento nosografico della demenza. Lo studio è in corso. Il reclutamento saràcompletato il 31 dicembre 2004.Fattori di rischio neoplastico e comorbidità nella miastenia graveUno studio caso-controllo è stato eseguito in collaborazione con la clinica neurologicadell’università di Pavia per la ricerca di fattori di rischio neoplastico in pazienti con miasteniagrave. La popolazione in esame è rappresentata da 2479 soggetti assistiti da centri di terzolivello disseminati sul territorio nazionale e seguiti per un periodo medio di 9 anni. Una o piùneoplasie erano presenti in 221 casi (9%). Se confrontati con i pazienti senza neoplasie(controlli), i casi di neoplasia presentavano più frequentemente un timoma o un trattamentopregresso o attuale con immunoglobuline, e meno frequentemente un’esposizione allaciclofosfamide.Il materiale raccolto per l'esecuzione dello studio è stato utilizzato per l'elaborazione di progettivolti al confronto con altre banche-dati per verificare se la mortalità nei pazienti con miasteniagrave associata a neoplasie sia superiore a quella della popolazione generale e se l'incidenzadelle neoplasie nella coorte in esame sia superiore a quella della popolazione generale, conricerca dei predittori principali di mortalità all'interno della coorte.Diagnosi e prevalenza della distoniaNel contesto di una collaborazione con l’istituto “San Raffaele” di Milano è stato recentementeconcluso uno studio sulla prevalenza della distonia focale nell’adulto nella provincia di Foggia.I casi sono reperiti da fonti molteplici (ricoveri ospedalieri, visite presso gli ambulatori dineurologia, ORL, oculistica, ortopedia) presso i due principali ospedali della provincia. Per laverifica della qualità della diagnosi di distonia, è stato effettuato nel 2002 uno studio divalidazione che ha coinvolto 4 neurologi e 14 specializzandi in neurologia i quali hannoesaminato 29 videoregistrazioni di casi con distonia o con malattie considerate nella diagnosidifferenziale. L’accordo tra esaminatori è stato giudicato insoddisfacente nel 26% delle coppie,era migliore tra i neurologi che tra gli specializzandi, e predominava per il blefarospasmo, ladistonia cervicale e dell’arto superiore e la disfonia spasmodica. Dai risultati dello studio èemerso che la qualità degli studi epidemiologici sulla distonia dipende dal background edall’esperienza degli esaminatori e può variare a seconda delle diverse forme cliniche. L’analisidei dati dello studio di prevalenza è tuttora in corso.Laboratorio di Metabolismo dei FarmaciContributo dell’iperforina negli effetti farmacologici degli estratti diHypericum perforatumL’iperforina, il costituente lipofilo più abbondante degli estratti di Hypericum perforatum, è unodei possibili responsabili degli effetti di tipo antidepressivo degli estratti di questa piantamedicinale. E’ probabilmente implicato anche nei ben documentati fenomeni di interazionemetabolica tra gli estratti di Hypericum perforatum e i farmaci metabolizzati dall’isoformaCYP3A del citocromo P450. Questo è stato documentato in studi in vivo ed ex-vivo in modellianimali, evidenziando che il derivato acilfloroglucinolico induce l’attività e l’espressione dellaisoforma CYP3A, comportandosi qualitativamente e quantitativamente come un estrattoidroalcolico di Hipericum perforatum contenente un’equivalente quantità di iperforina. Gli studisono stati condotti in collaborazione con il Laboratorio di Patologia Molecolare.Nuovi derivati di origine semi-vegetale per il trattamento delladepressioneProseguendo la linea di ricerca che ha portato a identificare l’iperforina come uno dei73RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNcomponenti responsabili degli effetti farmacologici degli estratti di Hypericum perforatum, sisono considerati nuovi derivati ed esteri dell’acilfloroglucinolo. L’obiettivo è quello diidentificare i composti che mantengono l’attività antidepressivo-simile dell’iperforina perdendola capacità di indurre gli isoenzimi del citocromo P450 coinvolti nei fenomeni di interazionemetabolica degli estratti di Hypericum perforatum. Il progetto è svolto in collaborazione conIndena S.p.A, l’Unità di Farmacologia Comportamentale e i Laboratori di FarmacologiaRecettoriale e di Patologia Molecolare.Studi farmacocinetici con particolare riferimento al problema delpassaggio della barriera ematoencefalica di nuovi potenziali farmaciL’obiettivo principale è quello di caratterizzare aspetti generalmente non valutabili nell’uomo,quali il grado di uptake e la distribuzione nel SNC dei composti precursori e loro metabolitiattivi. L’imprevedibilità di questi aspetti e le possibili differenze tra le specie sottolineano poil’importanza di queste conoscenze per una corretta interpretazione del profilo farmacologico diun farmaco e per l’estrapolazione dei dati sperimentali alla situazione clinica. In questo contestosi sono inseriti vari progetti, svolti in collaborazione con Laboratori sia interni che esterniall’Istituto, atti a documentare il passaggio della barriera ematoencefalica e la farmacocineticain sede cerebrale di:- molecole con attività anti-amiloidogenica, potenzialmente in grado di legarsi “in vitro “adaggregati amiloidei già formati impedendo la formazione di nuovi accumuli (Sigma-Tau,Pomezia); composti “NO-releasing” particolarmente attivi nell’alleviare il dolore neuropaticonei modelli animali (NicOx Research Institute, Milano);- nuove strutture selettive per i recettori 5-HT3, sintetizzate dal Dipartimento Farmaco ChimicoTecnologico dell’ Università di Siena, con particolare interesse verso quei derivati che, nonoltrepassando in misura significativa la barriera ematoencefalica, potrebbero trovare potenzialiutilizzi in patologie cardiovascolari.Si sono conclusi gli studi riguardanti un nuovo antagonista al recettore AMPA (ZK 187638;Shering AG, Berlino), caratterizzato in Istituto per quanto riguarda il profilo farmacologico(Laboratori di Neurobiologia Molecolare e Farmacologia Recettoriale) in modelli animali diSLA. Questi studi hanno documentato che, differentemente da altri AMPA antagonisti, ilcomposto è caratterizzato da un efficiente assorbimento dal tratto gastro-intestinale e da unrapido passaggio della barriera ematoencefalica, due aspetti importanti per un suo potenzialeutilizzo a livello clinico.Laboratorio di Neurologia SperimentaleMeccanismi biochimico-molecolari coinvolti nelle genesi e propagazionedelle convulsioni e del danno neuronale a esse associato: ruolo deineuropeptidiStiamo indagando il ruolo della somatostatina e del neuropeptide Y e dei loro sottotipirecettoriali nel controllo dell’attività epilettica. I nostri precedenti risultati in collaborazione conil Dr Gobbi hanno infatti dimostrato che questi due neuropeptidi endogeni controllano inmaniera inibitoria l’attività epilettica. Stiamo utilizzando farmaci che agiscono specificamentesui diversi sottotipi recettoriali con attività agonista o antagonista per valutare la loro capacità diinibire o modulare le convulsioni in modelli sperimentali in vivo. Utilizziamo anche topigeneticamente modificati che mancano dei diversi sottotipi recettoriali per valutare la lorosuscettibilità alle convulsioni e all’epilettogenesi. Una volta identificato inequivocabilmente ilruolo dei sottotipi recettoriali nell’inibire l’attività epilettica, indagheremo la possibilità diutilizzare dei farmaci non peptidici che possano essere somministrati per via sistemica al fine dicontrollare le convulsioni.74RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNRuolo delle molecole dell’infiammazioneStiamo studiando in collaborazione con i laboratori della Dr De Simoni e del Dr Mantovani(Dip Immunologia), il ruolo di alcune citochine proinfiammatorie quali IL-1beta, TNF-alfa edIL-6, e molecole di fase acuta quali la pentraxina 3 nella genesi e propagazione delleconvulsioni e nei fenomeni neurodegenerativi ad esse associati. I nostri risultati sperimentalihanno fino ad ora dimostrato che l’attività epilettica induce la sintesi di varie molecole coinvoltenei processi infiammatori. IL-1 ha proprietà proconvulsivanti mentre l’antagonista recettorialedi IL-1 e il TNF-alfa hanno proprietà anticonvulsivanti. Stiamo studiando quali di questemolecole oltre a modulare l’attività epilettica contribuiscono all’insorgenza del danno neuronaleoppure hanno effetti neuroprotettivi.Convulsioni e sviluppo postnataleE’ noto che la suscettibilità alle convulsioni è maggiore nel bambino rispetto all’adulto e lostesso fenomeno si manifesta nel roditore durante lo sviluppo postnatale. Ci prefiggiamo quindidi studiare quali siano i meccanismi coinvolti in maniera significativa nei cambiamenti disuscettibilità alle convulsioni e in particolare alla insorgenza del danno neuronale che simanifesta nel ratto solo dopo i primi 15 giorni di vita postnatale. I nostri studi si stannofocalizzando principalmente sui neuropeptidi e le citochine sopracitati.Nuovi approcci terapeutici di gene transfer in vivoQuesto studio riguarda l’utilizzo di vettori virali che introducano nel cervello nuovi geni chedeterminino un’ aumentata produzione di alcune proteine in aree in grado di antagonizzarel’attività epilettica. Stiamo al momento utilizzando vettori adenovirali e abbiamo dimostrato cheun'aumentata trasduzione del neuropeptide Y o della galanina nell’ippocampo del ratto è ingrado di inibire significativamente l’attività epilettica. E’ interessante notare che questainibizione si mantiene per almeno 3 mesi dopo una singola iniezione del vettore virale nelcervello. Lo sviluppo di questa linea di ricerca riguarda la possibilità di utilizzare vettori viraliche possano inibire la comparsa e la ricorrenza delle convulsioni spontanee che insorgono dopol’induzione di un danno acuto cerebrale (traumatico, eccitotossico, ischemico).Meccanismi di resistenza ai farmaci antiepiletticiLo studio è svolto in collaborazione con il laboratorio di Metabolismo dei Farmaci (Dr Caccia)e si prefigge di indagare se il fenomeno della resistenza a vari farmaci antiepilettici dipendedall’attività di una famiglia di proteine di membrana quali la p-glicoproteina (P-gp) cheestrudono i farmaci dal tessuto cerebrale verso il sangue. Queste proteine sembrano avere unruolo significativo nel determinare la resistenza ad alcuni farmaci antitumorali e hanno lacapacità di estrudere dalle cellule anche farmaci anticonvulsivanti. Abbiamo dimostrato che laproteina prodotta dal gene MDR1, detta appunto p-gp, viene sintetizzata in maggiori quantità inspecifiche aree cerebrali durante l’attività epilettica e influenza significativamnte laconcentrazione cerebrale di alcuni farmaci anticonvulsiventi. Un'aumentata espressione della p-glicoproteina è stata dimostrata anche nel tessuto cerebrale di pazienti affetti da epilessiafarmacoresistente e potrebbe quindi contribuire alla refrattarietà alla terapia farmacologicaimpedendo il raggiungimento di concentrazioni di farmaco clinicamente rilevanti nel tessutoepilettico. Studi futuri si prefiggeranno di inibire l’attività della P-gp in modelli sperimentali diepilessia utilizzando bloccanti della sua funzione e quindi valutare se l’efficacia dei trattamentianticonvulsivanti migliora significativamente.Laboratorio di Neuropsichiatria GeriatricaImpatto clinico del donepezil su pazienti Alzheimeriani nella popolazione75RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNgeneraleE’ proseguito lo studio osservazionale sull’impatto clinico del donepezil (5 o 10 mg/die per os),un farmaco anticolinesterasico approvato per il trattamento della malattia di Alzheimer di gradolieve e moderato. Nello studio, 800 pazienti vengono seguiti per una durata di tre anni (anche incaso di sospensione, per qualsiasi motivo, dell’assunzione del farmaco) e vengono valutati inmaniera prospettica i parametri concernenti i diversi aspetti della malattia, compresi glieventuali disturbi del caregiver e i costi legati alla malattia, oltre agli aspetti legati alla sicurezzadel farmaco.Studio di popolazione sulla prevalenza delle demenze nei grandi anzianiIn parallelo al progressivo aumento degli individui di 85 e più anni all’interno della popolazioneanziana (65+), il numero dei malati di demenza nella fascia di età 85+ rappresenta una frazionein continua crescita sul totale degli affetti. L’esclusione dagli studi, come quasi sempre avviene,dei soggetti nelle classi di età più avanzate tende inevitabilmente a sottostimare il numerocomplessivo di affetti da demenza presenti nella popolazione. Per ovviare a questa lacuna èstato dunque avviato uno studio di popolazione (door-to-door) sulla prevalenza, i fattori dirischio e la storia naturale delle demenze e dei deficit cognitivi associati all’invecchiamento inuna popolazione di anziani con età maggiore di 80 anni residente in sette comuni della bassaValle Olona, in provincia di Varese.Prevalenza dell’anemia in una popolazione anzianaIn collaborazione con il Laboratorio di Ricerca Translazionale e di Outcome in Oncologia èstato avviato uno studio epidemiologico sulla prevalenza dell’anemia in una popolazione dianziani di età tra i 65 e gli 84 anni di età che risiedono nella città di Biella (circa 9500 soggetti).Scopo dello studio inoltre è di stabilire se un’anemia di grado lieve (definita da bassi livelli diemoglobina) presenti un’associazione significativa con variabili cliniche, cognitive e funzionalie di qualità della vita.Epidemiologia della malattia di Alzheimer: prevalenza e fattori di rischioNell’ambito del “Progetto strategico di ricerca finalizzata sulla malattia di Alzheimer” delMinistero della Sanità, in collaborazione con il Dipartimento di Neurologia dell’Ospedale “CasaSollievo della Sofferenza” di S. Giovanni Rotondo (FG) e con il Laboratorio di Neurologiadell’Istituto “Mario Negri” abbiamo intrapreso uno studio triennale sull’incidenza, prevalenza efattori di rischio vascolari e genetici della malattia di Alzheimer in provincia di Foggia.Sempre nell’ambito del “Progetto strategico di ricerca finalizzata sulla malattia di Alzheimer”del Ministero della Sanità, abbiamo iniziato a collaborare con il Dipartimento di Neuroscienzedell’Azienda “Santa Maria della Misericordia” di Udine allo svolgimento del progetto “Studio[triennale] di prevalenza e incidenza e valutazione di markers bioumorali della malattia diAlzheimer” gestito dalla Regione Friuli Venezia Giulia.Iperomocisteinemia come fattore di rischio per le demenzeLe evidenze che indicano nell’iperomocisteinemia un fattore di rischio vascolare unitamentealla recente rivalutazione del ruolo del danno vascolare nella patogenesi della malattia diAlzheimer ci hanno indotto a intraprendere un studio collaborativo con il Servizio di Geriatriadell’Ospedale della Beata Vergine di Mendrisio (Svizzera) sull’associazione trasversale elongitudinale di omocisteina, vitamina B12 e acido folico con malattia di Alzheimer, DemenzeVascolari e mild cognitive impairment.Validità e attendibilità della batteria neuropsicologica del CERADE’ stato avviato, in collaborazione con la Clinica della Memoria del Servizio di Geriatriadell’Ospedale della Beata Vergine di Mendrisio (Svizzera), uno studio trasversale e76RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNlongitudinale sulla validità e attendibilità della batteria neuropsicologica del CERAD(Consortium to Establish a Registry of Alzheimer’s Disease, uno degli strumenti più diffusiinternazionalmente per lo studio delle demenze e dei deficit cognitivi dell’anziano) nelladiagnosi delle forme iniziali di demenza e nell’individuazione degli anziani con mild cognitiveimpairment.Studio longitudinale in pazienti affetti da MCIPartecipazione, in collaborazione con la Clinica Neurologica III (Azienda Ospedaliera S. Paolo)dell’Università degli Studi di Milano, allo studio longitudinale sulla capacità di variabilipsicometriche (oltre che demografiche, cliniche e biologiche) di predire la “conversione” indemenza di soggetti con mild cognitive impairment. Questo studio fa parte del progetto dellaRegione Lombardia finanziato dal Ministero della Sanità nell’ambito del “Progetto strategico diricerca finalizzata sulla malattia di Alzheimer”.Ruolo della nicastrina nell’etiopatogenesi della malattia di AlzheimerA seguito della scoperta della Nicastrina, una proteina implicata nel processamento della betaamiloide,è in corso un progetto finanziato in parte con fondi del Ministero della Salute, chetende a meglio definire il ruolo della Nicastrina nell’etiopatogenesi della malattia di Alzheimer.Tale progetto, che vede la nostra collaborazione in campo statistico-epidemiologico, è guidatodall’Istituto Superiore di Sanità e dall’Associazione per la Ricerca Neurogenetica di LametiaTerme (CS).Valutazione della qualità dei servizi per il malato di demenzaNel campo della valutazione della qualità dei servizi per le demenze e degli interventi asostegno della famiglia e del caregiver è stata avviata una collaborazione con la DirezioneGenerale dell’Assessorato alla Famiglia e Solidarietà Sociale della Regione Lombardia per larealizzazione di due progetti specifici finanziati da fondi del Ministero della Salute.Il primo progetto ha l’obiettivo di valutare comparativamente in un campione di 70 RSA e IDRcon e senza Nucleo Alzheimer (a) la qualità di queste strutture sulla base di indicatori distruttura e di processo, (b) l’appropriatezza dei ricoveri e (c) l’impatto delle caratteristichestrutturali, organizzative e assistenziali sullo stato cognitivo, funzionale e comportamentale delpaziente con demenza.Il secondo progetto (Progetto CARER), in collaborazione con la Federazione Alzheimer Italia(AI), ha l’obiettivo di valutare l’effetto di un intervento di sostegno e di counselling allafamiglia che ha in carico e assiste a domicilio un malato di demenza. Misure d’outcome sono: ilgrado di stress, il carico assistenziale del caregiver, l’uso di servizi el’istituzionalizzazione/permanenza in famiglia del paziente.Progetto educativo/didattico “Cara Nonna”“Cara Nonna” è un progetto educativo/didattico con gli alunni delle classi V elementare perpresentare e discutere le problematiche connesse con l’avere un nonno o una nonna con lamalattia di Alzheimer.Servizio di informazione sui farmaci nell’anzianoOgni giorno è disponibile gratuitamente, per gli anziani e per i medici, un servizio telefonico ovia e-mail di informazione sui farmaci. Questo servizio risponde ogni anno a oltre 600 quesiti.Qualità dell’assistenza ai soggetti oncologici terminaliNel 1999 è stato avviato, in collaborazione con l’hospice “via di Natale” di Aviano (PN), unprogetto di ricerca che ha come obiettivo quello di valutare la qualità dell’assistenza durante77RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNl’ultimo periodo di vita dei malati accolti in hospice. Sono stati avviati uno studio retrospettivoe uno prospettico. Dal 2001 è in corso uno studio prospettico multicentrico con tre hospice (PioAlbergo Trivulzio di Milano, Domus Salutis di Brescia, “Via di Natale” di Aviano) al fine dirilevare le richieste implicite o esplicite da parte dei malati e/o dei familiari finalizzate amodificare la storia naturale della malattia.Progetto nazionale PROGRES AcutiConclusione della prima fase (censimento dei servizi di Diagnosi e Cura) in Lombardia eorganizzazione e definizione degli strumenti per la seconda fase (rilevazioni sui pazienti).Appropriatezza dell’utilizzo delle strutture psichiatriche residenziali esemiresidenziali in LombardiaAnalisi dei dati e restituzione dei risultati dello studio caso-controllo sui predittori dell’invio astruttura residenziale nelle Unità Operative di Psichiatria della Lombardia e dello studioprospettico sui pazienti delle strutture residenziali e semiresidenziali nelle Unità Operative diPsichiatria in tre Dipartimenti di Salute Mentale lombardi.Depressione resistenteStesura del protocollo e reclutamento dei centri in Lombardia per lo studio clinico sul valorepredittivo dei marker genetici per l’identificazione dei soggetti con diagnosi di depressioneresistenti al trattamento con SSRI e sulla relazione tra livelli serici di BDNF in un campione dipazienti che non rispondono al trattamento con SSRI.Progetto PROSPECTCoordinamento del Progetto PROSPECT per l’Unione Nazionale delle Associazioni per laSalute Mentale (UNASAM) per la disseminazione di tecniche di facilitazione in gruppi di autoaiutoper utenti e familiari.Efficacia degli interventi psicosociali in psichiatriaRevisione dei dati disponibili sull’efficacia degli interventi psicosociali in psichiatria all’internodel gruppo di consulenza del Dipartimento di Salute Mentale e Dipendenza da Sostanzedell’Organizzazione Mondiale della Sanità.Partecipazione al gruppo di consulenza per la valutazione dei progetti sulla salute mentalefinanziati dal Direttorato Generale – Salute Pubblica e Protezione del Consumatore –dell’Unione Europea.Fattori di guarigioneConduzione e discussione di interviste a pazienti con patologie gravi e in via di miglioramento oguarigione.Laboratorio di Infiammazione e Malattie del Sistema NervosoIl complemento e i sistemi infiammatori associati, nel danno cerebrale daischemia/riperfusioneIl ruolo del complemento nel danno da ischemia/riperfusione non è noto. Abbiamo dimostratoche il C1-INH, l'inibitore endogeno del primo componente (C1q) della via classica delcomplemento, migliora significativamente i deficit neurologici e il volume d'infarto in topi conischemia cerebrale focale indotta da occlusione transitoria dell'arteria cerebrale media. Abbiamoapprofondito ulteriormente questo dato verificando la sua efficacia in diversi ceppi di topi (chehanno un diverso livello di espressione del complemento) e definendo la dose-risposta e la78RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNfinestra temporale della sua efficacia. Dato che C1-INH può agire anche su altri substrati,stiamo anche valutando il coinvolgimento di altre vie di attivazione del complemento e quello dialtri sistemi quali il sistema delle chinine e quello della coagulazione. Per esplorare imeccansimi di neuroprotezione attivati dal C1-INH stiamo inoltre studiando l'espressione(mRNA e proteine) di molecole infiammatorie tra cui citochine, molecole di adesione, isoformedi NO sintasi e marker di apoptosi. I risultati ottenuti mostrano che il C1-INH esercita un effettoneuroprotettivo molto marcato, inducendo una diminuzione della lesione ischemica fino al 10%,e che la sua azione coinvolge, oltre al complemento, anche altri sistemi infiammatori associati,quale quello delle chinine. Abbiamo dimostrato inoltre che l’effetto protettivo del C1-INH èottenuto inducendo un ampio spettro di azioni antiifiammatorie.Studi sul ruolo di Rai (Shc C) nel danno cerebrale daischemia/riperfusioneQuesta linea di ricerca è focalizzata su Rai, un membro della famiglia delle proteine di tipo Shc,trasduttori citoplasmatici che condividono una struttura modulare simile. Rai è espressaselettivamente nel tessuto nervoso. E' in grado di attivare il pathway PI3K/Akt, di agire comefattore anti-apoptotico e di aumentare la sopravvivenza di neuroni esposti a deprivazione disiero. In collaborazione con G. Pelicci (IEO, Milano) abbiamo iniziato a studiare il ruolo di Raiin vivo. Abbiamo studiato l'espressione di Rai e nel suo sistema di segnalazione in topiischemici Rai -/-. In questi topi l’ischemia induce deficits funzionali più marcati, un aumentodell’apoptosi e dell’area ischemica. Rai sembra funzionare come un gene sensibile allo stressche aumenta l’attivitazione di PI3K e la fosforilazione di Akt in seguito a un insulto ipossico oossidativo. I dati ottenuti indicano che Rai possiede un ruolo protettivo nel danno cerebrale e laulteriore definizione del suo sistema di segnalazione potrà fornire indicazioni per nuovestrategie terapeutiche per il trattamento dell’ictus.Cellule staminali neurali o ematopoietiche nell’approccio terapeuticodell'ischemia cerebraleScopo di questo progetto è di valutare i meccanismi indotti dall'infusione e della mobilizzazionedi precursori ematopoietici (HSC) e dell'infusione di cellule neurali (NSC), responsabili dellariduzione del danno ischemico cerebrale. Si utilizza un modello murino di ischemia cerebralefocale con riperfusione. Abbiamo inizialmente determinato i protocolli ottimali per lasomministarzione di cellule, tra cui la concentrazione e la via di somministrazione. Abbiamoinoltre studiato alcuni marcatori cellulari che consentissero di ottenere un segnale chiaro eduraturo. E' stata valuata anche le diffusione e la penetrazione di cellule staminali nel tessutonormale e ischemico. Stiamo attualmente studiando l'effetto di popolazioni midollari selezionatesulla lesione ischemica, la neurodegenerazione e il recupero funzionale.Effetto del trasferimento genico di IL-4 mediante vettore virale sul dannoischemicoLa risposta infiammatoria contribuisce in modo rilevante all’evoluzione del danno daischemia/riperfusione. Abbiamo studiato l’effetto dell’infusione di un vettore adenoviralehelper-dipendente ingegnerizzato con il gene della citochina antiifiammatoria IL-4 (Ad-IL-4-GFP) e con quello GFP come riferimento, nel tessuto cerebrale di topi ischemici. I topi chericevevano l’infusione del vettore contenente il gene per IL-4 mostravano un miglioramento deideficit neurologici generali e focali e una riduzione dell’area di lesione rispetto a quelli chericevevano il vettore con il solo GFP (Ad-GFP). Stiamo attualmente determinando la finestratemporale di questo effetto, caratterizzando le cellule che esprimono il gene e le modificazionibiochimiche indotte da Ad-IL-4-GFP.79RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNLaboratorio di Neurobiologia MolecolareStudio dei meccanismi patogenetici della Sclerosi Laterale Amiotrofica(SLA)Ruolo dei meccanismi intracellulari e della via di degradazione proteica ubiquitina/proteasomanella progressiva degenerazione dei motoneuroni spinali nei topi con SOD1 mutata(SOD1G93A), un modello di SLA familiare. Dopo aver dimostrato che la proteina p38MAPKviene selettivamente attivata nei motoneuroni e nella glia dei midolli spinali di topi con SOD1mutata, abbiamo identificato la p38MAPK quale nuovo marker delle inclusioni proteichetipiche della SLA in motoneuroni spinali di reperti autoptici di pazienti con la malattia. Questirisultati, in pubblicazione su J. Neuropath. Exp.Neurol., avvalorano l’ipotesi che l’attivazione diquesta proteina giochi un ruolo nei meccanismi patogenetici della malattia. Abbiamo altresìvisto che a monte di quest’attivazione nei motoneuroni vi è un aumento dei recettori per TNFα eche l’attivazione di p38MAPK può avvenire attraverso pathways diversi in dipendenza del tipocellulare coinvolto. Questi dati forniscono utili indicazioni per il riconoscimento di meccanismiselettivi responsabili della degenerazione dei motoneuroni.Abbiamo inoltre esaminato il pathway PI3K-Akt deputato al mantenimento della sopravvivenzacellulare, nei topi SOD1G93A. I dati ottenuti sinora indicano che non ci sono alterazioni inquesta via, quindi, la morte dei motoneuroni non sembra dipendere da un deficit di questi fattoridi sopravvivenza. Per quanto riguarda lo studio del sistema ubiquitina/proteasoma abbiamocompletato l’analisi dell’attività del sistema in omogenato di midollo spinale di topiSOD1G93A presi a differenti stadi della malattia e confrontati con topi controllo e topi chesovraesprimono la SOD1 wild-type. I dati indicano che nonostante ci sia un accumulo diproteine insolubili al detergente, tra cui la SOD1, con la progressione della patologia, l’attivitàdel proteasoma non è variata. Tuttavia, abbiamo osservato una chiara diminuzione dei livellidella subunità 20S del proteasoma nei motoneuroni dei topi SOD1G93A mediante analisiimmunoistochimica che farebbe pensare a una disfunzione selettiva del sistema a livello deimotoneuroni. Inoltre continua la collaborazione con la Dr.ssa Bonetto del dipartimento diBiochimica e Farmacologia Molecolare per l’analisi proteomica della composizione degliaggregati proteici nel midollo spinale dei topi con SOD1mutata.Terapie farmacologiche nel modello murino di SLAIn uno studio preliminare abbiamo dimostrato un parziale effetto benefico dell’acetilcarnitinanel migliorare la progressione della malattia nei SOD1G93A Il passo successivo è stato quellodi valutare se l’associazione di acetylcarnitina più riluzolo fosse in grado di migliorare l’effettodell’acetilcarnitina. I risultati dimostrano un effetto additivo dei due farmaci nel rallentare ilrapido declino della funzione neuromuscolare e nell’aumentare la sopravvivenza. Stiamo oraesaminando l’effetto neuroprotettivo di questa combinazione farmacologica. Sulla base di questidati è stato approntato un clinical trial in pazienti con SLA coordinato dal Dr. E. Beghi.Sviluppo di un modello condizionale di topi transgenici per SOD1 mutatacon il metodo tTALo scopo di questo progetto è quello di sviluppare un modello murino condizionale dovel'espressione della SOD1 umana (hSOD1) mutata possa essere controllata temporalmente con ilsistema tTA. Sinora abbiamo generato 9 linee di topi transgenici nei quali il gene codificante perhSOD1 con mutazione G93A è sotto il controllo di un promotore bidirezionale, che controllaanche l'espressione del gene reporter EGFP. Tutte queste linee sono state incrociate con topitransgenici per tTA, dove l'espressione di tTA è guidata da un promotore per la proteinaubiquitaria Prp. Abbiamo valutato il pattern di espressione di hSOD1 G93A e del gene reporterEGFP negli animali doppi transgenici. I due geni sono co-espressi ad alti livelli nei neuronirecettori olfattivi posti nell'epitelio olfattivo e nelle proiezioni che dai recettori raggiungono lo80RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNstrato glomerulare del bulbo olfattivo. Inoltre, abbiamo ottenuto alcuni topi attivatori nei quali iltransattivatore tTA è sotto il controllo del promotore di hSOD1, per riprodurre in maniera piùaccurata il profilo di espressione della SOD1 mutata. Attualmente stiamo incrociando questitopi con le linee dei topi responsivi con l’obiettivo di ottenere animali doppi transgenici con unpattern di espressione più ubiquitario.Altre attività di ricercaUNITÀ DI FARMACOLOGIA COMPORTAMENTALEBasi neuronali del “drug craving” e del “relapse” nell’assunzione disostanze d’abusoScopo di questo progetto è quello di produrre indicazioni utili allo sviluppo di approcciterapeutici efficaci per prevenire la ricaduta nel consumo di sostanze d’abuso in seguitoall’insorgenza di “craving”.Il progetto prevede l’utilizzo di un modello sperimentale di “relapse” (ricaduta) indotto dallapresentazione di stimoli ambientali associati all’autosomministrazione della cocaina dopo unperiodo di astinenza. Si è dimostrato che agonisti parziali e antagonisti al recettoredopaminergico del tipo D3 sono in grado di modulare, in ratti disintossicati, i comportamenti diricerca della sostanza d’abuso scatenati dalla presentazione degli stimoli ambientaliprecedentemente associati all’assunzione della cocaina. Inoltre, si stanno svolgendo diversi studinel tentativo di trasferire queste evidenze sperimentali, ottenute studiando la cocaina, ad altresostanze d’abuso (nicotina) e in altre procedure sperimentali (“conditioned place preference”).Caratterizzazione di nuovi parziali agonisti ai recettori dopaminergici D3 ingrado di modulare il "craving" da cocainaCon l’obiettivo di ottenere farmaci in grado di modulare il craving per la cocaina incollaborazione con l’Unità di Farmacologia Comportamentale, il Laboratorio di FarmacologiaRecettoriale e il Dipartimento Farmaco Chimico Tecnologico dell’Università di Siena sono statesintetizzate diverse "nuove" molecole in grado di agire selettivamente come agonisti parziali ocome antagonisti ai recettori dopaminergici di tipo 3. I risultati di questi esperimenti hannodimostrato la capacità di alcune molecole che agirebbero non selettivamente come parzialiagonisti ai recettori di tipo 3 della dopamina, di modulare i comportamenti di ricerca dellasostanza d’abuso.Nuovi prodotti di origine vegetale per il trattamento della depressioneIl progetto, svolto in collaborazione con Indena S.p.A., il Laboratorio Metabolismo dei Farmaci(Silvio Caccia) e il Laboratorio di Farmacologia Recettoriale (Tiziana Mennini), si proponel’identificazione dei costituenti attivi responsabili della attività antidepressiva degli estratti diHypericum perforatum L. e loro possibile meccanismo d’azione, nell’intento di sviluppare unfarmaco con caratteristiche farmacodinamiche e farmacocinetiche superiori all’estratto totaleattualmente utilizzato.Dopo aver dimostrato attraverso studi farmacologici e farmacodinamici che l'iperforina è unelemento che sicuramente contribuisce all'attività dell'estratto idrometanolico di Hypericumperforatum L. in un modello predittivo dell'attività antidepressiva, si è passati alla sintesi e allavalutazione farmacologica di alcuni suoi derivati tra cui l’iperforina trimetossibenzoato.Resistenza ai farmaci antidepressivi: studi sperimentali e cliniciIl progetto svolto in collaborazione con l’Unità di Microdialisi Intracerebrale, il LaboratorioMetabolismo dei Farmaci e il Laboratorio di Biologia delle Malattie Neurodegenerative ha81RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNcome obiettivo la caratterizzazione comportamentale e biochimica di un modello di resistenza aifarmaci antidepressivi.A tale scopo, abbiamo documentato che i ratti Wistar Kyoto, rispondono in modo diversorispetto a un ceppo di controllo, lo Sprague Dawley, quando sottoposti a uno stress inevitabile.Entrambi i ceppi hanno però risposto al trattamento cronico con farmaci antidepressivi.Nel tentativo di individuare un ceppo resistente, abbiamo cominciato a caratterizzare la rispostadi vari ceppi di topi al trattamento con farmaci antidepressivi triciclici e bloccanti selettividell’uptake della serotonina.UNITA' DI MICRODIALISI INTRACEREBRALEStudi sul meccanismo d’azione dei farmaci antidepressiviL’interesse principale del nostro gruppo di ricerca è rivolto allo studio dei meccanismi adattativiche determinano la comparsa degli effetti antidepressivi degli inibitori selettivi del “reuptake”della serotonina (SSRI) e della noradrenalina (NRI).E’ noto che il ritardo con cui insorge l’effetto antidepressivo costituisce uno dei limiti principalidell’azione dei farmaci antidepressivi. Studi del nostro gruppo hanno mostrato che l’effettodegli SSRI sulla disponibilità sinaptica della serotonina in varie aree del cervello di ratto èmodulata dall’attività degli autorecettori somatodendritici di tipo 5-HT1A. Inoltre, un aumentodei livelli sinaptici di serotonina causato dal trattamento cronico con SSRI è associato alladesensibilizzazione degli autorecettori 5-HT1A che controllano il rilascio delneurotrasmettitore. Meccanismi analoghi modulano la capacità della reboxetina, un farmacoantidepressivo che inibisce selettivamente il “reuptake” della noradrenalina, di aumentare ladisponibilità sinaptica di noradrenalina nel cervello di ratto.Questi risultati dimostrano che l’attività degli autorecettori serotoninergico di tipo 5-HT1A eα2-adrenergico determina l’efficacia con cui gli SSRI e NRI aumentano la disponibilità diserotonina e noradrenalina nelle sinapsi centrali e suggeriscono che l’effetto antidepressivodegli SSRI e NRI può essere favorito dagli antagonisti dei rispettivi autorecettori.Un altro progetto riguarda la capacità dei farmaci antidepressivi di attivare geni bersagliospecifici in regioni limbiche e corticali e in particolare lo studio delle modificazionidell’espressione del “ brain derived neurotrophic factor” in relazione alla rispostacomportamentale al trattamento cronico con farmaci antidepressivi nel test del nuoto forzato.Infine, abbiamo valutato la capacità di farmaci ad attività ansiolitica/antidepressiva e inparticolare gli antagonisti dei recettori NK1 della sostanza-P di inibire gli effetti dello stress sulrilascio di catecolamine corticali nel ratto.Ruolo dei recettori serotoninergici 5-HT2C nella fisiopatologia dei ganglidella baseI gangli della base sono parte essenziale del circuito neuronale deputato al controllo motorio ecognitivo. Alterazioni a vari livelli di tale circuito sono responsabili dei movimenti ipo- o ipercineticiassociati a varie malattie neurologiche tra cui il Morbo di Parkinson, la Corea diHuntington e la Sindrome di Gilles de la Tourette.Gli studi condotti dal nostro gruppo hanno avuto l’obiettivo di chiarire il ruolo dei recettoriserotoninergici di tipo 5-HT2C nel controllare la trasmissione GABAergica nella substantianigra reticulata (SNR), principale nucleo di “output” dei gangli della base. Abbiamo stabilitoche la stimolazione dei recettori 5-HT2C aumenta il rilascio di GABA nella SNR. Inoltre, igruppi di M. Carli (Dip. Neuroscienze, Milano) e E. Esposito (Consorzio M. Negri Sud, Chieti),partecipanti al progetto finanziato dalla “Tourette Syndrome Association” americana hannostabilito che la stimolazione dei recettori 5-HT2C aumenta l’attività elettrica dei neuroniGABAergici della SNR e migliora i deficit cognitivi causati dalla stimolazione dei recettoriGABAergici nel nucleo subtalamico.82RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNUNITA' DI FARMACOLOGIA DEL COMPORTAMENTO COGNITIVOSviluppo di modelli di deficit cognitivo per individuazione di nuovestrategie farmacologiche per il trattamento dei disturbi cognitiviL’interesse principale di questi studi è lo sviluppo di nuove strategie farmacologiche per iltrattamento sintomatico dei disturbi cognitivi associati a malattie neurologiche come la demenzad’Alzheimer o psichiatriche come depressione e schizofrenia. A questo scopo sono statisviluppati modelli animali che presentano caratteristiche tipiche dei disturbi cognitivi che siosservano nei pazienti. Questi studi includono: a) l’uso delle eccitotossine, immunotossine oagenti farmacologici specifici per distruggere o manipolare in modo selettivo diversepopolazioni neuronali nel cervello di ratto e topo; b) l’utilizzo di diversi test comportamentaliche permettono di esaminare vari aspetti di apprendimento, memoria e di attenzione sia nei rattiche nei topi; c) l’utilizzo dei topi transgenici che presentano aspetti neuropatologici dellamalattia di Alzheimer o di altre malattie neurologiche o psichiatriche.Studi sul ruolo dei meccanismi serotonergici e glutammatergici dellacorteccia prefrontale nei disturbi di attenzione e delle funzioni esecutiveI deficit di attenzione e delle funzioni esecutive sono una componente importante dellaschizofrenia per i quali il trattamento con antipsicotici classici risulta inefficace. Un’ipotesirecente suggerisce che i deficit cognitivi dei pazienti schizofrenici possono dipendere daun’alterata trasmissione glutammatergica nella corteccia prefrontale.Nell’ambito di un progetto collaborativo con il Dott. Invernizzi (Dip. Neuroscienze, M. Negri,Milano) finanziato dal MIUR (FIRB) sul deficit di attenzione causato dall’ipofunzione deirecettori glutamatergici corticali di tipo NMDA abbiamo studiato come i recettori 5-HT2A e 5-HT1A della serotonina localizzati a livello corticale regolano aspetti dell’attenzione e dellefunzioni esecutive.Questi studi hanno dimostrato che l’attenzione può essere migliorata dal blocco dei recettori 5-HT2A o dalla stimolazione dei 5-HT1A corticali. Abbiamo anche mostrato che le funzioniesecutive, che regolano il comportamento attraverso l’attivazione e coordinazione di programmidiversi come l’inibizione dell’impulsività e/o degli atti compulsivi, possono essere dissociati alivello dei meccanismi serotoninergici e dopaminergici corticali.Gli studi di microdialisi condotti dal Dott. Invernizzi hanno dimostrato che il deficit diattenzione e delle funzioni esecutive indotto dal blocco dei recettori NMDA è associatoall’aumentato rilascio di glutammato e di serotonina nella corteccia prefrontale e che i recettori5-HT2A della serotonina sono in grado di modulare la trasmissione glutamatergica corticale ealcuni aspetti delle funzioni esecutive e dell’attenzione.83RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMN84RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNDIPARTIMENTO DI RICERCACARDIOVASCOLAREPERSONALECapo DipartimentoMaria Grazia FRANZOSI, Dr.Sci.Biol.Laboratorio di Farmacologia Clinica CardiovascolareCapo LaboratorioRoberto LATINI, Dr.Med.Chir.Unità di Endocrinologia CardiovascolareCapo UnitàSerge MASSON, Dr.Bioch.Laboratorio di Valutazione Clinica dei FarmaciCapo LaboratorioMaria Grazia FRANZOSI, Dr.Sci.Biol.Unità di BioinformaticaCapo UnitàUnità di Statistica MedicaCapo UnitàEnrico NICOLIS, Stud.Sci.Informaz.Simona BARLERA, Dr.Sci.Pol.Laboratorio di Ricerca in Medicina GeneraleCapo LaboratorioM.Carla RONCAGLIONI, Dr.Sci.Biol.Laboratorio di Farmacologia ClinicaCapo LaboratorioGianni TOGNONI, Dr.Med.Chir.Unità di Ricerca InfermieristicaCapo UnitàPaola DI GIULIO, Dipl.Inf.Prof.85RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNINTRODUZIONE ALLE ATTIVITA' DEL DIPARTIMENTOIl Dipartimento di Ricerca Cardiovascolare sviluppa attività di ricerca che coprono sia l'areasperimentale e di ricerca di base, sia quella della valutazione clinica ed epidemiologica difarmaci, strategie diagnostico-terapeutiche, fattori di rischio, predittori di esito. Caratteristicacomune alla logica di sviluppo dei progetti del Dipartimento (nato sostanzialmente della lungaesperienza degli studi GISSI) è quella di privilegiare un'organizzazione di ricerca a forteimpronta collaborativa e multicentrica (anche per quanto riguarda la componente della partesperimentale che si interfaccia con la clinica). In questo senso lo staff del Dipartimento èconcepibile come un "nucleo di riferimento" per un gruppo di ricerca reale che abbraccia, alivello nazionale ed internazionale, in modo permanente, centinaia di ricercatori clinici emoltissime strutture assistenziali.Alle più tradizionali collaborazioni centrate sulla componente medica ed ospedaliera dellaricerca, si sono aggiunte negli ultimi anni linee di ricerca specificamente originali nel panoramaitaliano, che riguardano la medicina generale e la funzione-attività infermieristica.Il Laboratorio di Farmacologia Clinica Cardiovascolare svolge attività di ricerca clinica esperimentale riassumibili in tre aree principali: a) fisiopatologia, modulazione farmacologica eruolo prognostico dell’attivazione del sistema renina-angiotesina-aldosterone e dei sistemineuro-ormonali in genere, nell’infarto miocardico e nell’insufficienza cardiaca; b)fisiopatologia, inibizione farmacologica e ruolo prognostico dell’attivazione dei processiinfiammatori nell’infarto miocardico e nell’insufficienza cardiaca; c) terapia cellularedell’infarto miocardico.Il Laboratorio di Valutazione Clinica dei Farmaci svolge attività di ricerca clinica edepidemiologica nell’ambito di tre aree principali: a) valutazione clinica di farmaci e strategieterapeutiche in ambito ospedaliero con la conduzione di clinical trial di grandi dimensioni nelloscompenso cardiaco, nelle sindromi coronariche acute e nella fibrillazione atriale; b)epidemiologia genetica dell’infarto miocardico e dello scompenso cardiaco; c) epidemiologiaclinica e valutazione dei fattori di rischio dell’Infarto miocadico.Il Laboratorio di Ricerca in Medicina Generale svolge attività di ricerca clinica eepidemiologica nell'ambito della prevenzione cardiovascolare con una vasta rete di Medici diMedicina Generale. In particolare l'attività è orientata: a) alla verifica di nuove ipotesi attraversotrial clinici di grandi dimensioni; b) alla valutazione della reale trasferibilità degli interventipreventivi di provata efficacia nella pratica clinica quotidiana attraverso studi epidemiologici edi outcome research; c) a effettuare studi di farmacoepidemiologia a partire dalle analisi delleprescrizioni di grandi data-base amministrativi.Il Laboratorio di Farmacologia Clinica ha sviluppato reti di ricerca infermieristica orientate allavalutazione della qualità di salute e di vita dei pazienti e all'epidemiologia degli interventiinfermieristici e alle loro implicazioni per il benessere e l'outcome dei pazienti.SCOPERTE/RISULTATI PRINCIPALIIl primo confronto diretto tra vari marker di prognosi in 4300 pazienti con insufficienza cardiacaha permesso di dimostrare che il peptide natriuretico cerebrale (BNP) è uno dei più fortiindicatori indipendenti di mortalità e di morbidità.La N-acetilcisteina (NAC), precursore del glutatione e antiossidante, riduce la perdita deimiociti ventricolari in un modello sperimentale di diabete di tipo I.Lo studio PPP ha indicato che nei pazienti diabetici l'aspirina a basse dosi è molto meno86RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNefficace nel prevenire gli eventi cardiovascolari rispetto ad altri gruppi di soggetti ad altorischio.COLLABORAZIONI NAZIONALIANMCO (Associazione Nazionale Medici Cardiologi Ospedalieri)CINECA (Centro di Calcolo Interuniversitario dell'Italia Nord-Orientale)CSeRMEG (Centro Studi e Ricerche in Medicina Generale)Gruppi organizzati di MMG (FIMMG; CoS, Ass.Cu.M.I.)IFOM-FIRC, MilanoRegione LombardiaSIBIOC (Società Italiana di Biochimica Clinica)SIFO (Società Italiana di Farmacia Ospedaliera)Stem Cell Research Institute, Ospedale San Raffaele, MilanoCOLLABORAZIONI INTERNAZIONALIPHRI (Population Health Research Institute) & CCC (Canadian Cardiovascular Collaboration),Università McMaster, Hamilton, Ontario,CanadaCecomet (Centro de Epidemiologia comunitaria y Medicina tropical, Esmeraldas, Ecuador)Cochrane Collaboration, Oxford, UKClinical Trial Research Unit, Università di Auckland, New ZealandCTSU (Clinical Trial Service Unit) / ISIS (International Studies on Infarct Survival), Oxford,UKDivision of Genetics and Development, Guy's, King's and St Thomas' School of Medicine,King's College, LondonECLA (Estudios Cardiologicos de Latino-America)Karolinska Institutet, Stockholm, SveziaVeterans Affairs, Minneapolis, Minnesota, USAWestfälische Wilhelms - Universität, Münster, GermaniaWellcome Trust Centre for Human Genetics, University of Oxford, UKWONCA (World Organization of Family Doctors), EuropaPRESENZA IN COMITATI EDITORIALICirculation, International Journal of Health Services, Journal of Clinical Epidemiology (GianniTognoni), Italian Heart Journal, Journal of Cardiac Failure (Roberto Latini)ATTIVITA' DI REVISIONEAmerican Heart Journal, American Journal of Managed Care, Cardiovascular Research,87RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNCirculation, Clinical Pharmacology and Therapeutics, European Heart Journal, Italian Journal ofCardiology, Journal of Cardiac Failure, PharmacoEconomicsPRESENZA IN COMMISSIONI NAZIONALI E INTERNAZIONALIEuropean Science FoundationCUF (Commissione Unica per il Farmaco)Comitato Etico della Regione LombardiaComitato Etico per la Sperimentazione Clinica dei Farmaci Azienda U.L.S.S. 21 di Legnago -Regione VenetoComitato Etico Azienda U.L.S.S. 20 di Verona - Regione VenetoORGANIZZAZIONE DI EVENTICorso di formazione per il monitoraggio - Studio GISSI-HF30-31/1/03, Istituto di Ricerche Farmacologiche “Mario Negri” – Milano1°Incontro del Gruppo Collaborativo Italiano sul BNP nell'Insufficienza Cardiaca, Palermo, 11marzo 2003Mini Investigators’ Meeting – Studio GISSI-HF7/7/03, Ospedale Papardo – Contrada Sperone, Messina8/7/03, Presidio Ospedaliero Villa Sofia, Palermo9/7/03, Starhotels, Bologna21/7/03, Ospedale San Michele Brotzu, Cagliari22/7/03, Ospedale Policlinico, Bari23/7/03, Consorzio “Mario Negri” Sud, S. Maria Imbaro (CH)21/7/03, Hotel Bologna, Mestre22/7/03, Istituto di Ricerche Farmacologiche “Mario Negri”, Milano23/7/03, Sede ANMCO Regionale, c/o Viglia Biomed, Torino28/7/03, Ospedale Monaldi, Napoli29/7/03, Poliambulatorio S. Maria, Roma30/7/03, Sede ANMCO, Learning Center, FirenzeInvestigators’ Meeting - Studi MICHELANGELO: OASIS-5 & OASIS-612/9/03, BolognaInvestigators' Meeting – Studio GISSI-HF, Un modello di ricerca collaborativa,7/10/03,BolognaEuropean Investigators’ Meeting – Studio ACTIVE1/12/03, Roma88RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNPARTECIPAZIONE AD EVENTI CON CONTRIBUTI DELDIPARTIMENTOAmerican College of Cardiology. Annual Scientific Session, 30/3/03–2/4/03, Chicago:- Changes in plasma Brain Natriuretic Peptide and Norepinephrine over time and subsequentmortality and morbidity in Heart Failure: Results from Val-HeFT.- The relationship between B-Type Natriuretic Peptide, Heart Structure, and Function in 4300patients with Heart Failure Enrolled to Val-HeFT.- Valsartan produces a sustained decrease in Plasma Aldosterone independent of Age, Gender,or Race: Results from Val-HeFT.Dipartimento Riabilitazione Cardiovascolare-Università di Foggia. Attualità in Cardiologia2003, 10-12/4/03, Foggia.Prevenzione dell’ictus nei soggetti con fibrillazione atriale: oltre gli anticoagulanti orali.Associazione Nazionale Medici Cardiologi Ospedalieri. 34° Congresso Nazionale diCardiologia, 31/5/03-4/6/03, Firenze:- Utilità del dosaggio del NT-proBNP nella stratificazione clinica dello scompenso.- Relazione fra BNP e struttura/funzione cardiaca in 4300 pazienti con scompenso cardiaconello studio Val-HeFT.- Il Valsartan provoca una marcata riduzione dell’aldosterone plasmatico, indipendentemente daeta’, sesso e razza: risultati dello studio Val-HeFT.- Trattamento invasivo vs terapia medica in pazienti con sindrome coronarica acuta esottoslivellamento del segmento ST. Acute Coronary Syndromes: Validation of Early InvasiveDiagnosis/PTCA, AVOID/PTCA study.- Significato prognostico a lungo termine di misure ripetute nel corso di un anno di pressionearteriosa sistolica e pulsatoria nell’anziano.- Significato prognostico della pressione arteriosa pulsatoria e media dopo infarto miocardico:risultati del GISSI-Prevenzione.- Farmaci antiipertensivi “vecchi” e “nuovi”: con quali iniziare? Con quali continuare?European Society of Hypertension. Thirteenth European Meeting on Hypertension, 13-17/6/03,Milano:- Long-term prognostic significance of repeated measurements over one year of pulse pressureand systolic blood pressure in the elderly.- Treatment and control of arterial hypertension in the Ecuadorina forest.Wonca Europe (World Family Doctors Caring for People). The Future Challenges of GeneeralPractice/Family Medicine, 18-21/6/03, Lubiana:- Prescription of antithrombotic drugs in patients at high cardiovascualr risk in GP.- How general practitioners perceive and rate their patients’ cardiovascular risk.ESC, European Society of Cardiology, 30/8/03-3/9/03, Vienna:- Relationship betwen changes in ejection fraction, brain natriuretic peptide and norepinephrineover time and the effect of valsartan in Val-HeFT.- Baseline predictors of adverse events with chronic valsartan therapy in symptomatic heartfailure. Results from Val-HeFT Trial.- Prognostic value of aldosterone in heart failure. Results from Val-HeFT.- Brain natriuretic peptide, but not norepinephrine, predicts improvements in left-ventricularstructure and function in patients with chronic heart failure enrolled to Val-HeFT.89RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNSocietà Italiana di Farmacia Ospedaliera. Percorsi diagnostico terapeutici in sanità: obiettivi eresponsabilità del farmacista pubblico, 28/9/03-1/10/03, VeneziaStatine e diabete: indicazioni di letteratura e pratica terapeutica.Società Italiana di Statistica Medica ed Epidemiologia Clinica. Informazione ConoscenzaDecisione, 1-4/10/03, BresciaContributo di un indicatore prognostico di mortalità basato su segni e sintomi, in pazienti conscompenso cardiaco: risultati dello studio Val-HeFT.ASL Napoli e CINECA. Dall’epidemiologia del farmaco ai bisogni di popolazione valutazioni easpetti economici, 6-7/11/03, NapoliAmerican Heart Association. Scientific Session, 9-12/11/03, Orlando:- The mesoangioblast, a multipotent embryonic cell from dorsal aorta, repairs the infarctedheart: comparative efficacy with bone marrow-derived stem cells and fibroblasts.- A retrospective analysis of major markers of heart failure severity in patients receiving bothACE inhibitors and Beta-Blockers in Val-HeFT.- Prognostic value of aldosterone in heart failure – Results from Val-HeFT.- Valsartan reduces the incidence of atrial fibrillation in the patients with heart failure in theVal-HeFT trial.- Predicting outcomes in chronic heart failure from short-term change in BNP as a surrogateend-point: Val-HeFT data.- Prognostic significance of the long Pentraxin PTX3 in acute myocardial infarction:comparison with C-Reactive Protein, NT-Probnp and Troponin T.Presentazione del protocollo dello studio Rischio e Prevenzione ai medici di medicina generalee ai responsabili delle ASL di: Friuli, Veneto, Lombardia e PugliaCONTRIBUTI E CONTRATTIAstraZeneca, Bayer, Chiesi Farmaceutici, Fondazione Cariplo, Population Health ResearchInstitute- Mc Master University, ElyLilly, ISS Programma Cellule Staminali, MIUR FIRB,MSD, Novartis Pharma, Pharmacia Upjohn, Sigma Tau, SPA Società Prodotti AntibioticiS.p.A., Warren Institute, Zambon FarmaceuticiSELEZIONE PUBBLICAZIONI SCIENTIFICHE APPARSENELL'ANNO 2003Chiodini B D, Barlera S, Franzosi M G, Labarta Beceiro V, Introna M, Tognoni GAPO B gene polymorphisms with coronary artery disease: A meta-analysisAtherosclerosis 2003; 167: 355-366Villella M, Villella A, Santoro L, Santoro E, Franzosi M G, Maggioni A P, GISSI-2Ergometric score systems after myorcardial infarction: Prognostic performance of the Duke Treadmill Score,Veterans Administration Medical Centre Score and of a novel score system, GISSI-2 index, in a cohort of survivorsof acute myocardial infarctionAm Heart J 2003; 145: 475-48390RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNLatini R, Staszewsky L, Maggioni A P, Marino P, Hernandez-Bernal F, Tognoni G, Labarta V, Gramenzi S, BianchiF, Sarcina G, Cremonesi G, Nicolosi G L, Geraci E, Delapril Remodeling After Acute Myocardial Infarction(DRAMI) Collaborative GroupBeneficial effects of angiotensin-converting enzyme inhibitor and nitrate association on left ventricular remodeling inpatients with large acute myocardial infarction: The Delapril Remodeling after Acute Myocardial Infarction(DRAMI) trialAm Heart J 2003; 146: e1-e8Calvillo L, Masson S, Salio M, Pollicino L, De Angelis N, Fiordaliso F, Bai A, Ghezzi P, Santangelo F, Latini RIn vivo cardioprotection by N-acetylcysteine and isosorbide 5-mononitrate in a rat model of ischemia-reperfusionCardiovasc Drugs Ther 2003; 17: 199-208Anselmi M, Avanzini F, Moreira J M, Montalvo G, Armani D, Prandi R, Marquez M, Calcedo C, Colombo Fabio,Tognoni GTreatment and control of arterial hypertension in a rural community in EcuadorLancet 2003; 361: 1186-1187Carson P, Tognoni G, Cohn J NEffect of Valsartan on hospitalization: Results from Val-HeFTJ Card Fail 2003; 9: 164-171Sacco M, Pellegrini F, Roncaglioni M C, Avanzini F, Tognoni G, Nicolucci A, PPP - Primary Prevention ProjectPrimary prevention of cardiovascular events with low-dose aspirin and vitamin E in type 2 diabetic patients. Resultsof the PPP trialDiabetes Care 2003; 26: 3264-3272Anand I S, Fisher L D, Chiang Y T, Latini R, Masson S, Maggioni A P, Glazer R D, Tognoni G, Cohn J N, Val-HeFT InvestigatorsChanges in brain natriuretic peptide and norepinephrine over time and mortality and morbidity in the Valsartan HeartFailure (Val-HeFT)Circulation 2003; 107: 1278-1283Maggioni A P, Sinagra G, Opasich C, Geraci E, Gorini M, Gronda E, Lucci D, Tognoni G, Balli E, Tavazzi L,BRING-UP InvestigatorsTreatment of chronic heart failure with beta-adrenergic blockade beyond controlled clinical trials: The BRING-UPexperienceHeart 2003; 89: 299-305Calvillo L, Latini R, Kajstura J, Leri A, Anversa P, Ghezzi P, Salio M, Cerami A, Brines MRecombinant human erythropoietin protects the myocardium from ischemia-reperfusion injury and promotesbeneficial remodelingProc Natl Acad Sci USA 2003; 100: 4802-4806Lucena M I, Andrade R J, Tognoni G, Hidalgo R, Sanchez de la Cuesta F, Spanish Collaborative Study GroupTherapeutic Management Liver DiseaseDrug use for non-hepatic associated conditions in patients with liver cirrhosisEur J Clin Pharmacol 2003; 59: 71-76Cohn J N, Anand I S, Latini R, Masson S, Chiang Y T, Glazer R, Valsartan Heart Failure Trial InvestigatorsSustained reduction of aldosterone in response to the angiotensin receptor blocker valsartan in patients with chronicheart failure. Results form the Valsartan Heart Failure TrialCirculation 2003; 108: 1306-1309Anselmi M, Moreira J M, Caicedo C, Guderian R, Tognoni GCommunity participation eliminates yaws in EcuadorTrop Med Int Health 2003; 8: 634-638Barzi F, Woodward M, Marfisi R M, Tavazzi L, Tognoni G, Valagussa F, Marchioli R, GISSI-PrevenzioneMediterranean diet and all-causes mortality after myocardial infarction: Results from the GISSI-Prevenzione trialEur J Clin Nutr 2003; 57: 604-611QuED Study Group, Pellegrini F, Belfiglio M, De Berardis G, Franciosi M, Di Nardo B, Greenfield S, Kaplan S H,Sacco M, Tognoni G, Valentini M, Corrado D, D'Ettorre A, Nicolucci A91RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNRole of organizational factors in poor blood pressure control in patients with type 2 diabetesArch Intern Med 2003; 163: 473-480Bertolini G, Iapichino G, Radrizzani D, Facchini R, Simini B, Bruzzone P, Zanforlin G, Tognoni GEarly enteral immnunonutrition in patients with severe sepsis. Results of an interim analysis of a randomizedmulticentre clinical trialIntensive Care Med 2003; 29: 834-840De Berardis G, Pellegrini F, Franciosi M, Belfiglio M, Di Nardo B, Greenfield S, Kaplan S H, Rossi M C E, SaccoM, Tognoni G, Valentini M, Nicolucci A, QuED Study GroupIdentifying patients with type 2 diabetes with higher likelihood of erectile dysfunction: The role of the interactionbetween clinical and psychological factorsJ Urol 2003; 169: 1422-1428SELEZIONE PUBBLICAZIONI DIVULGATIVE APPARSENELL'ANNO 2003Franzosi M G, Tognoni G, Maggioni A P, Mauri FIl GISSI ha cambiato il modo di fare ricerca in Cardiologia . E non solo in Italia. Vent’anni dall’avvio del GISSI-1Cardiologia negli Ospedali 2003, n.133:26-27Geraci E, Franzosi M GGli studi GISSI: genio e regolatezzaJanus 2003, n.122-129Latini RCellule per riparare il cuore malatoRicerca & Pratica 2003; n. 110: 58-64Gruppo Collaborativo Italiano BNP nell'Insufficienza Cardiaca, Maggioni A P, Latini R, Masson SDocumento di consenso. Il peptide natriuretico di tipo B nella realta' clinica cardiologica italiana: esperienze aconfrontoItal Heart J 2003; Suppl 4: 850-861Tognoni GUn ITD?Ricerca & Pratica 2003; n. 109: 3-4Tognoni GUna celebrazione per oggi, e per la MG. Nozze d'argento della lista OMS dei farmaci essenzialiRicerca & Pratica 2003; n. 112: 137-141Tognoni GA proposito di manifesti informativiInformazioni sui Farmaci 2003; 27: 57-58Tognoni GPro-memoria per un lungo (dopo)guerraGiornale Italiano Farmacia Clinica 2003; 17: 55-63Tognoni GRicerca sulla qualita' e qualita' della ricerca: per una riflessione critica sui metodi di ricerca qualitativaAssistenza Infermieristica e Ricerca 2003; 22: 168-170Scurti V, Tognoni GFarmacovigilanza centrata sul paziente: una guida bibliografica orientata per problemiAssistenza Infermieristica e Ricerca 2003; 22: 171-177Tognoni G92RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNMedio evo, Power Point, informazione (sui farmaci e altro)Informazioni sui Farmaci 2003; 27: 85-86Tognoni G, Lepore VProfilo di prescrizioni della popolazione anzianaAssistenza Infermieristica e Ricerca 2003; 22: 216-226Monesi LI database amministrativi come fonti di ricerca epidemiologica: il percorso clinico-assistenziale del diabete mellito.Giornale Italiano di Diebetologia e Metabolismo 2003; 23 suppl. 1: 79-83Roncaglioni MC, Roccatagliata D, a nome del Gruppo Collaborativo dello Studio Rischio&PrevenzioneRischio&Prevenzione: una nuova proposta di trial clinico in Medicina Generale.Dialogo sui Farmaci 2003; 6: 307-311.ATTIVITA' DI RICERCALaboratorio di Farmacologia Clinica CardiovascolareModulazione farmacologica dell’apoptosi dei cardiomiociti in rattidiabetici ipertesiL’ipertensione e il diabete sono i fattori di rischio per l’insorgenza e il peggioramento dimalattie cardiovascolari. In pazienti diabetici e ipertesi, il rischio di morte cardiovascolare e didanno d’organo è maggiore rispetto ai pazienti con solo diabete o ipertensione. Inoltre, lafunzione cardiaca risulta maggiormente compromessa in ratti diabetici ipertesi rispetto a animalidiabetici o ipertesi. L’obiettivo principale di questo progetto è di confrontare l’apoptosi deicardiomiociti nel ventricolo sinistro di ratti normotesi con quella di ratti geneticamente ipertesiin un modello di diabete di tipo 1 indotto da streptozotocina. Un secondo obiettivo è di valutaremediante l’uso di inibitori farmacologici specifici, il ruolo di diversi sistemi neuro-ormonali(sistema renina-angiotensina, sistema beta-adrenergico) o delle specie reattive dell’ossigeno neldeterminare l’apoptosi. Risultati preliminari indicano che l’apoptosi dei cardiomiociti èmaggiore nei ratti diabetici ipertesi rispetto ai ratti normotesi, e che l’inibizione dei sistemirenina-angiotensina e beta-adrenergico riduce significativamente la morte dei cardiomiociti.Effetto della N-acetilcisteina e di un ACE inibitore sul danno cardio-renalein un modello sperimentale di diabeteAbbiamo precedentemente dimostrato che la N-acetilcisteina (NAC), un composto antiossidantee precursore del glutatione, riduce la perdita di miociti in vivo in un modello didiabete di tipo 1 nel ratto e in cardiomiciti isolati esposti a concentrazioni elevate di glucosio.L’obiettivo di questo studio, condotto in collaborazione con il Laboratorio diNeuroimmunologia, è di verificare se la NAC, da sola o in combinazione con un ACE inibitore,sia in grado di proteggere il cuore e il rene nel medesimo modello di diabete di tipo 1 indotto dastreptozotocina nel ratto. I primi risultati indicano che, nonostante l’assenza di protezione renaledopo sette settimane di trattamento (la funzione e l’istologia renale non migliorano), sia la NACche l’ACE inibitore riducono significativamente il danno a livello del ventricolo sinistro(volume del miocita, fibrosi perivascolare e densità di specie reattive dell’ossigeno ridotti) edell’aorta (densità di specie reattive dell’ossigeno ridotta e rapporto elastina/collagenemigliorato).93RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNIpertrofia cardiaca in ratti trattati cronicamente con basse dosi diouabainaL’ ouabain-like factor (OLF) endogeno è un inibitore della pompa Na+/K+-ATPase presente sianei tessuti che nel circolo dei mammiferi. Negli uomini, questa inibizione influenza moltefunzioni fisiologiche coinvolte nell’omeostasi idro-salina e caratterizza alcune patologie comel’ipertensione e lo scompenso. La presenza di ipertrofia e ipertensione in un modellosperimentale con infusione di ouabaina (uno steroisomero di OLF) rappresenterebbe unacondizione ideale per riprodurre lo stato dei pazienti ipertesi con alti livelli di OLF endogena.Per tale motivo, abbiamo studiato la funzione e la morfologia cardiaca in ratti SD trattati per 24settimane con un’infusione continua di basse dosi (15 µg/kg/day) di ouabaina. I ratti trattati conouabaina presentavano allo studio ecocardiografico un significativo aumento della massa delventricolo sinistro mentre la valutazione emodinamica mostrava la presenza di ipertensione inquesti ratti rispetto a quelli non trattati. La morfometria quantitativa ha permesso di rilevare chel’aumento del volume occupato dai miociti nel ventricolo sinistro del cuore di ratti trattati conouabaina era da attribuire non a un aumento del numero dei miociti ma a un incremento delvolume dei singoli miociti che presentavano una maggiore lunghezza e quindi una forma piùallungata. Attualmente è in corso uno studio per valutare l’effetto antipertensivodell’antagonista dell’ouabaina PST 2238 (Sigma Tau, Italia) in un modello che prevede uninfusione più lunga (28 settimane) e una dose doppia di ouabaina.GISSI-HF. Sottoprogetto Bioumorale (G105-S2)Lo studio clinico GISSI-HF (arruolamento dei pazienti in atto) si propone di valutare se duetrattamenti (un inibitore dell’idrossimetil-glutaril-CoA reduttasi o statina e gli n-3 PUFA) sonoin grado di migliorare la prognosi dei pazienti con insufficienza cardiaca di ogni eziologia, cono senza riduzione della frazione di eiezione del ventricolo sinistro. Il sottoprogetto bioumorale èsuddiviso in 4 aree di ricerca specifiche, con lo scopo ultimo di ottenere risultati utili per megliocomprendere la fisiopatologia dello scompenso cardiaco e gli effetti dei farmaci in studio.Campioni ematici vengono raccolti all’ingresso dello studio e dopo tre mesi per misurare gliacidi grassi plasmatici, il profilo neuroormonale dei pazienti (in particolare la concentrazioneplasmatica del peptide natriuretico cerebrale, BNP) e indicatori circolanti dell’infiammazione(proteina C reattiva e PTX3), in circa 800 pazienti. In un gruppo più ristretto di pazienti (circa50) il numero di progenitori endoteliali circolanti verrà posto in relazione con l'eziologia delloscompenso e con i trattamenti dello studio. Dati preliminari sul profilo lipidico di questipazienti, ottenuti in collaborazione con il Laboratorio di Biochimica e Chimica delle Proteine,sono disponibili.La proteina C-reattiva nello studio Val-HeFTLo studio Val-HeFT (Valsartan Heart Failure Study) era uno studio clinico internazionale,randomizzato, il cui scopo era di valutare l'efficacia del valsartan, un antagonista recettoriale ditipo I dell'angiotensina II in 5010 pazienti con insufficienza cardiaca sintomatica. Lo studio hadimostrato una significativa riduzione del 13% dell'end-point combinato di mortalità e morbilità(Cohn and Tognoni, New England J Med 2001; 345: 1667-75). Alla randomizzazione e alfollow-up (mediana di 23 mesi) sono stati raccolti e analizzati i campioni plasmatici nellamaggior parte dei pazienti. L'obiettivo di questo studio era di determinare i livelli plasmaticidella proteina C-reattiva (PCR), una proteina della risposta infiammatoria acuta, nei pazientiVal-HeFT. PCR è emersa come un nuovo indicatore di stratificazione del rischiocardiovascolare in pazienti con sindromi coronariche, ed ha dimostrato di essere ridotta da varifarmaci, tra cui gli inibitori delle riduttasi del CoA (statine). PCR plasmatica è stata determinatain circa 8000 campioni di 2550 pazienti mediante un metodo immunonefelometrico ad altasensibilità (Dade Behring) nel Laboratorio di Chimica Clinica dell'Ospedale di Desio (Prof.94RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNMocarelli, Dr. Signorini). Per la prima volta, si è verificato che la PCR era un fattoreprognostico indipendente nei pazienti con insufficienza cardiaca, in un modello di analisimultivariata che comprendeva variabili demografiche, cliniche e ecocardiografiche. Il valsartannon riduceva in modo significativo i livelli circolanti di PCR.Rimodellamento cardiaco in un modello sperimentale di infartomiocardico in ratti anziani. Effetto di un antagonista specifico recettorialedell'aldosterone, eplerenoneLo scopo del presente studio è quello di valutare gli effetti dell'eplerenone, un antagonistaspecifico dei recettori dell'aldosterone, sul rimodellamento ventricolare in un modello di infartomiocardico dopo occlusione permanente della coronaria in ratti adulti. Più specificatamente,sono stati valutati l'anatomia, l'emodinamica, la funzione cardica da una parte e la biologia dialcuni componenti della matrice extracellulare dall'altra in ratti di 19 mesi (vecchi). Prima delsacrificio, circa 3 mesi dopo la chirurgia, gli animali sono stati sottoposti a un esameecocardiografico completo.I ratti anziani con infarto mostravano una disfunzione diastolica e una modesta disfunzionesistolica. Il trattamento con eplerenone non ha migliorato la disfunzione sistolica, ma hanormalizzato i parametri diastolici del ventricolo sinistro. L'anatomia del ventricolo sinistro(diametro ventricolare sinistro, volume della camera e spessore del setto) non dimostravasignificativi effetti di infarto. Non c'erano evidenze di attivazione ormonale, ma l'attivitàreninica plasmatica e l'aldosterone erano significativamente elevati in ratti che ricevevanoeplerenone, come atteso dalle sue proprietà farmacologiche. La fibrosi interstiziale era elevatanella parte infartuata del ventricolo sinistro nei gruppi con infarto, ma veniva normalizzatadall'eplerenone. In conclusione, l'eplerenone normalizza il rilasciamento ventricolare comerisulta dalle valutazioni ecocardiografiche ed emodinamiche, possibilmente attraverso unariduzione della fibrosi interstiziale. Ciò conferma gli effetti benefici di questo farmaconell'infarto miocardico estendendo tali osservazioni a un modello di disfunzione cardiaca inanimali anziani.Gli effetti anti-rimodellamento del blocco dei recettori dell'aldosterone concanrenone nell'insufficienza cardiaca lieve-moderata: lo studio AREA IN-CHFLo studio RALES ha dimostrato che lo spironolattone, un antagonista recettorialedell'Aldosterone, riduce il rischio di morbilità e mortalità sia nello scompenso cardiacoprogressivo, sia nella morte improvvisa in pazienti con scompenso cardiaco moderato o severo.Gli antagonisti dell'aldosterone potrebbero essere efficaci in quanto contrastano gli effettidell'aldosterone sulla ritenzione di sodio, sulla perdita di potassio e magnesio, sull'attivazionesimpatica, la compliance vascolare e la fibrosi cardiaca. Nell'AREA IN-CHF, uno studiomulticentrico, randomizzato e controllato con placebo, è stato valutato l'effetto del canrenone,un metabolita dello spironolattone, in pazienti con scompenso cardiaco moderato (n=400 pergruppo) in termini di rimodellamento del ventricolo sinistro e di end-point combinato dimortalità e morbilità. Il disegno dello studio prevede un prelievo di sangue a tutti i pazienti allarandomizzazione e dopo 6 mesi per determinare la concentrazione plasmatica di aldosterone(solo all'ingresso), del peptide natriuretico cerebrale e di un marker circolante del turnover delcollagene (peptide N-terminale del collagene III). Questi fattori bioumorali saranno dosaticentralmente dal Dipartimento di Ricerca Cardiovascolare e produrranno informazionisull'effetto del canrenone su questi indicatori e sulle loro relazioni con l'outcome dello studio.L'arruolamento è in atto.95RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNModulazione farmacologia con un trattamento anti-ossidante in unmodello di cardiopatia diabeticaLa cardiomiopatia diabetica è caratterizzata da alterazioni del miocardio indipendenti dallecomplicanze legate alla coronopatia che si osserva più frequentemente nei diabetici. Tra imeccanismi proposti per spiegare il danno cardiaco da iperglicemia, la produzione di radicaliliberi dell'ossigeno guadagna sempre più credito nella comunità scientifica. Sulla base di questeevidenze ci si è proposti di verificare se una terapia antiossidante a lungo termine con N-acetilcisteina (NAC) possa ridurre (a) la perdita dei cardiomiociti sia in vivo che in vitro e (b) ildanno a carico della funzione del cuore in un modello di diabete ottenuto sperimentalmente constreptozotocina (STZ). Il diabete è stato indotto in ratti maschi Sprague-Dawley medianteiniezione intraperitoneale di STZ alla dose di 60 mg/kg di peso corporeo, e 0.5g /kg/die di NACsono stati somministrati nell'acqua di abbeverazione. Il trattamento cronico con NAC per 3 mesiha dimostrato di ridurre significativamente la perdita di circa il 30% dei cardiomiociti causatadal diabete, senza però dimostrare benefici significativi in termini di funzione cardiaca.Cardiomiociti isolati da ratto esposti ad un medium iperglicemico (glucosio 25mM) per 24 oremostravano un aumento di 7 volte della percentuale di apoptosi rispetto ai controlli; iltrattamento con NAC (0.01 mM) era in grado di abolire totalmente la morte cellulare deicardiomiociti per apoptosi. Questi dati indicano che un trattamento antiossidante può prevenirela morte dei cardiomiociti causata da iperglicemia marcata.Mesangioblasti, cellule staminali di origine midollare, fibroblasti e cellulestaminali di origine endoteliale nel topo dopo occlusione dell'arteriacoronarica. Efficacia comparativa a lungo termine della funzioneventricolare sinistra, perfusione collaterale del miocardio ischemico,rigenerazione del miocardioNumerosi studi hanno dimostrato che cellule autologhe e omologhe di differente originepossono riparare il miocardio danneggiato in seguito a un insulto ischemico acuto. La resa intermini di colonizzazione dell'area danneggiata e di sostituzione delle cellule irreversibilmentedanneggiate varia molto da studio a studio, oscillando dal 63% a meno dell'1%.Il lavoro inviato per la pubblicazione su mesoangioblasti di topo trapiantati in topi dopo legaturadella coronaria sinistra ha dimostrato che i mesoangioblasti sono in grado di ridurresignificativamente il danno da infarto sperimentale, in modo simile ai precursori emopoieticimidollari (più noti). A differenza dei precursori midollari i mesoangioblasti sonopotenzialmente interessanti perché (a) più facilmente espnadibili e (b) ottenibili da biopsia delmuscolo scheletrico nell’uomo.Nuovi studi su potenziale riparativo di differenti tipi cellulari di originemurina e umana nell’infarto sperimentale nel topoA seguito degli studi completati sui mesoangioblasti, sono di recente iniziati altri studisperimentali:confronto su differenziazione e riduzione di danno da infarto sperimentale di 2 linee cellularimurine che differiscono per il recettore di tipo 1 del fattore di crescita dei fibroblasti (FGFR), unrecettore essenziale nello sviluppo embrionale, nella crescita e nel rimodellamento dei tessuti diorigine mesodermica. In vitro, le cellule dotate di recettore (+/-) danno origine nel 90% dei casia cardiomiociti pulsanti, mentre quelle prive (-/-) solo nel 10%. Scopo dello studio è confrontaredue tipi cellulari identici, a parte il destino a cardiomiociti, nel riparare il danno; in altre parole,è necessario/utile che una cellula trapiantata abbia un destino cardiomiocitario per ottimizzare ilbeneficio?Lo scenario più attraente di terapia cellulare cardiaca è quello teoricamente basato su metodichedi autotrapianto di cellule miocardiche con potenziale rigenerativo (“staminali cardiache”). Siintende indicare con questo termine una procedura che implica il prelievo dal cuore del paziente96RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNdi un frammento miocardico seguito dall’ isolamento e la successiva espansione in vitro dicellule staminali e progenitori cardiaci derivati da questo. Ottenuta una adeguata quantità dicellule, esse verrebbero reimpiantate nel cuore del paziente, eventualmente previodifferenziamento in vitro. I vantaggi di questa procedura sarebbero: la mancanza di rigetto,l’utilizzo di cellule già indirizzate in senso miocardico e l’ipotizzabile assenza di liste di attesaper il trapianto. Gli svantaggi potrebbero essere: il tempo necessario per l’espansione in vitro dicellule cardiache, i costi elevati di tale procedura, l’ impiego di cellule derivate da un organoscompensato (quindi, possibilmente, a potenziale proliferativo/differenziativo limitato) e, nonultima, la necessità di prelevare frammenti di tessuto a pazienti con performance cardiaca giàcompromessa. La possibilità di superare questi impedimenti potrebbe essere data dall’impiegodi cellule autologhe provenienti da fonti alternative più accessibili. Ciò implica chemiocardiociti funzionali possano essere generati da cellule primitive di origine non cardiaca. Inquesto progetto ci si propone di paragonare fra loro cellule multipotenti derivate da differentiorgani e tessuti (cuore, midollo osseo e fegato) per la loro capacità di rigenerare miocardiofunzionale in un modello murino di infarto acuto del miocardio. Dovremo trapiantare cellule diorigine umana in topi immunodeficienti per poi valutare gli effetti con ecocardiografia e istomorfometria.Qualora cellule derivate da differenti sorgenti si dimostrassero equipotenti nellacapacità rigenerativa d’organo, si potrebbe attuare una terapia cellulare privilegiando comefonte quella più facilmente accessibile.Sulla stessa linea del punto 2, si stanno sperimentando cellule derivate da biopsie miocardiche(atrio o ventricolo) umane, espanse in vitro fino a generare “cardiosfere” e poi trapiantate nellazona circostante l’infarto in topi immunodeficienti.Caratterizzazione del fenotipo knock-out per Junction Adhesion Molecule1 (JAM-1) in un modello murino sperimentale di ischemia cardiaca eriperfusioneJAM-1 è stata la prima proteina identificata di questa famiglia nelle giunzioni aderenti tracellule endoteliali. JAM sembra avere un ruolo nel modulare il passaggio di cellule dal sangueai tessuti. Lo studio è stato disegnato per verificare se l’assenza di JAM-1 (a) modifichi ilnumero di leucociti infiltranti il miocardio nelle prime ore dopo ischemia seguita da riperfusionee (b) influenzi l’entità del danno conseguente. Sembra che non ci siano marcate differenze nelledimensioni del danno (area dell’infarto), mentre si osservano meno leucociti polimorfonucleatinel miocardio dei topi geneticamente privi di JAM-1.Effetti cardioprotettivi di un analogo sintetico dell’eritropoietina in unmodello murino sperimentale di ischemia cardiaca e riperfusioneL'eritropoietina umana ricombinante (EPO) è un fattore di crescita essenziale che promuove lasopravvivenza, proliferazione e differenziazione di cellule progenitrici eritroidi. In un modellodi ischemia e riperfusione cardiaca nel ratto abbiamo dimostrato che EPO ha miglioratosignificativamente la funzione ventricolare sinistra dopo 1 e 12 settimane di riperfusione. Ilbeneficio osservato potrebbe essere spiegato parzialmente da una minore perdita di miociticardiaci e da una attenuazione ipertrofica. La protezione in vitro da apoptosi indotta da ipossiapotrebbe spiegare i benefici osservati i quali suggeriscono un possibile ruolo terapeuticodell'EPO nell'infarto miocardico acuto. Scopo dello studio in corso è di verificare se laprotezione con EPO è da attribuire almeno in parte a un aumento di eritrociti, oppure no.Abbiamo quindi riprodotto il disegno sperimentale con un nuovo composto, un derivatocarbamilato di EPO (CEPO), che sembra dare gli stessi risultati benefici di EPO, aprendo nuovevie alla cardioprotezione selettiva, senza aumento della eritropoiesi, non sempre desiderata.97RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNSignificato prognostico di 2 proteine di fase acuta, PTX3 e proteina C-reattiva, Nt-proBNP e troponina T dopo infarto miocardico acutoPTX-3 è una nuova pentraxina lunga la cui espressione è indotta da citochine in cellulemononucleate ed endoteliali, generalmente nel muscolo striato e cardiaco, mentre la proteina C-reattiva è per lo più prodotta nel fegato.PTX-3 raggiunge il picco nel plasma circa 7 ore dopo l'inizio dei sintomi di infarto miocardico;non è noto se le concentrazioni plasmatiche di PTX-3 abbiano un valore prognosticoindipendente dopo l'infarto. In 724 pazienti con infarto miocardico arruolati nello studio LATIN(

IRFMNaltre modalità di analisi della trasmissione familiare di rischio genico, specificamente con latecnica TDT (transmission disequilibrium test) o altre strategie di verifica di associazione giàdisponibili o che diverranno tecnicamente praticabili.Il PROCARDIS è condotto da un Consorzio di ricerca, il cui programma è stato supportato dal5th Framework Programme della Comunità Europea e da un grant di AstraZeneca. Il Consorziodi ricerca è così costituito: Gruppo Italiano per lo Studio della Sopravvivenza nell'Infarto(gruppo GISSI, sostenuto dalla collaborazione tra l'Istituto Mario Negri e l'ANMCO); ClinicalTrial Service Unit, Università di Oxford (gruppo ISIS); Institute of Clinical Chemistry andLaboratory Medicine and Institute for Arteriosclerosis Research, Università di Münster;Institute for Atherosclerosis Research, Karolinska Hospital, Stoccolma; Wellcome Trust ofHuman Genetics, Cardiovascolar Medicine Department, Università di Oxford.Il progetto ha concluso la fase di arruolamento delle famiglie da parte dei 4 centri di ricercaeuropei afferenti al Consorzio. Sono state reclutate nello studio più di 2000 coppie di ASPs epiù di 1200 famiglie analizzabili per il TDT. In Italia il reclutamento è stato effettuatoinizialmente utilizzando il database degli studi GISSI-3 e GISSI-Prevenzione e successivamentein modo prospettico in 44 centri di cardiologia, con un totale di 765 famiglie reclutate. Per tuttela famiglie è stata completata la genotipizzazione. L’analisi di linkage è in corso.GISSI-HF. Studio clinico di grandi dimensioni che valuta gli effetti di n-3PUFA e di Rosuvastatina sulla mortalità e morbidità dei pazienti conscompenso cardiaco sintomaticoIl GISSI (Gruppo Italiano per lo Studio della Sopravvivenza nell'Insufficienza cardiaca) è unacollaborazione tra l'Istituto "Mario Negri" e l'ANMCO (Associazione Nazionale MediciCardiologi Ospedalieri) che opera da oltre 15 anni nel campo della ricerca cardiovascolare. Lostudio GISSI-HF è una sperimentazione clinica (la quinta condotta dal GISSI) che si propone diverificare gli effetti di due trattamenti, il primo con n-3 PUFA (acidi grassi polinsaturi) e ilsecondo con rosuvastatina (una nuova statina) in pazienti affetti da scompenso cardiaco che giàricevono i trattamenti raccomandati per questa malattia.Il GISSI-HF è uno studio prospettico, multicentrico, in doppio cieco, controllato con placebo, incui pazienti con evidenza clinica di scompenso cardiaco di qualsiasi eziologia e senza limiti dietà vengono randomizzati aR1 n-3 PUFA o placebo (Randomizzazione 1);R2 rosuvastatina o placebo (Randomizzazione 2).L'obiettivo principale dello studio è di dimostrare che una terapia a lungo termine con (a) n-3PUFA, (b) rosuvastatina riduce la mortalità totale, e la mortalità totale o il ricovero in ospedaleper qualsiasi ragione, rispetto ai corrispondenti gruppi placebo.Verranno reclutati 7000 pazienti per verificare l'efficacia di n-3 PUFA. Di questi, 5250entreranno anche nella parte R2 dello studio che valuta l'efficacia di rosuvastatina.Secondo la caratteristica degli studi GISSI, anche il GISSI-HF è uno studio pragmatico, supazienti quanto più possibile rappresentativi della realtà clinica quotidiana.La randomizzazione nello studio è iniziata nel settembre 2002. Al 31 dicembre 2003 risultanoarruolati 4070. E’ previsto un follow-up di almeno di 3 anni. Partecipano allo studio 350Cardiologie.Contestualmente al trial, vengono condotti vari sottoprogetti per cercare di comprendere ilmeccanismo d’azione dei trattamenti sperimentali:rimodellamento ventricolare (ecocardiografia);bioumorale (neurormoni, marker dell’infiammazione, progenitori endoteliali circolanti, acidigrassi liberi circolanti):aritmie e attività simpatica (monitoraggio Holter);funzione cognitiva;tolleranza allo sforzo;99RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNcarico assistenziale;marker genetici.Il progetto è condotto in collaborazione con il Laboratorio di Farmacologia ClinicaCardiovascolare.Studio GISSI-HF: Sottoprogetto geneticoSi conosce ancora poco circa il ruolo dei fattori genetici nell'eziologia, evoluzione, prognosi, erisposta al trattamento dello scompenso cardiaco, con l'eccezione di alcune forme originate daspecifiche cardiomiopatie. Lo scompenso cardiaco presenta differenti eziologie, tra le qualil'ischemica rappresenta più del 50%. Tra i geni candidati nella cardiopatia ischemica, i piùcoinvolti sembrano quelli implicati nel metabolismo dei lipidi. Recente interesse suscitanoanche i geni coinvolti nei processi infiammatori.Il sottoprogetto genetico dello studio GISSI-HF (vedi sezione ad esso relativa) offrel'opportunità di migliorare le nostre conoscenze circa il ruolo di varianti genetiche nelloscompenso cardiaco, grazie alla raccolta di campioni ematici di un ampio numero di soggettiaffetti da scompenso di differente eziologia (es. non-ischemica e ischemica).Gli obiettivi del sottoprogetto genetico sono 1) valutare le relazioni tra i polimorfismi di genicandidati implicati nel metabolismo dei lipidi e nella risposta infiammatoria e la prognosi dipazienti arruolati nello studio GISSI-HF, 2) valutare se e come tali relazioni vengono modificatedai trattamenti farmacologici in studio.Data la rapidità con la quale continuamente nascono e si accumulano nuove informazioni eipotesi in campo genetico, potranno venire valutati anche altri polimorfismi correlati alloscompenso che risultassero interessanti nel corso dello studio. Circa 100 centri dello studioGISSI-HF partecipano a questo sottoprogetto. A fine dicembre 2003 sono stati inclusi circa lametà dei 2000 pazienti previsti dallo studio. Come per lo studio principale, il follow-up sarà dialmeno tre anni.Studio GISSI-Prevenzione-GeneticaLa cardiopatia ischemica (CHD) è determinata dall’interazione tra fattori ambientali noti efattori genetici molto meno conosciuti. Lo studio GISSI-Prevenzione ha dimostrato in unapopolazione di 11.324 pazienti sopravvissuti ad infarto del miocardio, l'efficacia di una terapiacon n-3 PUFA e con pravastatina, nel ridurre la mortalità nel corso di 3,5 anni di follow-up.Durante questo periodo sono stati raccolti circa 8.000 campioni di sangue di pazienti arruolatinello studio, che sono oggetto di studi collaborativi con la SIBioC (Società Italiana diBiochimica Clinica e Biologia Molecolare Clinica). Lo studio GISSI-Prevenzione-genetica siprefigge l'obiettivo di valutare il ruolo di alcuni polimorfismi genetici implicati nel metabolismolipidico e nella risposta infiammatoria nella prognosi di pazienti con cardiopatia ischemica enella loro risposta alla terapia farmacologica con n-3 PUFA e/o statine su circa 2.500 pazientiinclusi nello studio GISSI-Prevenzione.Le implicazioni pratiche comprendono 1) la possibilità di stimare il rischio di ciascun pazienteconsiderando oltre ai fattori di rischio classici cardiovascolari anche caratteri genetici, e 2) lapossibilità di individuare i pazienti che realmente rispondono alla terapia con n-3 PUFA e/o constatine.Studio ACTIVE (Atrial Fibrillation Clopidogrel Trial with Irbesartan forprevention of Vascular Events)Lo studio ACTIVE (Atrial Fibrillation Clopidogrel Trial with Irbesartan for prevention ofVascular Events) è un trial multinazionale, multicentrico condotto in più di 600 centri di 40paesi afferenti alla rete OASIS (Organization to Assess Strategies in Ischaemic Syndromes),coordinata dal Canadian Cardiovascular Collaboration Project Office del Population HealthResearch Institute che fa capo alla Università McMaster di Hamilton, Ontario. Per l’Italia il100RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNcoordinamento scientifico di questi studi è svolto dal Laboratorio di Valutazione Clinica deiFarmaci del Dipartimento di Ricerca Cardiovascolare.Lo studio ACTIVE è un trial randomizzato a gruppi paralleli i cui obiettivi primari sonoa)valutare se clopidogrel più aspirina (ASA) è superiore ad ASA e non inferiore alla terapiaanticoagulante orale standard nel prevenire gli eventi vascolari nei pazienti con fibrillazioneatriale b) valutare se la riduzione della pressione sanguigna con irbesartan è superiore al placebonel prevenire gli eventi vascolari nei pazienti con fibrillazione atriale. L’outcome principale diefficacia è costituito dall’incidenza di ictus, infarto miocardio e morte vascolare nel corso delfollow-up, che durerà tra due e quattro anni. Lo studio, iniziato nel giugno 2003, randomizzerà14000 pazienti.Studi MICHELANGELO: OASIS-5 & OASIS-6Gli studi internazionali Michelangelo OASIS-5 e OASIS-6 hanno lo scopo di valutarel’efficacia di fodaparinux, un pentasaccaride di sintesi che agisce come anticoagulanteattraverso l’inibizione selettiva del fattore Xa, nelle Sindromi Coronariche Acute. Vengonocondotti in più di 600 centri di 40 paesi afferenti alla rete OASIS (Organization to AssessStrategies in Ischaemic Syndromes), coordinata dal Canadian Cardiovascular CollaborationProject Office del Population Health Research Institute che fa capo alla Università McMaster diHamilton, Ontario. Per l’Italia il coordinamento scientifico di questi studi è svolto dalLaboratorio di Valutazione Clinica dei Farmaci del Dipartimento di Ricerca Cardiovascolare.Lo studio OASIS-5 ha l’obiettivo principale di valutare l’efficacia di fondaparinux, rispetto adenoxaparina nel prevenire la morte, l'infarto miocardico acuto o l'ischemia refrattaria in pazienticon angina instabile e infarto miocardico senza sopraslivellamento del tratto ST (UA/NSTE), interapia di routine. Lo studio è randomizzato, in doppio cieco, controllato, a gruppi paralleli eprevede l'inclusione di un totale di 16.000 pazienti. La fase di reclutamento è stata avviata nelgiugno 2003.Lo studio OASIS-6 ha l’obiettivo principale di valutare se fondaparinux è superiore al controllo(eparina non frazionata o placebo) nel prevenire la morte e il reinfarto a 9 giorni in pazienti consindrome coronarica acuta con sopraslivellamento del tratto ST (STE-ACS), candidati altrattamento con trombolisi o PCI primaria e in terapia standard. Lo studio prevede l'inclusionedi un totale di 10.000 pazienti.Lo studio prevede inoltre una valutazione, con un disegno fattoriale, dell’efficacia della GIK nelprevenire la morte e l’arresto cardiaco non fatale a 30 giorni. La fase di reclutamento verràavviata all’inizio del 2004.Studio INTER-HEARTLa mortalità per patologie cardiovascolari appare in diminuzione nella maggior parte dei Paesisviluppati ma è in aumento nei Paesi emergenti e in via di sviluppo. Le attuali conoscenzederivano soprattutto da studi condotti nei Paesi sviluppati e poco si conosce del ruolo dei fattoridi rischio tradizionali e nuovi nei Paesi emergenti.Lo studio INTER-HEART è uno studio di tipo caso-controllo che si prefigge di raccogliere datiepidemiologici sui fattori di rischio ambientali, clinici e genetici per l'infarto miocardico in 55diversi Paesi in Asia, Europa, Medio Oriente, Africa, Australia, Nord e Sud America,utilizzando un protocollo standardizzato e con la logica di valutare se i diversi fattori di rischiohanno un impatto differente nelle diverse regioni del mondo.I casi sono pazienti con infarto miocardico acuto ricoverati entro 24 ore dall’inizio dei sintominelle Unità di Cura Coronarica dei centri partecipanti; i controlli sono soggetti senza precedentidi malattie cardiovascolari e “matched” per sesso ed età ai casi. Per ciascun caso viene reclutatoalmeno un controllo.101RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNIl questionario dello studio raccoglie dati su fattori demografici (paese di origine, lingua madre),aspetti socio-economici (istruzione, occupazione, reddito), abitudini di vita (fumo, attività fisica,dieta) e sulla storia personale e familiare di malattie e fattori di rischio cardiovascolari.Lo studio INTER-HEART è sponsorizzato dall’Organizzazione Mondiale della Sanità, dallaWorld Heart Federation, e ha ricevuto finanziamenti da più di 40 enti pubblici e privati.La fase pilota dell’INTER-HEART, durata da febbraio 1999 a fine 2000, aveva reclutato 4000soggetti in 41 paesi. Lo studio a regime ha raccolto 26300 tra casi e controlli dall’aprile 2000 aldicembre 2002. La rete internazionale è coordinata dal Canadian Cardiovascular CollaborationProject Office dell'Università McMaster di Hamilton, Canada. Il Laboratorio di ValutazioneClinica dei Farmaci svolge il ruolo di coordinatore nazionale per l'Italia; allo studio hannopartecipato 15 centri che hanno arruolato 350 soggetti tra casi e controlli. I risultati finali sonostati presentati allo Steering Committee nel Dicembre 2003 ed è in preparazione il report per laloro pubblicazione.Laboratorio di Ricerca in Medicina GeneraleStudio Rischio e Prevenzione (R&P)Lo studio R&P è uno studio sull’ottimizzazione della prevenzione cardiovascolare nei pazientiad alto rischio, condotto a livello nazionale dai medici di medicina generale.Obiettivo e disegno dello studio- Valutazione clinica controllata, in doppio cieco, randomizzata, dell’efficacia di un trattamentocon n-3 PUFA nel ridurre l’incidenza di eventi cardiovascolari, fatali e non, in una popolazionedefinita dai MMG partecipanti ad alto rischio.- La storia epidemiologica ed assistenziale di questa popolazione (studio di outcomes).Popolazione in studio - Criteri di inclusioneTra i soggetti che vengono considerati dal MMG a elevato rischio cardiovascolare vengonoselezionati/e i/le pazienti con:- fattori di rischio multipli (e.g. ipertensione, ipercolesterolemia, diabete, fumo, storia familiaredi infartomiocardico, obesità, sesso e età)- pregressi eventi cardio-cerebrovascolari o manifestazioni cliniche di patologia aterosclerotica(ictus cerebrale, TIA, arteriopatie periferiche, precedenti interventi di rivascolarizzazionearteriosa, angina pectoris).Criteri di esclusione- condizioni di co-morbidità tali da far considerare infausta la prognosi in un tempo breve (es.neoplasie maligne);- attesa non-compliance in un follow-up di lungo periodo;- controindicazioni (allergie note agli n-3 PUFA) o indicazioni (IMA pregresso) al trattamentocon n-3 PUFA.Misure di efficaciaL’obiettivo primario è quello di valutare se una somministrazione a lungo termine con n-3PUFA è più efficace del corrispondente placebo nel ridurre l’insieme della mortalità totale e deimaggiori eventi cardiovascolari (infarti e ictus non fatali); gli eventi cardiovascolari maggiori(mortalità cardiovascolare, ictus e infarti non fatali) la mortalità per cause coronariche; la morteimprovvisa.La randomizzazione è centrale, stratificata per medico.102RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNIl trattamento sperimentale è rappresentato da una capsula contenente 1 g di n-3 PUFA, o ilplacebo corrispondente, da assumere giornalmente.La durata del follow-up è di 5 anni.Per documentare con sufficiente affidabilità statistica che il trattamento con n-3 PUFA è ingrado di ridurre l’incidenza di eventi sarà necessario reclutare almeno 12.000 pazienti.Lo studio è nella sua fase di avvio e nel corso dell’anno si è Costituito il Comitato Scientificodello Studio composto da: Centro Studi e Ricerca in Medicina Generale (CSeRMEG),Federazione Italiana Medici di Medicina Generale (FIMMG), Consorzio Sanità (CoS),Associazione Culturale Medica Interdisciplinare (Ass.Cu.M.I.), Associazione per la MedicinaIntegrativa e la Sanità Integrata (AMISI), Istituto di Ricerche Farmacologiche “Mario Negri”,Consorzio Mario Negri SUD. Si è creata la rete di Medici di Medicina Generale (760 MMGpresenti in 123 ASL rappresentati in tutto il territorio nazionale), si è avviata la procedura dicoinvolgimento attivo delle ASL (come previsto dal decreto ministeriale del 10.5.2001 sullasperimentazione clinica in medicina generale) e si è svolta una parte dei corsi di presentazionedel protocollo agli sperimentatori.L’avvio delle randomizzazioni è previsto per l’inizio del 2004.Studi di farmacoepidemiologia a partire da banche dati di prescrizioniamministrative-istituzionali: la popolazione degli anziani e delle donneLa farmacoepidemiologia a partire dai dati di prescrizione in medicina generale ha portato nelcorso degli anni a concentrare l’interesse sui problemi e le popolazioni che hanno nei datiprescrittivi uno degli indicatori più informativi.Continuando una lunga tradizione di collaborazione con il CINECA (ConsorzioInteruniversitario per il Calcolo Automatico dell'Italia Nord Orientale) sono stati elaborati i datidi prescrizione dell’Osservatorio ARNO, che consiste in un database di dati omogenei diprescrizione farmaceutica su un campione di diverse realtà prescrittive sparse sul territorionazionale, in due popolazioni particolarmente interessanti: gli anziani e le donne .Il rapporto ARNO “Rapporto sul profilo prescrittivo della popolazione anziana”, pubblicato adaprile 2003, è il risultato di analisi effettuate su un campione di 5.222.213 assistibili, di cui il21.5% è rappresentato dalla popolazione anziana. Di questi oltre il 95% è stato trattato almenouna volta nel corso dell’anno 2001. Il tasso di prescrizioni croniche della popolazione anziana èdi 85,8% paragonato al 57,65 della popolazione generale. Più del 30% dei soggetti anziani ètrattato cronicamente con più di 4 diversi farmaci.Il rapporto ARNO sulle donne è in via di elaborazione. I dati disponibili si riferiscono a unapopolazione di 2.885.153 donne che rappresentano il 52,2% della popolazione adultacomplessiva. Tra tutte le donne esposte, il 77% è stato trattato con almeno un farmaco diqualsiasi tipo nell’arco del 2002. I consumi farmaceutici saranno stati valutati in termini dinumero di trattati, numero di confezioni prescritte e spesa farmaceutica. Verrà posta particolareattenzione alle pazienti trattate per fasce d’età caratterizzanti epoche del ciclo della vitafemminile: adolescenza, età fertile, età matura (perimenopausa e menopausa) e età avanzata.L’ipertensione arteriosa nella foresta ecuadoregna: un progetto sullaprevalenza dell’ipertensione, sulle sue complicanze e sull’efficaciapreventiva del trattamento antiipertensivo in una zona rurale dell’Ecuador.Fa parte delle attività del Laboratorio un progetto di collaborazione con il Cecomet (Centro deEpidemiologia comunitaria y Medicina tropical) di Esmeraldas, Ecuador sulla prevalenza e iltrattamento dell’ipertensione arteriosa.In una zona rurale dell’Ecuador, il distretto sanitario di Borbon, localizzato al nord dellaprovincia di Esmeraldas è attualmente in corso uno studio sul trattamento dell’ipertensione inquesta popolazione.Dall’analisi dei dati dei primi 18 mesi di follow-up attivato in un’area del distretto emerge103RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNun’iniziale riduzione dei livelli pressori più alti: gli ipertesi con valori di grado II sono passatidal 34% al 25% e quelli di grado III dal 35% al 29%. Parallelamente la percentuale di pazienticon rischio cardiovascolare globale alto è diminuita anche se non si è verificata l’attesariduzione nel gruppo con rischio più alto, probabilmente a causa di un’insufficiente prescrizionedella terapia farmacologia e, soprattutto, di un uso ancora limitato delle terapie di associazione.L’evidenza di una scarsa compliance alle prescrizioni in metà degli ipertesi riflette la difficoltàdi far accettare una terapia farmacologica di lunga durata per una patologia cronica quasisempre asintomatica in una cultura locale tradizionale fortemente legata agli eventi acuti.Laboratorio di Farmacologia ClinicaGISSI-QDF (Qualità di Vita, depressione e Funzioni Cognitive)Il progetto - sottoprogetto dello studio GISSI-HF- ha l'obiettivo di descrivere l'andamento dellevariabili QDF nei pazienti con scompenso cardiaco, randomizzati per il GISSI-HF. Il follow-upè di 3 anni. Lo studio si propone inoltre due obiettivi, che possono avere implicazioniparticolarmente importanti per la trasferibilità dei risultati della ricerca all’assistenza in generaledel paziente con scompenso:verificare la validità nella pratica degli strumenti che quantificano le variabili QDF rispetto allaloro percezione-valutazione che viene di routine formulata dal personale infermieristico;documentare se, quanto, come la valutazione delle variabili QDF porta a decisioni assistenziali eterapeutiche specifiche (es. interventi farmacologici e/o di supporto specialistico).Hanno aderito 145 centri e sono stati a tutt'oggi reclutati più di 600 pazienti.Studio PARI-ETLD. Epidemiologia e trattamento delle Lesioni da DecubitoSi tratta di una sperimentazione clinica, randomizzata controllata in doppio cieco, per valutarel'efficacia delle fitostimoline nella riepitelizzazione delle lesioni da decubito superficiali. Ilcentro proponente è l'Ospedale di Trento. Sono stati randomizzati 295 pazienti in repartiospedalieri e RSA, nelle regioni Trentino, Veneto, Emilia Romagna e Friuli Venezia Giulia. Lostudio è stato chiuso nel marzo 2004 e i dati sono in corso di analisi.La collaborazione tra medici e infermieri in oncoematologia pediatricaIl progetto-laboratorio triennale di formazione e ricerca ha visto coinvolti rappresentanti dimedici e infermieri di 15 oncoematologie pediatriche italiane. Ogni anno sono stati organizzatilaboratori di formazione-ricerca per aiutare i singoli gruppi a identificare un probelma rilevante,risolvibile con il coinvolgimento di medici e infermieri, stendere un progetto e provare adapplicarlo. Ciascun gruppo ha scelto un tema (la gestione del paziente terminale; l'analgesiadurante i trattamenti invasivi; la gestione delle chiamate telefoniche). I risultati sono statipresentati nel seminario del Dicembre 2003 e sono in fase di pubblicazione.La valutazione del carico di lavoro in oncoematologiaIl progetto riguarda la valutazione dei carichi di lavoro per il personale infermieristico delleoncoematologie pediatriche. E' stata valutata la percezione del carico di lavoro, i pazienticonsiderati più gravosi. Sono stati campionati i tempi di esecuzione delle attività relative aiprincipali profili diagnostico terapeutici. I dati sono in fase di analisi.104RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNDIPARTIMENTO DI IMMUNOLOGIAE BIOLOGIA CELLULAREPERSONALECapo DipartimentoAlberto MANTOVANI,Dr.Med.Chir.Laboratorio di Biologia VascolareCapo LaboratorioElisabetta DEJANA, Dr.Sci.Biol. Ph.D.Unità di Angiogenesi Molecolare*Capo UnitàFerruccio BREVIARIO, Per.Chim.Unità di Coltura di TessutiCapo UnitàGiovanna BALCONI, Dipl.Univ.Unità di Fisiologia Endoteliale*Capo UnitàMaria Grazia LAMPUGNANI, Dr.Sci.Biol.*Unità distaccate presso l’Istituto FIRC di Oncologia Molecolare (IFOM, Milano)Unità di Adesione CellulareCapo UnitàGianfranco BAZZONI, Dr.Med.Chir.Laboratorio di Immunoematologia MolecolareCapo LaboratorioMartino INTRONA, Dr.Med.Chir.Unità di Differenziamento LinfoideCapo UnitàJosée GOLAY, Dr.Bioch. Ph.D.Laboratorio di ImmunofarmacologiaCapo LaboratorioAnnunciata VECCHI, Dr.Sci.Biol.105RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNLaboratorio di Immunologia CellulareCapo LaboratorioPaola ALLAVENA, Dr.Med.Chir.Unità di Regolazione dell’Espressione GenicaCapo UnitàAntonio SICA, Dr.Sci.Biol. Ph.D.Unità di Tecniche ImmunologicheCapo UnitàGiuseppe PERI, Dipl.Lab.Biol.Laboratorio di Infiammazione e Trasduzione del SegnaleCapo LaboratorioSilvano SOZZANI, Dr.Farm.106RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNINTRODUZIONE ALLE ATTIVITA' DEL DIPARTIMENTOIl Dipartimento di Immunologia e Biologia Cellulare (DIBC) è focalizzato sullaimmunobiologia dei mediatori dell'immunità innata, in particolare citochine e chemochine, esull'endotelio vascolare. Inoltre, il Dipartimento è interessato allo sviluppo di nuove terapiemediate da cellule o anticorpi per le patologie di tipo onco-ematologico. Le aree di interesse delDIBC sono centrali alla comprensione della patofisiologia di diverse patologie umane chevanno dalle malattie vascolari, all'infiammazione, all'autoimmunità e alle malattie neoplastiche.Le citochine e le cellule endoteliali costituiscono un importante bersaglio per lo sviluppo dinuovi approcci terapeutici nei confronti di queste malattie come pure per l'identificazione distrumenti diagnostici innovativi. Inoltre, il DIBC ha un interesse particolare nello sviluppo enella definizione del meccanismo di azione di nuove terapie basate su cellule o anticorpi nelsettore dell'ematologia.Gli approcci utilizzati al DIBC enfatizzano il livello molecolare, con uno sforzo in particolarenell'identificazione e caratterizzazione di nuove molecole e lo sviluppo di nuovi strumentioriginali (es. animali geneticamente modificati, anticorpi monoclonali, saggi di misura). Glistudi a livello molecolare sono facilitati dalla attività di una parte del gruppo di BiologiaVascolare all'Istituto FIRC di Biologia Molecolare. Questa istituzione offre accesso ametodologie sperimentali avanzate nell'ambito delle nanotecnologie, della bioinformatica edella biologia strutturale. In parallelo, vengono condotti studi in vivo in modelli preclinici e unosforzo continuo viene fatto per valutare gli strumenti molecolari e i paradigmi sviluppati nelcontesto della patologia umana o direttamente nell'uomo. Da questo punto di vista,complessivamente l'attività del DIBC riflette la convergenza di ricerca fondamentale e clinica.Attività antitumorale di chemochineSCOPERTE/RISULTATI PRINCIPALICaratterizzazione del ruolo dell'enzima PI3Kg nella migrazione leucocitariaCaratterizzazione del ruolo di PTX3 in diverse patologie umane: cardiovascolari, infettive,tumoraliCaratterizzazione del ruolo delle strutture giunzionali endoteliali nella regolazione dellapermeabilità vascolare e nell'angiogenesi.Caratterizzazione di alcuni difetti molecolari nella trasmissione del segnale di leucociti tumoreassociatiCaratterizzazione di un nuovo ruolo funzionale del recettore del mannosio su cellule dendriticheColture a lungo termine di cellule endoteliali linfaticheDefinizione del switch dei recettori per chemiochine in cellule dendriticheDefinizione del ruolo di PTX3 in infezioni e fertilitàGenerazione di nuove linee di topi KO107RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNGenerazione e stabilizzazione di una linea di cellule endoteliali linfatiche di topoIdeazione del sistema suicida CD20Identificazione del primo recettore decoy per IL-1Identificazione della prima pentraxina lunga umana, PTX3Identificazione di nuovi inibitori di citochine e chemiochineIdentificazione di proteine che compongono le strutture giunzionali dell'endotelio (VE-caderinae JAM-1).Identificazione di recettori decoy funzionali nel sistema delle chemiochineIdentificazione di TIR8, un nuovo componente della superfamiglia dei recettori TLR e IL-1Identificazione di un nuovo recettore chemiotattico nella migrazione di DC allo stadio maturoLe leucemie linfoblastiche acute CD33 positive come bersagli del Gemtuzumab OzogamicinRegolazione della produzione di chemiochine in cellule dendriticheRegolazione dell'espressione di TLR4 e trasmissione del segnale attraverso MyD88Regolazione dell'espressione e della funzionalità di recettori per chemiochineRegolazione di chemiochine in microambientiRuolo del complemento per la risposta biologica a RituximabRuolo inibitorio di TIR8 nell’infiammazioneSinergismo tra Interleukin-2 e Rituximab/AlemtuzumabStudio della capacità dei precursori mesodermici circolanti di colonizzare vasi e altri tessuti inrigenerazione.Sviluppo di linee di precursori mesodermici circolanti.COLLABORAZIONI NAZIONALIDIBIT, Istituto Scientifico San Raffaele, MilanoDipartimento di Ematologia, Ospedali Riuniti di BergamoDipartimento di Genetica, Biologia e Biochimica, Università di TorinoDipartimento di Medicina Sperimentale e Biochimica,Università di Perugia.Dipartimento di Medicina Sperimentale e Patologia, Università di RomaDipartimento di Medicina Sperimentale e Patologia, Università di BresciaDipartimento di Pediatria, Ospedale S.Gerardo, Monza108RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNDipartimento di Salute Pubblica e Biologia Cellulare, Università Tor Vergata, RomaDipartimento di Scienze Biomediche e Biotecnologie, Università di BresciaFacoltà di Medicina e Chirurgia Ospedale di Desio, MilanoI Clinica Medica, Università di Roma "La Sapienza", Policlinico Umberto I.Istituto di Clinica Medica Generale Ematologia ed Immunologia Clinica, Torrette di Ancona,ItalyIstituto di Anatomia Patologica, Università di Milano, Ospedale Luigi Sacco, MilanoIstituto di Patologia Generale, Università di MilanoIstituto di Terapia Sperimentale per la Fibrosi Cistica, Ospedale S. Raffaele, MilanoLaboratorio di Biologia Molecolare, Istituto Gaslini, GenovaLaboratorio di Chirurgia Sperimentale, Ospedale San Raffaele, MilanoLaboratorio di Immunopatologia Cattedra di Nefrologia, Dip. di Discipline Cliniche eChirurgiche, Università di TorinoLaboratorio di Microbiologia, Università di PerugiaOspedale Molinette, Università di Torino.COLLABORAZIONI INTERNAZIONALICentro di Virologia Applicata ai Tumori, Deutsches Krebsforschungszentrum, Heidelberg,GermaniaCentro di Tecnologia Transgenica e Terapia Genica, Lovanio, BelgioDipartimento di Chimica Biologica, Università di Buenos Aires, ArgentinaDip. Farmacologia, Facoltà di Medicina di Hannover, GermaniaDipartimento di Ematologia, Academisch Ziekenhuis Leiden, OlandaDipartimento di Medicina Interna, Università di Basilea, SvizzeraDipartimento di Nefrologia, Università di Leiden, OlandaDuke University, Durham, North Carolina, USAErasmus University, Rotterdam, OlandaINSERM U470, Centro di Biochimica, Università di Nizza, FranciaIstituto Pasteur, Parigi, FranciaIstituto di Ricerca sul Cuore, Camperdown, AustraliaLaboratorio di Immunoregolazione Molecolare, NCI-FCRDC, Frederick, MD, USALaboratorio di Oncologia Trasduzionale, ICRF, Londra, UKIstituto Max Planck, Friburgo, GermaniaMRC, Hammersmith Hospital, London, UKNCI, NIH, Bethesda, Maryland, USARega Institute, Lovanio, BelgioScripps Research Institute, La Jolla, CA, USAUniversità di Friburgo, SvizzeraUniversità of Lovanio, BelgioUniversity College di Londra, UKPRESENZA IN COMITATI EDITORIALIAmerican Journal of Physiology (E. Dejana)Annals of Oncology (A. Mantovani)Atherosclerosis, Thrombosis. A Journal of Vascular Biology (E. Dejana)109RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNCell Adhesion and Communication (E. Dejana)Cell and Tissue Research (E. Dejana)Cytokine (A. Mantovani)Endothelium (A. Mantovani, E. Dejana)European Cytokine Network (A. Mantovani)European Journal of Immunology (A. Mantovani, Executive Commitee Edition)Haematologica (A. Mantovani, E. Dejana)International Immunopharmacology (A. Mantovani)Journal of Cell Biology (E. Dejana)Journal of Clinical Investigation (A. Mantovani)Journal of Immunology (A. Mantovani, S. Sozzani, Associate Editors)Journal of Leukocyte Biology (A. Mantovani)Journal of Vascular Investigation (E. Dejana)Microvascular Research (E. Dejana)Trends in Immunology (A. Mantovani)ATTIVITA' DI REVISIONEArteriosclerosis and Thrombosis, Blood, British Journal of Cancer, British Journal ofPharmacology, Cancer , Cancer Research, Cytokine, European Journal of Cancer, EuropeanJournal of Immunology, FEBS Letters, Haematologica, Human Gene Therapy, Immunity,International Journal of Cancer, Journal of Cellular Physiology, Journal of ClinicalInvestigation, Journal of Experimental Medicine, Journal of Immunology, Journal of LeukocyteBiology, Journal of the National Cancer Institute, Leukemia, Nature, Nature Immunology,Nature Reviews in Immunology, Nature Medicine, PNAS, Trends in ImmunologyPRESENZA IN COMMISSIONI NAZIONALI E INTERNAZIONALIAssociazione Italiana per la Ricerca sul CancroConsiglio Nazionale delle Ricerche, Progetto Finalizzato BiotecnologieCommissione “Ricerca Finalizzata” del Ministero della Salute, ItalyCommissione “Cellule Staminali” dell’Istituto Superiore di Sanità, ItalyCPMP (EMEA) Agenzia per la valutazione del dossier di registrazione di nuovi farmaciEMBO (European Molecular Biology Organization), Heidelberg, GermanyEC 5° Programma QuadroFondazione Scientifica MaurizianaIstituto Superiore di Sanità, Programma Nazionale per l'AIDSUNESCO Commission for Natural SciencesORGANIZZAZIONE DI EVENTI2a Conferenza Nazionale SIICA, Verona, 28-31 Maggio 2003110RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNPARTECIPAZIONE AD EVENTI CON CONTRIBUTI DELDIPARTIMENTOKeystone Symposium on Chemokines and Chemokine Receptors, Breckenridge, Colorado, 7-12Gennaio 2003.Keystone Symposium on Regulatory and effector function of macrophages, Taos, New Mexico,30 Gennaio-4 Febbraio 2003.2003 Annual Meeting of the Israeli Society of Immunology, Haifa, 12-13 Febbraio 2003Translational Research in Autoimmunity, Genova, 3-5 Aprile 2003.Asthma VI, Ischia, 24-28 Maggio 2003.2a Conferenza Nazionale SIICA, Verona, 28-31 Maggio 200315° Congresso Europeo di Immunologia, Rodi, Grecia, 8-12 Giugno 2003.Congresso Annuale European Hematology Association (EHA), Lione, 12-15 Giugno 2003.Italy-US Meeting on Cancer Pharmacogenomics, 31 Luglio-1 Agosto, 2003.Congresso Internazionale "From Laboratory to the Clinic", Oxford, UK, 6-10 Settembre 2003.European Meeting on Complement in Human Disease, Trieste, 6-9 Settembre 2003.International Cytokine Conference 2003, Dublino, Settembre 2003.Conferenza Scientifica su Cytokine-Regulated gene expression at the crossroad of innateimmunity, New York, 17-18 Ottobre 2003.Congresso Annuale della Società Italiana di Ematologia, Roma, Ottobre 2003.Institut Pasteur Euroconference on Chemokines, Parigi, 23-24 Ottobre 2003.18th Annual Meeting Int. Society for Biological Therapy of Cancer, Bethesda, Maryland, 30Ottobre-2 Novembre 2003.Cancer Immunotherapy, 34° Simposio Internazionale della Fondazione per la Ricerca sulCancro "Princess Takamatsu", Tokyo, 11-13 Novembre 2003.XVII Congresso Nazionale AIDS e Sindromi Correlate, Roma, 28-30 Novembre 2003.Otto Hertz Memorial Lectureship in Cancer Research, Tel Aviv University, 25 and 26November 2003.Cell Migration in Physiology and Disease, Madrid, 1-2 Dicembre 2003.Meeting Annuale della American Society of Hematology (ASH), San Diego, California, 6-9Dicembre 2003.111RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNCONTRIBUTI E CONTRATTIACRAF AngeliniAlfa WassermannAssociazione Italiana per la Ricerca sul CancroAstra ZenecaComunità EuropeaConsiglio Nazionale delle RicercheFondazione CARIPLOFondazione Italiana per la Ricerca sul CancroFondazione Paolo BelliFondazione TettamantiHycultIDIImClone Inc.IndenaIstituto Superiore di SanitàMinistero Istruzione, Università e Ricerca ScientificaMinistero SaluteMolmedRoche ItaliaSigma TauSELEZIONE PUBBLICAZIONI SCIENTIFICHE APPARSENELL'ANNO 2003Abderrhaim-Ferkoune A, Bezy O, Chiellini C, Maffei M, Grimaldi P, Bonino F, Moustaid-Moussa N, Pasqualini F,Mantovani A, Ailhaud G, Amri E ZCharacterization of the long pentraxin PTX3 as a TNFalfa-induced secreted protein of adipose cellsJ Lipid Res 2003; 44: 994-1000Amico D, Barbui A, Erba E, Rambaldi A, Introna M, Golay JDifferential response of human acute myeloid leukaemia cells to gemtuzumab ozogamicin in vitro: Role of Chk1 andChk2 phosphorylation and caspase 3Blood 2003; 101: 4589-4597Bazzoni GThe JAM family of junctional adhesion moleculesCurr Opin Cell Biol 2003; 15: 525-530Biswas P, Mantelli B, Sica A, Malnati M, Panzeri C, Saccani A, Hasson H, Vecchi A, Saniabadi A, Lusso P,Lazzarin A, Beretta A.Expression of CD4 on human peripheral blood neutrophils.Blood. 2003;101:4452-4456.Bonini C, Grez M, Traversari C, Ciceri F, Marktel S, Ferrari G, Dinauer M, Sadat M, Aiuti A, Deola S, RadrizzaniM, Hagenbeek A, Apperley J, Ebeling S, Martens A, Kolb H J, Weber M, Lotti F, Grande A, Weissinger E, Bueren JA, Lamana M, Falkenburg J H F, Heemskerk M H M, Austin T, Kornblau S, Marini F, Benati C, Magnani Z,Cazzaniga S, Toma S, Gallo-Stampino C, Introna M, Slavin S, Greenberg P D, Bregni M, Mavilio F, Bordignon CSafety of retroviral gene marking with a truncated NGF receptor112RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNNature Medicine 2003; 9: 367-369Bourke E, Bosisio D, Golay J, Polentarutti N, Mantovani AThe toll-like receptor repertoire of human B lymphocytes: Inducible and selective expression of TLR9 and TLR10 innormal and transformed cellsBlood 2003; 102: 956-963Bourke E, Cassetti A, Villa A, Fadlon E J, Colotta F, Mantovani AIL-1beta scavenging by the type II IL-1 decoy receptor in human neutrophilsJ Immunol 2003; 170: 5999-6005Bussolati B, Peri G, Salvidio G, Verzola D, Mantovani A, Camussi GThe long pentraxin Ptx3 is synthesized in IgA glomerulonephritis and activates mesangial cellsJ Immunol 2003; 170: 1466-1472Chieppa M, Bianchi G, Doni A, Del Prete A, Sironi M, Laskarin G, Monti P, Piemonti L, Biondi A, Mantovani A,Introna M, Allavena PCross-linking of the mannose receptor on monocyte-derived dendritic cells activates an anti-inflammatoryimmunosuppressive programJ Immunol 2003; 171: 4552-4560Di Gaetano N, Cittera E, Nota R, Vecchi A, Grieco V, Scanziani E, Botto M, Introna M, Golay JComplement activation determines the therapeutic activity of rituximab in vivoJ Immunol 2003; 171: 1581-1587Doni A, Peri G, Chieppa M, Allavena P, Pasqualini F, Vago L, Romani L, Garlanda C, Mantovani AProduction of the soluble pattern recognition receptor PTX3 by myeloid, but not plasmacytoid, dendritic cellsEur J Immunol 2003; 33: 2886-2893Fra A M, Locati M, Otero K, Sironi M, Signorelli P, Massardi M L, Gobbi M, Vecchi A, Sozzani S, Mantovani AScavenging of inflammatory CC chemokines by the promiscuous putatively silent chemokine receptor D6J Immunol 2003; 170: 2279-2282Golay J, Manganini M, Facchinetti V, Gramigna R, Broady R, Borleri G M, Rambaldi A, Introna MRituximab-mediated antibody-dependent cellular cytotoxicity against neoplastic B cells is stimulated strongly byinterleukin-2Haematologica 2003; 88: 1002-1012Introna M, Golay J, Barbui TRituximab: A new therapeutic tool for primary immune thrombocytopenic purpura?Haematologica 2003; 88: 482-484Kaplamski G, Marin V, Montero-Julian F, Mantovani A, Farnarier CIL-6: A regulator of the transition from neutrophil to monocyte recruitment during inflammationTrends Immunol 2003; 24: 25-29Luchetti M M, Paroncini P, Majlingova P, Frampton J, Mucenski M, Svegliati Baroni S, Sambo P, Golay J, IntronaM, Gabrielli ACharacterization of the c-Myb-responsive region and regulation of the human type I collagen alfa2 chain gene by c-MybJ Biol Chem 2003; 278: 1533-141Mancini F, Landolfi C, Muzio M, Aquilini L, Soldo L, Coletta I, Guglielmotti A, Mantovani A, Pinza M, Milanese CAcetaminophen down-regulates interleukin-1beta-induced nuclear factor-kB nuclear translocation in a humanastrocytic cell lineNeurosci Lett 2003; 353: 79-82Mantovani A, Locati M, Sozzani SCC chemokinesIn: Cytokine handbook, 4th. ed.. Elsevier, Amsterdam; 2003 : 1083-1100Mantovani A, Garlanda C, Bottazzi BPentraxin 3, a non-redundant soluble pattern recognition receptor involved in innate immunity113RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNVaccine 2003; 21: S2/43-S2/47Mantovani A, Sica AResponse to Hellstrand: The jury on radicals is still outTrends Immunol 2003; 24: 234Mantovani A, Bonecchi R, Martinez F O, Galliera E, Perrier P, Allavena P,Locati MTuning of innate immunity and polarized responses by decoy receptorsInt Arch Allergy Appl Immunol 2003; 132: 109-115Mantovani AInterleukin-1 (IL-1)In: Encyclopedia of hormones. Academic Press, Amsterdam; 2003 : 405-412Monti P, Mercalli A, Leone B E, Di Carlo V, Allavena P, Piemonti LRapamycin impairs antigen uptake of human dendritic cellsTransplantation 2003; 75: 137-145Monti P, Allavena P, Di Carlo V, Piemonti LEffects of anti-lymphocytes and anti-thymocytes globulin on human dendritic cellsInt Immunopharmacol 2003; 3: 189-196Monti P, Leone B E, Marchesi F, Balzano G, Zerbi A, Scaltrini F, Pasquali C, Calori G, Pessi F, Sperti C, Di CarloV, Allavena P, Piemonti LThe CC chemokine MCP-1/CCL2 in pancreatic cancer progression: Regulation of expression and potentialmechanisms of antimalignant activityCancer Res 2003; 63: 7451-7461Nauta A J, Bottazzi B, Mantovani A, Salvatori G, Kishore U, Schwaeble W J, Gingras A R, Tzima S, Vivanco F,Egido J, Tijsma O, Hack E C, Daha M R, Roos ABiochemical and functional characterization of the interaction between pentraxin 3 and C1qEur J Immunol 2003; 33: 465-473Raschi E, Testoni G, Bosisio D, Borghi M O, Koike T, Mantovani A, Meroni PLRole of the MyD88 transduction signaling pathway in endothelial activation by antiphospholipid antibodiesBlood 2003; 101: 3495-3500Riboldi E, Frascaroli G, Transidico P, Luini W, Bernasconi S, Mancini F, Guglielmotti A, Milanese C, Pinza M,Sozzani S, Mantovani ABenzydamine inhibitis monocyte migration and MAPK activation induced by chemotactic agonistsBr J Pharmacol 2003; 140: 377-383Schioppa T, Uranchimeg B, Saccani A, Biswas S, Doni A, Rapisarda A, Bernasconi S, Saccani S, Nebuloni M, VagoL, Mantovani A, Melillo G, Sica ARegulation of the chemokine receptor CXCR4 by hypoxiaJ Exp Med 2003; 198: 1391-1402Tacchini L, Fusar-Poli D, Sironi M, Mantovani A, Bernelli-Zazzera AActivation of signal transducer and activator of transcription 3 in rat liver after heat shock and reperfusion stressInt J Biochem Cell Biol 2003; 35: 316-323Vulcano M, Struyf S, Scapini P, Cassatella M A, Bernasconi S, Bonecchi R, Calleri A, Penna G, Adorini L, Luini W,Mantovani A, Van Damme J, Sozzani SUnique regulation of CCL18 production by maturing dendritic cellsJ Immunol 2003; 170: 3843-3849Wittamer V, Franssen J D, Vulcano M, Mirjolet J F, Le Poul E, Migeotte I, Brezillon S, Tyldesley R, Blanpain C,Detheux M, Mantovani A, Sozzani S, Vassart G, Parmentier M, Communi DSpecific recruitment of antigen-presenting cells by Chemirin, a novel processed ligand from human inflammatoryfluidsJ Exp Med 2003; 198: 977-985114RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNATTIVITA' DI RICERCALaboratorio di Biologia VascolareRegolazione delle giunzioniLe interazioni tra proteine delle Giunzioni Strette regolano il passaggio dei fluidi e lamigrazione dei leucociti tra cellule endoteliali ed epiteliali contigue. Recentemente abbiamodescritto alcune di queste interazioni, focalizzandoci su JAM-A (una proteina di membranadelle Giunzioni Strette) e sulle molecole ad essa associate. Abbiamo inoltre definito che idomini PDZ mediano la maggior parte di queste interazioni molecolari. Uno degli obiettiviprincipali della nostra ricerca consiste ora nel valutare come queste interazioni sono regolate inrisposta a stimoli normali e patologici. Per questo scopo, stiamo utilizzando approccicomplementari di biologia cellulare e di biochimica. Un altro obiettivo consisterànell’identificare nuove interazioni tra proteine (e i domini che mediano queste associazioni)utilizzando tecniche di proteomica. Da ultimo, definiremo la rilevanza biologica di questeinterazioni mediante l’analisi genetica delle proteine giunzionali nell’organismo modelloCaenorhabditis elegans. Il fine ultimo di tutte queste linee di ricerca è l’identificazione dideterminanti molecolari per il possibile sviluppo di farmaci ad azione anti-infiammatoria.Laboratorio di ImmunofarmacologiaIdentificazione del ruolo di nuovi recettori dell’immunità innataNel Dipartimento negli ultimi anni sono state identificate nuove molecole dell’immunità innata,il recettore solubile pentrassina 3 (PTX3), il recettore TIR8, membro della superfamiglia deirecettori IL-1R/TLR e il recettore orfano per chemiochine LCCR. Il laboratorio hasignificativamente contribuito alla definizione del ruolo di queste molecole grazie allagenerazione di animali geneticamente modificati e allo studio del loro fenotipo in condizionifisiologiche o patologiche in contesti infiammatori e infettivi. Inoltre questi animali sono statiutilizzati nel laboratorio per la generazione di anticorpi monoclonali specifici, sfruttando la loroassenza di tolleranza verso la molecola di cui sono deficienti.Gli studi su PTX3 hanno messo in evidenza il ruolo non ridondante di questa molecolanell’immunità innata in infezioni fungine opportuniste e il suo ruolo di componente strutturaledella matrice extracellulare del cumulo ooforo e verosimilmente in altre matrici extracellulariprodotte in condizioni di infiammazione. I risultati ottenuti hanno permesso di avviare unostudio sull'applicazione farmacologica di questa molecola nelle infezioni fungine di pazientiimmunodepressi.Gli studi condotti su TIR8 hanno permesso di identificare il ruolo di questo recettore. TIR8 èuna molecola espressa a livello di cellule epiteliali e di cellule dendritiche che si associa alrecettore di IL-1 e ad alcuni membri della famiglia dei TLR ed esercita un ruolo di controllonegativo sulla produzione di citochine che consegue all'attivazione di questi recettori da parte dispecifici ligandi. TIR8 è quindi una molecola con attività modulatoria dei processi diinfiammazione mucosale, in particolare nel tratto gastrointestinale.LCCR è un recettore orfano della famiglia dei recettori per chemiochine: i primi studi condottisugli animali geneticamente modificati suggeriscono un ruolo per questa molecola nellaregolazione della migrazione leucocitaria in contesti infiammatori.Un’altra linea di lavoro ha riguardato lo studio filogenetico dei membri della famiglia delle115RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNpentrassine, realizzato analizzando le sequenze depositate nelle banche dati delle pentrassine didiverse specie, e lo studio dell’espressione delle pentrassine lunghe dell’uomo e del topo insottopopolazioni leucocitarie.Caratterizzazione del ruolo di D6, un recettore per chemochine silenteAll’interno di una linea di ricerca portata avanti nel Dipartimento da anni sullo studio direcettori “trappola” (decoy receptors) è stato caratterizzato un recettore per chemiochine,chiamato D6, espresso prevalentemente dalle cellule endoteliali dei vasi linfatici. D6 è statodefinito un recettore “promiscuo”, in quanto è in grado di legare molte chemiochine, indotte oaumentate nei processi infiammatori, della famiglia delle CC chemiochine. Il lavoro svolto incollaborazione con l’Istituto di Patologia Generale della Facoltà di Medicina, Università degliStudi di Milano, ha permesso di definire D6 come recettore “spazzino”, che lega e rimuove lechemiochine infiammatorie, ma non manda alla cellula segnali attivatori noti. Questecaratteristiche e la sua localizzazione anatomica sui vasi linfatici suggeriscono che faccia partedi una strategia antiinfiammatoria, regolando la biodisponibilità delle chemiochine elimitandone la loro diffusione attraverso il sistema linfatico. La disponibilità di topi KOper D6,di cui è iniziata l’espansione di una colonia, permetterà lo studio della sua funzione in vivo.Generazione e caratterizzazione di una linea di cellule endoteliali linfatichedi topoIl sistema linfatico costituisce un importante meccanismo di sorveglianza immunologica,filtrando la linfa e gli antigeni in essa contenuti attraverso la catena dei linfonodi. C’è quindiinteresse allo studio delle funzioni delle cellule endoteliali linfatiche, sia per quanto riguarda laregolazione dei fluidi nei tessuti che l’interazione con le cellule che migrano attraverso questoendotelio, come le cellule presentanti gli antigeni, altri leucociti e, in condizioni patologiche, lecellule tumorali. La difficoltà di ottenere in vitro cellule endoteliali linfatiche limita il lorostudio. Abbiamo isolato, stabilizzato e caratterizzato una linea di cellule endoteliali da vasilinfatici iperplastici di topi. Le cellule esprimono i marcatori caratteristici delle celluleendoteliali linfatiche (VEGFR3, podoplanina, Prox-1 e D6). Producono inoltre citochine edesprimono molecole di adesione, che vengono regolate da stimoli infiammatori. E’ quindidisponibile uno strumento per lo studio delle interazioni tra endotelio linfatico e le cellule checircolano in questi vasi fisiologicamente, come i leucociti, o in condizioni patologiche, come lecellule tumorali.Chemochine e polarizzazione dei fagociti mononucleatiNella regolazione delle risposte immuni come nella infiammazione le cellule che presentanol’antigene, come i fagociti mononucleati e le cellule dendritiche, svolgono un ruolo centrale. Ilmicroambiente in cui i monociti differenziano a macrofagi influenza la loro maturazione edattivazione. I macrofagi detti di tipi I (M1) differenziano in presenza di stimoli come IFNg eLPS e sono coinvolti in risposte come DTH e controllo dei patogeni intracellulari, mentre imacrofagi di tipo II (M2) sono una popolazione più eterogenea, indotta dall’esposizione a IL-4/IL-13, o IL-10 o immunocomplessi e stimoli infiammatori, e partecipano al riparo erimodellamento dei tessuti, allergie, immunoregolazione e risposta agli elminti. Anche laproduzione di chemochine differisce nei macrofagi ottenuti in microambienti specifici. Inparticolare abbiamo osservato che la presenza di immunocomplessi e stimoli infiammatoriinduce macrofagi con capacità di produzione di CCL1 regolata in modo unico, essendo inibitada citochine sia di tipo 1 che di tipo 2. Il controllo di circuiti specifici di chemochine e citochinepuò portare ad approcci terapeutici per malattie mediate da immunocomplessi.116RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNFarmacologiaLa comprensione dei circuiti delle citochine è necessaria per riconsiderare il modo di agire diagenti immunosoppressivi/antiinfiammatori classici come per es.gli ormoni glucocorticoidi.Vengono studiati nuovi farmaci, con attività antiinfiammatoria e meccanismi d’azione ancoranon noti, per i loro effetti sulla produzione di citochine e chemiochine o per la loro capacità diinterferire con i recettori specifici. In particolare la attivazione e la modulazione dei recettori perle chemiochine hanno mostrato avere un ruolo importante nei processi infiammatori acuti ecronici. L’antagonismo di questi recettori rappresenta quindi un importante target perl’identificazione di nuovi agenti terapeutici con attività antiinfiammatoria e/oimmunomodulatoria. In questa ottica è stato condotto uno studio sulla ricerca di nuovi compostiin grado di interferire con il recettore CCR2, di cui è stato documentato in letteratura il ruoloimportante in patologie infiammatorie croniche, come l’aterosclerosi e l’artrite reumatoide.Laboratorio di Immunologia CellulareCaratterizzazione di nuovi circuiti di regolazione dell'infiammazione eimmunità innataDa diversi anni è sorto un grande interesse nel nostro Dipartimento per la caratterizzazione dinuovi circuiti molecolari che regolano i processi infiammatori. I fattori dell'infiammazione edell'immunità innata regolano in modo determinante l'avvio della risposta immunitaria, nonchèla sua amplificazione e polarizzazione. I mediatori infiammatori sono anche fortementecoinvolti nei meccanismi patogenetici di numerose malattie a elevato impatto sociale, qualiinfezioni, malattie auto-immuni, tumori. Vi è quindi un grande interesse nello sviluppare nuovestrategie terapeutiche per modulare appropriatamente (stimolare/sopprimere) la rispostainfiammatoria/immunitaria.Nuovi geni indotti da IL-1 : Pentraxin 3 (PTX3)PTX3 è la prima pentraxina lunga identificata, ed è strutturalmente correlata ad altre pentraxinecorte già note, come la proteina C-reattiva (CRP). PTX3 è prodotta da vari tipi cellulari, inparticolare da cellule endoteliali, monociti-macrofagi, cellule dendritiche, in risposta a mediatoriprimari dell'infiammazione quali IL-1, TNF e LPS. PTX3 lega alcuni microrganismi patogeni elega un componente importante della cascata complementare (C1q). Il ruolo patofisiologico diPTX3 di facilitare il riconoscimento dei patogeni da parte delle cellule del sistema immunitarioè stato recentemente confermato in topi geneticamente modificati (PTX3 -/- ) i quali sonomaggiormente suscettibili ad alcune infezioni fungine e batteriche (Garlanda et al. Nature 2002).Il significato di alti livelli di PTX3 circolanti é attualmente in corso in pazienti affetti da variepatologie, incluso l'infarto miocardico acuto, patologie vascolari e altre.Recettori decoy (trappola) per citochine e chemiochine infiammatorie.I recettori decoy sono in grado di legare in modo specifico il loro ligando, ma non sono in gradodi trasdurre a valle il segnale, essi fungono quindi da sequestratori del ligando. Il nostrolaboratorio ha collaborato alla identificazione del primo recettore decoy: il recettore di tipo II diIL-1 (Colotta et al. Science, 1993). Il nostro gruppo ha recentemente dimostrato l'esistenza didecoy funzionali (cioè strutturalmente integri, ma lo stesso incapaci di segnalare) nel sistemadelle citochine chemiotattiche/chemiochine. I recettori per chemiochine infiammatorie su celluledendritiche e monociti vengono funzionalmente disaccoppiati dalle componenti che trasmettonoil segnale, quando le cellule sono esposte a una combinazione di segnali pro- e antiinfiammatori,quali IL-10 e LPS e IFN gamma. Vengono così generati dei recettori decoy117RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMN"funzionali" che hanno la funzione di eliminare le chemiochine infiammatorie dal tessuto e diattivare quindi un circuito di blocco dell'infiammazione. E' in corso di attuazione lacaratterizzazione dei meccanismi molecolari che sottendono al disaccoppiamento di questirecettori decoy.Biologia delle cellule che presentano gli antigeni: le cellule dendriticheLe cellule dendritiche (DC) sono leucociti professionisti nella presentazione degli antigeni esvolgono un ruolo indispensabile nell'avviare, amplificare e polarizzare la risposta immunitaria.Da alcuni anni lo studio della biologia delle DC è studiata da diversi gruppi del nostroDipartimento. I principali progetti sono i seguenti:1) Differenziazione in vitro di colture di DC umane a partire da precursori (monociti, celluleCD34+),2) Isolamento di sottopopolazioni di DC umane circolanti (DC mieloidi, DC plasmacitoidi)3) Modulazione del differenziamento/attivazione di DC con fattori pro/anti-infiammatori, nuovimodulatori della risposta immunitaria, farmaci.4) Analisi delle funzioni biologiche delle DC: cattura e presentazione dell'Ag; produzione difattori importanti nella risposta infiammatoria/immunitaria (citochine/chemiochine, PTX3) epolarizzazione delle risposte Th1/2 e T reg; risposta migratoria a fattori chemiotattici, inclusenuove chemiochine.5) Analisi e caratterizzazione di recettori di membrana il cui ruolo è importante nella biologia diDC, in particolare nuovi recettori coinvolti nella risposta immunitaria innata (TLR, PTX3, C-type lectin R (recettore del mannosio); nuovi recettori chemiotattici).6) Profilo di espressione genica di DC umane stimolate con fattori infiammatori/antiinfiammatorimediante tecniche Affimetrix.Ruolo del sistema immunitario all'interfaccia col tumoreOltre alla componente propriamente tumorale, il tumore è composto da cellule stromali:endoteliali, fibloblasti, leucociti. Questo laboratorio studia da molti anni il ruolo dei leucocitiche infiltrano il tessuto neoplastico e ha descritto in passato come queste cellule possano esseredi interesse per nuove strategie di immunoterapia. In particolare, il principale interesse delprogetto è lo studio del fenotipo cellulare e molecolare dei Macrofagi Associati a Tumore(TAM), nella prospettiva di esplorare il potentiale uso di queste cellule per la terapia contro itumori. Il nostro interesse si basa su nostri precedenti studi sulle alterazioni molecolari efunzionali dei TAM, che suggeriscono alcuni meccanismi molecolari responsabili delle loroattività protumorali. Alcuni nostri studi precedenti hanno dimostrato che in seguito a trattamentocon Interferone-g (IFN-g) e lipolisaccaride (LPS) i TAM, umani e murini, mostrano unaproduzione difettiva di Interleuchina-12 (IL-12), una citochina centrale nell’ attivazione diinfiammazione e immunità e nella generazione delle risposte di tipo Th1. Questo difetto eraassociato a una mancata attivazione di p50/p65 NF-kB e a un’aumentata produzione di IL-10.Questo pathway molecolare sottolinea verosimilmente altre alterazioni nelle funzioni dei TAM,dipendenti da NF-kB, come il difetto di induzione dell’Ossido Nitrico Sintetasi, e puo’rappresentare un severo ostacolo per la risposta infiammatoria e immune. Il progetto si proponedi investigare le basi molecolari dell’immunosoppressione nei TAM, attraverso l’analisi delprofilo di espressione delle citochine e della cascata di segnali promossi da IFN-g e LPS.L’analisi del fenotipo molecolare dei TAM sara’ completata utilizzando tecnologie di indaginegenomica (cDNA microarray) e proteomica (2D/PAGE e spettrometria di massa).Basi biologiche della disseminazione tumorale: ruolo dei recettori perchemochineIl processo di metastatizzazione tumorale mostra sorpredenti somiglianze con la migrazione dei118RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNleucociti nei tessuti, che è strettamente regolata dalle chemiochine. Studi recenti hanno rivelatoche anche i tumori esprimono alcuni recettori per chemiochine e che questi possono esserecoinvolti nella disseminazione del tumore. La caratterizzare dell'espressione dei recettori perchemiochine su linee tumorali di origine epiteliale ha indicato che alcuni tumori esprimono ilCXCR4 (recettore per CXCL12) e il CCR7. Quest'ultimo è particolarmente rilevante in quantolega due chemiochine (CCL19 e CCL21), prevalentemente espresse nei linfonodi. L'espressionedei recettori per chemiochine sulle cellule tumorali può essere modulata da citochine chegiocano un ruolo cruciale durante i processi infiammatori/immunitari, quali IL-1/TNF, IFNgamma, IL-10. La funzionalità dei recettori per chemiochine sulle cellule tumorali e' confermatain esperimenti di chemiotassi in vitro.Laboratorio di Infiammazione e Trasduzione del SegnaleRegolazione dei recettori per chemochineLe chemochine sono segali chemiotattici che regolano la migrazione dei leucociti durante lerisposte infiammatorie/immunitarie e in condizioni omeostatiche. Le chemochine legano eattivano recettori a sette domini transmembrana accoppiati a proteine G. Si conoscono 19recettori per chemochine che possiedono diverse specificità per i ligandi. La specificità diazione delle chemochine sulle diverse sottopopolazioni leucocitarie è determinata dalla regolataespressione dei recettori sulle cellule bersaglio. Questo laboratorio è interessato a definire imeccanismi che regolano l’espressione dei recettori per chemochine. In questo contestoabbiamo identificato che in cellule appartenenti allo stipite mieloidi (es. monociti e celluledendritiche) i mediatori pro-infiammatori (es. LPS e TNF) e anti-infiammatori (es IL-10 ecorticosteroidi) hanno effetti divergenti e opposti sull'espressione dei recettori e sullaproduzione di chemochine. Inoltre, abbiamo scoperto che in alcune condizioni di stimolazione,nuovi recettori per chemochine possono essere indotti. Per esempio IL-4 e IL-13 inducono neimonociti l'espressione di recettori funzionali per IL-8, una classica chemiochina per i neutrofili.Trasduzione del segnale di recettori per chemochineL'ingaggio dei recettori per chemochine attiva diverse vie di trasduzione del segnale. Incollaborazione con il Prof. Hirsch (Università di Torino) e il Dr. Wymann (Università diFribourg, Svizzera) abbiamo dimostrato che l'ingaggio dei recettori per chemochine attival'isoforma gamma della phosphoinositide3 kinasi (PI3Kg). L'attivazione di questo enzima ha unruolo cruciale nella chemiotassi di cellule infiammatorie, quali macrofagi e neutrofili. Topigeneticamente modificati per questo enzima (PI3Kg-/-) hanno un difetto grave della migrazioneleucocitaria in vitro e in vivo. Questi animali mostrano anche difetti in risposte di ipersensibilitàda contatto. Studi recenti hanno definito che questo difetto è strettamente correlato alla ridottacapacità migratoria delle cellule dendritiche.Le cellule dendritiche come paradigma del "sistema chemochine"Le cellule dendritiche hanno un ruolo chiave nell'induzione della risposta immunitaria. Percompiere questa funzione devono migrare in modo regolato nei tessuti e negli organi linfoidisecondari. In collaborazione con il laboratorio di Immunologia Cellulare, questo gruppo hacaratterizzato l'espressione dei recettori per chemochine in cellule dendritiche. La regolazionedei recettori da parte di stimoli infiammatori ha portato alla formulazione del paradigma dello"switch recettoriale" durante la maturazione di cellule dendritiche. Per meglio approfondire imeccanismi responsabili della migrazione di cellule dendritiche nei tessuti sono in fase dicaratterizzazione due nuovi recettori per chemochine. Il primo ChemR23 è stato recentementeidentificato come il recettore di chemerina, una proteina che appartiene alla famiglia dellecatelecidine. Il secondo, HCR, è tuttora un recettore "orfano", in quanto il suo ligando è ancorasconosciuto.119RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNLe cellule dendritiche come cellule effettrici dell’immunità innataLe cellule dendritiche svolgono il ruolo di “interruttori” delle risposte dell’immunità specifica.Tuttavia studi recenti stanno delineando per queste cellule un importante ruolo regolatorio anchenell’ambito dell’immunità specifica. Infatti, le cellule dendritiche non solo rispondono ai fattorichemiotattici ma sono anche in grado di produrre elevati livelli di molte chemochine. Lachemochina MDC/CCL2 è prodotta in grandi quantità da DC in vitro e in vivo, sopratutto incondizioni patologiche che sono caratterizzate da una polarizzazione dei lifociti Th2 (dermatitiallergiche). La produzione di PARC/CCL18 è invece selettivamente inibita durante lamaturazione delle DC e rappresenta verosimilmente un meccanismo di inibizione della rispostainfiammatoria in condizioni omeostatiche. Infine, le cellule dendritiche sono in grado didegradare batteri mediante la produzione di radicali dell’ossigeno prodotti in seguitoall’attivazione della NADPH ossidasi. Questo meccanismo contribuisce ad evitare ladisseminazione dei patogeni dai siti periferici agli organi linfoidi secondari.Laboratorio di Immunoematologia MolecolareStudio del meccanismo di azione di anticorpi monoclonali terapeuticiNegli ultimi anni alcuni anticorpi monoclonali sono stati utilizzati nella pratica clinica per iltrattamento di alcune forme tumorali. Ci stiamo in particolare occupando del meccanismo diazione in vitro e vivo del chimerico non coniugato anti-CD20 (Rituximab) utilizzato per iltrattamento dei linfomi B-non Hodgkin, dell’umanizzato non coniugato anti-CD52(Alemtuzumab) utilizzato per il trattamento delle leucemie linfatiche croniche e dell’umanizzatoconiugato a tossina anti-CD33 (Gemtuzumab Ozogamicin) utilizzato per il trattamento delleleucemie mieloidi acute.In particolare abbiamo identificato la lisi complemento mediata come il principale meccanismodi azione di Rituximab e scoperto che ciò che determina la suscettibilità/resistenza delle celluletumorali è il rapporto quantitativo in membrana tra CD20 e gli inibitori CD55 e CD59. Inoltreabbiamo messo a punto tre modelli murini che mostrano l’importanza del complementonell’effetto terapeutico di Rituximab. Inoltre con un modello tumorale sotto cute, abbiamoanche dimostrato il ruolo aggiuntivo delle cellule del sistema immune in particolare delle celluleNK nell’attività terapeutica di Rituximab. Nel 2003 abbiamo proseguito il progetto di studioclinico multicentrico randomizzato di fase II/III PRISMA per la valutazione prospettica delruolo dei marcatori biologici CD20, CD55 e CD59 e dei test di lisi in vitro sulla responsivitàclinica al farmaco in pazienti con linfoma follicolare recidivato in terza linea o dopo trapianto.Circa 15 pazienti sono stati arruolati nel 2003 per questo studio.Più recentemente abbiamo anche messo a punto un modello murino per lo studio dell’attivitàterapeutica di Gemtuzumab Ozogamicin (anti CD33). Infatti, abbiamo osservato unasuscettibilità inattesa delle leucemie linfoblastiche acute al trattamento con Gemtuzumab (antiCD33). Questi studi aprono teoricamente una nuova prospettiva terapeutica di utilizzo delfarmaco.Infine abbiamo caratterizzato il meccanismo di azione di Alemtuzumab (anti CD52) in vitrousando cellule leucemiche isolate da pazienti con B-CLL. Abbiamo mostrato una efficienteattivazione della lisi complemento mediata da parte di Alemtuzumab in queste cellule, ma unadebole lisi cellulo-mediata. Questa lisi può però essere notevolmente aumentata con laincubazione delle cellule effettrici con IL-2 per 48 ore.Terapia genica della malattia trapianto verso ospite (GVHD)Il trapianto di midollo osseo allogenico è da anni una terapia consolidata per il trattamento delleleucemie e dei linfomi. L’ostacolo principale alla sua diffusione è dato dalla tossicitàprocedurale soprattutto legata allo svilupparsi della reazione trapianto verso ospite (GVHD).120RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNQuesta situazione morbosa è innescata dall’attivazione funzionale dei linfociti T citotossici deldonatore diretti contro normali alloantigeni del ricevente. Da tempo si è prefigurata la possibilitàdi ingegnerizzare i linfociti T del donatore con geni esogeni per renderli suscettibili altrattamento con agenti farmacologici. L’idea di questi “geni suicidi” è quella di attivare lafunzione citotossica solo durante l'attivazione della reazione GVH. Abbiamo sviluppato un'ideaoriginale in laboratorio per un nuovo sistema suicida, basato sul gene umano del CD20. Questosistema si basa sul trasferimento mediante vettori retrovirali del cDNA completo del CD20umano nei linfociti T. Queste cellule dopo la manipolazione genica vengono facilmenteselezionate su colonne di immunoaffinità grazie al CD20 in superficie e sono poi iniettabili nelpaziente. Nel caso si manifesti una GVH le cellule T sono aggredibili con la somministrazionedi Rituximab, un anticorpo monoclonale citotossico per le cellule CD20 positive giàcorrentemente utilizzato in clinica con bassissima tossicità. Abbiamo documentato che laintroduzione costitutiva del CD20 esogeno nei linfociti T non ne altera le principali funzioniimmunologiche quali l’utilizzo del T cell receptor, la produzione di citochine, la chemiotassi, larisposta proliferativa allogenica e la rispota ad antigeni solubili. Stiamo percorrendo tutta lastrada che va dall'osservazione originaria nel laboratorio alla documentazione completa perl'autorizzazione alla sperimentazione clinica in fase I.121RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMN122RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNDIPARTIMENTO DI BIOCHIMICAE FARMACOLOGIA MOLECOLAREPERSONALECapo DipartimentoMario SALMONA, Dr.Sci.Prep.Alim.Laboratorio di Biochimica e Chimica delle ProteineCapo LaboratorioMario SALMONA, Dr.Sci.Prep.Alim.Laboratorio di Biologia MolecolareCapo LaboratorioEnrico GARATTINI, Dr.Med.Chir.Unità di Struttura e Regolazione del GeneCapo UnitàMineko TERAO, Ph.D.Bioch.Laboratorio di Farmacologia RecettorialeCapo LaboratorioTiziana MENNINI, Dr.Farm.Unità di Trasmissione SinapticaCapo UnitàMarco GOBBI, Dr.Farm.Laboratorio di NeuroimmunologiaCapo LaboratorioPietro GHEZZI, Biol.Unità di Farmacologia dello Shock SetticoCapo UnitàPia VILLA, Dr.Farm.Unità dei Mediatori Biochimici dell’InfiammazioneCapo UnitàMaddalena FRATELLI, Dr.Sci.Biol.Unità delle Neuropatie MetabolicheCapo UnitàRoberto BIANCHI, Dr.Sci.Biol.123RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNINTRODUZIONE ALLE ATTIVITA' DEL DIPARTIMENTOIl Dipartimento di Biochimica e Farmacologia Molecolare è composto da cinque laboratori coninteressi scientifici e scopi di ricerca apparentemente eterogenei fra loro, ma accomunati dallostudio strutturale e funzionale di prodotti genici specifici e farmacologicamente rilevanti. Aquesto proposito per l'identificazione di nuove proteine che potrebbero rappresentare deibersagli per la terapia farmacologica vengono utilizzate le classiche tecniche di biochimica ebiologia molecolare. Le potenziali interazioni tra farmaci e proteine sono studiate anche a livellomolecolare, utilizzando un'ampia varietà di approcci che vanno dagli studi condotti suglianimali a simulazioni computazionali.SCOPERTE/RISULTATI PRINCIPALIIdentificazione delle tetracicline e della quinacrina come potenziali agenti terapeutici per iltrattamento delle malattie da prioni.Sintesi e caratterizzazione chimico-fisica e biologica di peptidi dedotti dalla sequenza dellaproteina prionica.Identificazione di una correlazione tra sintesi del colesterolo e produzione di proteina prionica.Sviluppo di metodi di estrazione di proteine e di protocolli di purificazione di proteineattraverso elettroforesi bidimensionale su gel.Messa a punto di metodi per l'analisi e l'identificazione di modifiche ossidative delle proteine,tra cui la glutationilazione.Identificazione di proteine mediante analisi di spettrometria di massa e ricerca in banca dati.L'iperforina, presente negli estratti di Hypericum Perforatum (utilizzati nelle forme lievi didepressione), induce il sistema microsomiale epatico del metabolismo dei farmaci.Sviluppo di una linea cellulare murina motoneurone-simile che esprime in modo stabile ilplasmide pTet-Off permettendo di controllare l'espressione di geni di interesse.La presenza nel motoneurone della forma umana G93A superossido dismutasi 1 alteral'equilibrio elettrico della membrana e la morfologia dei mitocondri.124RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNL'epatotossicità del diclofenac è evidenziata da un aumento dell'enzima eme ossigenasi-1nell'epatocita.Identificazione dell'eritropoietina come agente neuroprotettivo e individuazione di molecole conattività neuroprotettiva in modelli di ischemia cerebrale.Identificazione di derivati dell'eritropoietina che ne hanno mantenute le attività neuroprotettivema perso quelle emopoietiche.Scoperta di proteine che sono reversibilmente regolate dallo stato di ossidoriduzione medianteun processo detto glutationilazione.L'uso di molecole antiossidanti in modelli di sepsi permette di diminuire la rispostainfiammatoria potenziando quella di difesa immunitaria.Identificazione delle proteine esofacciali redox regolate.L'eritropoietina protegge colture primarie di motoneuroni da processi di morte apoptotica manon di morte necrotica.Il Riluzolo riduce la perdita di motoneuroni e la progressione clinica in un modello dimotoneurodegenerazione murina: il topo wobbler.Sinaptosomi cerebrali in perfusione permettono di distinguere derivati amfetamici neurotossicida quelli non neurotossici.Identificazione e caratterizzazione di una nuova classe di retinoidi di sintesi a marcata attivitàapoptotica sulla cellula neoplastica. Sviluppo pre-clinico in ambito di terapia della leucemiaacuta mieloide.Identificazione di nuove combinazioni farmacologiche a base di retinoidi per il trattamento dellaleucemia acuta mieloide.Clonaggio molecolare dei cDNA e dei geni di quattro nuovi membri della famiglia dellemolibdo-flavoproteine di mammifero. Definizione di un nuovo cluster genico sul cromosoma 1umano e sul cromosoma 2 murino.Sviluppo di un animale knock-out per la molibdo-flavoproteina, AOH2.125RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNCOLLABORAZIONI NAZIONALIAdvanced Biology Center, GenovaCentro Anemie Congenite, Ospedale Maggiore Policlinico, IRCCS, Dip. Medicina Interna,Università di MilanoDip. Anatomia, Farmacologia, Medicina Legale, Università di TorinoDip. Biotecnologie, Università di MilanoDip. Farmaco-Chimico-Tecnologico, Università di SienaDip. Farmacologia Medica, Università degli Studi di MilanoDip. Scienze Biochimiche, Università di FirenzeDip. Scienze Farmaceutiche, Università di CataniaDip. Scienze Farmaceutiche, Università di GenovaDip. Scienze Farmacologiche, Università di MilanoDip. Scienze Fisiologiche e Farmacologiche,Università di PaviaDip. Scienze Molecolari, Università di MilanoDip. Studi pre-clinici, Università degli Studi di MilanoFacoltà di Biologia, Università degli Studi di MilanoFacoltà di Chimica, Università degli Studi di MilanoFacoltà di Chimica, Università di FerraraIndena, MilanoIstituto di Biologia Molecolare Buzzati Traverso, NapoliIstituto di Biomedicina e Immunologia Molecolare CNR, PalermoIstituto di Clinica Neurologica, Ospedale Maggiore Policlinico, MilanoIstituto di Neuroscienze C.N.R., PisaIstituto Nazionale dei Tumori, MilanoIstituto Nazionale dei Tumori, NapoliIstituto Nazionale Neurologico "C. Besta", MilanoIstituto Oncologico Europeo, MilanoIstituto Regina Elena, RomaLofarma Allergeni, MilanoOspedale Pediatrico Bambino Gesu', RomaOspedale Pediatrico "Gaslini", GenovaOspedale S. Gerardo, MonzaPrimo Dipartimento di Ostetricia e Ginecologia, Clinica Mangiagalli, Università di MilanoRemedia, GoriziaSigma-Tau, PomeziaUniversità di SienaZambon, MilanoCOLLABORAZIONI INTERNAZIONALIBoston College, Boston, MA, USACase Western Research University, Cleveland, OH, USADept. de Biologia Cellular, Fac. de Ciences Biologiques, Università di Valencia, SpagnaDept. de Bioquimica, Fac. Medicina/Centro de Investigacion, Hospital Universitario La Fe,Valencia, SpagnaDept. de Quimica-Fisica de Macromoleculas Biologicas, CSIC, Madrid, SpagnaFlanders Interuniversity Institute for Biotechnology (VIB) University of Gent, BelgioGiessen Polyclinic University, Giessen, Germania126RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNHouston University, TX, USAIBSN CNRS, Marseille, FranciaIndiana University, Indianapolis, IN, USAInstitut de Genetique et Biologie Moleculaire et Cellulaire, Strasbourg, FranciaInstitute Pasteur, Paris, FranciaJohn Innes Centre, Norwich, Gran BretagnaKenneth S. Warren Institute, Ossining, NY, USAMax-Planck-Institut für experimentelle Medizin, Göttingen, GermaniaNational Institute of Health, Bethesda, MD, USANippon University, Tokyo, GiapponeNorth Shore University Hospital, Manhasset, NY, USAPepscan System BV, Lelystad, OlandaStanford University School of Medicine, Stanford, CA, USATechnical University Braunschweig, GermaniaTrinity College, Dublin, IrlandaUniversidad de La Laguna, Tenerife, SpagnaUniversidad de Santiago de Chile, CileUniversidaed Nova, Lisbon, PortogalloUniversitat des Saarlandes, Homburg, GermaniaUniversitat Freiburg, GermaniaUniversité Paris, FranciaUniversité Victor Segalen Bordeaux 2, Bordeaux, FranciaUniversity of Cardiff, Gran BretagnaUniversity of Colorado, School of Medicine, Denver, CO, USAUniversity of Glasgow, Gran BretagnaUniversity of Gottingen, GermaniaUniversity of Muenster, GermaniaUniversity of Sussex, Gran BretagnaUniversity of Vienna, AustriaWaring-Webb Institute, University of Colorado, Denver CO, USAWeizmann Institut, Rehovot, IsraeleWestfaelische Wilhelms-Universitaet Muenster, GermaniaPRESENZA IN COMITATI EDITORIALINeurobiology of Lipids (L.Diomede)Neuroimmunomodulation (P.Ghezzi)Newsletters of the International Cytokine Society (P.Ghezzi)Editorial Board European Journal of Cancer (E. Garattini)ATTIVITA' DI REVISIONEAmerican Journal Physiology, Biochemical Journal, Biochemical Pharmacology, BiochimicaBiophysica Acta, Brain Research, Cancer Research, Cell Death and Differentiation, Circulation,Drug Investigation, European Journal of Cancer, European Journal of Immunology, EuropeanJournal of Neuroscience, International Journal of Cancer, Journal of Hepatology, Journal ofImmunology, Journal of Lipid Mediators, Journal of Neurochemistry, Pharmacological127RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNResearch, Proceedings of the National Academy of SciencesPRESENZA IN COMMISSIONI NAZIONALI E INTERNAZIONALIReferee per MRC Career Development Award, Medical Research Council, 20 Park Crescent ,London W1B1AL, Regno UnitoPARTECIPAZIONE AD EVENTI CON CONTRIBUTI DELDIPARTIMENTOCongresso: "Molecular Mechanism Of Neurodegeneration" from triplet repeat expansions toprotein toxicity, "Effect of the competitive AMPA antagonist RPR119990 on motorneurondegeneration in wobbler mice", "Proteomic analysis of a mouse model of familial amyotrophiclateral sclerosis: differentially expressed and nitrated proteins", 2-4 Maggio, Milano;Conferenza: "3rd International Conference on Neuroprotection and Neurorepair: Focus 2003:Stroke and Endogenous Stem Cells", 7-10 Maggio, Magdeburg, Germania;Congresso: "51st Congress of the American Society of Mass Spectrometry", "Identification ofthe Glutathionylation Site(s) of Oxidatively Modified Proteins", 8-12 Giugno, Montreal,Canada;Congresso: "31° Congresso Nazionale della Società Italiana di Farmacologia", "Receptorinteractions and behavioral deficiencies in rats treated with neurotoxic doses of Disulfiram", 26-29 Giugno, Trieste;Congresso: "Sixth IBRO World Congress Of Neuroscience", "In vitro and in vivo effect oferythropoietin on motorneuron death", 10-15 Luglio, Praga, Repubblica Ceca;Meeting: " VI European Meeting On Glial Cell Function In Health And Disease", "Glutamateuptake in glial plasmalemmal vesicles and synaptosomes from mouse spinal cord: relation toGLT1 isoforms expression", 3-6 Settembre, Berlino, GermaniaSimposio: "14th Camerino-Noordwijkerhout Symposium, Ongoing progress in the receptorchemistry (1978-2003 The Silver Symposium)", "A Novel and Selective Sigma1/2 ReceptorLigand (PO680C): Binding Properties and Expression of Tissue Transglutaminase", 7-11Settembre, Camerino;128RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNCongresso: "First HMGB-1 Cytokine World Congress", 11-13 Settembre, Saltsjöbaden,Stoccolma, Svezia;Meeting: "International Cytokine Society Annual Meeting", 20-24 Settembre, Dublino, Irlanda;Congresso: "Congresso Nazionale della Società Italiana di Neuroscienze","HIP-A, un analogoconformazionalmente bloccato dell'aspartato, inibisce preferenzialmente il reversed uptake delglutammato rispetto al suo reuptake", "AMPA e KAINATO inducono morte cellulare condifferenti meccanismi in colture primarie di motoneuroni: selettiva azione antiapoptotica dieritropoietina", 26-28 Settembre, Pisa;Corso: "Fourth course of the European School of Neuroimmunology (ESNI)", 28 Settembre - 1Ottobre, Barcellona, Spagna;Meeting: "The Polish-Austrian-German-Hungarian-Italian Joint Meeting on MedicinalChemistry", "Design, synthesis and biological evaluation of non-peptidic inhibitors offarnesyltransferase", "Benzimidazole, Benzoxazole and Benzothiazole derivatives as 5-HT1_serotonin receptor ligands", "Searching for Novel Endothelin Receptors Ligands", 15-18Ottobre, Krakow, Polonia;Meeting: "33rd Annual Meeting of the Society for Neuroscience", "SB-277011-A, a selectivedopamine D3 receptor antagonist, reduces covaine-seeking behavior in response to drugassociatedstimulis in rats", 8-13 Novembre, New Orleans, LA;Simposio: "14 th International Symposium on ALS/MND", "Characterization of neural stemcells obtained from animal models of motoneuron diseases", "Early alterations of mitochondrialfunction and morphology in the cervical spinal cord of the wobbler mouse", "Mutant G93Ahuman SOD1 increases mitochondrial dysfunction and death after inhibition of the electrontransport chain in a cellular model of fALS", "Molecular basis for motor neuron selectivedamage induced by mutated SOD1: distribution of the G93A mutant of SOD1 in mitochondriaand mitochondrial structural alterations in motor neuron-like and in non-neuronal cellularmodels of ALS", "Proteomic analysis of a mouse model of familial amyotrophic lateralsclerosis: differentially expressed and nitrated proteins", 17-19 Novembre, Milano.CONTRIBUTI E CONTRATTIAssociazione Italiana Ricerca sul Cancro (AIRC), Milano, ItaliaBiotecnologie BT, Perugia, ItaliaComunità Europea, Bruxelles, BelgioConsiglio Nazionale delle Ricerche (CNR), Palermo, ItaliaDompè, L' Aquila, ItaliaFondazione Don Gnocchi, Milano, ItaliaFondazione Cariplo, Milano, Italia129RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNFondazione Mariani, Milano, ItaliaFondazione Monzino, Milano, ItaliaFondazione Weizmann-Pasteur-Negri, Parigi, FranciaIndena, Milano, ItaliaIstituto Auxologico Italiano, Milano, ItaliaIstituto Nazionale Neurologico "C. Besta", Milano, ItaliaKenneth S. Warren Institute, NY, USALundbeck A/S, Copenhagen, DanimarcaMinistero della Salute, Roma, ItaliaMinistero dell'Istruzione, Università e Ricerca Scientifica (MIUR), Roma, ItaliaNorth Shore University Hospital, NY, USAPerfetti-Van Melle, Lainate (Mi), ItaliaPharmacia, Nerviano (Mi), ItaliaRemedia, Gorizia, ItaliaSigma Tau, Pomezia (Roma), ItaliaTelethon, Milano, ItaliaUniversità di Milano-Bicocca, ItaliaUniversità di Siena, ItaliaUniversity of Colorado, Denver, CO, USAZambon Group, Bresso (Mi), ItaliaSELEZIONE PUBBLICAZIONI SCIENTIFICHE APPARSENELL'ANNO 2003Bahadi R, Farrelly PV, Kenna BL, Kourie JI, Tagliavini F, Forloni G, Salmona M. Channels formed with a mutantprion protein PrP(82-146) homologous to a 7-kDA fragment in diseased brain of GSS patients. Am J Physiol CellPhysiol. 285(4):C862-72, 2003Barret A, Tagliavini F, Forloni G, Bate C, Salmona M, Colombo L, De Luigi A, Limido L, Suardi S, Rossi G, AuvreF, Adjou KT, Sales N, Williams A, Lasmezas C, Deslys JP. Evaluation of quinacrine treatment for prion diseases. JVirol. 77(15):8462-9, 2003Brandolini L, Allegretti M, Berdini V, Cervellera MN, Mascagni P, Rinaldi M, Melillo G, Ghezzi P, Mengozzi M,Bertini R. Carbocysteine lysine salt monohydrate (SCMC-LYS) is a selective scavenger of reactive oxygenintermediates (ROIs). Eur Cytokine Netw. 14(1):20-6, 2003Casarsa C, De Luigi A, Pausa M, De Simoni MG, Tedesco F. Intracerebroventricular injection of the terminalcomplement complex causes inflammatory reaction in the rat brain. Eur J Immunol. 33(5):1260-70, 2003Calvillo L, Latini R, Kajstura J, Leri A, Anversa P, Ghezzi P, Salio M, Cerami A, Brines M. Recombinant humanerythropoietin protects the myocardium from ischemia-reperfusion injury and promotes beneficial remodeling. ProcNatl Acad Sci U S A. 100(8):4802-6, 2003Calvillo L, Masson S, Salio M, Pollicino L, De Angelis N, Fiordaliso F, Bai A, Ghezzi P, Santangelo F, Latini R. Invivo cardioprotection by N-acetylcysteine and isosorbide 5-mononitrate in a rat model of ischemia-reperfusion.Cardiovasc Drugs Ther. 17(3):199-208, 2003Campiani G, Butini S, Trotta F, Fattorusso C, Catalanotti B, Aiello F, Gemma S, Nacci V, Novellino E, Stark JA,Cagnotto A, Fumagalli E, Carnovali F, Cervo L, Mennini T. Synthesis and pharmacological evaluation of potent andhighly selective D3 receptor ligands: Inhibition of cocaine-seeking behavior and the role of dopamine D3/D2receptors. J Med Chem. 46: 3822-3839, 2003Cantoni L, Rozio M, Mangolini A, Hauri L, Caccia S. Hyperforin contributes to the hepatic CYP3A-inducing effectof Hypericum perforatum extract in the mouse. Toxicol Sci. 75: 25-30, 2003130RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNCantoni L, Valaperta R, Ponsoda X, Castell J V, Barelli D, Rizzardini M, Mangolini A, Hauri L, Villa P. Induction ofhepatic heme oxygenase-1 by diclofenac in rodents: Role of oxidative stress and cytochrome P-450 activity. JHepatol. 38: 776-783, 2003Cervo L, Carnovali F, Stark J, Mennini T. Cocaine-seeking behavior in response to drug-associated stimuli in rats:involvement of d(3) and d(2) dopamine receptors. Neuropsychopharmacology. 28: 1150-1159, 2003Corvino V, Businaro R, Geloso M C, Bigini P, Cavallo V, Pompili E, Mennini T, Fumagalli L, Michetti F. S100Bprotein and 4-hydroxynonenal in the spinal cord of wobbler mice. Neurochem Res. 28: 341-351, 2003Diomede L, Forloni G, Bugiani O, Tagliavini F, Salmona M. The prion protein and cellular cholesterol homeostasis.Neurobiology Lipids 1: 8-14, 2003Erbayraktar S, Grasso G, Sfacteria A, Xie QW, Coleman T, Kreilgaard M, Torup L, Sager T, Erbayraktar Z, GokmenN, Yilmaz O, Ghezzi P, Villa P, Fratelli M, Casagrande S, Leist M, Helboe L, Gerwein J, Christensen S, Geist MA,Pedersen LO, Cerami-Hand C, Wuerth JP, Cerami A, Brines M. Asialoerythropoietin is a nonerythropoietic cytokinewith broad neuroprotective activity in vivo. Proc Natl Acad Sci U S A. 100(15):9102, 2003Farrelly PV, Kenna BL, Laohachai KL, Bahadi R, Salmona M, Forloni G, Kourie JI. Quinacrine blocks PrP(106-126)-formed channels. J Neurosci Res. 74(6):934-41, 2003Forloni G, Vari MR, Colombo L, Bugiani O, Tagliavini F, Salmona M.Prion diseases: Time for a therapy? Current Medicinal Chemistry - Immunology Endocrine Metabolic Agents. 3:185-197, 2003Fra AM, Locati M, Otero K, Sironi M, Signorelli P, Massardi ML, Gobbi M, Vecchi A, Sozzani S, Mantovani A.Scavenging of inflammatory CC chemokines by the promiscuous putatively silent chemokine receptor D6. JImmunol. 170: 2279-2282, 2003Fratelli M, Demol H, Puype M, Casagrande S, Villa P, Eberini I, Vandekerckhove J, Gianazza E, Ghezzi P.Identification of proteins undergoing glutathionylation in oxidatively stressed hepatocytes and hepatoma cells.Proteomics. 3(7):1154-61, 2003Fratelli M, Minto M, Crespi A, Erba E, Vandenabeele P, Del Soldato P, Ghezzi P. Inhibition of nuclear factorkappaBby a nitro-derivative of flurbiprofen: a possible mechanism for antiinflammatory and antiproliferative effect.Antioxid Redox Signal. 5(2):229-35, 2003Garattini E, Mendel R, Romao MJ, Wright R, Terao M. Mammalian molybdo-flavoenzymes, an expanding family ofproteins: Structure, genetics, regulation, function and patho-physiology. Biochem J. 372: 15-32, 2003Garattini E, Parrella E, Diomede L, Giannì M, Kalac Y, Merlini L, Simoni D, Zanier R, Ferrara FF, Chiarucci I,Carminati P, Terao M, Pisano C. ST1926, a novel and orally active retinoid-related molecule inducing apoptosis inmyeloid leukemia cells: modulation of intracellulr calcium homeostasis. Blood. 103: 194-207, 2003Ghezzi P, Bonetto V. Redox proteomics: identification of oxidatively modified proteins. Proteomics. 3(7):1145-53,2003Gianni M, Tarrade A, Nigro E A, Garattini E, Rochette-Egly C. The AF-1 and AF-2 domains of RARgamma2 andRXRalfa cooperate for triggering the transactivation and the degradation of RARgamma2/RXRalfa heterodimers. JBiol Chem. 278: 34458-34466, 2003Laragione T, Bonetto V, Casoni F, Massignan T, Bianchi G, Gianazza E, Ghezzi P. Redox regulation of surfaceprotein thiols: identification of integrin alpha-4 as a molecular target by using redox proteomics.Proc Natl Acad Sci U S A. 100(25):14737-41, 2003Launay S, Gianni M, Diomede L, Machesky M L, Enouf J, Papp B.Enhacement of ATRA-induced cell differentiation by inhibition of calcium accumulation into the endoplasmicreticulum: Cross-talk between RARalpha and calcium-dependent signaling.Blood. 101: 3220-3228, 2003Mennini T, Fumagalli E, Gobbi M, Fattorusso C, Catalanotti B, Campiani G.Substrate inhibitors and blockers ofexcitatory amino acids transporters in the treatment of neurodegeneration: Critical considerations. Eur J Pharmacol.131RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMN479: 291-296, 2003Moison D, De Deurwaerdere P, Cagnotto A, Marrazzo A, Prezzavento O, Ronsisvalle G, Mennini T, Spampinato U.Intrastriatal administration of sigma ligands inhibits basal dopamine release in vivo. Neuropharmacology 45: 945-953, 2003Pastore A, Tozzi G, Gaeta LM, Bertini E, Serafini V, Di Cesare S, Bonetto V, Casoni F, Carrozzo R, Federici G,Piemonte F. Actin glutathionylation increases in fibroblast of patients with Friedreich's ataxia: a potential role in thepathogenesis of the disease. J Biol Chem. 278(43):42588-95, 2003Poli G, Ponti W, Carcassola G, Ceciliani F, Colombo L, Dall' Ara P, Gervasoni M, Giannino ML, Martino PA,Pollera C, Villa S, Salmona M.In vitro evaluation of the anti-prionic activity of newly synthesized congo red derivatives. Arzeimittelforschung.53(12):875-88, 2003Rizzardini M, Lupi M, Bernasconi S, Mangolini A, Cantoni L. Mitochondrial dysfunction and death in motor neuronsexposed to the glutathione-depleting agent ethacrynic acid. J Neurol Sci. 207: 51-58, 2003Romeo G, Materia L, Manetti F, Cagnotto A, Mennini T, Nicoletti F, Botta M, Russo F, Minneman KP. Newpyrimido[5,4-b]indoles as ligands for alpha1-adrenoceptor subtypes. J Med Chem. 46: 2877-2894, 2003Rossi G, Salmona M, Forloni G, Bugiani O, Tagliavini F. Therapeutic approaches to prion diseases. Clin Lab Med.23(1):187-208, review 2003Salmona M, Morbin M, Massignan T, Colombo L, Mazzoleni G, Capobianco R, Diomede L, Thaler F, Mollica L,Musco G, Kourie JJ, Bugiani O, Sharma D, Innouye H, Kirschner DA, Forloni G, Tagliavini F. Structural propertiesof Gerstmann-Straussler-Scheinker disease amyloid protein. J Biol.Chem. 278(48):48146-53, 2003Villa P, Bigini P, Mennini T, Agnello D, Laragione T, Cagnotto A, Viviani B, Marinovich M, Cerami A, Coleman T,Brines M, Ghezzi P.Erythropoietin selectively attenuates cytokine production and inflammation in cerebral ischemia by targetingneuronal apoptosis.J Exp Med. 198: 971-975, 2003ATTIVITA' DI RICERCALaboratorio di Farmacologia RecettorialeStudi sulla patologia del motoneurone ICi sono forti evidenze che complesse interazioni tra stress ossidativo, disfunzioni mitocondriali,alterazioni di citochine e della trasmissione glutammatergica giochino un importante ruolo nellapatogenesi di malattie del motoneurone come la sclerosi laterale amiotrofica. Abbiamo in corsoprogetti specifici su queste tematiche, alcuni in collaborazione con il dipartimento dineuroscienze (Dr. Beghi, Dr. Bendotti).Studi in vitro: colture primarie di motoneuroni di ratto, esposte per 48 ore a basseconcentrazioni di agonisti glutammatergici, vanno incontro a morte di tipo apoptotico mentreconcentrazioni più elevate inducono morte di tipo non-apoptotico. Stiamo studiando i principalieventi intracellulari che si verificano in questi diversi meccanismi di morte cellulare e stiamotestando nuovi potenziali trattamenti che interferiscano selettivamente con uno dei duemeccanismi. Abbiamo, per esempio, evidenziato che eritropoietina protegge i motoneuroniesclusivamente da morte apoptotica mentre acetilcarnitina è efficace per entrambi i processi,aumentando l'espressione di TrkB nei motoneuroni. Sono in corso studi con un peptide inibitoredi JNK, reso permeabile alla membrana cellulare mediante la sequenza TAT, per chiarire il132RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNruolo di JNK nella morte necrotica o apoptotica.Studi sulla patologia del motoneurone II. Studi In vivoI topi wobbler manifestano una selettiva perdita dei motoneuroni del tratto cervicale del midollospinale e sono ritenuti un buon modello di Sclerosi Laterale Amiotrofica sporadica. Nonabbiamo trovato differenze nei livelli plasmatici del glutammato e nell’espressione deitrasportatori e delle subunità per il recettore AMPA nel midollo cervicale del topo wobblerrispetto al controllo sano. Abbiamo osservato inoltre che il trattamento con un antagonistacompetitivo ai recettori AMPA non ha ridotto la progressione sintomatologica e la perdita dimotoneuroni, mentre il trattamento con riluzolo é risultato efficace. Queste evidenze supportanol'ipotesi che l’eccitotossicità non sia causa della morte del motoneurone nel topo wobbler esuggeriscono che il riluzolo agisca con un meccanismo d’azione diverso da quelloantiglutammatergico, che stiamo approfondendo. Risultati preliminari indicano anche chel'apoptosi non sia elemento chiave nel processo di morte del motoneurone nel topo wobbler e, inaccordo con queste evidenze, il trattamento con eritropoietina è risultato inefficace. Per quantoriguarda i processi neuroinfiammatori nel topo wobbler si osserva aumento di TNF e TNFR1 etale aumento si accentua con l'evoluzione della patologia. E' in corso un trattamento con unaproteina legante h-TNF per chiarire il ruolo di questa citochina nella morte del motoneurone.Sono inoltre in corso ricerche legate all'uso di cellule staminali (collaborazione col Dott. Parati,Istituto Neurologico Besta) e alla valutazione del ruolo del deficit mitocondriale (Prof. Curti,Università di Pavia).Studi sulla patologia del motoneurone III. Studi In vivoI topi mnd hanno una mutazione spontanea del gene CLN8, responsabile di una patologia raranell'uomo (epilessia mioclonica progressiva, della famiglia delle lipofuscinosi ceroideeneuronali) e presentano una retinopatia precoce e una disfunzione motoria tardiva senza perditadi motoneuroni. Sono un buon modello di eccitotossicità, con aumentati livelli di glutammatoplasmatico gia in fase presintomatica, riduzione del trasportatore per il glutammato GLT-1 edella subunità GluR3 del recettore AMPA, e aumento della subunità GluR2 nel midollo spinalelombare. Il trattamento con un nuovo antagonista non competitivo per i recettori AMPA(ZK187638) migliora le prestazioni motorie nei topi, come riportato in precedenza perl’agonista competitivo NBQX. Il TNF e il suo recettore TNFR1 sono aumentati già in etàpresintomatica, quando un'intensa proliferazione astrogliale e microgliale è manifesta.Presentano riduzione delle funzioni mitocondriali e del consumo di ossigeno (Prof. D.Curti,Università di Pavia) e aumentati livelli di derivati dei perossilipidi che reagiscono con AcidoTiobarbiturico (TBARS) (Prof. P. Guarneri, CNR di Palermo). Il trattamento con L-carnitinaritarda la comparsa dei sintomi motori, aumenta le attività mitocondriali e il QO2 e diminuisce ilivelli di TBARS. Sono in corso ricerche per chiarire la funzione molecolare della proteinacodificata dal gene CLN8 e i meccanismi di morte delle cellule nervose.Studi sui trasportatori del glutammatoUn'eccessiva stimolazione dei recettori glutammatergici risulta dannosa per i neuroni e laconcentrazione di glutammato viene mantenuta a livello fisiologico mediante un meccanismoattivo di ricaptazione da parte di trasportatori (EAATs) localizzati sulle membrane cellulari dineuroni e glia. E' stato suggerito che un meccanismo di trasporto inverso (rilascio di glutammatonel versante extracellulare) da parte degli EAATs rappresenti un evento precoce nell'ischemiaacuta. Quindi composti che interagiscono con tale meccanismo bloccando gli EAATspotrebbero essere utili nel prevenire l'eccitotossicità indotta da ischemia. Abbiamo in corso unprogetto con l'Università di Siena (Prof. Campiani) per la caratterizzazione di nuove strutturesintetizzate attraverso la realizzazione di un modello 3D della struttura attiva dei trasportatoridel glutammato, con lo scopo di trovare inibitori selettivi di rilevanti EAATs. Si stanno133RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNcaratterizzando differenti approcci biochimici per distinguere agenti "bloccanti" o "substrati".Per questo studio saranno usate preparazioni sinaptosomiali o gliali purificate da cervello emidollo spinale di ratto e cellule HEK 293 che esprimono stabilmente i tre principali EAATs.Studi sulla neurotossicità di derivati dell’amfetaminaIl meccanismo responsabile della neurotossicità serotoninergica indotta da alcuni derivatidell’amfetamina, tra cui l’ecstasy (metilenediossimetamfetamina), è ancora controverso. Il loroprincipale effetto acuto è il rilascio di serotonina dalle terminazioni nervose ed è conseguentealla loro interazione, come substrati, con i trasportatori serotoninergici. Questa interazionesembra necessaria per indurre gli effetti neurotossici, ma non sufficiente, in quanto sono statidescritti alcuni derivati dell’amfetamina che inducono un marcato rilascio di serotonina in vivosenza dare neurotossicità. Abbiamo studiato vari derivati dell’amfetamina (forniti dal Dr.Reyes-Parada, Universidad de Santiago de Chile), neurotossici o non, in differenti modellisperimentali in vitro e in vivo. Un risultato particolarmente interessante è che nei sinaptosomiperfusi in vitro, solo le amfetamine neurotossiche aumentano il rilascio di serotonina.Attualmente stiamo approfondendo il significato di questa osservazione utilizzando nuovemolecole.Impiego del Biacore per studiare composti antifibrillogeniciLa possibilità di analizzare le interazioni biomolecolari si è recentemente ampliata con losviluppo di biosensori ottici, come il Biacore, che impiegano la tecnologia della risonanzaplasmonica di superficie (SPR). Questa metodologia offre numerosi vantaggi, tra cui lapossibilità di misurare l'interazione in tempo reale, utilizzando quantità molto ridotte dimolecole interagenti, e senza nessun tipo di marcatura. Stiamo valutando la possibilità dianalizzare con il Biacore le reazioni di aggregazione della proteina prionica e della betaamiloide,nell'ambito di progetti di ricerca coordinati dal Laboratorio di Biochimica e Chimicadelle proteine (nostro Dipartimento) e dal Laboratorio di Biologia dei disordinineurodegenerativi ( Dipartimento di Neuroscienze). Risultati preliminari indicano che questatecnologia può effettivamente permettere di misurare e caratterizzare il legame di peptidisolubili agli aggregati fibrillari. Il passaggio successivo sarà quindi rappresentato dallo studiodei composti che interferiscono con il processo di aggregazione, potenzialmente utili neltrattamento delle patologie da prioni e della malattia di Alzheimer.Studi di binding recettorialeAbbiamo studiato composti di nuova sintesi sui recettori cerebrali in vitro, in collaborazione conProf. Campiani (Università di Siena) e Prof. Russo (Università di Catania). I risultati ottenutidagli esperimenti di binding (affinità e selettività) sono stati utilizzati per studi di molecularmodeling (QSAR) e per ulteriori valutazioni farmacologiche. Esempi sono la caratterizzazionedi nuove molecole con attività di antipsicotici atipici; di antagonisti selettivi al recettore 5HT3che non passano la barriera ematoencefalica e possono essere utilizzati come tool per il sistemacardiovascolare; di leganti potenti e selettivi per i recettori del glutammato, o per i recettori5HT1A e alpha-1 della noradrenalina. E’ anche possibile valutare l’attività agonista/antagonistadi composti che agiscono su recettori accoppiati alle G-proteins misurando il loro effetto sulbinding del GTP-g-S. Con questo approccio abbiamo caratterizzato agonisti parziali selettivi peril recettore D3, che sono risultati attivi nel ridurre il craving da cocaina nel ratto (incollaborazione con Dr. Luigi Cervo, Dipt. Neuroscienze), e stiamo valutando l'attività di nuovipotenziali agonisti al recettore 5-HT6.134RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNLaboratorio di NeuroimmunologiaCitochine e infiammazioneLe citochine sono importanti mediatori infiammatori. Il laboratorio studia il loro ruolo inmodelli di infezione e infiammazione, con particolare attenzione al loro doppio ruolo dimediatori patogenetici da un lato e di molecole essenziali per l’immunità innata dall’altra e allapossibilità di modularne farmacologicamente la produzione e l’azione.In particolare utilizziamo modelli in vitro e in vivo per lo studio della produzione di citochine(IL-1, IL-6, IL-8, IL-10, IL-18, MCP-1, TNF) e l’attivazione di fattori trascrizionali (NF-kB) evie di trasduzione del segnale (p38, STAT) implicate nella loro azione e produzione. Inoltreverifichiamo i risultati di questi studi in modelli in vivo di artrite e infiammazione acuta. Inquesti modelli stiamo studiando molecole antiossidanti tioliche, farmaci antiinfiammatori nonsteroidei e statine.Una parte di questi progetti è mirata all’area della neuroinfiammazione utilizzando modelli dipatologie del sistema nervoso centrale e periferico con componente infiammatoria (vedi attività3) e cellule nervose in vitro (neuroni, glia, astrociti).Inoltre utilizziamo la produzione di citochine in vitro come indicatore per testare compostipotenzialmente pirogeni, irritanti o tossici che si propone come possibile alternativa ai test suanimali.Regolazione redoxLo studio del cosiddetto stress ossidativo ha portato alla identificazione di fenomeni biochimiciche vengono modificati da molecole antiossidanti anche in assenza di stress ossidativo intesocome produzione eccessiva di metaboliti tossici dell’ossigeno (radicali liberi). Si parla perciò diregolazione redox per definire l’insieme delle funzioni cellulari (espressione di geni, attività dienzimi e fattori trascrizionali etc.) che sono in qualche modo modificate dallo stato di redoxdella cellula, inteso come il rapporto tra specie ossidanti e riducenti (in genere: il rapporto traglutatione ossidato e ridotto). Il nostro lavoro si focalizza sui meccanismi molecolari con cuipiccole variazioni nello stato di redox possono influenzare proteine di vario genere, e inparticolare su modificazioni transitorie di cisteine all’interno di proteine a formare pontidisulfuro con altre catene di proteine o con piccole molecole tioliche come il glutatione.Recentemente abbiamo inoltre rivolto la nostra attenzione all'identificazione dello stato di redoxdelle proteine poste sulla superficie della membrana cellulare in quanto queste hanno spessofunzioni importanti (es: trasportatori, recettori) e sono il primo bersaglio di ossidantiextracellulari.NeuroprotezioneLe patologie del sistema nervoso, centrale e periferico, studiate in laboratorio sono l’ischemiacerebrale, l’encefalomielite autoimmune e la neuropatia diabetica. Utilizzando modelli animali eculture in vitro cerchiamo di descrivere le interazioni tra morte neuronale e infiammazione e diintervenire con strategie protettive. Tra queste ultime, stiamo in particolare studiando molecoleendogene che hanno mostrato inattese attività antiapoptotiche su cellule neuronali (in particolarel’eritropoietina) e farmaci antiinfiammatori.Laboratorio di Biologia MolecolareNuovi retinoidi ad attività antileucemicaI derivati sia naturali che sintetici dell’acido retinoico (retinoidi) sono composti moltopromettenti in ambito oncologico. Tali composti svolgono il loro effetto anti-leucemico e antitumoraleattraverso tre diversi meccanismi: cito-differenziazione, arresto della crescita cellulare135RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNe apoptosi (morte cellulare programmata). Tali meccanismi sono parzialmente dissociabili.Esistono, infatti, retinoidi di sintesi a forte effetto anti-proliferativo e/o cito-differenziante.Recentemente, abbiamo identificato e caratterizzato una nuova serie di retinoidi dotati di forte eselettivo effetto apoptotico nei confronti della cellula neoplastica. Tali derivati (adamantilretinoidi),originariamente sviluppati come agonisti specificici dei recettori nucleari per l’acidoretinoico di tipo gamma (RARγ) inducono apoptosi in diversi tipi di cellule leucemiche ecarcinomatose attraverso un meccanismo ancora largamente sconosciuto, che peraltro nonprevede la mediazione da parte di alcuno dei recettori nucleari per l’acido retinoico conosciuti.Gli adamantil-retinoidi agiscono attraverso l’attivazione di determinanti molecolari totalmentedifferenti da quelli di altri agenti chemioterapici e sono attivi non solo in vitro ma anche in vivosu diversi modelli sperimentali di leucemia acuta mieloide. Alcune di queste molecoleinnovative sono in fase avanzata di sviluppo pre-clinico.Nuove combinazioni farmacologiche a base di retinoidi in ambito diterapia antileucemicaUno degli effetti clinici più significativi dell’acido retinoico è rappresentato dalla capacità diquesto composto di favorire la maturazione del blasto leucemico verso un fenotipo più simile aquello della cellula normale. L’utilizzo clinico dell’acido retinoico per il trattamento dellaleucemia acuta promielocitica, rappresenta, al momento, il primo e unico esempio di terapiadifferenziante in ambito oncologico. Questo tipo di strategia terapeutica ha il vantaggio di esserepiù facilmente accettata dal paziente oncologico in quanto associata a minore tossicità rispetto aiclassici trattamenti chemioterapici a base di farmaci cito-tossici. Nonostante gli eccellentirisultati ottenuti nel caso della leucemia acuta promielocitica, l’utilizzo clinico dell’acidoretinoico è ancora limitato a causa di una serie di problemi, tra i quali, la resistenza naturale edindotta e la tossicità sistemica e locale hanno particolare rilevanza. Una delle possibili strategieperseguibili al fine di aumentare l’indice terapeutico dell’acido retinoico si basa sullaidentificazione e l’utilizzo di farmaci in grado di potenziare significativamente l’attività citodifferenziantedel retinoide. Abbiamo recentemente dimostrato che una serie di agenti quali ilG-CSF, gli interferoni, i derivati del cAMP, gli inibitori della fosfo-diesterasi IV e una serie dialtre molecole a meccanismo d’azione ignoto sono in grado di sensibilizzare la cellulaneoplastica all’effetto farmacologico dell’acido retinoico. Ci poniamo come obiettivo a lungotermine di valutare la possibilità di utilizzare in ambito clinico le combinazioni di cui sopra. Ciproponiamo, inoltre, di utilizzare tali combinazioni per meglio comprendere i meccanismimolecolari alla base del processo di differenziazione del blasto leucemico indotto dall’acidoretinoico e dai suoi derivati.La famiglia delle molibdo-flavoproteineI molibdo-flavoenzimi sono proteine di interesse sia medico che industriale. Essi sono gli unicienzimi che richiedono molibdeno, sotto forma del cofattore molibdenico, per la loro attivitàcatalitica. Da tempo il laboratorio di Biologia Molecolare si occupa della biochimica e dellabiologia dei molibdo-flavoenzimi nell’uomo e nel mammifero più in generale. In passato,abbiamo contribuito alla identificazione ed alla caratterizzazione strutturale di due molibdoflavoproteine,l’aldeide ossidasi (AOX1) e la xantina ossidoreduttasi (XOR). Negli ultimi dueanni, abbiamo identificato e clonato i cDNA e i geni di tre nuovi molibdo-flavoenzimi (AOH1,AOH2 ed AOH3) nel topo. A lungo termine, i nostri obiettivi principali sono lacaratterizzazione strutturale, la definizione della specificità di substrato, la delucidazione delmeccanismo di catalisi e della funzione fisio-patologica delle tre nuove proteine. Ci proponiamoinoltre di continuare gli studi di caratterizzazione biochimica e funzionale di AOX1 ed XOR siadi origine umana che murina. Allo scopo di perseguire questi obiettivi, abbiamo recentementesviluppato linee cellulari in grado di esprimere XOR in maniera condizionale. Abbiamo, infinegenerato un topo knock-out per il gene codificante AOH2.136RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNLaboratorio di Biochimica e Chimica delle ProteineMetabolismo lipidico e proteina prionicaE’ stata recentemente suggerita l'esistenza di una relazione tra livelli di colesterolo e proteinaprionica, sebbene il meccanismo cellulare e molecolare che ne è alla base non sia chiaro.L’inibizione della sintesi di colesterolo da parte delle statine, inibitori selettivi dell’enzima 3-idrossi-3-metilglutaril coenzima A (HMG-CoA) reduttasi, provoca la riduzione dellaproduzione delle molecole derivate dal mevalonato con il conseguente aumento dellaproduzione di citochine anti-infiammatorie in modelli in vitro e in vivo. La biosintesi e l’uptakedel colesterolo è regolato da due fattori di trascrizione, noti come sterol regulatory elementbinding protein (SREBP-1 e SREBP-2), che promuovono l’attivazione dei geni che codificanoper enzimi chiave, come per esempio l’HMG-CoA sintetasi, l’HMG-CoA reduttasi, il farnesildifosfato sintetasi e la squalene sintetasi. Negli studi condotti quest'anno abbiamo dimostratoche la riduzione dei livelli cellulari di colesterolo riduce la produzione di proteina prionica.Stress ossidativo e sclerosi laterale amiotrofica: un approccio proteomicoI meccanismi molecolari alla base di malattie neurodegenerative con origine genetica come lasclerosi laterale amiotrofica (SLA) familiare, sono ancora sconosciuti. Ci sono indicazioni chelo stress ossidativo abbia un ruolo importante nella patogenesi di queste malattie. L'Unità diProteomica dell'Istituto Telethon Dulbecco si propone di affrontare il problema mediantel'analisi proteomica di modelli animali e cellulari di patologia con particolare riguardo allemodifiche ossidative delle proteine. In particolare, il gruppo in collaborazione con il laboratoriodi Neurobiologia Molecolare si è concentrato sull'analisi dei cambiamenti di espressioneproteica e di modifiche ossidative, come la nitrazione della tirosina, in topi trangenici (Tg) chesovraesprimono la superossido dismutasi (SOD1) mutata (G93A) umana, che costituiscono unmodello di SLA familiare. Le proteine estratte dai midolli spinali di topi Tg SOD1 G93A adiversi stadi della malattia e i relativi controlli sani, topi Tg che overesprimono SOD1 umanawild-type (WT), sono state separate con elettroforesi bidimensionale su gel. Le mappe proteicheottenute nelle diverse condizioni sono state paragonate con software di analisi di immagini ecaratterizzate con analisi Western blot e spettrometria di massa. Recentemente, sono statiottenuti i primi risultati che evidenziano interessanti alterazioni del proteoma nei topi Tg checontraggono la SLA, ma che sono ancora in una fase presintomatica. Infatti, è stato dimostratoche alcune proteine come l’ATP sintetasi, enolasi alfa, enolasi gamma, creatina chinasi efosfoglicerato mutasi sono maggiormente nitrate nel topo Tg recante la SOD1 mutata rispetto altopo Tg recante SOD1 WT. Questi sono tutti enzimi che, direttamente o indirettamente, sonocoinvolti nella sintesi di ATP e un loro eventuale malfunzionamento potrebbe causare un gravedeficit energetico per la cellula. Sono ora in corso studi funzionali per determinare seeffettivamente le modifiche ossidative a carico di queste proteine contribuiscano allaprogressione della malattia.Caratterizzazione di differenti isoforme della proteina SMNL’atrofia muscolare spinale (SMA) è una malattia autosomica recessiva che, nell’ambito dellemalattie ereditarie, rappresenta la maggior causa di mortalità infantile. La SMA è caratterizzatadalla degenerazione dei motoneuroni delle corna anteriori del midollo spinale con conseguenterigidità e paralisi amiotrofica della muscolatura scheletrica. La SMA è associata a delezioni omutazioni del gene SMN e la copia telomerica del gene SMN (SMN1) presenta delezioni omutazioni in più del 98% dei pazienti affetti da SMA. La proteina SMN è espressa in tutti itessuti dei mammiferi, ma livelli particolarmente alti sono presenti solo nei motoneuroni.Recentemente, per mezzo di esperimenti di Western blot, sono state identificate differentiisoforme della proteina SMN e studi di ontogenesi hanno mostrato la presenza di un’espressione137RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNprogressivamente maggiore di queste isoforme a partire dalla nascita. Queste osservazionisuggeriscono che le differenti isoforme di SMN possano svolgere un importante ruolonell’omeostasi e nella funzione dei motoneuroni. Nel nostro laboratorio abbiamo sviluppato unastrategia per la purificazione e la caratterizzazione delle isoforme di SMN attraverso l’uso dellacromatografia multidimensionale associata all’elettroforesi bidimensionale e alla spettrometriadi massa. Siamo riusciti ad identificare le isoforme di SMN nei gel bidimensionali per mezzo diWestern blot ma non è stato possibile identificarne la sequenza primaria attraverso laspettrometria di massa. E’ probabile che le isoforme di SMN siano troppo poco espresse perpoter essere identificate con le tecniche di proteomica nonostante l’arricchimento ottenutograzie alla cromatografia multidimensionale. Stiamo cercando di ottenere degli anticorpi chesiano in grado di immunoprecipitare le proteine correlate ad SMN per poter ottenere dellequantità sufficienti da analizzare con la spettrometria di massa. L'identificazione delle isoformedi SMN verrà inoltre effettuata attraverso tecniche di genomica.Studi sulla conformazione della proteina prionica e dei peptidi dedottidalla sua sequenza primariaNelle malattie da prioni esiste una relazione tra la formazione di fibrille della Proteina Prionica(PrP) e la citotossicità o le risposte reattive astrogliali. La formazione di fibrille è laconseguenza di un cambiamento conformazionale della proteina nativa che porta alla proteinapatologica. Ciò è ritenuto essere di grande importanza nella comparsa e nella progressione dellemalattie da prione. La comprensione dei determinanti strutturali alla base di questatrasformazione conformazionale è molto importante per la delucidazione del processopatogenetico. Sorge quindi la necessità di sviluppare dei modelli semplificati in grado diapprossimare al meglio la dinamica di questa transizione. A questo proposito abbiamosviluppato dei peptidi sintetici che rappresentano l’essenza dei domini fibrillogenici della PrP.Utilizzando diverse tecniche chimico-fisiche e biochimiche, conduciamo studi in vitro perdeterminare le proprietà conformazionali di questi peptidi, e ne valutiamo la strutturasecondaria, lo scambio idrogeno-deuterio, la resistenza alla digestione con proteasi, la capacitàdi aggregazione e le proprietà amiloidogeniche. Questo lavoro fornisce indicazioni qualitative equantitative sulla plasticità conformazionale dei frammenti di PrP.Meccanismi biochimici e molecolari coinvolti nella tossicità della proteinaprionicaLo scopo di questa attività di ricerca è quello di comprendere i meccanismi biochimici emolecolari che determinano la citotossicità o la risposta reattiva astrogliale della ProteinaPrionica (PrP). Questo studio prevede l’utilizzo di peptidi sintetici che le sequenze dei dominifibrillogenici della PrP e di alcuni modelli cellulari al fine di stabilire una relazione tra leproprietà chimico-fisiche dei vari peptidi ed i loro effetti biologici. Utilizzando tecniche diproteomica, stiamo valutando il pannello di espressione proteica in diversi modelli cellularidopo trattamento con i peptidi neurotossici. Il riconoscimento e la caratterizzazione delleproteine differenzialmente espresse sono potenzialmente in grado di fornire delle indicazionisulle vie biochimiche coinvolte nei meccanismi di neurodegenerazione e determinare dei markerbiochimici e dei possibili target farmacologici. L’attività, svolta in collaborazione con ilLaboratorio di Biologia delle Malattie Neurodegenerative, è volta inoltre ad analizzare ladistribuzione sub-cellulare dei peptidi e ad identificare i bersagli biologici molecolariintracellulari.Sviluppo di strategie terapeutiche per la cura delle malattie da prioneAttualmente non esistono opzioni terapeutiche per il trattamento delle malattie da prione.Pertanto composti in grado di interferire con la formazione delle fibrille possono costituire degliutili candidati terapeutici. Questa attività di ricerca, condotta in collaborazione con il138RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNLaboratorio di Biologia delle Malattie Neurodegenerative, ha avuto lo scopo di identificare dellemolecole che siano in grado di contrastare la capacità della PrP di formare fibrille. Studi difibrillogenesi sono stati compiuti utilizzando i peptidi sintetici, PrP106-126 e PrP82-146 chesono stati da noi studiati in passato per la loro peculiarità di avere un alto contenuto di ß-sheet ela capacità di formare delle fibrille amiloidi. Le molecole che sono risultate più promettentisono state studiati in modelli in vivo della malattia da prioni nel criceto e nel topo.Laboratorio di Patologia MolecolareCitocromo P-450Frequentemente estratti vegetali di vario genere vengono utilizzati come farmaci, anche inseguito ad automedicazione. La presenza in queste preparazioni di decine di componenti dieffetto non conosciuto espone grandemente al rischio di interazioni con farmacicontemporaneamente assunti. Il sistema microsomiale del citocromo P-450 è il principalesistema di metabolismo dei farmaci e qualsiasi alterazione (induzione/inibizione) nell’attività diquesto sistema può portare a modifiche nel metabolismo e quindi nel livello/effetto dei farmaciassunti. E’ quindi importante definire se le preparazioni di estratti vegetali utilizzate comefarmaci influiscano sul funzionamento del citocromo P-450. Nel corso di questo anno abbiamostudiato gli effetti degli estratti di Hypericum perforatum (erba di San Giovanni), per i qualisono state riportate diverse interazioni sfavorevoli in seguito al loro utilizzo nella cura di formelievi e moderate di depressione. Abbiamo evidenziato che l’effetto induttore del citocromo P-450 3A da parte degli estratti di iperico è riproducile somministrando iperforina, un componentedi questi estratti. Questo dato permette di stabilire che la determinazione della quantità diiperforina presente in un estratto di iperico potrà dare indicazioni sul suo potenziale effetto sulmetabolismo e l’eliminazione di farmaci contemporaneamente assunti che siano substrati delcitocromo P-450 3A.Neurodegenerazione: nuovi modelli in vitro per lo studio delle patologiedel motoneuroneNelle patologie neurodegenerative svolgono un ruolo preminente le alterazioni dell'espressioneo le modificazioni post-traslazionali di proteine specifiche, espresse anche in forme mutate. E’quindi importante poter riprodurre nei modelli sperimentali l’espressione di queste proteine.Recentemente è stato ideato un nuovo sistema - noto come pTet-On/pTet-Off - per regolarel’espressione di geni di interesse tramite la presenza di tetracicline.Questo sistema è stato da noi applicato a una linea cellulare murina motoneurone-simile (NSC-34). In questa linea è stato introdotto in modo stabile un plasmide attivatore (pTet-Off)contenente il gene che codifica per l’elemento transattivatore tTA; l’espressione della proteinatTA – che in questo caso avviene solo in seguito alla rimozione dal medium di cultura dellatetraciclina o di suoi derivati (doxiciclina) – è in grado di modulare l’espressione di un genesuccessivamente inserito nella cellula mediante trasfezione transiente o stabile. Questa nuovalinea NSC-34 pTet-Off sarà utile per lo studio degli effetti di proteine coinvolte in patologie delmotoneurone.Neurodegenerazione: studio dei meccanismi della degenerazione selettivadel motoneurone nella sclerosi laterale amiotrofica (SLA)La presenza di forme mutate di superossido dismutasi 1 (SOD1) caratterizza circa il 20% deipazienti con forme familiari di Sclerosi Laterale Amiotrofica (SLA) e il 3% dei casi totali diSLA; il fenotipo patologico e clinico delle forme familiari è peraltro indistinguibile da quellodei pazienti con forma sporadica, suggerendo che cause diverse portino a una comune cascata dieventi neuropatologici. In un nuovo modello cellulare, ottenuto in questo laboratoriotrasfettando in modo stabile la linea murina motoneurone-simile NSC-34 con SOD1 umana wt o139RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNmutata in G93A, abbiamo studiato la morfologia mitocondriale e la tossicità della G93ASOD1sulla catena di trasporto degli elettroni (ETC) mitocondriale e sul funzionamento del poro cheregola la transizione di permeabilità del mitocondrio, due sistemi che presiedono all’integritàdel mitocondrio e della cellula. I risultati ottenuti hanno evidenziato che la presenza dellaproteina mutata altera la morfologia mitocondriale e disturba l’equilibrio elettrico dellamembrana mitocondriale. Inoltre rende i motoneuroni più vulnerabili agli effetti tossici diinibitori della ETC suggerendo che un malfunzionamento dei mitocondri contenenti la proteinamutata potrebbe essere amplificato in presenza di elevate necessità energetiche o di sostanzeesogene che alterino il funzionamento della ETC. Questi effetti aberranti della G93ASOD1 sonorilevanti per la comprensione dei meccanismi patogenetici della SLA in quanto possonocontribuire a spiegare sia le alterazioni della morfologia mitocondriale osservate a stadi precocidella malattia nei terminali dei nervi motori di pazienti SLA e nei motoneuroni di topitransgenici per G93ASOD1 sia la morte dei motoneuroni.Ruolo degli enzimi della via metabolica di degradazione dell’eme (isozimidell’eme ossigenasi e biliverdina reduttasi)Il sistema enzimatico dell’eme ossigenasi (HO) provvede alla degradazione delle molecolecontenenti eme (ad esempio citocromi ed emoglobina) e al riciclo del ferro. Recentemente èstato però evidenziato che i prodotti di questa attività catalitica come il monossido di carbonio ei pigmenti biliari hanno importanti funzioni regolatorie all’interno della cellula. Un aumentodella attività enzimatica dell’HO (di solito dovuta all’attivazione dell’isoforma inducibile HO-1)è attualmente considerato un meccanismo protettivo di risposta cellulare a stimoli nocivi diversi.Nostri studi in modelli sperimentali in vivo e in vitro hanno evidenziato che l’HO-1 è indottanell’epatocita dal trattamento con diclofenac, un antiinfiammatorio non steroideo moltoutilizzato, che causa epatotossicità (evidenziata da un aumento delle transaminasi) nel 15% deipazienti, ed anche, pur se raramente, una epatite fulminante. Nel nostro modello l’induzionedell’HO-1 è parallela al danno epatico e può essere modulata modificando l’equilibrio redoxdella cellula o l’attività del citocromo P-450 (e quindi il metabolismo del diclofenac). L’effettodel diclofenac sull’HO-1 evidenzia che questo farmaco induce nel fegato una situazione distress che potrebbe essere all’origine della epatotossicità riscontrata nei pazienti.140RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNLABORATORIO POLITICHEREGOLATORIE DEL FARMACOPERSONALECapo LaboratorioVittorio BERTELE’, Dr. Med. Chir.141RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNINTRODUZIONE ALLE ATTIVITA' DEL LABORATORIOValutazione di dossier registrativi di farmaci sottoposti all’autorità regolatoria centrale europea(EMEA) per l’autorizzazione al commercio e successive variazioni dei terminidell’autorizzazione originale (estensione dell’indicazione, nuove informazioni sulla sicurezzadei farmaci, etc).Attività di farmacovigilanza attraverso la valutazione di Periodic Safety Update Reports (PSUR)su farmaci approvati dall’EMEA.Valutazione di dossier registrativi di farmaci sottoposti all’autorità regolatoria nazionale perl’ammisssione al regime di rimborsabilità e per la contrattazione del prezzo.Valutazione dell’adeguatezza della legislazione, delle istituzioni e delle procedure regolatorie aifini della salute pubblica.Cooperazione allo sviluppo e alla soluzione di problematiche regolatorie in Paesi in via disviluppo.SCOPERTE/RISULTATI PRINCIPALIPubblicizzazione delle deficienze della legislazione europea sul farmaco e delle proposte peradeguarle alle esigenze di salute pubblica.Valutazione critica della documentazione alla base delle autorizzazioni al commercio deimedicinali.Definizione dei criteri di qualità per farmaci antiretrovirali in assenza di autorità regolatorieCorso su "Valutazione regolatoria di efficacia e sicurezza" tenuto al personale scientifico delCentro per la Valutazione del Farmaco di Pechino dal 20 al 24 Ottobre 2003, in collaborationecon l'Organizzazione Mondiale della Sanità (Dipartimento dei Farmaci Essenziali e dellaPolitica Farmaceutica di Ginevra) e il Laboratorio per la Salute Materno Infantile, Istituto"Mario Negri", MilanoIstituto Superiore di SanitàMinistero della SaluteMinistero degli Affari EsteriCOLLABORAZIONI NAZIONALICOLLABORAZIONI INTERNAZIONALIEuropean Medicine Evaluation Agency (EMEA)142RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNOrganizzazione Mondiale della Sanità (Dipartimento dei Farmaci Essenziali e della PoliticaFarmaceutica)Centro Cinese per la Valutazione dei FarmaciNational Emergency Response Council on HIV/AIDS (Swaziland) tramite la CooperazioneItaliana (Direttorato Generale Cooperazione e Sviluppo del Ministero degli Affari Esteri)PRESENZA IN COMITATI EDITORIALIDialogo sui Farmaci (Vittorio Bertelè)Servizio di Informazione e Documentazione Clinica DOCTORline (Alessandro Nobili)Banca dati “Drugdex” di Micromedex ® Thompson Health Care (Alessandro Nobili)The Annals of Pharmacotherapy (Alessandro Nobili)ATTIVITA' DI REVISIONEThe Annals of Pharmacotherapy (Alessandro Nobili)Eurpean Journal of Clinical Pharmacology (Vittorio Bertelè, Luca Li Bassi)PRESENZA IN COMMISSIONI NAZIONALI E INTERNAZIONALIAssociazione per lo Sviluppo della ricerca in FarmacoEpidemiologia (ASFE)Committee for Proprietary Medicinal Products (CPMP) presso l’EMEA (in qualità di esperti)Federazione Alzheimer Italia, Progetto CARERGruppo di Lavoro per la negoziazione del prezzo dei farmaci e la loro adozione in regime dirimborsabilità presso il Ministero della SaluteSottocommissione Procedure Comunitarie presso il Ministero della SaluteCONTRIBUTI E CONTRATTIEuropean Medicine Evaluation Agency (EMEA)SELEZIONE PUBBLICAZIONI SCIENTIFICHE APPARSENELL'ANNO 2003Garattini S, Bertele V, Li Bassi LEuropean Council waters down European Parliament's drug regulatory legislationLancet 2003; 362: 1688-1689Garattini S, Bertele V, Li Bassi LHow can research ethics committees protect patients better?143RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNBMJ 2003; 326: 1199-1201Garattini S, Bertele V, Li Bassi LLight and shade in the proposed revision of EU drug regulatory legislationLancet 2003; 361: 635-636Garattini S, Bertele VEfficacy, safety and cost of new drugs acting on the central nervous systemEur J Clin Pharmacol 2003; 59: 79-84Garattini S, Bertele VEfficacy, safety and cost of new cardiovascular drugs: a surveyEur J Clin Pharmacol 2003; 59: 701-706Li Bassi L, Bertele V, Garattini SEuropean regulatory policies on medicines and public health needsEuropean Journal Public Health 2003; 13: 246-251Garattini S, Bertele V, Li Bassi LPlacebo or active control? Either, as long as it is in the patient's interestWHO Drug Information 2003,17:253-6Xianglin Z, Reggi V, Bertele V, Bonati MRegulatory evaluation of efficacy and safety of new drugs in ChinaChin Med J (Engl) , In PressBertele V, Li Bassi LA critique to the European Regulatory SystemJ Ambul Care Manage , In PressGarattini S, Bertele V, Li Bassi LEU pharmaceutical legislation. Open letter to Commissioner LiikanenHealth Policy , In PressSELEZIONE PUBBLICAZIONI DIVULGATIVE APPARSENELL'ANNO 2003Garattini S, Bertele V, Li Bassi LCome possono i comitati etici proteggere al meglio i pazienti coinvolti in sperimentazioni cliniche?Bollettino Informazione Farmaci 2003; 10: 153-157Garattini S, Bertele V, Li Bassi LRevisione della legislazione farmaceuticaRicerca & Pratica 2003; n. 112: 165-171Garattini S, Bertele V, Li Bassi LLa regolazione europea dei farmaci e l'industria farmaceuticaProfessione Cultura Practica del Medico d'Oggi 2003; 6: 6-9ATTIVITA' DI RICERCAContributo alla revisione della legislazione europea sui medicinaliPubblicizzazione delle deficienze della legislazione europea sul farmaco e delle proposte per144RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNadeguarle alle esigenze di salute pubblica.Valutazione della documentazione a supporto di procedure registrativedei medicinaliAttività di rapporteur per tre domande di ammissione al commercio di mnuovi medicinaliAttività di rapporteur per tre Variazioni cliniche alle condizioni di autorizzazione al mercatoAttività di rapporteur per una serie di Variazioni farmaceutiche alle condizioni di autorizzazioneal mercatoValutazione dei risultati di due studi postmarketing richiesti dall'autorità regolatoria europeaValutazione di sei Periodic Safety Update ReportAttività di supporto all’autorità regolatoria nazionaleValutazione di dossier registrativi di farmaci sottoposti all’autorità regolatoria nazionale perl’ammisssione al regime di rimborsabilità e per la contrattazione del prezzo145RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMN146RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNLABORATORIO PER LA SALUTEMATERNO INFANTILEPERSONALECapo LaboratorioMaurizio BONATI, Dr.Med.Chir.147RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNINTRODUZIONE ALLE ATTIVITA' DEL LABORATORIOLa ricerca, intesa come approccio multidisciplinare per produrre conoscenza, caratterizzal'attività del laboratorio.La ricerca fornisce le basi per lo svolgimento e la pianificazione critica delle attività dellaboratorio con la partecipazione di operatori sanitari e sociali, madri, bambini e genitori sia delnord che del sud del mondo.Il principale obiettivo delle attività svolte dal Laboratorio per la Salute Materno Infantile èquello di contribuire al miglioramento del benessere della madre e del bambino mediante unlavoro interdisciplinare e collettivo nell'ambito della Salute Pubblica.COLLABORAZIONI NAZIONALIAssociazione Culturale PediatriCentro Antiveleni - Unità di Tossicologia Clinica - Ospedali Riuniti di BergamoCentro per la Salute del BambinoCINECA, Consorzio Interuniversitario, Casalecchio di Reno (BO)Il Pensiero Scientifico Editore, RomaMinistero della Salute, Dipartimento Valutazione dei Medicinali e la FarmacovigilanzaUniversità degli Studi di Milano - Facoltà di Scienze PoliticheUniversità degli Studi di Milano, Bicocca - Facoltà di MedicinaCOLLABORAZIONI INTERNAZIONALIComunità Europea (CE)Centro de Epidemiologia Comunitaria y Medicina Tropical (CECOMET), Ecuador Colsubsidio,ColumbiaEuropean Network Drug Investigation Children (ENDIC)International Society of Drug Bulletins (ISDB)The European Agency for the Evaluation of Medicinal Products (EMEA)Organizzazione Mondiale della Sanità (WHO)Università di NottinghamPRESENZA IN COMITATI EDITORIALIIl Responsabile di Laboratorio, dott. Maurizio Bonati, è presente nei seguenti ComitatiEditoriali: European Journal of Clinical Pharmacology, Paediatric & Perinatal Drug Therapy,Pediatria (Sao Paulo), Quaderni ACP, Ricerca & Pratica, Saludarte.148RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNATTIVITA' DI REVISIONEArchives of Disease in Childhood, Drug Safety, Expert Opinion on Pharmacotherapy, EuropeanJournal of Clinical Pharmacology, Major Drug Safety Information on the Internet, PediatricDrugs, Pediatric and Perinatal Drug Therapy, Pediatrics, Prescrire, The Italian Journal ofPediatrics.ORGANIZZAZIONE DI EVENTICorso interuniversitario finalizzato alla creazione di specialisti in pianificazione e gestione diprogetti di cooperazione allo sviluppo "Master in Analisi e Gestione di Progetti di Sviluppo"(www.eco-dip.unimi.it), svoltosi dal 7 al 18 Luglio 2003 presso l'Istituto Mario Negri diMilano.Nell’ambito di un ampio progetto promosso dall’Organizzazione Mondiale della Sanità (OMS)volto a incrementare un uso più razionale dei farmaci nel corso dell’anno 2003 sono statiorganizzati dal Laboratorio a Kuala Lumpur, Pechino e Bangkok, corsi internazionali sullestrategie di valutazione delle informazioni e delle evidenze disponibili per la registrazione deifarmaci. Sono stati affrontati vari aspetti pratici del processo di valutazione dei farmaci quali ilreperimento preciso, accurato e completo delle informazioni disponibili, i criteri di analisi perun giudizio di evidenza (di efficacia e sicurezza), l’impiego di protocolli standard per lavalutazione dei dossier, etc.Dopo il dibattito, sia tra gli operatori sanitari che sulla stampa, in merito alla reintroduzione incommercio del metilfenidato per curare l’ADHD, che ha suscitato confusione nell’opinionepubblica, anche in mancanza di protocolli operativi nazionali condivisi, si è tenuta a Cagliari laConferenza Nazionale di Consenso "Indicazioni e strategie terapeutiche per i bambini e gliadolescenti con disturbo da deficit attentivo e iperattività", organizzata dall'Università degliStudi di Cagliari e il Laboratorio per la Salute Materno-Infantile dell'IRFMN. Le indicazioniconcordate sono state:- la diagnosi di ADHD, e degli altri disturbi con sintomi simili, deve essere effettuata daoperatori della salute mentale dell’età evolutiva;- il programma di trattamento deve prevedere consigli e supporto per i genitori e gli insegnanti,oltre a interventi psicologici specifici;- occorre predisporre un piano nazionale (con un’articolazione a livello regionale) specificoriguardo a questa patologia.PARTECIPAZIONE AD EVENTI CON CONTRIBUTI DELLABORATORIOGENNAIO – FEBBRAIOCriteri di inclusione e di esito nei RTCs terapeutici. 4° Convegno annuale per il bambinodisattento e iperattivo - Il Disturbo da Deficit di Attenzione/Iperattività: la complessità dellavalutazione diagnostica. AIDAI onlus, IRCCS, Min. Affari Esteri, AIRIPA onlus. Brindisi.149RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNMARZOImpact of compliance and medication errors/misuse in children, the role of proper informationto children and parents. Evaluation of Medicinal Prodicts in Children. Eudipharm e ESDPPP.Università cattolica di Louvain, Brussels, Belgio.Farmaci in Gravidanza. Tossicologia Clinica, Ospedali Riuniti, Bergamo.Risultati dell’indagine conoscitiva sulla farmacovigilanza e progetto “medici in rete per lafarmacovigilanza”. Forum - Sanità Futura ‘ 03. I progetti che cambieranno la Sanità italiana:dalla Sanità alla Salute. Ministero della Salute et.al.; Villa Erba, Cernobbio, Como.Sperimentazione clinica controllata in medicina generale e in pediatria di libera scelta, Como.APRILEBambini e Farmaci: le risposte alle domande più frequenti. Cumunità montana PresilaCatanzarese, Comune di Taverna; Taverna, Catanzaro.Esmeraldas: un’esperienza di cooperazione sanitaria. Corso elettivo n.16: La promozione dellasalute nei Paesi con risorse limitate. Facoltà di Medicina e Chirurgia Università Milano-Bicocca. Università degli Studi di Milano; Monza, Milano.MAGGIOFarmaci nel neonato. Il farmaco e il bambino. Dal concepimento alla prima infanzia. Il ruolo delfarmacista. Laboratorio per la Salute Materno-Infantile; Istituto Mario Negri, Milano.Le diseguaglianze interregionali nella salute. “Il bambino a rischio sociale” (1995) aiprogrammi integrati di sostegno precoce e promozione della salute dei bambini e delle lorofamiglie. Regione Campania, Comune di Napoli, ASL Napoli 1, Centro Studi Interistituzionale,ASL Caserta 2, AORN-Santobono Paosilipon, Università Federico II, ACP, Centro Salute delBambino e l’Isola dei Ragazzi.; S. Maria la Nova, Sala del Chiostro, Napoli.GIUGNOIl Medico di Medicina Generale e la Farmaco-Vigilanza: ricerca, conoscenza, in-formazione.ASL Leno; Leno, Brescia.Clinical trials in children - the need and register. First International Workshop on Paediatric andPerinatal Drug Therapy. Derby, UK.A European paediatric clinical trial registry. International Workshop on Paediatric and PerinatalDrug Therapy and Paediatric Clinical Trials. Derby, UK.Un altro mondo è possibile. Problemi e proposte per una economia alternativa. I brevetti suifarmaci e la tutela della salute e nel sud del mondo. CISL Milano, FEMCA Milano,Coordinamento Giovani e Cooperativa Chico Mendes; sede CISL Sala Brodolini, Milano.SETTEMBREOff label drugs in pediatric primary care. 14° Congresso della società150RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNEuropea per Ambulatori Pediatrici. Regione Lombardia, FIMP, ACP, SIP, SIPPS. Hotel Star,Palazzo Business; Milano.OTTOBRELe possibili epidemie e loro controllo. L’esperienzadelle grandi epidemie degli ultimi 20 anni.1° Congresso Nazionale S.I.A.R.E.D. Società Italiana di Anestesia Rianimazione Emergenza eDolore. Sorrento, Napoli.NOVEMBREAnche in salute i bambini sono vittime di diritti negati. Farmaci e salute: un diritto negato.COOP e Medici Senza Frontiere. Regione Emilia Romagna, Aula Magna; Bologna.I bambini. Dalla epidemiologia del farmaco ai bisogni di popolazione: valutazioni ed aspettieconomici. ASL Napoli 1 e CINECA Consorzio Interuniversitario; Napoli.DICEMBREBambini e farmaci: problematiche aperte e prospettive future. Convegno Regionale: Bambini eFarmaci. SIP Sezione Veneto, ULSS 6, Ospedale San Bortolo; Vicenza.Boehringer IngelheimCinecaComunità EuropeaConsorzio Mario Negri SudIl Pensiero Scientifico EditoreMinistero SaluteRegione LombardiaRegione Valle d'AostaCONTRIBUTI E CONTRATTISELEZIONE PUBBLICAZIONI SCIENTIFICHE APPARSENELL'ANNO 2003Bonati M. Why diverse prices of infant formula in Europe never seems harmonised.2003;http://bmj.com/cgi/eletters/326/7396/984.Clavenna A, Rossi E, Berti A, Pedrazzi G, De Rosa M, Bonati M and the ARNO Working Group. Inappropriate useof anti-asthmatic drugs in the Italian paediatric population. Eur J Clin Pharmacol 2003;59:565-569.Olsen J, Campi R, Frydenberg M, Basso O, Ebbesen P. Studying health consequences of microchimerism.Methodological problems in studying health effects of procreation with multiple partners. Eur J Epidemiol2003;18:623-629.Pandolfini C, Bonati M. Off-Label drug use in children in Europe: a major health issue. Pharm Dev Regul2003;1:133-143.151RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNPandolfini C, Bonati M, Reggi V, Figueras A. Regulatory assessment of new drugs in developing countries. Lancet2003;362:249-250.Pandolfini C, Bonati M, Sammons H, Choonara I, Jacqz-Aigrain E, Danès I, Arnau J. A european clinical trialsregistry for children. Paediatr Perinatal Drug Ther 2003;5:98-100.The international comparative study on drug information (ICSODI) collaborative group. Prescribing information in26 countries: a comparative study. Eur J Clin Pharmacol 2003;59: 263-270.ABSTRACT PUBBLICATIBonati M, Pandolfini C, Campi R, Clavenna A. Off-label drug in paediatric primary care. In: "14°th Congress of theEuropean Society for Ambulatory Pediatrics", September 19-21, 2003 (Milan).Bonati M, Pandolfini C, Choonara I, Jacqz-Aigrain E, Arnau J. From proposal to reality. Paed Perinatal Drug Ther2003;5:169.Clavenna A, Rossi E, Berti A, Pedrazzi G, De Rosa M, Bonati M. Not appropriate anti-asthmatic drugs prescriptionin the italian paediatric population. Paed Perinatal Drug Ther 2003;5:169.Olsen J, Campi R, Frydenberg M, Basso O, Ebbesen P. Microchimerism - An exposure looking for a disease but theroad is paved with problems. Gac Sanit 2003;17(Supl 2):133.Pandolfini C, Bonati M, Giozani M, Raffaelli MP, Rossi R, Serra G, Joppi R, Temporin G. Off-label and unlicenseddrug use in neonatal wards of three different italian hospitals. Paed Perinatal Drug Ther 2003;5:169.Rocchi F, Clavenna A, Ferrara T, Campi R, Calati MG, Bonati M. Information and education in sanitary setting. PaedPerinatal Drug Ther 2003;5:149.SELEZIONE PUBBLICAZIONI DIVULGATIVE APPARSENELL'ANNO 2003Besana D, Bonati M, Calzone C, Carpiniello B, Cianchetti C, Cornoldi C, Curatolo P, Dessi F, D'Errico R, Drago F,Fratta W, Garattini S, Gessa GL, Marzocchi GM, Masi G, Morosini P, Omerini M, Pancheri P, Pintor C, Zuddas A.Indicazioni e strategie terapeutiche per i bambini e gli adolescenti con ADHD. Medico e Bambino 2003;22:383-386.Bonaccorsi A. La 12° lista dei farmaci essenziali. La selezione e l'uso delle medicine essenziali. Bollettino SIFO2003;49:62-63.Bonati M. Le sanzioni sulla salute. Not in my name. Guerra e Diritto. A cura di Bimbi L. Editori Riuniti, Roma 27-35; 2003.Bonati M. Ancora dal mondo dei bambini: non solo sperimentazione. Troppi errori terapeutici nei reparti pediatriciinglesi! E in Italia? GIFC 2003;17:54.Bonati M, Pandolfini C. Da una guida nazionale ad un formulario pediatrico europeo. Bollettino SIFO2003;49(5):276-7.Bonati M. Anche l'embargo economico può essere una violazione dei diritti umani. Assistenza infermieristica ericerca 2003;22:50-55.Bonati M. La ricerca nelle cure primarie: un bisogno ancora inevaso. Quaderni ACP 2003;X:8-9.Bonati M. Perché non armonizzare anche i prezzi del latte in polvere per neonati in Europa? Quaderni ACP2003;X:24.Bonati M. I dilemmi della ricerca nelle cure primarie. R&P 2003; 111:93-95.152RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNBonati M. Gli embargo ammazza-bambini. Fondazione Internazionale Lelio Basso 2003;4:11-12.Bonati M. Cantando la Salute. Volontari per lo Sviluppo 2003;Novembre:26-28.Bonati M. Ser niño es una calidad del alma. Espasa e Práctico - Haz tu vida más fácil. Ventanas Abiertas. Pedagogiacon afecto y libertad 2003;144-145.Bonati M, Pandolfini C. Un prontuario europeo dei farmaci per i bambini. Medico e Bambino 2003;9:563-564.Campi R. Introduzione al concetto di probabilità. R&P 2003;19:72-77.Clavenna A. No Free Lunch. R&P 2003;112:39-42.Clavenna A. I percorsi della Farmaco-Vigilanza: il caso del Celecoxib. SIAR NEWS 2003;42:7-9.Garattini S, Bonati M. Approcci diagnostici-terapeutici condivisi per l'ADHD: un bisogno ancora inevaso in Italia.Psicomotricità 2003;18:39-42.Pandolfini C. Assistenza sociale e sanitaria per stranieri. R&P 2003;110:71.Pandolfini C. Un supporto per chi soffre di allergie. R&P 2003; 248.ALTRE PRODUZIONI EDITORIALI PUBBLICATE NEL CORSO DEL2003Monografie informative per operatori sanitari e cittadini in ambito sanitario.Rapporto attività CRIFRicerca & Pratica"Guida all'uso dei farmaci per i bambini", in collaborazione con il Ministero della Salute, Dipartimento per laValutazione dei Medicinali e la Farmacovigilanza. Pubblicata in 600.000 copie e distribuita gratuitamente a medici,infermieri e farmacisti. Roma, 2003.ATTIVITA' DI RICERCAIl monitoraggio e la valutazione epidemiologica dell’uso razionale deimedicamenti e dei vaccini, in ospedale e nella medicina del territorio- Si sono conclusi alcuni studi epidemiologici che hanno documentato la necessità di tempestivied efficienti interventi finalizzati a un uso dei farmaci sempre più motivato, appropriato,efficace e sicuro (in particolare) per i bambini. Per garantire tutto questo, il monitoraggiosistematico e continuo della prescrizione farmacologica (drug utilization) rappresenta uno deglistrumenti per ottenere informazioni della qualità delle cure: indicatori indispensabili perprogrammare oculati e appropriati interventi per la Salute Pubblica. Proseguirà il ProgettoARNO, sviluppato in collaborazione con il Cineca (Centro di Calcolo Interuniversitario) diBologna, a cui aderisco 27 ASL di 8 Regioni. A partire dal 1995, con aggiornamento mensile, èstata costruita una banca dati di tutte le prescrizioni farmacologiche rimborsabili effettuate aoltre 8 milioni di residenti (poco meno di un milione di bambini) da oltre 7000 medici dimedicina generale e 1000 pediatri di libera scelta. Oltre a tutte le informazioni anagrafiche e153RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNamministrative degli assistiti e dei medici, per alcune ASL sono disponibili anche i dati relativialle ospedalizzazioni. Oltre a rapporti informativi periodici verranno effettuate valutazionispecifiche per: specifiche popolazioni (p. es. la popolazione pediatrica), andamenti temporali,realtà geografiche differenti (locali e regionali), problemi clinico-terapeutici sia rari chericorrenti, voci di spesa, etc.- Le reazioni avverse da farmaci non sono un evento raro e necessitano di un attento, continuo,intenso e integrato monitoraggio, quale consapevole partecipazione, sia dell’operatore sanitarioche dell’autorità sanitaria, al processo assistenziale. Tuttavia, l’Italia si caratterizza ancora per lascarsità di segnalazioni imputabile (come ampiamente documentato da alcuni studi di ampiedimensioni condotti, anche, dal Laboratorio) sia dalla scarsa attitudine, limitata informazione eprecaria fiducia dei medici che dalla disattenzione mostrata in passato dagli organi regolatori.Con l’attuazione della nuova legge nazionale che recepisce una direttiva comunitaria e con lerecenti iniziative informative e regolatorie intraprese dall’apposito Dipartimento ministeriale,saranno intrapresi studi formali atti a documentare sia l’atteso miglioramento (qualitativo equantitativo) dell’attività segnalatoria che a monitorare la sicurezza di medicamenti e vaccini inalcune popolazioni indice e/o in specifiche condizioni patologiche.- Nell’ambito del Fifth Framework Programme, l’Unione Europea, in accordo con quantoprevisto nel documento Better Medicines for Children, nel dicembre 2002 ha approvato unprogetto finalizzato alla creazione di un registro europeo di studi clinici in pediatria. Di duratatriennale, il progetto, intitolato DEC-net, rappresenta la fase di fattibilità per la creazione di unregistro comune di libera consultazione in cui vengano raccolte le informazioni essenziali deglistudi clinici sperimentali per l’età pediatrica. Il progetto, coordinato dal Laboratorio incollaborazione con il Laboratorio di Informatica Medica,, coinvolge attualmente membriprovenienti da quattro nazioni: Italia, Regno Unito, Spagna, Francia. Collegandosi ad unapposito sito web sarà possibile consultare il registro e (già da ora) accedere a raccoltebibliografiche aggiornate, sia della letteratura che delle normative, nazionali e internazionali,inerenti la sperimentazione clinica pediatrica. Sono stati attivati, e saranno ulteriormenteampliati, specifici collegamenti con database accessibili, in particolare con il metaRegisterinternazionale degli studi clinici controllati e randomizzati, a cui DEC-net potrà collaborareattivamente in futuro. A partire dal 1° gennaio 2004 è prevista l’attivazione formale del registro.Ciascun coordinatore nazionale inizierà, infatti, a inserire le informazioni relative agli studiclinici pediatrici approvati o in corso nel proprio paese. Per favorire la raccolta delleinformazioni e della documentazione formale, a partire dai prossimi mesi verrà attivata unacampagna di informazione e sensibilizzazione degli operatori sanitari, delle società eassociazioni scientifiche pediatriche, dei comitati etici per la sperimentazione clinica, delleindustrie farmaceutiche e, per quanto possibile, della popolazione tutta. Per ogni studio saràpossibile ottenere le informazioni essenziali, anche nella propria lingua, (titolo, patologia,farmaco/i impiegati, numero e caratteristiche dei bambini partecipanti, tipo di studio,responsabile) che saranno consultabili liberamente collegandosi al sito. Mentre informazioni piùdettagliate (criteri di inclusione/esclusione, centri partecipanti, stato dello studio, esito,pubblicazione/presentazione dei risultati, etc.) saranno consultabili solo dal coordinatorenazionale e dal gestore del sito (IRFMN di Milano). Sarà quindi un registro all’insegna dellatrasparenza e partecipazione; uno strumento (anche) di informazione e ricerca, a tutt’oggi unico,che ha come obiettivo strategico quello di aumentare l’informazione della ricerca clinica e,quindi, il consenso alla partecipazione: a partire da una ricerca per e con i bambini (e i lorogenitori).Lo studio delle variabili socio-sanitarie associate alle condizioni di salute- L’introduzione dell’Indice di Sviluppo Umano (ISU) nel 1990 ad opera dell’Undp (UnitedNations Development Programme – Programma di sviluppo delle Nazioni Unite) harappresentato un importante contributo a livello internazionale in campo economico, sanitario epolitico, suggerendo una nuova indicazione per la misura del benessere di un paese, basato non154RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNsolo sulla crescita economica, ma anche su altre dimensioni. L’ISU è un indice sinteticocostruito sulla base di diversi indicatori semplici che comprendono oltre al reddito pro-capite,l’autonomia culturale delle singole persone e la loro speranza di vita. Questo indice è usatocorrentemente per suggerire scelte e priorità per le politiche di intervento ed è utilizzato permonitorare nel tempo il corso dello sviluppo per le singole nazioni. Molti studi hannodimostrato la correlazione dell’ISU con alcuni indicatori “classici”, e tra questi il tasso diMortalità Infantile (MI), uno dei più frequentemente utilizzati per stimare lo stato di salute diuna popolazione e l’impatto dei risultati degli interventi legati alle politiche sanitarie. In accordocon la metodologia utilizzata dall’UNDP, per la prima volta è stato utilizzato un ISUdisaggregato a livello regionale, mostrando significative correlazioni con la latitudine e i tassi dimortalità nel primo anno di vita. Questi risultati documentano che sono anche le componentisociali e culturali (da sole o insieme), oltre a quelle economiche, a dare il loro contributo neldeterminare le differenze di sviluppo e negli indicatori di MI tra le diverse realtà italiane.Tuttavia per meglio comprendere come e perché queste evidenti diseguaglianze sono prodotte (eriprodotte), dovranno essere considerati anche altri indicatori più immediati ed esplicativi dellediverse realtà nazionali. È questa la finalità di alcuni studi formali in corso e interventi nelcampo della Salute Pubblica che verranno intrapresi in un prossimo futuro.Il trasferimento dell’informazione scientifica alla comunità- Il Centro Regionale di Informazione sul Farmaco (CRIF), la cui attività principale è finalizzataall'uso razionale dei farmaci in gravidanza, durante l'allattamento e in età pediatrica, è parte delLaboratorio. Il CRIF, nato con lo scopo di promuovere l’attività dei prontuari terapeuticiospedalieri, si è sempre più caratterizzato per l'interesse verso i pazienti/utenti e gli operatorisanitari. Il cuore dell’attività del CRIF è rappresentato dal servizio quotidiano di consulenzatelefonica, garantita anche ai non specialisti, per ciò che attiene la terapia farmacologica. Tuttele richieste, e le relative risposte, vengono inserite in una banca-dati, così da permettere ilmonitoraggio dell’attività, sia in termini di rilevazione farmaco-epidemiologica, che di followupdei problemi. Così strutturato il CRIF rappresenta quindi un osservatorio epidemiologico(unico nel settore) di problemi terapeutici latenti nella comunità, segnalati e individuati da utentie operatori.- Molti farmaci prescritti ai bambini non hanno una autorizzazione per uso pediatrico, mavengono utilizzati in maniera off-label (cioè ad di fuori delle indicazioni riportate nella licenza).L’uso off-label è un aspetto molto complesso. Molti possono essere i motivi che determinanoquesto tipo di utilizzo. I medici hanno il dovere di prescrivere un farmaco nel miglior interessedei loro pazienti. Devono quindi essere ben informati sulle malattie per le quali il farmaco èprescritto, sulle caratteristiche particolari di ogni paziente e sulle proprietà del farmaco inquestione. Il fatto che l’autorità responsabile per l’immissione in commercio dei farmaci abbiadato l’autorizzazione per un particolare uso è rassicurante, ma molti altri aspetti devono essereconsiderati quando si prescrive o somministra un farmaco. A tale proposito è stata preparata daun gruppo di lavoro coordinato dal Laboratorio, su incarico del Ministero della Salute, la prima“Guida all’uso dei farmaci per i bambini”, un’iniziativa onerosa, appena conclusasi. La Guidasarà distribuita, gratuitamente, a tutti i medici, infermieri e farmacisti del SSN: è solo l’inizio diun percorso collaborativo di in-formazione che prevede per i prossimi anni un aggiornamento,una versione ridotta tascabile, una versione elettronica che consenta agli ospedali di formularelinee guida specifiche e di integrare i foglietti illustrativi con informazioni appropriate per igenitori e gli stessi bambini. Ci sarà anche la necessità di costruire una banca dati. Circa il 50%dei farmaci elencati nella Guida non hanno un’autorizzazione all’uso o sono utilizzati al di fuoridelle indicazioni riportate nella licenza. Ciò richiede la loro individuazione e una valutazionespecifica per ulteriore studi clinici e per la sorveglianza del loro utilizzo.- Ricerca & Pratica (R&P) è nata nel gennaio del 1985, come espressione dell'Istituto diRicerche Farmacologiche “Mario Negri”. Membro italiano dell'International Society of DrugBulletins è distribuita su abbonamento dal Pensiero Scientifico Editore, di Roma. La rivista è155RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNoggi arricchita dalla collaborazione delle più avanzate équipe di ricerca clinica italiana e siavvale della collaborazione redazionale del Centro Studi e Ricerche in Medicina Generale. Gliaspetti più apprezzati sono stati l'indipendenza della rivista e dei suoi autori, l’offerta di unpalcoscenico per tutti coloro che in medicina generale raccolgono dati e producono studi con ilsincero intento di capire e di migliorarsi, lo sforzo di guardare al di là dei soli aspetti clinicidella medicina, senza però mai dimenticare che è alla clinica che i lettori dedicano la maggiorparte del proprio tempo e dei propri sforzi. L’impegno di R&P è quello di continuare in questadirezione, allargando gli spazi di attenzione alla pediatria di famiglia e ai problemi della salute edella sanità pubblica; il tutto con uno sguardo all’Europa. Questo nuovo indirizzo coincide conil mutamento che, potrà presto verificarsi nell’ambito delle cure primarie (ricerca in medicinaextraospedaliera, piani sanitari regionali, EMC, etc.). Un osservatorio esclusivo e autonomo,qual è R&P, può quindi rappresentare, con le sue attività anche un laboratorio di riflessione,valutazione e informazione. Come sempre useremo nella valutazione gli strumenti che ci sonoabituali: l'affidabilità e la rilevanza dei dati, l'equilibrio tra benefici e rischi e tra benefici e costi,l'indipendenza da conflitti di interesse, l'obiettivo reale di contribuire a un miglioramento,progressivo ed equamente distribuito, del livello di salute della popolazione.La cooperazione con i Paesi a risorse limitate- Come espressione, verifica, sviluppo originale della scelta di rendere le proprie ricerchetrasferibili e accessibili alle popolazioni, il Laboratorio ha promosso e seguito progetti nel e peril “Sud del Mondo”.- Nell’ambito di un ampio progetto promosso dall’Organizzazione Mondiale della Sanità (OMS)volto a incrementare un uso più razionale dei medicamenti sono stati e verranno organizzati indiversi Paesi corsi formali sulle strategie di valutazione delle informazioni e delle evidenzedisponibili per la registrazione dei farmaci. L’attività, rivolta alle Agenzie regolatorie nazionali,prevede anche l’attivazione di progetti formali internazionali di ricerca farmacoepidemiologica.- Nell’ambito del “Master in Analisi e Gestione di Progetti di Sviluppo”, un corsointeruniversitario finalizzato alla formazione di specialisti in pianificazione e gestione diprogetti di cooperazione allo sviluppo, il Laboratorio organizza uno Stage della durata di duesettimane. Lo Stage costituisce un approfondimento pratico sulle problematiche inerenti laSalute Pubblica nei Paesi del Sud del Mondo, in considerazione della primaria importanza chequeste rappresentano per tutta la popolazione mondiale agli inizi del Millennio.- Continuerà il supporto tecnico e organizzativo per lo svolgimento di progetti socio-sanitari inPaesi a risorse limitate da parte di gruppi locali e organizzazioni non governative internazionali.In particolare in Colombia, Ecuador, Brasile, Bolivia, Filippine e Balcani.Altre attivitàContinueranno le attività che prevedono la partecipazione e l'organizzazione di iniziative diinformazione, formazione e dibattito rivolte e con il coinvolgimento sia degli operatori sanitari esociali che della popolazione (p. es., corsi di aggiornamento, conferenze di consenso, attivitàeditoriali, etc.). Continuerà anche l’attività di expertise in supporto a comitati etici, comitatiterapeutici e organi regolatori.156RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNLABORATORIOEPIDEMIOLOGIA GENERALEPERSONALECapo LaboratorioCarlo LA VECCHIA, Dr.Med.Chir.Unità di Epidemiologia AnaliticaCapo UnitàFabio PARAZZINI, Dr.Med.Chir.Unità delle Malattie CronicheCapo UnitàAlessandra TAVANI, Dr.Sci.Biol.Unità di Metodologia EpidemiologicaCapo UnitàEva NEGRI, Dr.Mat.157RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNINTRODUZIONE ALLE ATTIVITA' DEL LABORATORIOIl laboratorio di Epidemiologia si occupa principalmente di epidemiologia di diverse neoplasiecomuni (tra cui tumori del seno, del tratto genitale femminile, del tratto respiratorio e digestivo,della prostata e delle vie urinarie, neoplasie linfoidi, melanomi, etc.) e delle malattiecardiovascolari, attraverso un approccio sia descrittivo, che analitico.Tra le attività di epidemiologia descrittiva vi sono l'analisi degli andamenti temporali e delladistribuzione geografica della mortalità per tumore, malattie cardiovascolari, e altre condizioniselezionate, in Italia e Europa; e l'analisi degli andamenti nel consumo del fumo di tabacco nellapopolazione italiana, e dei corrispondenti effetti sull'incidenza e la mortalità per tumore delpolmone ed altre neoplasie tabacco-relate.Per ciò che riguarda l'epidemiologia analitica, il Laboratorio si occupa della conduzione edanalisi di studi osservazionali di tipo caso-controllo su vari tumori o patologie cardiovascolari,con la finalità di identificare e quantificare le relazioni tra aspetti genetici e vari fattori legatiallo stile di vita, all'utilizzo di ormoni esogeni, e all'esposizione a varie sostanze. In particolare,si occupa dell'analisi dei correlati dietetici di tumori e malattie cardiovascolari; dell'analisi delrischio di vari tumori associato all'utilizzo di contraccettivi orali e terapie sostitutive inmenopausa; della quantificazione degli effetti sulla salute del fumo di tabacco, consumo dialcool e implicazioni per la prevenzione; della valutazione dell'impatto dello screening nelladiagnosi precoce e nella prevenzione del cancro. Altre attività in cui il Laboratorio è coinvoltoriguardano la conduzione di meta-analisi e ri-analisi di studi epidemiologici pubblicati sullatiroide, l'ovaio e la mammella e l'analisi di coorti storiche di esposizioni occupazionali ad aminearomatiche, asbesto, erbicidi, e altri potenziali sostanze cancerogene.SCOPERTE/RISULTATI PRINCIPALITra il 1989 e il 2000 si è osservata una riduzione della mortalità per tumore nell’UnioneEuropea, corrispondente ad aver evitato circa 90.000 decessi, dovuta principalmente agliavanzamenti nella prevenzione del tumore del polmone e di altri tumori fumo-correlati. Imiglioramenti nella terapia dei tumori ormono-correlati hanno giocato anch’essi un ruolo.La pizza appare essere un indicatore favorevole del rischio dei tumori dell’apparato digerente.Ruolo dell’indice e il carico glicemico nel rischio di tumore dell’endometrio e dell’ovaio.Decremento dello 0.43% nel consumo di sigarette in Italia, a seguito dell’incremento dell’1%del prezzo.Riduzione del rischio di infarto miocardico con il consumo di alcol durante i pasti. Protezionecon il consumo di pizza, folati e vitamina B6; assenza di associazione con quello di acido α-linolenico e il carico e indice glicemico dei cibi. Diminuzione del rischio di infarto miocardicoin soggetti con maggiore attività fisica, aumento in quelli con familiarità per la malattia.Calcolo del rischio relativo di tumore della mammella legato alle patologie e ai trattamenti dellatiroide.Valutazione dei rischi relativi di vari tumori legati all’uso di terapie ormonali sostitutive inmenopausa, e revisione sistematica dell’argomento.158RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNIdentificazione dell'effetto sinergico di alcool e terapie ormonali sostitutive sul rischio di tumoremammario.Le donne con familiarità di tumore dell'ovaio e della mammella hanno un maggior rischio ditumore dell'ovaio.L'alto consumo di carne e formaggio aumenta il rischio di cisti ovariche benigne. La verdura afoglia verde risulta protettiva.Le sigarette ad alto contenuto di catrame rispetto a quelle a basso contenuto aumentano ilrischio di tumore del cavo orale, della faringe e dell'esofago.L'uso regolare di aspirina, una volta la settimana per almeno 5 anni, riduce il rischio di tumorealle alte vie respiratorie.Diversi aspetti della dieta mediterranea, fra cui il consumo di caffè e di folati, riducono il rischiodi tumore delle alte vie respiratorie. Alti valori di indice e carico glicemico aumentano il rischio.Assenza di un’associazione significativa tra storia di colelitiasi e rischio di tumore del pancreas.Assenza di apprezzabile rischio di cancro in lavoratori degli elettrodi di carbonio.Associazione inversa tra assunzione di omega-3 e tumori della mammella, ovaio, colonretto,cavo orale, faringe ed esofago.Assenza di associazione nella popolazione Italiana tra consumo di patate fritte e aumento dirischio di comuni neoplasie.Diminuzione della prevalenza di fumatori tra i giovani Italiani.Aumento del rischio di infarto miocardico acuto per consumi maggiori di 3 tazze al giorno dicaffè. Diminuzione del rischio di tumore del colon e forse di tumore orofaringeo, esofageo edepatico e il rischio di cirrosi epatica. Aumento di rischio di aborto spontaneo durante lagravidanza, ma non di ritardo di crescita intrauterina e di basso peso alla nascita.Revisione della relazione tra bifenili policlorurati (PCB) e rischio di tumore della mammella.COLLABORAZIONI NAZIONALICentro Cardiologico Monzino, IRCCS, MilanoCentro di Riferimento Oncologico, Servizio di Epidemiologia, Aviano PNGruppo Italiano Studi Epidemiologici in Dermatologia GISED, BresciaIstituto Auxologico Italiano, Divisione Malattie Metaboliche III, IRCCS, Piancavallo (VB)Istituto Auxologico Italiano, Laboratorio Sperimentale di Ricerche Endocrinologiche (LSRE),IRCCS, MilanoIstituto di Fisiologia Clinica CNR, Sezione di Milano, MilanoIstituto di Medicina del Lavoro, CTO, TorinoIstituto di Pediatria, Milano159RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNIstituto Europeo di Oncologia, Divisione di Epidemiologia e Biostatistica, MilanoIstituto Nazionale di Ricerca per gli Alimenti e la Nutrizione (INRAN), RomaIstituto Nazionale per la Ricerca sul Cancro, GenovaIstituto Nazionale per lo Studio e la Cura dei Tumori, Oncologia Sperimentale, Unità di EreditàPoligenetica, MilanoIstituto Tumori “Fondazione Pascale”, Servizio di Epidemiologia, NapoliOspedale Niguarda, Dipartimento Cardiologico “A. De Gasperis”, MilanoPrima Clinica Ostetrico Ginecologia, Mangiagalli, MilanoUniversità degli Studi di Milano - Bicocca, Dipartimento di Statistica, MilanoUniversità degli Studi di Milano, MilanoUniversità di Milano, Istituto di Statistica Medica e Biometria, MilanoUniversità di Milano, Prima Clinica Ostetrico Ginecologica, MilanoUniversità di Verona, Clinica Ostetrico Ginecologica, VeronaCOLLABORAZIONI INTERNAZIONALIHarvard School of Public Health, Department of Epidemiology, Boston, USAHôpital Necker - Enfants Malades, Centre of the Association Claude Bernard on Auto-immunesdiseases, Paris, FranceInternational Agency for Research on Cancer, Unit of Field and Intervention Studies, Lyon,FranceInternational Epidemiology Institute, Rockville, USAMRC Biostatistics Unit, Cambridge, UKNational Cancer Institute, Environmental Studies Section, Bethesda, USANational Cancer Institute, Radiation Epidemiology Branch, Bethesda, USANational School of Public Health, WHO, Athens, GreeceNational University of Ireland, Department of Psychology, Galway, IrelandOrganizing Committee – Center of Oncology, Dept. of Epidemiology and Cancer Prevention,Warsaw, PolandRegistre Vaudois des Tumeurs, Institut Universitaire de Médecine Sociale et Préventive,Lausanne, SwitzerlandUniversity of Toronto and the Clinical Nutrition and Risk Factor Modification Centre,Department of Nutritional Sciences, Faculty of Medicine, St Michael’s Hospital, Toronto,Ontario, CanadaVanderbilt University, Department of Medicine, School of Medicine, Nashville, Tennessee,USAPRESENZA IN COMITATI EDITORIALIAdvances in Therapy (Eva Negri)Alimentazione e Prevenzione (Carlo La Vecchia)American Journal of Epidemiology (Carlo La Vecchia)Asian Pacific Journal of Cancer Prevention (Carlo La Vecchia, Associate Editor)Cancer Causes and Control (Eva Negri)Digestive and Liver Disease (Carlo La Vecchia)European Journal of Cancer (Carlo La Vecchia)European Journal of Cancer Prevention (Carlo La Vecchia, Associate Editor)160RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNEuropean Journal of Clinical Nutrition (Carlo La Vecchia)European Journal of Nutrition (Carlo La Vecchia)European Journal of Public Health (Carlo La Vecchia, Editor)International Journal of Cancer (Carlo La Vecchia)Italian Journal of Obstetric and Gynecology (Fabio Parazzini)Journal of Epidemiology and Biostatistics (Eva Negri)Journal of Epidemiology and Biostatistics (Carlo La Vecchia, Editor)Journal of Epidemiology and Biostatistics (Fabio Parazzini)Journal of Nephrology (Carlo La Vecchia)Nutrition and Cancer (Carlo La Vecchia)Oncology (Carlo La Vecchia)Revisiones en Ginecologìa y Obstetricia (Carlo La Vecchia)Revista Española de Nutriciò Comunitaria (Carlo La Vecchia)Revue d'Epidémiologie et de Santé Publique (Carlo La Vecchia)Sozial und Praeventivmedizin (Carlo La Vecchia)Tumori (Carlo La Vecchia)ATTIVITA' DI REVISIONEActa Psychiatrica Scandinavica, American Journal of Epidemiology, British Journal of Cancer,British Medical Journal, Cancer, Cancer Causes and Control, Cancer Epidemiology Biomarkersand Prevention, Digestive Liver Disease, Epidemiology, Epidemiology & Biostatistic, EuropeanJournal of Cancer, European Journal of Cancer Prevention, European Journal of ClinicalNutrition, European Journal of Epidemiology, European Journal of Public Health,Gynecological Endocrinology, Hepatology, Human Reproduction, International Journal ofCancer, International Journal of Epidemiology, International Journal of Obesity, Journal ofClinical Endocrinology and Metabolism, Journal of Epidemiology and Community Health,Journal of the National Cancer Institute, Lancet, Maturitas, Nutrition and Cancer, Obstetric andGynecology, Oncology, Preventive Medicine, Radiation Research, Revue d’Epidèmiologie et deSanté Publique, The Cancer Journal, Tumori.PRESENZA IN COMMISSIONI NAZIONALI E INTERNAZIONALIAdvisory Committee of the Oxford Collaborative group on Aetiological Factors in Cancers ofthe Female Genital TractBoard of Trustees, International Health Foundation, UtrechtComitato Scientifico del Gruppo Italiano Studi Epidemiologici in DermatologiaComitato Scientifico della Società Italiana di Colposcopia e Patologia Cervico VaginaleData and Safety Monitoring Board of the “Phase II therapeutic trial with a humanized nonmitogenicCD3 (ChAgly CD3) monoclonal antibody in recently diagnosed type I diabeticpatients”IARC/OMS di Lione e OMS di GinevraIstituti Clinici di Perfezionamento, MilanoProgetto Menopausa Italia, Associazione Ostetrici Ginecologi ItalianiScientific Review Committee del UND/WHO/World Bank Human Reproduction ProgrammeSocietà Italiana della Riproduzione161RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNORGANIZZAZIONE DI EVENTICongresso, SIR (Società Italiana di Riproduzione). Quarto week-end clinico “MenopausaMillennio”- 10-11 Gennaio 2003, FirenzePARTECIPAZIONE AD EVENTI CON CONTRIBUTI DELLABORATORIOSeminario di aggiornamento, Monitoraggio ambientale e biologico dell’esposizioneprofessionale a fibre, policlorobifenili ed elementi in traccia. “Aspetti ambientali e genetici deltumore del polmone”. 11 aprile 2003. Torino.V Convegno nazionale tabagismo e servizio sanitario nazionale. Istituto Superiore di Sanità.“Dai divieti ai programmi di intervento”. 30 maggio 2003. Roma.Serata pubblica presso ASL Città di Milano dal titolo: L’alcol fa bene o fa male?. “Benefici erischi per la salute: i risultati delle ricerche”. 11 giugno 2003. Milano.9° Congresso Nazionale Società Italiana della Menopausa (SIM). “HRT ed oncogenesi”. 13giugno 2003. Modena.Dermatologia e Sanità Pubblica. XVIII Meeting Annuale GISED. “Farmacoepidemiologia:Sorveglianza per la sicurezza”. 26-27 Settembre 2003. Bergamo.79° Congresso Nazionale S.I.G.O. “L’epidemiologia delle neoplasie in età evolutiva ed in etàfertile”. 12-15 Ottobre 2003. Catania.3rd World congress on men’s health. “Epidemiology”. 24-26 October 2003. Vienna.Toxicology Forum. 2003 European Meeting. “Cancer epidemiology and hair dyes”. 28-30October, 2003. Brussels, BelgioLega Contro I tumori. Il comportamento tabagico e la dipendenza da tabacco: quali interventinelle scuole? “Aspetti epidemiologici e costi sociali della malattia fumo”. 30 ottobre, 20novembre 2003. BiellaQuinto Week-end Clinico SIR. Contraccezione 2003. Quali novità? “Contraccettivi ormonali erischio oncologico”. 21 novembre 2003. Brescia4th Nutrition and Health Conference. “Mediterranean Diet and Cancer Risk: some collaborativefindings”. 22 november 2003. Londra, UKI tumori polmonari in non fumatori. Centro Congressi Fondazione Cariplo. “Epidemiologia deitumori polmonari” – “L’epidemiologia e l’analisi dei fattori di rischio”. 5 dicembre 2003.Milano.162RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNAssociazione Italiana per la Ricerca sul CancroCentro Cardiologico MonzinoEuropean CommissionGlaxo WellcomeL’OrealLega Italiana Lotta contro i tumoriLifescan SIEDP Gruppo DiabeteMinistero della SanitàWeber Shandwick Italia3M ItaliaERABInternational Agency for Research on CancerIstituto Nazionale Neurologico “Carlo Besta”Saint-Gobain VetrotexCONTRIBUTI E CONTRATTISELEZIONE PUBBLICAZIONI SCIENTIFICHE APPARSENELL'ANNO 2003Parazzini F, Balducci A, Vercellini P, Chatenoud L, Gruppo Italiano Studio EndometriosiLeft: Right side ratio of endometriotic implants in the pelvisEur. J. Obstet. Gynecol. Reprod. Biol. 111: 65-67 (2003).Parazzini F., Ricci E., Chatenoud L., Tozzi L., Rosa C., Nicolosi A., Surace M., Benzi G., La Vecchia C.Maternal and paternal smoking and pregnancy-induced hypertension.Eur. J. Obstet. Gynecol. Reprod. Biol.109:141-144 (2003.Negri E, Pelucchi C, Franceschi S, Montella M, Conti E, Dal Maso L,Tavani A., Carbone A., La Vecchia C.Family history of cancer and risk of ovarian cancer.Eur. J. Cancer, 39: 505-510 (2003).Chiaffarino F., Parazzini F., Surace M., Benzi G., Chiantera V., La Vecchia C.Diet and risk of seromucinous benign ovarian cancer.Eur. J. Obstet. Gynecol.,. 110:196-200 (2003).Bertuzzi M., Negri E., Tavani A., La Vecchia C.Family history of ischaemic heart disease and risk of acute myocardial infarction.Prev. Med., 37: 183-187 (2003).Negri E., La Vecchia C., Pelucchi C., Bertuzzi M., Tavani A.Fiber intake and risk of nonfatal acute myocardial infarction.Eur.J.Clin.Nutr., 57: 464-470 (2003).Parazzini F, Chatenoud L, Surace M, Tozzi L, Salerio B, Bettoni G, Benzi GModerate alcohol drinking and risk of preterm birthEur. J. Clin. Nutr. 2003; 57: 1345-1349 (2003).Levi F, La Vecchia C, Saraceno B.Global suicide rates.163RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNEur. J. Publ. Health, 13:97-98 (2003).Levi F., Lucchini F., Negri E., La Vecchia C.Dying for a drink. Global suicide prevention.Br. Med. J., http://bmj.com/cgi/eletter/323/7317/817#17018.Pelucchi C., Talamini R., Levi F., Bosetti C., La Vecchia C., Negri E.,Parpinel M., Franceschi S.Fibre intake and laryngeal cancer risk.Ann. Oncol., 14: 162-167 (2003).Altieri A., La Vecchia C., Negri E.Fluid intake and risk of bladder and other cancers.Eur. J. Clin. Nutr., 57 (Suppl. 2): S59-S68 (2003).D’Avanzo B., La Vecchia C., Negri E.Mortality in long-stay patients from psychiatric hospitals in Italy. Results from the QUALYOP Project.Soc. Psychiatry Psych. Epidemiol., 38: 385-389 (2003).Mack JW, Preston-Martin S, Dal Maso L, Galanti R, Min Xiang, Franceschi S, Hallquist A, Jin F, Kolonel L, LaVecchia C, Levi F, Linos A, Lund E, McTiernan A, Mabuchi K, Negri E, Wingren G, Ron E.A pooled analysis of case-control studies of thyroid cancer: cigarettesmoking and consumption of alcohol, coffee, and tea.Cancer Causes Control, 14: 773-785 (2003).Augustin L.S.A., Polesel J., Bosetti C., Kendall C.W.C., La Vecchia C.,Parpinel M., Conti E., Montella M., Franceschi S., Jenkins D.J.A., Dal Maso L.Dietary glycemic index, glycemic load and ovarian cancer risk: a case-control study in Italy.Ann. Oncol.,14: 78-84 (2003).Gallus S., Altieri A., Bosetti C., Franceschi S., Levi F., Negri E., Dal Maso L.,Conti E., Zambon P., La Vecchia C.Tar yield and risk of upper digestive tract cancers: a case-control studies from Italyand Switzerland.Ann. Oncol., 14: 209-213 (2003).Fernandez E, Schiaffino A, Borràs J-M, Shafey O, Villalbí JR,La Vecchia C.Prevalence of cigarette smoking by birth cohort among males and females in Spain, 1910-1990.Eur. J. Cancer Prev., 12: 57-62 (2003).Levi F, La Vecchia C, Lucchini F, Negri E, Saxena S, Maulik PK,Saraceno B.Trends in mortality from suicide, 1965-1969.Acta Psychiat Scand., 108: 341-349 (2003).La Vecchia C., Chatenoud L., Negri E., Franceschi S.Session: Whole cereal grains, fibre and human. wholegrain cereals ad cancer in Italy.Proc. Nutr. Soc., 62: 45-49 (2003).Gallus S., Bosetti C., Franceschi S., Levi F., Negri E., La Vecchia C.Laryngeal cancer in women: tobacco, alcohol, nutritional and hormonal factors.Cancer Epidemiol. Biomarkers Prev., 12:514-517 (2003).Bosetti C., Negri E., Franceschi S., La Vecchia C.Reply: Gallstones, cholecystectomy, and the risk for developing pancreatic cancer.Br. J. Cancer, 88: 159-160 (2003).Tavani A., Bosetti C., Negri E., Augustin L., Jenkins DAJ, La Vecchia C.Carbohydrates, dietary glycaemic load and glycaemic index, and risk ofacute myocardial infarction.Heart, 89: 722-726 (2003).Levi C., Pasche C., Lucchini F., La Vecchia C.Oral contraceptives and colorectal cancer.Digest. Liver Dis., 35:85-87 (2003).164RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNLa Vecchia C., Franceschi S., Levi F.Epidemiological research on cancer with a focus on Europe.Eur.J. Cancer Prev., 12: 5-14 (2003).Augustin LSA, Gallus S, Franceschi S, Negri E, Jenkins DJA, Kendall CWC,Dal Maso L, Talamini R, La Vecchia C.Glycemic index and risk of upper aero-digestive tract neoplasms.Cancer Causes Control, 14:657-662 (2003).Pelucchi C, Franceschi S, Trichopoulos D, Bosetti C, Negri E,La Vecchia C.Fried potatoes and human cancer.Int. J. Cancer, 105:558-560 (2003).Tavani A, Pelucchi C, Parpinel MT, Negri E, Franceschi S, Levi F, La Vecchia C.n-3 Polyunsaturated fatty acid intake and cancer risk in Italy.Int. J. Cancer, 105; 105: 113-116 (2003).Bosetti C, La Vecchia C, Talamini R, Negri E, Levi F, Fryzek J, McLaughlin JK, Garavello W, Franceschi S.Energy, macronutrients and laryngeal cancer risk.Ann. Oncol., 14: 907-912 (2003).Bidoli E, Bosetti C, La Vecchia C, Levi F, Parpinel M, Talamini R,Negri E, Dal Maso L, Franceschi S.Micronutrients and laryngel cancer risk in Italy and Switzerland:a case-control study.Cancer Causes Control, 14: 477-484 (2003).Levi F, Te V-C, Randimbison L, La Vecchia C.Cancer risk in women with previous breast cancer.Ann. Oncol., 14: 71-73 (2003).La Vecchia C, Bosetti C.Oral contraceptives and cervical cancer: public health implications.Eur. J. Cancer Prev., 12 :1-2 (2003).La Vecchia C, Bosetti C.Calcium channel blockers, verapamil and cancer risk.Eur. J. Cancer, 39: 7-8 (2003).Augustin LSA, Gallus S, Bosetti C, Levi F, Negri E, Franceschi S, Dal Maso L, Jenkins DJA, Cyril WC KendallCWC, La Vecchia C.Glycemic index and glycemic load in endometrial cancer.Int. J. Cancer, 105: 404-407 (2003).La Vecchia C, Franceschi S.Hormone replacement therapy and cancer: an update.Eur.J. Cancer Prev., 12: 3-4 (2003).Bosetti C, Talamini R, Franceschi S, Negri E, Garavello W, La Vecchia C.Aspirin use and cancers of the upper aerodigestive tract.Br. J. Cancer, 88: 672-674 (2003).Gallus S, Bosetti C, Negri E, Talamini E, Montella M, Conti E, Franceschi S, La Vecchia C.Does pizza protect against cancer?Br. J. Cancer, 107: 283-284 (2003).Progetto Menopausa Italia Study Group, Parazzini F, Chatenoud L, Chiaffarino FDeterminants of body mass index in women around menopause attending menopause clinics in ItalyClimacteric, 6: 67-74 (2003).La Vecchia C, Franceschi S, Levi F.Biochemical and therapeutic effects of antioxidants in the treatment of165RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNAlzheimer’s disease, Parkinson’s disease and amyotrophic lateral sclerosis.Current Drug Targets CNS Neurological Disorders 2:95-107 (2003).Pelucchi C, Talamini R, Negri E, Levi F, Conti E, Franceschi S, La Vecchia C.Folate intake and risk of oral and pharyngeal cancer.Ann. Oncol., 14: 1677-1681 (2003).Apolone G, Cavuto S, Torri V, La Vecchia CEffectiveness of adjuvant fluorouracil in elderly colon cancer patients:the internal and external validity of non-randomized research design.J. Clin. Oncol., 21: 1892-1897 (2003).Altieri A, Franceschi S, Farley J, Smith J, La Vecchia C.Epidemiology and aetiology of gestational trophoblastic diseases.Lancet Oncology,4: 670-678 (2003).Borràs JM, Fernandez E, Gonzalez JR, Negri E, Lucchini F, La Vecchia C, Levi F.Lung cancer mortality in Euopean regions (1955-1997).Ann. Oncol., 14: 159-161 (2003).Fernandez E, Gallus S, Bosetti C, Franceschi S, Negri E, La Vecchia C.Hormone replacement therapy and cancer risk: a systematic analysis froma network of case-control studies.Int. J. Cancer, 105: 408-412 (2003).La Vecchia C, Levi F.Lung cancer in Europe. The levelling of an epidemic.Eur. J. Publ. Health, 13: 1-2 (2003).Gallus S, Fernandez E, Towsend J, Schiaffino A, La Vecchia C.Price and consumption of tobacco in Italy over the last three decades.Eur. J. Cancer Prev., 12: 333-337 (2003).La Vecchia C, Franceschi S, Apolone G.Drug distribution and expenditure: The issue of Epoetin in Italy.Eur. J. Publ. Health., 13: 367 (2003).Gallus S, Franceschi S, La Vecchia C.RE:Alcohol, postmenopausal hormones, and breast cancer.Ann. Intern. Med. ,139:601-602 (2003).Levi F, Lucchini F, Negri E, Boyle P, La Vecchia C.Recent trends in mortality from benign prostatic hyperplasia.The Prostate, 56:207-211 (2003)Levi F, Randimbison L, Te V-C, La Vecchia C.Second primary cancers in laryngeal cancer patients.Eur. J. Cancer, 39:265-267 (2003).Levi F, Lucchini F, Boyle P, Negri E, La Vecchia C.Testicular cancer mortality in eastern Europe.Int. J. Cancer., 105:574 (2003).Levi F, Lucchini F, Negri E, La Vecchia C.Pancreatic cancer mortality in Europe: the levelling of an epidemic.Pancreas, 27: 139-142 (2003)Bosetti C, Gallus S, Trichopoulou A, Talamini R, Franceschi S, Negri E,La Vecchia C.Influence of the Mediterranean diet on the risk of cancers of the upperaerodigestive tract.Cancer Epidemiol. Biomark. Prev., 12: 1091-1094 (2003).166RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNLevi F, Randimbison L, Te V-C, La Vecchia.Prognosis of bilateral synchronous breast cancer in Vaud, Switzerland.The Breast, 12:89-91 (2003).Altieri A., Tavani A, Gallus S, Bosetti C, Talamini R, Franceschi S,Levi F, La Vecchia C.RE: Simon et al., Do thyroid disorders increase the risk of breast cancer?Cancer Epidemiol. Biomark. Prev, 12: 684-686 (2003).Levi F, Lucchini F, Negri E, La Vecchia C.The end of the tobacco-related lung cancer epidemic in Europe.J. Natl. Cancer Inst., 95: 631-632 (2003).Levi F, Lucchini F, Negri E, Boyle P, La Vecchia C.Mortality from major cancer sites in the European Union, 1955-1998.Ann. Oncol., 14: 490-495 (2003).Bosetti C, Negri E, Fattore E, La Vecchia C.Occupational exposure to polychlorinated biphenyls and cancer risk.Eur. J. Cancer Prev., 12: 251-255 (2003).Levi F, Te V-C, Randimbison L, La Vecchia C.Trends in testicular cancer incidence in Vaud, Switzerland.Eur. J. Cancer Prev.,12: 347-349 (2003).Bosetti C, La Vecchia C, Lipworth L, McLaughlin JK.Occupational exposure to vinyl chloride and cancer risk: a reviewof the epidemiologic literature.Eur. J. Cancer Prev., 12: 427-430 (2003).Tavani A, Gallus S, La Vecchia C.a-linolenic acid and nonfatal acute myocardial infarction.Circulation,108: e127-e128; author reply e 127-8 (2003).La Vecchia C, Bosetti C.Cancer risk in carbon electrode workers: an overview of epidemiological evidence.Eur. J. Cancer Prev., 12: 431-434 (2003).Tavani A, Bertuzzi M, Talamini R, Gallus S, Parinel M, Franceschi S,Levi F, La Vecchia CCoffee and tea intake and risk of oral, pharyngeal and esophageal cancer.Ann. Oncol., 39: 695-700 (2003).Quinn MJ, d’Onofrio A, Møller B, Black R, Martinez-Garcia C,Møller H, Rahu M, Robertson C, Schouten LJ, La Vecchia C, Boyle P,.Cancer mortality trends in the EU and acceding countries up to 2015.Ann. Oncol., 14: 1148-1152 (2003).Peterson J, Lagiou P, Samoli E, Lagiou A, Katsouyanni K, La Vecchia C,Dwyer J, Trichopoulos D.Flavonoid intake and breast cancer risk: a case-control study in Greece.Br. J. Cancer, 89: 1255-1259 (2003).Franceschi S, Negri E, La Vecchia C.Gender effects in familial cancer.Int. J. Cancer, 106: 812-813 (2003).Levi F, Te V-C, Randimbison L, La Vecchia C.Increase in lobular breast cancer incidence in Switzerland.Int. J. Cancer, 107: 164-165 (2003).Levi F, Lucchini F, negri E, La Vecchia C.The recent decline in gallbladder cancer mortality in Europe.167RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNEur. J. Cancer Prev., 12: 265-267 (2003).Boyle P, Autier P, Bertelink H, Baselga J, Boffetta P, Burn J, Burns HJG, Christensen L, Denise L, Dicato M, DiehlV, Doll R, Franceschi S, Gillis CR, Gray N, Griciute L, Hackshaw A, Kasler M, Kogevinas M, Kvinnsland S, LaVecchia C, Levi F, McVie JG, Maisonneuve P, Martin-Moreno JM, Newton Bishop J, Oleari F, Perrini P, Quinn M,Richards M, Ringbord U, Scully C, Siracka E, Storm H, Tubiana M, Turz T, Veronesi U,Wald N, Weber W,ZaridzeDG, Zatonski W, zue Hausen H.European Code against cancer and scientific justification: third version.Ann. Oncol., 14: 973-1005 (2003).Parente F, Cucino C, Gallus S, Bargiggia S, Greco S, Pastore L, Bianchi Porro GHospital use of acid-suppressive medications and its fall-out on prescribing in general practice: A 1-month surveyAliment. Pharmacol. Ther. 17: 1503-1506 (2003).Coggiola M, Bosio D, Pira E, Piolatto PG, La Vecchia C, Negri E, Michelazzi M, Bacaloni A.An update of a mortality study of talc miners and millers in Italy.Am. J. Ind. Med., 44: 63-69 (2003).Negri E, Bosetti C, Fattore E, La Vecchia C.Environmental exposure to polychlorinated biphenyls (PCBs) and breastcancer: a systematic review of the epidemiological evidence.Eur. J. Cancer Prev., 12: 509-516 (2003).Levi F, Randimbison L, Te V-C, La Vecchia C.Influence of tumor location on breast cancer prognosis.Int. J. Cancer, 107: 683-684 (2003).Parente F, Greco S, Molteni M, Cucino C, Maconi G, Sampietro G M, Danelli P G, Cristaldi M, Bianco R, Gallus S,Bianchi Porro GRole of early ultrasound in detecting inflammatory intestinal disorders and identifying their anatomical locationwithin the bowelAliment. Pharmacol. Ther. 18: 1009-1016 (2003).Levi F, Lucchini F, Negri E, La Vecchia C.Trends in cancer mortality for population aged 15-24 years in Europe.Eur. J. Cancer, 39: 2611-2621 (2003).La Vecchia C.Menopause, hormone therapy and breast cancer.Eur. J. Cancer Prev., 12:437-438 (2003).Bosetti C, La Vecchia C.The risk of cervical cancer increases with increasing duration of oral contraceptive use – meta-analysis. Commentary.Evidence-based Obstet. Gynecol. 5: 181-182 (2003).Preston-Martin S, Franceschi S, Ron E, Negri E.Thyroid cancer pooled analysis from 14 case-control studies: what havewe learned?Cancer Causes Control, 14: 787-789 (2003).Parazzini F, Donati Sarti C, Ognisanti F, Chatenoud L, Chiatera A, Progetto Menopausa Italia Study GroupDoes participation in an epidemiological study improve appropriate prescription of screening mammography forasymptomatic women?Prev. Med.,37: 672-675 (2003).Herrero R, Castellsague X, Pawlita M, Lissowska J, Balaram P, Rajkumar T, Shidhar H, Rose B, Pintos J, FernandezL, Idris A, Sanchez MJ, Nieto A, Talamini R, Tavani A, Bosch FX, Reidel U, Snijders PJF, Meijer CJLM, Viscidi R,Munoz N, Franceschi S.Human papillomavirus and oral cancer. The International agency for Research on Cancer Multicenter Study.J. Natl. Cancer Inst., 95: 1772-1783 (2003).Sartorio A, Lafortuna CL, Marinone PG, Tavani A, La Vecchia C, Bosetti CShort-term effects of two integrated, non-pharmacological body weight reduction programs on coronary heart disease168RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNrisk factors in young obese patients.Diab. Nutr. Metab., 16: 262-265 (2003).Progetto Menopausa Italia Study Group (AOGOI)Determinants of body mass index in women around menopause attending menopause clinics in ItalyClimacteric 6: 67-74; 2003Chiaffarino F, Parazzini F, Lavezzari M, Giambanco V, on behalf of GISIUImpact of urinary incontinence and overactive bladder on quality of lifeEur Urol 43: 535-538; 2003Parazzini F, Chiaffarino F, Lavezzari M, Giambanco V, a nome del Gruppo di Studio VIVARisk factors for stress, urge or mixed urinary incontinence in ItalyBr J Obstet Gynaecol 110: 927-933; 2003Ricci E, Parazzini F, Mirone V, Imbimbo C, Palmeri A, Bortolotti A, Di Cintio E, Landoni M, Lavezzari MCurrent drug use as risk factor for erectile dysfunction: results from an italian epidemiological study.Int J Impotence Res 15: 221-224; 2003Colli E, Artibani W, Goka J, Parazzini F, Wein AJAre urodynamic tests useful tools in the diagnosis of urinary incontinence? A review of the literatureEur Urol 43: 63-69; 2003Progetto Menopausa Italia Study Group (AOGOI)Premature ovarian failure: frequency and risk factors among women attending a network of Menopause Clinics inItalyBr J Obstet Gynaecol 110: 59-63; 2003Guaschino S, Ricci E, Franchi M, Del Frate D, Tibaldi C, De Santo D, Ghezzi F, Benedetto C, De Seta F, Parazzini FTreatment of asymptomatic bacterial vaginosis to prevent preterm delivery: A randomised trialEur J Obstet Gynecol Reprod Biol 110: 149-152; 2003Agnoletto V, Chiaffarino F, Nasta P, Rossi R, Parazzini FReasons for complementary therapy and characteristics of users among HIV infected peopleInt J STD & AIDS 14: 482-486; 2003SELEZIONE PUBBLICAZIONI DIVULGATIVE APPARSENELL'ANNO 2003Franceschi S., La Vecchia C.Terapia ormonale sostitutiva e tumori: un aggiornamento.Epidemiologia e Prevenzione, 27: 7-8 (2003).Franceschi S, Levi F, La Vecchia C.Benefiche inversioni di tendenza.Ricerca Roche, 39: 4-7 (2003).La Vecchia C, Chatenoud L.Epidemiologia descrittiva: un aggiornamento.Aggiornamento Medico, 27: 310-314 (2003).La Vecchia C, Franceschi S.Terapia ormonale sostitutiva in menopausa e neoplasie.Minerva Ginecol., 55: 217-219 (2003).La Vecchia C, Chatenoud L.Epidemiologia analitica: un aggiornamentoAggiornamento Medico, 27: 352-362 (2003)169RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNChiaffarino F, Milani R, Parazzini F, De Besi P, Lavezzari M, a nome del Gruppo di Studio VIVAI fattori di rischio, la qualità della vita e l'approccio diagnostico, terapeutico alla incontinenza urinaria ed alla vescicaiperattiva nella donna: i risultati dello studio VIVARivista di Ostetricia Ginecologica Pratica e Medicina Perinatale XVIII: 6-13; 2003Parazzini F, Chatenoud L, Chiaffarino F, Bortolus RL'epidemiologia dell'aborto spontaneoAtti 79 Congresso SIGO, Catania, 12-15 ottobre 2003, 75-78; 2003Chiaffarino F, Parazzini F, De Besi P, Lavezzari M, medici partecipantiFattori di rischio per la vaginosi battericaCurrent Obstetrics and Gynaecology, Edizione Italiana 12: 39-43; 2003Chiantera A, Curiel P, Donati Sarti C, Graziottin A, Ognissanti F, Parazzini F, Gruppo di Studio IperAOGOIQualità della vita, sessualità nel periodo successivo alla menopausaGynecoAOGOI n.3, 12-17; 2003ALTRE PRODUZIONI EDITORIALI PUBBLICATE NEL CORSO DEL2003La Vecchia C., Tavani A.Studies on cancer in humans in relation to the use of anti-ulcer drugs.In: “Predictive value of rodent forestomach and gastric neuroendocrine tumours in evaluating carcinogenic tisks ohumans”.Lyon, IARC Technical Publ., No. 39: 99-107 (2003).Prechtel K, Levi F, La Vecchia C, Sasco A, Cutuli B, Pisni P, Hoefler H,Prechtel D, Devilee P.Tumours of the male breast.In: WHO Classification of Tumours of the Breast and female Genital:“Pathology and Genetics of Tumours of the Breast an Female Genital Organs”,Tavassoli FA, Devilee P, eds. Lyon: IARC Press, 2003, pp. 110-112.La Vecchia C.Terapia ormonale sostitutiva in menopausa. Un aggiornamento.In: Menopausa 2003. CIC, Roma, 2003, pp. 99-101.La Vecchia C.Terapia ormonale sostitutiva in menopausa; un aggiornamento.In: Menopausa nel 3° Millennio, Atti IV° Week-end Clinico della SocietàItaliana della Riproduzione, Firenze, 10/11 Gennaio, 2003, pp.40-41.Parazzini F, Chatenoud L, Chiaffarino F, Bortolus RL'epidemiologia dell'aborto spontaneoIn: 79 Congresso Società Italiana di Ginecologia e Ostetricia, Catania 12-15 ottobre, Relazioni. CIC, Roma; 2003 :75-77.Negri E, Bosetti C, Fattore E, La Vecchia CEsposizione ambientale ai bifenili policlorurati (PCB) e tumore della mammella: una revisione sistematicadell'evidenza epidemiologicaIn: Ingegneria e chimica per l'ambiente, Atti 1 Convegno, Milano, 26-27 novembre, 2003: 267-282.Bosetti C, Negri E, Fattore E, La Vecchia C.Esposizione occupazionale ai Bifenili Policlorurati e rischio di cancroIn: Ingegneria e chimica per l'ambiente, Atti 1 Convegno, Milano, 26-27 novembre, 2003: 23-31.170RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNATTIVITA' DI RICERCARaccolta e organizzazione dei datiLa raccolta dati di casi di tumori di mammella, colonretto, prostata e relativi controlli ècontinuata come previsto nella rete di ospedali nell’area della Grande Milano, come è peraltroproseguita tutta l’attività di gestione, verifica, input e analisi dei dati.Relazione tra patologie e trattamenti della tiroide e tumore della mammellaOsservazioni cliniche e di laboratorio suggeriscono da tempo una possibile associazione tra unastoria di patologie della tiroide o trattamenti per tali patologie e rischio di tumore allamammella. Ad oggi l’evidenza epidemiologica a riguardo è comunque inconsistente e limitatadall’esiguo numero di studi che hanno affrontato il problema e dalla limitata specificitàdell’informazione raccolta su disturbi specifici della tiroide.Abbiamo quindi analizzato l’associazione fra una storia di disturbi benigni alla tiroide e ilrischio di tumore alla mammella, sfruttando i dati provenienti da due studi caso-controllo su untotale di 6.315 donne con tumore della mammella e 6.038 controlli. Le patologie benigneincludevano adenomi della tiroide (82 casi, 114 controlli), gozzo (45 casi, 53 controlli),ipertiroidismo (72 casi, 69 controlli), ipotiroidismo (24 casi, 43 controlli) e disturbi della tiroidenon specificati (41 casi, 30 controlli). Il rischio di tumore alla mammella è risultato essere di 0,7per una storia di adenomi della tiroide e di 0,6 per l’ipotiroidismo; l’ipertiroidismo e il gozzonon sono risultati essere associati al rischio di tumore, mentre il rischio per le patologie dellatiroide non specificate era di 1,5. Complessivamente il rischio di aver avuto un qualunquedisturbo della tiroide non è risultato essere materialmente associato al rischio di tumore dellamammella, e in generale nessuna delle associazioni trovate era statisticamente significativa. Leanalisi negli strati di parità e menopausa hanno evidenziato una debole associazione protettivaper le donne con storia di ipotiroidismo che avevano avuto almeno un figlio (RR = 0,5) e per ledonne in pre-menopausa con storia di adenomi tiroidei (RR = 0,4, basati rispettivamente su 17 e20 casi).In conclusione, questo studio, sfruttando una banca dati di singolare ampiezza, ha aggiuntoevidenza epidemiologica che globalmente ci consente di escludere ogni apprezzabileassociazione tra i disturbi benigni della tiroide e il rischio di tumore della mammella.Terapie ormonali sostitutive in menopausa e rischio di cancroIn considerazione dell’attualità dell’argomento, è stata rivista sistematicamente la relazione traterapie ormonali sostitutive (TOS) e tumori, in particolare della mammella. La stima piùattendibile dell’influenza della menopausa sul tumore mammario proviene da una ri-analisicollaborativa dei dati originali derivanti da 51 studi epidemiologici, che comprendevano più di52.000 donne con tumore mammario e 108.000 donne non affette da questa neoplasia (inclusi inostri dati). L’aumento di rischio era del 2,8% per ogni anno in più di età alla menopausa. Inriferimento alle TOS, nello stesso studio è stato riportato un moderato aumento di rischio ditumore mammario nelle utilizzatrici correnti e recenti. Il rischio aumentava del 2,3% per anno diuso, ma diminuiva dopo la cessazione delle TOS. L’informazione più importante sul rischio dicancro nelle utilizzatrici di TOS combinate (estrogeni e progestogeni) proviene dalla “Women’sHealth Initiative” (WHI), uno studio controllato randomizzato di prevenzione primaria cheincludeva 8.506 donne, tra i 50 e 70 anni di età, trattate con TOS combinate e 8.102 donne nonsottoposte al trattamento. In riferimento al rischio di tumore, sono attualmente disponibili datisull’incidenza delle neoplasie mammarie, endometriali e intestinali. Per il tumore mammario,nel WHI non si osservava alcuna differenza di rischio durante i primi 4 anni dall’inizio deltrattamento, ma un eccesso di rischio si rendeva evidente con il prolungamento dell’utilizzo.Complessivamente, a un follow-up di 7 anni, erano stati osservati 166 casi di tumore mammario171RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNnel gruppo trattato con TOS, contro 124 nel gruppo trattato con placebo (RR = 1,24, 95% CI:1,03-1,66). Una riduzione di rischio appariva evidente, invece, per il cancro colorettale. Sono,inoltre, disponibili i dati provenienti da altri due studi randomizzati più piccoli, uno (Heart andEstrogen/Progestagen Replacement Study, HERS II) sull’uso di TOS combinata(estrogeni/progestinici), e l’altro (Women’s Estrogen for Stroke Trial, WEST) sull’uso di TOScon solo estrogeni. In un’analisi combinata dei 3 studi randomizzati, sono stati registrati 205casi di cancro della mammella nel gruppo di donne che utilizzava TOS, rispetto a 154 nelgruppo trattato con placebo (RR combinato = 1,27, 95% CI: 1,03-1,56).Abbiamo inoltre analizzato i dati provenienti da due studi caso-controllo italiani per valutarel’effetto combinato di consumo di alcol e TOS in menopausa in relazione al rischio di tumoredella mammella. In totale, gli studi comprendevano 3.573 donne in menopausa con tumore dellamammella e 3.572 controlli in menopausa. L’odds ratio (OR) per le bevitrici di 3 o più bicchieridi bevande alcoliche al giorno, rispetto alle non bevitrici, era 1,62. Rispetto a coloro che nonavevano mai utilizzato TOS in menopausa, le utilizzatrici avevano un OR di 1,48. Le donneesposte a entrambi i fattori avevano un OR di 2,25. Questi risultati forniscono ulteriori evidenzedi un sostanziale eccesso di rischio per il tumore della mammella nelle donne bevitrici di alcol eche usano terapie post-menopausali.Per ottenere informazioni complete e quantitative sui benefici e rischi dell’uso di TOS inmenopausa per svariati tipi di tumori, abbiamo esaminato la relazione tra uso di terapiesostitutive e il rischio di vari tumori in donne di età compresa tra i 45 e i 79 anni, usando datiprovenienti da una serie di studi caso-controllo condotti in Italia tra il 1985 e il 2000. L’insiemecompleto dei dati conteneva i seguenti tipi di tumori: cavo orale, faringe, laringe e esofago (253casi), stomaco (258 casi), colon (886 casi), retto (488 casi), fegato (105 casi), colecisti (31 casi),pancreas (122 casi), mammella (4,713 casi), endometrio (704 casi), ovaio (1,614 casi), vescica(106 casi), rene (102 casi), tiroide (26 casi), linfoma di Hodgkin (26 casi), linfoma non-Hodgkin(145 casi), mieloma (65 casi), e sarcoma (78 casi). Il gruppo dei controlli comprendeva 6976donne ammesse negli stessi ospedali dei casi per disturbi acuti non correlati a tumori. E’ statatrovata una associazione inversa, statisticamente significativa tra l’uso di terapie ormonalisostitutive in menopausa e il rischio di tumore di colon (RR=0.7), retto (RR=0.5), e fegato(RR=0.2). Un significativo eccesso di rischio e’ stato invece riscontrato per i tumori di colecisti(RR=3.2), mammella (RR=1.1), endometrio (RR=3.0), e vescica (RR=2.0).Storia familiare di vari tumori e rischio di cancro dell’ovaioAbbiamo esaminato i dati dello studio caso-controllo sul carcinoma dell’ovaio per valutare ilruolo della storia familiare di vari tumori in relazione al rischio di cancro ovarico. L’indagine èstata condotta su 1031 casi e 2411 controlli e ha riguardato solo i parenti di primo grado(genitori, fratelli e sorelle, figli) dei soggetti intervistati. Complessivamente, 27 casi e 9 controllihanno riferito di avere avuto parenti di primo grado con tumore dell’ovaio, con corrispondenterischio di 7 volte superiore a quello dei soggetti con storia negativa. Il rischio era ancora più alto(23 volte) limitando le analisi alle donne minori di 50 anni. Rischi elevati di carcinoma ovaricosono stati rilevati anche per i soggetti con storia familiare positiva di tumore della mammella,dell’intestino, dello stomaco, e di tutti i siti congiuntamente (OR = 1.6), confermandol’esistenza di una suscettibilità genetica trasmessa di generazione in generazione.Relazione tra dieta e cisti ovariche benigneAbbiamo esaminato i dati di uno studio caso-controllo riguardante le cisti ovariche benigne pervalutare il ruolo di alcuni cibi selezionati nel rischio di questa patologia. Lo studio includeva225 donne con cisti ovariche sieromucinose istologicamente confermate, e 450 controlli.L’analisi ha evidenziato un maggior consumo di carni rosse e formaggio nelle donne con cistisieromucinose, mentre un alto consumo di vegetali verdi ha mostrato avere un effetto protettivo.172RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNFumo e rischio di tumori dell’alto apparato respiratorio e digerenteSono stati analizzati i dati di due studi caso-controllo condotti in Italia e in Svizzera tra il 1992 eil 1999 volti a valutare e meglio quantificare i principali fattori di rischio dei tumori dell’altoapparato digerente, inclusi i tumori del cavo orale e faringe. Il database totale includeva 749 casicon tumore del cavo orale o faringe e 1770 controlli, e 395 casi con tumore dell’esofago e 1066controlli. In particolare è stato studiato il ruolo del catrame di sigaretta sul rischio dei tumorisuddetti. Nei Paesi sviluppati il fumo di sigaretta è uno dei principali fattori di rischio per itumori del cavo orale, faringe e esofago. Sono invece disponibili scarse informazioni sul ruolodel tipo o del contenuto di catrame delle sigarette per quanto concerne il rischio di tumoridell’alto tratto digerente. L’argomento risulta di particolare interesse, dal momento che ilcontenuto di catrame nelle sigarette è calato in maniera regolare negli ultimi decenni.Per i tumori del cavo orale e faringe, considerando la marca di sigarette fumate per il tempo piùlungo, i rischi relativi per i fumatori correnti, rispetto a coloro che non avevano mai fumato,erano 6.1 per sigarette con un contenuto di catrame minore di 20 mg, e 9.8 per contenutomaggiore o uguale a 20 mg. I corrispondenti rischi per il tumore dell’esofago erano 4.8 e 5.4rispettivamente. Per la marca di sigarette fumata negli ultimi sei mesi, i rischi per i fumatori disigarette con un contenuto di catrame maggiore o uguale a 10 mg, rispetto ai fumatori disigarette con contenuti di catrame inferiore, erano 1.9 per il tumore del cavo orale e faringe, e1.8 per il tumore dell’esofago.Questi risultati confermano la relazione tra contenuto di catrame delle sigarette e tumoridell’alto tratto digerente, e forniscono informazioni innovative sulle sigarette con minorcontenuto di catrame, che sono associate ad un rischio più basso di tumori del tratto digerentesuperiore, se confrontate con le sigarette ad alto contenuto. Comunque, un significativo eccessodi rischio per questi tumori è stato osservato anche per categorie di catrame più basse,confermando inequivocabilmente che lo smettere di fumare risulta essere la prevenzioneprimaria per i tumori dell’alto apparato digerente.Aspirina e rischio di tumori dell’alto apparato respiratorio e digerenteSempre considerando il rischio di tumori del cavo orale e faringe, esofago e laringe, è statostudiato il ruolo di un uso regolare di aspirina su un totale di circa 1.000 casi e 1.800 controlliidentificati in diverse aree del nord Italia. Tale studio ha evidenziato che il rischio di questitumori era ridotto di circa il 60% in coloro che avevano utilizzato aspirina almeno una volta allasettimana per almeno 5 anni, confermando un potenziale ruolo dell’aspirina nella prevenzionedei tumori già evidenziato per altre neoplasie.Vari aspetti della dieta e rischio di tumori dell’alto apparato respiratorio edigerenteNei due studi caso-controllo condotti in Italia e Svizzera, è stata osservata un’associazioneinversa tra l’assunzione di caffè e il rischio dei tumori considerati (l’or era 0,6 per entrambi itumori nei bevitori di 3 o più, rispetto a 1 o meno, caffè al giorno). Tè e caffè decaffeinato nonsembravano avere un ruolo nella carcinogenesi del cavo orale e dell’esofago.L’assunzione di folati è stata inversamente associata in studi precedenti al rischio di svilupparevari tipi di tumore, in particolare della mammella e del colon-retto. Nello studio caso-controllosui tumori del cavo orale e della faringe abbiamo quindi esaminato quale tipo di relazioneintercorre con l’assunzione di folati. Rispetto a un livello di consumo basso, abbiamo riscontratoun effetto protettivo dei folati sia per un livello di consumo intermedio (RR = 0,7), sia per unlivello di consumo alto (RR = 0,5). I folati sembrano dunque proteggere anche dal rischio ditumore del cavo orale e della faringe.In un’analisi combinata di tre studi caso-controllo sui tumori del cavo orale e faringe, esofago elaringe è stato valutato il ruolo della dieta Mediterranea, attraverso uno score che ne riassumevale principali caratteristiche. Per tutti i tumori considerati si è osservato un rischio ridotto173RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNall’aumentare dei livelli di score, con OR compresi tra 0,2 e 0,4, indicando perciò un possibileeffetto benefico della dieta Mediterranea sul rischio di questi tumori.Analizzando i dati provenienti dagli stessi tre studi sui tumori dell’alto apparato digerente, èstata trovata un’associazione diretta tra indice e carica glicemica e rischio di tumore dell’altoapparato digerente con un significativo OR per il più alto quintile di assunzione di 1,5 perl’indice, e di 1,8 per la carica glicemica.Il ruolo di vari nutrienti è stato valutato sul tumore della laringe in uno studio caso-controllocondotto in Italia e Svizzera tra il 1992 e il 2000, su un totale di 527 casi e 1.297 controlli. I casidi tumore della laringe avevano un più elevato consumo calorico totale, riportavano un consumopiù elevato di proteine animali (OR=1,62 per soggetti nell’ultimo quintile di consumo, rispettoal più basso) e di colesterolo (OR=1,76). Una significativa associazione inversa è stata osservataper vari micronutrienti, tra cui vitamina C (OR=0,2), vitamina E (OR=0,4), a-carotene (OR=0,3)b-carotene (OR=0,2) e acido folico (OR=0,4), mentre zinco (OR=1,5) e vitamina D (OR=1,8)erano significativamente e direttamente associati al rischio di tumore della laringe.Il rischio di tumore della laringe è stato indagato anche in relazione all’assunzione di fibrealimentari nella dieta. Il rischio relativo per la categoria con la più elevata ingestione di fibrealimentari era 0.3 (significativo) rispetto alla categoria di consumo più bassa. I RR erano 0.3anche considerando le sottocategorie delle fibre – ovvero le fibre solubili e insolubili – mentredifferivano considerando le loro origini alimentari: i RR erano 0.2 per il livello più alto diconsumo di fibra proveniente da verdura, 0.5 da frutta e 1.1 da cereali. Le fibre alimentaridovrebbero quindi essere considerate uno dei componenti benefici di frutta e verdura neiconfronti del rischio di tumore della laringe.Fattori di rischio di cancro della laringe nelle donneIl ruolo di diversi fattori sul rischio di tumore della laringe è stato analizzato nelle sole donne(68 casi e 340 controlli). Il fumo di sigarette era fortemente associato al rischio di questo tumore(RR=46.0 nelle fumatrici rispetto alle non); il rischio associato al consumo di alcool era piùlimitato, ma comunque dell’ordine di 4-volte delle forti bevitrici rispetto alle non bevitrici. Ilruolo protettivo delle verdure, della frutta e dell’olio di oliva è stato confermato anche nelle soledonne, mentre i fattori riproduttivi e mestruali non sono consistentemente associati al rischio ditumore della laringe.Storia di colelitiasi e rischio di tumore del pancreasUno studio caso-controllo condotto su 362 casi di tumore del pancreas e 1.552 controlli haconfermato l’assenza di un’associazione significativa tra storia di colelitiasi e rischio di tumoredel pancreas, con OR di 1,03 per i soggetti che avevano avuto una storia di calcoli alla colecisti(OR=1,33 per diagnosi

IRFMNIl ruolo dell’indice (o carico) glicemico è stato considerato in relazione al tumore dell’ovaio.Un’associazione diretta è stata osservata nei soggetti nel terzile più elevato di indice e caricoglicemico, sia nelle donne in pre- che in post-menopausa. Questo studio supporta perciòl’ipotesi di un’associazione tra il tipo e la quantità di carboidrati consumati e il rischio di tumoredell’ovaio, e un possibile ruolo dell’iperinsulinemia/ resistenza all’insulina nello sviluppo diquesta neoplasia.Inoltre, abbiamo studiato l’associazione con l’indice glicemico e la carica glicemica anche inrelazione al rischio di tumore dell’endometrio, utilizzando i dati provenienti da due studiospedalieri caso-controllo, condotti tra il 1988 e il 1998 in Italia e in Svizzera, includenti untotale di 410 donne con tumore dell’endometrio e 753 controlli ospedalieri. I rischi relativimultivariati di tumore dell’endometrio, per il più alto verso il più basso quintile di indiceglicemico e di carica glicemica, erano rispettivamente uguali a 2.1 e 2.7. Le associazioni eranopiù forti nelle donne anziane, in coloro che avevano un indice di massa corporea maggiore enelle utilizzatrici di terapie ormonali sostitutive in menopausa. Il nostro studio supporta l’ipotesidi una associazione diretta tra l’indice glicemico e il rischio di tumore dell’endometrio.Consumo di pizza e rischio di cancroLa pizza è uno dei più noti cibi italiani, e la più usata insegna commerciale in tutto il mondo.D’altra parte, in letteratura pochi studi epidemiologici hanno studiato il ruolo della pizza sulrischio di tumori. Utilizzando quindi i dati provenienti da vari studi caso-controllo condotti inItalia tra il 1991 e il 2000, abbiamo analizzato le associazioni tra il consumo di pizza e i tumoridel cavo orale e faringe (598 casi), esofago (304 casi), laringe (460 casi), colon (1225 casi) eretto (728 casi). I controlli erano 4999 pazienti ammessi negli stessi ospedali dei casi perdisturbi acuti, non correlati a tumori. I rischi relativi per i consumatori abituali di pizza, rispettoai non consumatori, erano 0.66 per i tumori del cavo orale e faringe, 0.41 per l’esofago, 0.82 perla laringe, 0.74 per il colon e 0.93 per il retto. La pizza appare dunque essere un indicatorefavorevole del rischio dei tumori dell’apparato digerente.Consumo di acidi grassi n-3 dal pesce e rischio di cancroE’ stato possibile ricavare, con l’uso della banca dati di composizione alimentare, il datorelativo all’assunzione dei grassi polinsaturi omega-3 derivanti dal consumo di pesce, edesaminarne la relazione con il rischio di cancro. I tumori considerati nell’analisi sono stati, oltrea quelli di mammella e colonretto, quelli di cavo orale, faringe, esofago e ovaio. Tutti i tumoriesaminati sono risultati inversamente associati all’assunzione di omega-3, con riduzioni delrischio varianti, per il livello di assunzione più elevato, tra il 20% e il 50%. Inoltre, è emersoche sarebbero sufficienti piccoli aumenti nelle quantità di omega-3, del livello di 1g(corrispondente a circa una porzione di pesce) a settimana, per diminuire significativamente ilrischio di tumore ai siti considerati. In particolare, per i carcinomi mammari e intestinali,l’abbassamento del rischio sarebbe del 10%.Consumo di patate fritte e rischio di cancroRisale ad aprile 2002 la notizia che alcuni cibi, cucinati a temperature elevate, presenterebberotracce di acrilammide, una sostanza considerata probabilmente cancerogena per l’uomo. Lepatate fritte sono il cibo in cui sono stati rilevati i contenuti più alti di acrilammide. Abbiamoquindi analizzato, nei nostri studi sui tumori di mammella, colonretto, cavo orale, faringe,esofago, laringe e ovaio, la relazione che intercorre tra consumo di patate fritte o arrostite erischio di cancro. Il risultato è stato rassicurante. Ai livelli di consumo, relativamente bassi,della nostra popolazione, non abbiamo riscontrato aumenti di rischio significativi per nessunodei tumori considerati.175RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNAggiornamento del Codice Europeo Contro il CancroIl nostro gruppo di lavoro ha collaborato alla stesura della Terza Versione del Codice Europeocontro il Cancro e del relativo razionale scientifico. Per ciò che concerne il rischio di tumore dimammella e colonretto, i punti di principale interesse sono il 2) evitare l’obesità, il 3) svolgereattività fisica, il 4) aumentare il consumo quotidiano di frutta e verdura, e limitare quello di cibidi origine animale, il 5) moderare il consumo di alcool, e sigarette, il 9) le donne oltre 50 annidovrebbero partecipare a programmi di screening mammografico e il 10) gli uomini e le donnesopra i 50 anni dovrebbero partecipare a programmi di screening per il tumore del colonretto. Dispecifico interesse nelle “giustificazioni scientifiche” è anche la discussione relativa agli ormoniesogeni.Monitoraggio e indagine della mortalità per tumori in EuropaNegli anni passati il nostro gruppo ha costruito una banca dati contenente, in formato standard, idati di mortalità per numerose sedi tumorali selezionate e altre maggiori cause di morte per iPaesi europei e alcuni Paesi extra-europei. L’obiettivo principale di questo progetto è dimantenere, aggiornare e valorizzare il sistema integrato di analisi e valutazione delle statistichedi mortalità in Europa e altre aree geografiche creato dal nostro gruppo. In particolare, nel 2003sono stati aggiornati al 2000 gli andamenti della mortalità per tumore nell’Unione Europea, e lecause del declino nella mortalità per tumore sono state discusse. Tra il 1989 e il 2000 si èosservata una riduzione della mortalità per tumore, corrispondente ad aver evitato circa 90.000decessi. Come negli anni passati, il monitoraggio della mortalità per tumori in Italia ècontinuato con i nuovi dati resi disponibili dall’Istituto Centrale di Statistica (ISTAT). Gliandamenti temporali delle certificazioni di morte per malattia di Hodgkin e linfomi nonHodgkin in Europa e, a scopi comparativi, negli Stati Uniti e Giappone, sono stati analizzati ecommentati. Le continue diminuzioni nella mortalità per tumore dello stomaco nei diversi Paesieuropei sono state monitorate. Inoltre sono stati analizzati gli andamenti globali e età-specificidella mortalità per tumore primario del fegato in Italia. Infine, gli andamenti della mortalità perasma e patologie cardio- e cerebrovascolari sono stati analizzati nel quadro della sorveglianzasulle abitudini al fumo e morbilità e mortalità ad esso correlata in Italia e, più generalmente, inEuropa, che è sempre stata una priorità per il nostro gruppo.Prevalenza di fumo in ItaliaDurante l’anno 2003 sono stati studiati dati provenienti da uno studio di prevalenza peranalizzare e aggiornare la situazione del fumo in Italia. L’indagine è stata condotta dalla DOXAnel 2003 su più di 3.500 uomini e donne rappresentativi della intera popolazione adulta italiana(≥15 anni). E’ stato osservato che il 27.6% della popolazione italiana era fumatore corrente disigarette nel 2003. Rispetto agli anni precedenti, nessun particolare cambiamento è stato trovatonella prevalenza totale di fumatori. Comunque, nei giovani (da 15 a 24 anni), è stata osservataun’apprezzabile diminuzione dal 37.6% nel 2001 al 32.6% nel 2003 per i maschi, e dal 30.4% al20.7% per le femmine.In un progetto finanziato dalla Unione Europea è stato inoltre considerato il ruolo del prezzodelle sigarette sui consumi in Italia nel periodo 1970-2001. E’ stato infatti accertato che levariazioni di prezzo di sigarette hanno avuto un apprezzabile impatto sul consumo di tabacco inmolti paesi. In Italia, un incremento dell’1% del prezzo delle sigarette ha portato a uno 0.30% didiminuzione nella prevalenza di fumatori e a un decremento dello 0.43% nel consumo disigarette, indicando che anche in Italia gli aspetti economici possono avere importantiimplicazioni di salute pubblica nel controllo del tabagismo.Relazione tra assunzione di caffè e diverse malattieAbbiamo esaminato la relazione tra consumo di caffè, caffè decaffeinato e tè e l’incidenza di176RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNinfarto miocardico acuto (IMA), tumori a siti selezionati e selezionate complicazioni dellagravidanza in studi caso-controllo condotti e ancora in corso in varie parti d’Italia. Il consumo dicaffè: aumentava il rischio di IMA non fatale per consumi elevati, cioè più di 3 tazze al giorno.La relazione era simile in uomini e donne, diabetici e non, e in soggetti che avevano o no unastoria familiare di IMA; era inversamente associato al rischio di tumore orale/faringeo edesofageo (OR 0.6, significativo per >3 tazze al giorno, per tutti e due i siti tumorali); non eraassociato al rischio di tumore della prostata, di iperplasia prostatica benigna, di melanoma e dilinfoma non-Hodgkin; aumentava il rischio di aborto spontaneo, ma non era correlato al rischiodi ritardo di crescita intrauterina e di basso peso alla nascita.Studio sull’infarto miocardico acutoAbbiamo condotto uno studio caso-controllo per stabilire il rischio di infarto miocardico acuto(IMA) non fatale nella popolazione italiana. Nel 2003 abbiamo raccolto informazioni su altrisoggetti e analizzato il ruolo di variabili selezionate.Il consumo di alcol durante i pasti era inversamente correlato al rischio di IMA (0.50,significativo, per ≥3 bicchieri al giorno), mentre nessuna associazione è emersa per soggetti chebevevano alcol anche fuori pasto (OR 0.98).Abbiamo trovato un’associazione inversa col consumo di pizza, essendo l’or 0.78 per unconsumo occasionale, 0.62 (significativo) per un consumo regolare e 0.44 (significativo) per unconsumo frequente.I folati e la vitamina B6 erano inversamente correlati al rischio di IMA: rispetto ai pazienti nelpiù basso terzile di consumo, l’or per quelli nel più alto terzile era 0.56 (significativo) per ifolati e 0.34 (significativo) per la vitamina B6. Rispetto ai soggetti con un basso consumo dientrambi i micronutrienti, l’or era 0.29 per quelli con un alto consumo di entrambi. Rispetto aisoggetti che riportavano nessun consumo o un consumo occasionale di alcol e un bassoconsumo di metionina e folati, l’or era 0.28 nei bevitori regolari di alcol con un alto consumo dimetionina e di folati. Il valore corrispondente per la vitamina B6 era 0.25.Rispetto al più basso quintile di consumo (1 porzione alla settimana), vegetali (0.7 per ≥10 porzioni alla settimana) e frutta (OR 0.6 per ≥ 14 porzioni alla settimana), mentre la carne, icibi integrali e i prodotti caseari non erano associati. L’effetto del fumo era maggiore in177RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNcombinazione con diabete (OR 27.7), ipertensione (OR 15.7), iperlipidemia (OR 6.3), storiafamiliare di IMA (OR 8.7) e forte consumo di caffè (OR 5.7). Evitare il fumo e un aumento diconsumo di pesce, vegetali e frutta ridurrebbe il rischio di infarto di circa il 50%.Non abbiamo trovato alcuna relazione tra rischio di IMA e gli aborti spontanei (OR 1.0 per >1rispetto a nessuno) e gli aborti indotti (OR 0.7).Bifenili policlorurati (pcb) e rischio di tumoreIn relazione al tumore della mammella, abbiamo condotto una revisione quantitativadell’evidenza epidemiologica su esposizione ambientale a bifenili policlorurati (PCB). Lamaggioranza degli studi, sia prospettici che retrospettivi, non trova una associazione traconcentrazioni totali di PCB e rischio di cancro della mammella. Non è stata trovataun’associazione né per i congeneri del gruppo I (potenzialmente estrogenici), né per quelli delgruppo III (biologicamente persistenti, induttori del citocromo P450 tipo fenobarbital), secondola classificazione proposta da Wolff e Toniolo, mentre i risultati erano meno concordi per icongeneri del gruppo II (potenzialmente antiestrogenici e immunotossici, “dioxin-like”). Duestudi riportano un rischio di tumore della mammella post-menopausale tre volte più elevato indonne con una sostituzione di basi A2455G nell’esone 7 del gene polimorfico CYP1A1 ( unmembro della famiglia del citocromo P450) e alti livelli di PCB, in confronto a donne con duealleli “wild-type” e bassi livelli di PCB, basato però su un basso numero di casi. Quindi,l’evidenza epidemiologica non supporta l’ipotesi di un’associazione tra esposizione ambientalea PCB in età adulta nella popolazione generale e rischio di tumore della mammella, anche sepermangono incertezze per alcuni sottogruppi selezionati di donne o per alcuni congenerispecifici.Inoltre, la revisione dei principali studi di coorte su lavoratori occupazionalmente esposti a PCBnon ha mostrato alcun eccesso di mortalità per tutti i tumori, con 573 decessi osservati, rispettoa 630,4 attesi (rischio standardizzato di mortalità, RSM=0,91). Tra i tumori potenzialmenteassociati all’esposizione a PCB, vi erano complessivamente 12 morti per tumore del fegato,rispetto a 9.5 attesi (RSM=1,26). Nessun eccesso è stato invece osservato per tumori dellamammella (40 osservati, rispetto 47.4 attesi, RSM=0,84) e del sistema linfatico ed emopoietico(51 osservati, rispetto a 53,2 attesi, RSM=0,96).Valutazione tossicologica della funzione immunitaria di lavoratori dipesticidi (EUROPIT)Questo progetto, condotto in collaborazione con altri quattro Paesi Europei, consiste in unostudio epidemiologico “cross- sectional” su soggetti occupazionalmente esposti a pesticidi(composti organofosforici e ditiocarbamati) e su un gruppo adeguato di controlli, condotto alfine di stimare gli effetti immunitari conseguenti a un’esposizione cronica a questi composti.Tra gli obiettivi del progetto vi è la misurazione dell’esposizione dei lavoratori in diversecondizioni occupazionali utilizzando indicatori biologici e analisi chimiche dei pesticidi e/o deiloro metaboliti; la valutazione dell’effetto dei ditiocarbamati e dei pesticidi organofosforici edell’esposizione a un mix di composti organofosforici e di ditiocarbamati, sul sistemaimmunitario umano, tra cui la risposta immunitaria agli antigeni; la determinazione di unarelazione dose/risposta degli effetti osservati; e la valutazione dei polimorfismi genetici peralcuni enzimi di detossificazione e per i fattori immunologici, e il loro effetto sui marcatoribiologici di esposizione e i parametri del sistema immunitario. Al fine di stimare l’effetto deipesticidi sul sistema immunitario, i dati immunitari dei soggetti esposti saranno comparati conquelli ottenuti nei controlli. Ulteriori confronti saranno fatti con i risultati immunologici ottenutidagli stessi soggetti esposti prima dell’esposizione, e dopo un appropriato periodo senza alcunaesposizione al composto studiato.178RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNDermato-epidemiologia: il progetto "sole si / sole no - GISED"La dermato-epidemiologia è presente nel nostro laboratorio dall’inizio degli anni 90, fruttoprincipalmente di un’intensa e proficua collaborazione con il “Gruppo Italiano per gli StudiEpidemiologici in Dermatologia” (GISED, diretto dal Dr. Luigi Naldi).Nel corso del 2003 sono stati analizzati i dati relativi alla fase pilota dello studio “Sole Si/SoleNo”. Si tratta di uno studio randomizzato, sull’efficacia di un intervento educativo riguardantela corretta esposizione al sole, rivolto a bambini che frequentano la scuola elementare (II e III).Sono oggetto di valutazione: le abitudini di esposizione solare degli alunni; il grado diconoscenza sia dei bambini che dei genitori sugli effetti del sole sulla pelle; il numero di nevimelanocitici sugli arti superiori. Tutte le valutazioni verranno fatte sia prima dell’intervento chea un anno dalla conclusione dell’intervento stesso.La fase pilota (Marzo-Giugno 2002 (basale)- Marzo-Giugno 2003 (follow-up)), ha coinvoltocirca la metà del campione totale previsto (intervento attivo 2116 bambini/ 2117 controlli), conetà media otto anni. Tutti i parametri hanno mostrato distribuzioni sovrapponibili nei due gruppidi randomizzazione. Il 12% del campione (508 bambini), dichiara di aver avuto almeno unarrossamento con bruciore lo scorso anno, ma solo il 42% di questi bambini ha riportatoun’intensa esposizione solare. Di questi 508 bambini, il 79% circa usava regolarmente cremeschermanti o maglietta. I risultati di questa fase pilota indicano un tasso di ustioni solari piùbasso dell’atteso e un’attenzione maggiore dei bambini e dei genitori nei confronti di unacorretta esposizione al sole.La rispondenza al follow-up ha superato il 90%. Nel corso dell’anno scolastico 2002-2003, èstata inoltre avviata la parte allargata dello studio, che ha coinvolto 8 centri per un totale di 6700bambini (3300 randomizzati ad intervento attivo e 3400 a non intervento).Il progetto “Sole Si/Sole No” si concluderà nel corso dell’anno scolastico 2003-2004 erappresenta uno dei pochi tentativi di valutazione controllata di un intervento educativo inquesto settore nel nostro Paese.Dermato-epidemiologia: il progetto PRAKTISDal 2002, sempre in collaborazione con il GISED, è continuata la raccolta dati dello studio“PRAKTIS” sulla cheratosi attinica, patologia che oltre a essere associata a una considerevolemorbilità, è fortemente associata al rischio di basaliomi e di carcinoma squamo-cellulare dellapelle. Questo studio si articola in due fasi, la prima, svoltasi nel corso del 2003, riguardava lavalidazione di uno strumento sufficientemente sensibile e specifico per la diagnosi differenzialedella cheratosi attinica rispetto ad altre patologie dermatologiche partendo da 10 criteriselezionati da un gruppo di esperti. La seconda fase, invece, iniziata contemporaneamente allostudio di validazione stimerà la prevalenza della cheratosi attinica nella popolazione italiana, aoggi sconosciuta. Questo studio potrà apportare nuovi elementi nel campo della prevenzione deitumori della pelle (non-melanocitici).Epidemiologia delle patologie auto-immuniNel corso dell’anno 2003, è continuata la collaborazione con il Prof. Jean-François Bach,dell’istituto Nazionale per la Salute e la Ricerca Medica francese (INSERM) presso l’Ospedale“Necker-Enfants Malades” di Parigi. Il Prof. Bach è uno dei più importanti referentiinternazionali per quanto riguarda l’immunologia clinica, con un ampio spettro di studi clinicicontrollati e non, condotti da più di quindici anni nel settore della patologia auto-immune. Lacollaborazione si basa sulla possibilità di vagliare un’ipotesi sperimentale (immunologica)attraverso studi epidemiologici.L’ipotesi che si vorrebbe vagliare porta il nome di “Ipotesi Igienista”, e nasce dallaconstatazione che al generale declino delle infezioni nei Paesi sviluppati, dovuto all’aumentodegli standard igienici, corrisponde un aumento di certe patologie immuno-dipendenti quali il179RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNdiabete e le patologie associate all’espressione dell’atopia (asma, rinite e dermatite atopica).Una meta-analisi di dati pubblicati è attualmente in corso con l’obiettivo di verificare equantificare la potenziale protezione delle infezioni sulla patologia allergica.Divulgazione delle informazioniE’ continuata l’attività di divulgazione scientifica e di prevenzione, rivolta all’opinione pubblicagenerale, onde diffondere informazione quantitativa e favorire concreti atteggiamenti diriduzione di rischio, sia attraverso articoli e altre pubblicazioni divulgative che attraversointerventi nei media o seminari rivolti al pubblico.180RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNLABORATORIO DIINFORMATICA MEDICAPERSONALECapo LaboratorioEugenio SANTORO, Dr. Sci. Informaz.181RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNINTRODUZIONE ALLE ATTIVITA' DEL LABORATORIOIl laboratorio di Informatica Medica è coinvolto nelle seguenti attività:gestione degli aspetti informatici dell’Istituto;sviluppo di siti web a carattere medico;gestione del sito web dell’Istituto;attività di formazione su argomenti legati a "Internet e medicina" e all’informatica medica;analisi statistica di sperimentazioni cliniche.SCOPERTE/RISULTATI PRINCIPALISviluppo di un registro europeo per le sperimentazioni cliniche in pediatria WWW.DEC-NET.ORGSviluppo del nuovo sito web dell’Istituto Mario NegriMantenimento dei siti web CARDIO.CARE, ONCO.CARE, NEURO.CARE, GASTRO.CARE,PNEUMO.CARE e DERMA.CAREMantenimento del sito web MinosseCOLLABORAZIONI NAZIONALIAssociazione Italiana di Oncologia Medica (AIOM)Associazione Nazionale dei Medici Cardiologi Ospedalieri (ANMCO)Società Italiana di Ematologia (SIE)Società Italiana di Malattie Infettive e Tropicali (SIMIT)CNR MilanoGruppo Italiano per la Medicina Basata sulle Evidenze (GIMBE)Gruppo Italiano Studi Epidemiologici in Dermatologia (GISED)Gruppo Italiano per lo Studio della Sopravivenza nell'Infarto miocardico (GISSI)Istituto di Fisiologia Clinica CNR, Sezione di PisaMinistero dell'Ambiente e della Tutela del TerritorioSocietà Italiana Attività Regolatorie182RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNUniversità degli Studi di MilanoKnowledge Centre, Azienda Ospedaliera Santa Maria della Misericordia, UdineDipartimento di Ricerca Cardiovascolare – Istituto “Mario Negri”Dipartimento Ambiente e Salute – Istituto “Mario Negri”Laboratorio per la Salute Materno Infantile - Istituto “Mario Negri”Servizio Biblioteca - Istituto “Mario Negri”Organizzazione Mondiale della SanitàSociety for Internet in MedicineCOLLABORAZIONI INTERNAZIONALIPRESENZA IN COMITATI EDITORIALIJournal of Medical Internet Reaserch (Eugenio Santoro)Società Italiana Attività Regolatorie News, SIARNews (Eugenio Santoro)Journal of Medical Internet ResearchATTIVITA' DI REVISIONEPRESENZA IN COMMISSIONI NAZIONALI E INTERNAZIONALIConsorzio Italiano per la Ricerca MedicaSociety for Clinical TrialsSociety for Internet in MedicineSocieté International de SenologiéORGANIZZAZIONE DI EVENTICorso, Internet e Medicina: fonti, insidie, opportunità; Milano 12 luglio 2003, UNAMSI-IstitutoMario Negri183RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNPARTECIPAZIONE AD EVENTI CON CONTRIBUTI DELLABORATORIO8° Conferenza Internazionale su Primary Therapy of Early Breast Cancer, San Gallo, Svizzera12-15 Marzo 2003. "Internet and breast cancer: an overview"Master Universitario “Metodi e tecniche della comunicazione scientifica nell’area salute:dall’informazione alla formazione (e-learning)”, Università di Milano. “E-learning edistribuzione dell’informazione scientifica”, Milano 9 maggio 2003Corso "Internet e Medicina: fonti, insidie, opportunità" rivolto ai giornalisti scientifici dellaUNAMSI (Unione Nazione Medico Scientifica d’Informazione), Istituto Mario Negri, Milano12 luglio 2003. "La ricerca in Internet di informazioni strutturate in ambito sanitario"Convegno "Conoscenza Clinica 2003". Promosso dalla Azienda Ospedaliera Santa Maria dellaMisericordia di Udine. 19-20 settembre 2003. "Un modello di integrazione delle informazioniper la ricerca biomedica"AstraZeneca ItaliaFidia Farmaceutici SPAUnione Europea Fifth Framework ProgrammeCONTRIBUTI E CONTRATTISELEZIONE PUBBLICAZIONI SCIENTIFICHE APPARSENELL'ANNO 2003Santoro E. Internet and information on breast cancer: an overview. Breast 2003; 12: 424-431Villella M, Villella A, Santoro L, Santoro E, Franzosi M G, Maggioni A P, GISSI-2. Ergometric score systems aftermyorcardial infarction: Prognostic performance of the Duke Treadmill Score, Veterans Administration MedicalCentre Score and of a novel score system, GISSI-2 index, in a cohort of survivors of acute myocardial infarction. AmHeart J 2003; 145: 475-483SELEZIONE PUBBLICAZIONI DIVULGATIVE APPARSENELL'ANNO 2003Bazzi D, Santoro E. La masterizzazione. Ricerca & Pratica 2003; n. 109: 34-36Santoro E, Bazzi D. La tecnologia Wi-Fi. Ricerca & Pratica 2003; n. 111: 123-126Rossi Lorenzo, Santoro E. I sistemi per il salvataggio dei dati. Ricerca & Pratica 2003; n. 113: 213-215Santoro E. Le riviste mediche e l'automazione del processo di peer-reviewIn: L'Agorà. Cardiologia e metabolismo. Evidenze ed opinioni. Momento Medico 2003; 1: 97-102184RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNSantoro E. Nuovi modelli di distribuzione dell'informazione scientifica: il caso BIOMED Central. In: L'Agorà.Cardiologia e metabolismo. Evidenze ed opinioni. Momento Medico 2003; 2: 64-70Santoro E. I portali per la cardiologia. In: L'Agorà. Cardiologia e metabolismo. Evidenze ed opinioni. MomentoMedico 2003; 3: 62-67Santoro E, Bazzi D. La tecnologia Wi-Fi: un nuovo modo di navigare in Internet. SIAR News 2003; 41: 48-50Santoro E. Come non impigliarsi nella Rete. Giornale Italiano del Medico di Famiglia 2003; 13: 48-49Santoro E. La ricerca medica dalla carta al bit. Giornale Italiano del Medico di Famiglia 2003; 14: 44-45Santoro E. Un modello di integrazione delle informazioni per la ricerca biomedica. (Versione CD-ROM). In:Conoscenza Clinica 2003. Atti del convegno, Udine 19-20 settembre 2003. 2003ATTIVITA' DI RICERCAProgetto DEC-NET: Drug Evaluation in Children – Clinical Trials in EuropeIn collaborazione con il Laboratorio per la Salute Materno Infantile dell’Istituto Mario Negri, ilLaboratorio di Informatica Medica è stato impegnato nel corso del 2003 nello sviluppo di unregistro di sperimentazioni cliniche in pediatria basato sul web. Il progetto, finanziatodall’Unione Europea nell’ambito del Fifth Framework Programme, vede coinvolti 4 partnerinternazionali al fine di sviluppare uno strumento (accessibile a chiunque attraverso Internet) perreperire informazioni sulle sperimentazioni cliniche in pediatria condotte a livello nazionale einternazionale. Il progetto, della durata di tre anni, ha visto nel corso del 2003 la pubblicazionedel sito http://www.dec-net.org su cui sono disponibili i primi protocolli di ricerca.Sviluppo del nuovo sito web dell’Istituto Mario NegriNel corso del 2003 è stato pubblicato il nuovo sito web dell’Istituto Mario Negri(http://www.marionegri.it). L’interfaccia è stata radicalmente modificata e i contenutiriorganizzati per venire incontro alla nuova struttura “dinamica” del sito web. Sono statiaggiunti anche nuovi contenuti e nuovi servizi tra cui una sezione interamente dedicata aicittadini e agli operatori sanitari.Mantenimento dei siti web CARDIO.CARE, ONCO.CARE, GASTRO.CARE,NEURO.CARE, PNEUMO.CARE e DERMA.CAREQuesti indici sono stati realizzati dal Laboratorio di Informatica Medica per raccogliere,classificare e commentare i migliori siti web disponibili sulla rete, fornendo agli utenti diInternet uno strumento efficace di ricerca sulla rete. Il progetto copre diverse aree mediche tracui la cardiologia (http://www.cardiocare.it), la neurologia (http://www.neurocare.it),l’oncologia (http://www.oncocare.it), la gastroenterologia (http://www.gastrocare.it), lapneumologia (http://www.pneumocare.it) e la dermatologia (http://www.dermacare.it) e ha vistola collaborazione di alcuni dipartimenti dell’Istituto Mario Negri (Dipartimento di RicercaCardiovascolare, Laboratorio delle Malattie Neurologiche e Dipartimento di Oncologia) e digruppi di ricerca esterni (Gruppo Italiano Studi Epidemiologici in Dermatologia – GISED).Mantenimento del sito web MinosseIl sito web Minosse (http://www.marionegri.it/minosse) è stato sviluppato in collaborazione conil Dipartimento Ambiente e Salute dell’Istituto Mario Negri e con il Ministero dell’Ambiente185RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNdella Tutela del Territorio. Il sito web consente di creare e gestire un database della normativanazionale e internazionale relativa a problematiche legate all’ambiente. Il sito offre anche unsistema di interrogazione di nuova generazione che consente di raggiungere in pochi passi idocumenti desiderati. L’attività, iniziata nel 2001, è continuata anche nel 2003.Gestione degli aspetti informatici dell’IstitutoUna delle attività del Laboratorio di Informatica Medica è la gestione dell’informaticadell’istituto. Tra i compiti ad essa assegnati: l’assistenza hardware e software dei client e deiserver installati in istituto, la gestione della posta elettronica, la gestione del collegamentoInternet, la gestione della rete interna, la gestione del sito web dell’Istituto.Attività di formazioneNel corso del 2003 è proseguita l’attività di formazione su tematiche legate a “Internet eMedicina” attraverso lo svolgimento di corsi e workshop (sia interni all’istituto, sia esterni) acui ha partecipato il personale del laboratorio con ruoli di docenza. In questo contesto si collocaanche l'esperienza fatta con la Scuola di Scrittura Scientifica diretta dal Prof. Eugenio Picanodell'Istituto di Fisiologia Clinica del CNR di Pisa.Analisi dati dei database GISSINel corso del 2003 è continuata la collaborazione con il Dipartimento di ricerca cardiovascolareper l’analisi degli studi GISSI (Gruppo Italiano per lo Studio della Sopravvivenza nell’Infartomiocardico). Tali analisi hanno prodotto alcuni articoli apparsi sulle maggiori riviste medicheinternazionali che riguardano lo sviluppo di indici prognostici per il calcolo del rischiocardiovascolare.186RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNCENTRO COCHRANE ITALIANOPERSONALEDirettore del CentroAlessandro LIBERATI, Dr. Med. Chir.187RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNINTRODUZIONE ALLE ATTIVITA' DEL CENTROIl Centro Cochrane Italiano (CCI) è attivo dal 1994 ed è affiliato alla Cochrane Collaboration(CC), un'organizzazione no-profit che ha lo scopo di produrre, mantenere aggiornati ediffondere i risultati di sintesi (revisioni sistematiche) degli effetti degli interventi sanitari. Ilprincipale prodotto della Cochrane Collaboration è la Cochrane Library, una pubblicazionetrimestrale che contiene le revisioni sistematiche prodotte dai gruppi collaborativi della CC ealtri database relativi a revisioni sistematiche pubblicate su riviste internazionali e prodotte dagruppi non Cochrane e la sintesi dei migliori rapporti di Technology Assessment.Gli obiettivi del CCI sono centrati sul supporto alle diverse attività della CochraneCollaboration in Italia, con particolare riferimento a:far crescere la conoscenza delle attività della CC in Italia;fornire supporto metodologico e pratico a tutti gli individui e gruppi che vogliono collaborarealle attività della CC;contribuire all'adozione e disseminazione della pratica della Evidence-based Medicine (EBM) inItalia, sia a livello accademico sia nella pratica dei servizi sanitari.SCOPERTE/RISULTATI PRINCIPALICreazione di una rete nazionale di ricercatori e operatori sanitari che producono revisionisistematiche di letteratura per la Cochrane Collaboration.COLLABORAZIONI NAZIONALICe.V.E.A.S. (www.ceveas.it)Dipartimento di Epidemiologia della ASL Roma EIstituto Neurologico "Carlo Besta"Istituto Superiore di Sanità (www.iss.it)Ministero della Salute (www.ministerosalute.it)Agenzia Sanitaria Regionale, Regione Emilia RomagnaUniversità degli Studi di Milano (www.unimi.it)Università di Modena e Reggio EmiliaAzienda Sanitaria Locale 20, AlessandriaCOLLABORAZIONI INTERNAZIONALICentre for Reviews and Dissemination, University of York, York, UK (www.york.ac.uk)British Medical Journal Group (www.bmj.com)188RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNThe Cochrane Collaboration (www.cochrane.org)The Campbell Collaboration (www.campbellcollaboration.org)PRESENZA IN COMITATI EDITORIALIAnnals of Internal Medicine (Alessandro Liberati)Clinical Evidence (Alessandro Liberati)Evidence Based Health Policy and Research (Alessandro Liberati)Journal of Health Services Research (Alessandro Liberati)ATTIVITA' DI REVISIONEAnnals of Internal Medicine (Alessandro Liberati)British Medical Journal (Alessandro Liberati)JAMA (Alessandro Liberati)ORGANIZZAZIONE DI EVENTIMaster "Evidence Based Medicine e metodologia della ricerca sanitaria", Febbraio-Luglio 2003,Università di Modena e Reggio Emilia.Convegno internazionale "L'educazione medica continua (ECM): i modelli e la loro efficacia aconfronto", 28-29 Novembre 2003, BolognaRiunione italiana Revisori Cochrane, 3-5 Giugno 2003, MilanoPARTECIPAZIONE AD EVENTI CON CONTRIBUTI DEL CENTROMaster "Metodologia della revisioni sistematiche in campo medico e sanitario", Dicembre 2003-Settembre 2004, Università degli Studi di Milano, MilanoXI International Cochrane Colloquium, 26-31 Ottobre 2003, Barcelona, SpagnaConvegno "La necessità di una ricerca indipendente per tutelare gli interessi dei cittadini evigilare sui conflitti di interesse", 3 Novembre 2003, RomaMinistero della SaluteAstra ZenecaCONTRIBUTI E CONTRATTI189RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNFondazione TelethonSELEZIONE PUBBLICAZIONI SCIENTIFICHE APPARSENELL'ANNO 2003Formoso G., Moja L., Nonino F., Dri P., Addis A., Martini N., Liberati A.Clinical Evidence: a useful tool for promoting evidence based medicine?BMC Health Services Research 2003;3:25Martini N, Tomino C, Liberati ARole of research ethics committee in follow-up and publication of resultsLancet 2003; 361: 2246IF: 15.397ALTRE PRODUZIONI EDITORIALI PUBBLICATE NEL CORSO DEL2003Edizione italiana del volume "Clinical Evidence conciso", prodotta e distribuita grazie a un finanziamento delMinistero della Salute e distribuita a tutti i medici italiani.Edizione Italiana di "Effective Health Care Bulletin", un bimestrale prodotto dal Centre for Reviews andDissemination dell'Università di York (UK).Newsletter semestrale "Cochrane News", disponibile sul sito del CCI (www.cochrane.it)ATTIVITA' DI RICERCAAttività di formazioneA partire dall'anno accademico 1999-2000 il CCI ha contribuito all'organizzazione del master in"Metodologia delle Revisioni Sistematiche in Campo Medico e Sanitario" in collaborazione conla Facoltà di Medicina e Chirurgia dell'Università degli Studi di Milano. Il master è giunto nel2003 alla sua terza edizione e ha coinvolto 18 studenti. I docenti del Master sono ricercatori deiCentri Cochrane europei ed esperti italiani provenienti sia da università sia da centri di ricercaitaliani. Gli studenti che frequentano il Master hanno tra i propri obiettivi didattici lapreparazione di una revisione sistematica svolta secondo i requisiti metodologici della CochraneCollaboration.Nell'anno 2003 il Centro Cochrane Italiano ha contribuito all'organizzazione del "Master inEvidence-based medicine e Metodologia della Ricerca Sanitaria" presso l'Università di Modenae Reggio Emilia che ha coinvolto, nella prima edizione, 12 studenti.Il Centro ha anche avviato la fase pilota per la messa a punto del progetto “Ecce” (Educazionecontinua Clinical Evidence), che verrà attivato nel 2004 nell’ambito del programma nazionale diEducazione continua in Medicina (ECM).190RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNAttività di disseminazioneNel 2003 il CCI ha curato - su incarico del Ministero della Salute - la seconda edizione italianadi "Clinical Evidence", il compendio delle migliori prove di efficacia prodotto dal BMJPublishing Group, largamente basato sulle revisioni sistematiche della Cochrane Collaboration.La prima edizione è stata pubblicata nel 2002. Grazie ai risultati positivi di questa primainiziativa-pilota, l'incarico è stato rinnovato per il 2003 e una nuova edizione aggiornata delvolume è stata distribuita gratuitamente in 300.000 copie a tutti i medici italiani.Il CCI ha la responsabilità scientifica dell'edizione italiana di Effective Health Care Bulletin, unbimestrale prodotto dal Centre for Reviews and Dissemination dell'Università di York (UK).Nel 2003 sono stati pubblicati quattro numeri sui seguenti argomenti: a) Dispositivi inalatori neltrattamento dell'asma e della BPCO; b) L'utilizzo della tomografia a emissione di positroni(PET) in oncologia; c) Trattamento dell'enuresi notturna dei bambini; d) Trattamento dellasclerosi multipla.Revisioni sistematicheIl CCI e i ricercatori a esso afferenti hanno collaborato alla produzione di diverse revisionisistematiche Cochrane. Al Dicembre 2003 erano disponibili nella Cochrane Library oltre 40revisioni complete e oltre 50 protocolli che avevano un ricercatore italiano come autoreprincipale o co-autore. La lista completa di queste pubblicazioni è disponibile nel RapportoAnnuale di Attività 2003 del CCI (consultabile anche online al sito www.cochrane.it) oattraverso il sito web dell'Istituto Mario Negri (www.marionegri.it). Lo staff del CCI è ancheattivamente coinvolto in progetti di approfondimento metodologico mirati a identificarestrumenti validi e riproducibili per misurare la qualità delle revisioni sistematiche.Programma di miglioramento della qualità della ricerca nel campo dellemalattie neuromuscolariNell’anno 2003 il Centro Cochrane Italiano ha collaborato con la Fondazione Telethon per unprogramma di miglioramento della qualità della ricerca nel campo delle malattie neuromuscolarie la valutazione della variabilità degli approcci assistenziali ai pazienti affetti da distrofiamuscolare di Duchenne.Progetto per un’alleanza tra associazioni di pazienti e cittadini e comunitàmedico-scientificaNel 2003 il CCI ha collaborato con Il Laboratorio di Ricerca Translazionale e di Outcome inOncologia e con l’agenzia di giornalismo scientifico Zadig a un programma di ricerca checoinvolge i pazienti e le loro associazioni. Gli obiettivi del progetto sono:orientare pazienti, cittadini e loro associazioni a una partecipazione attiva nell’ambitodell’assistenza sanitaria e delle scelte in medicina; orientare le organizzazioni professionali escientifiche a un rapporto di confronto costruttivo con pazienti e cittadini; avviare unapartnership trasparente tra il paziente e il cittadino e i servizi sanitari.Ecco alcune fasi del progetto: costruzione di un sito internet rivolto a cittadini e pazienti, oltreche agli operatori sanitari; organizzazione di seminari e incontri pubblici con associazioni,pazienti e cittadini coinvolti nel progetto; produzione di materiale informativo e organizzazionedi corsi per pazienti e cittadini e loro associazioni; realizzazione di esperienze pilota dipartnership tra associazioni di pazienti e organizzazioni scientifiche e professionali.191RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMN192RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNCENTRO CATULLO E DANIELABORGOMAINERIOIl centro dedicato a “Catullo e Daniela Borgomainerio” è sorto nel 1987, grazie al contributodella Signora Angela Marchegiano Borgomainerio.L’edificio è nato come centro per lo studio delle malattie rare del bambino e a tutt’oggi alcunidei laboratori ospitati conducono ricerche in questo senso. Ad esempio, si occupano dellostudio di nuove opzioni terapeutiche da applicare al trattamento di una forma molto rara dileucemia acuta mieloide, nota come leucemia acuta promielocitica e sono in corso numerosistudi per identificare nuovi farmaci dotati di meccanismi diversi capaci di sinergizzare conl’acido trans-retinoico.Nel Centro Borgomainerio si svolgono inoltre ricerche epidemiologiche sulle leucemie infantilie sui tumori del testicolo negli adolescenti e giovani adulti.Le attività svolte presso il Centro Borgomainerio afferenti all'area pediatrica sono condotte incollaborazione anche con gruppi dell'Istituto dislocati in altre sedi, quali: il Centro di RicercheCliniche per le Malattie Rare Aldo e Cele Daccò (Ranica, BG), il Centro di informazione sulfarmaco (Crif) e il Laboratorio per la Salute Materno Infantile, che hanno entrambi sede aMilano.Oggi l’edificio ospita: il Laboratorio di Biologia Molecolare, il Laboratorio di EpidemiologiaGenerale, il Laboratorio di ricerca Translazionale e di Outcome in Oncologia, il Laboratorio diRicerca Clinica Oncologica, l’Ufficio studi Oncologici e Documentazione, il Laboratorio diMalattie Neurologiche, il Laboratorio di Immunologia Cellulare e il Centro Cochrane Italiano.Per maggiori informazioni sulle attività del Centro si rimanda ai rapporti di attività dei singolilaboratori.193RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMN194RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNANIMAL CARE UNITPERSONALECapo UnitàAmalia GUAITANI, Dipl. tecn. Sci. Biol.195RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNREGOLAMENTAZIONE E LINEE GUIDAL'Animal Care Unit (ACU) si occupa, a livello istituzionale, di regolamentazione dellasperimentazione animale, di preparazione professionale in scienza degli animali da laboratorio,di diffusione delle conoscenze in questa disciplina sia all'interno dell'Istituto che a livellonazionale, di collaborazione con altre istituzioni e associazioni attive nel settore. Il sistema diautoregolamentazione introdotto in Istituto dai primi anni '80 ha contribuito a migliorare lasperimentazione e a ridurre significativamente l'uso degli animali, come documentato da diversepubblicazioni. L'adeguamento della conduzione della sperimentazione animale in conformitàalle regolamentazioni nazionali e internazionali, permette all'Istituto di ottenere ogni cinqueanni l'Animal Welfare Assurance Renewal dal Public Health Service (Office for Protection fromResearch Risks, OPRR) Statunitense. I membri che costituiscono l'ACU sono ricercatori conesperienza specifica nelle scienze degli animali da laboratorio, un medico veterinario e ildirettore dell'Istituto. Uno speciale Comitato, costituito da membri non istituzionali, due medici,un avvocato e un teologo, affianca i membri dell'ACU per una consulenza di tipo etico suesperimenti con animali che richiedano un'accurata valutazione. Questa attività coinvolge anchei ricercatori responsabili dei progetti e delle procedure di ricerca.ATTIVITA' DI CONTROLLO DELLA SPERIMENTAZIONE ANIMALELa supervisione della sperimentazione animale comprende: 1) controllo dello stato di salute ebenessere degli animali, 2) revisione dei progetti di ricerca, dei protocolli e delle proceduresperimentali, 3) preparazione e aggiornamento delle linee-guida istituzionali, 4) valutazionestatistica dell'uso degli animali, 5) controllo dell'osservanza delle leggi nazionali edinternazionali, 6) preparazione dei documenti richiesti dalle autorità competenti per ottenere leautorizzazioni istituzionali, 7) consulenza tecnica nella progettazione di nuove strutture distabulazione.ATTIVITA' DI FORMAZIONE PROFESSIONALEVengono organizzati corsi teorici e pratici per certificare l'idoneità professionale del personaledell'istituto. A tale scopo viene tenuto due volte all'anno un corso interno di 16 ore, seguito daun programma continuo di addestramento pratico nelle metodologie per la sperimentazioneanimale. Vengono organizzate inoltre attività extramurali (seminari, lezioni, corsi) incollaborazione con Università, organizzazioni pubbliche e private, e Associazioni nell'area delleScienze degli Animali da Laboratorio. L'attività dell'Associazione Italiana per le Scienze degliAnimali da Laboratorio (AISAL) è coordinata principalmente dallo staff dell'ACU.CORSI E CONGRESSIAISAL Symposium in collaborazione con l'Università di Milano: "I dibattiti aperti nellasperimentazione animale: la ricerca scientifica senza animali ?” Sala di rappresentanza,Università degli Studi Milano, 5 maggio 2003.196RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNG.A. PFEIFFER MEMORIAL LIBRARYPERSONALECapo BibliotecariaVanna Pistotti197RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNLa Biblioteca, specializzata nel campo della farmacologia ed epidemiologia clinica, è statafondata nel 1963 grazie ad una donazione della Gustavus and Louise Pfeiffer ResearchFoundation con sede a Denville, New Jersey, USA.Enti pubblici e privati contribuiscono al suo funzionamento mediante donazioni, offerte dimateriale e di abbonamenti a periodici.PERSONALEIl personale della Biblioteca è composto da una responsabile, tre assistenti e un incaricato alservizio fotocopie.LA COLLEZIONELa biblioteca possiede 5000 volumi tra libri di testo, monografie e atti di convegno e 250abbonamenti a periodici. I libri vengono classificati secondo la US National Library ofMedicine Classification, quinta edizione e il Medical Subject Headings di Medline (MeSH).Oltre alla collezione interna la Biblioteca accede al Catalogo Nazionale dei Periodici , alCatalogo delle biblioteche appartenenti al Sistema Bibliotecario Biomedico Lombardo e aquello del GIDIF, RBM.BANCHE DATI E RIVISTE ELETTRONICHEDa ogni postazione interna all’Istituto è possibile accedere a più di 1500 riviste elettroniche e acinque tra le banche dati più importanti al mondo: Medline, Cinhal, La Cochrane Library,Embase.PROGETTILa biblioteca partecipa alla realizzazione del Catalogo dei Periodici dell’Associazione Italianadei Documentalisti GIDIF, RBM .Collabora attivamente al sito web dell’Istituto di cui in particolare cura la parte dellePubblicazioni, sia scientifiche sia divulgative.Ogni anno vengono svolti corsi al personale scientifico dell’Istituto sull’uso delle banche dati edelle riviste elettroniche.PUBBLICAZIONI 2003Bassi C, Pistotti V. Cochrane Library versus scientific journals: Is the ISI impact factor a validmethod for dissemination? Poster presentato al XI Cochrane Colloquium, Barcellona, Ottobre2003.198RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNCONTRATTI PIU’ SIGNIFICATIVIDal 1994 aderisce al progetto SBBL Sistema Bibliotecario Biomedico Lombardo della RegioneLombardia. cui partecipano sedici biblioteche lombarde come Poli primari e che offre banchedati, riviste elettroniche e articoli a più di 140 strutture in Regione.199RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMN200RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNLaboratori Negri BergamoRAPPORTIATTIVITA’ 2003dipartimenti e laboratori201RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMN202RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNDIPARTIMENTO DIMEDICINA MOLECOLAREPERSONALECapo Dipartimento Ariela BENIGNI, Dr. Sci. Biol. Ph. D.Unità di Terapia GenicaCapo Unità Susanna TOMASONI, Dr. Sci. Biol. Ph. D.Laboratorio di Biologia Cellulare e XenotrapiantoCapo LaboratorioMarina MORIGI, Dr. Sci. Biol.Unità dell’Interazione Piastrine-Endotelio VascolareCapo UnitàMiriam GALBUSERA, Dr. Sci. Biol.Laboratorio di Immunologia e Genetica del Trapianto e Malattie RareCapo LaboratorioMarina NORIS, Dr. Chim. Farm.Laboratorio di Modelli Sperimentali di Malattie RenaliCapo Laboratorio Carla ZOJA, Dr. Sci. Biol. Ph. D.Unità di Patologia e ImmunopatologiaCapo UnitàMauro ABBATE,.Dr. Med.203RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNINTRODUZIONE ALLE ATTIVITA' DEL DIPARTIMENTOIl Dipartimento di Medicina Molecolare è stato istituito nel 1999 presso i laboratori del MarioNegri di Bergamo con lo scopo di coordinare il lavoro di tre laboratori e tre unità.L’attività del Dipartimento di Medicina Molecolare è strettamente collegata a quella delDipartimento di Medicina Renale del Centro di Ricerche Cliniche per le Malattie Rare “Aldo eCele Daccò”.Questi i principali obiettivi del Dipartimento:1) Identificazione di mediatori e di meccanismi d’azione responsabili della perdita irreversibiledi funzionalità renale nelle malattie renali; sviluppo di strategie terapeutiche volte a rallentare obloccare la progressione della malattia renale verso l’insufficienza renale terminale.2) Analisi dei processi responsabili del danno della cellula endoteliale nelle microangiopatietrombotiche e nel rigetto iperacuto dei trapianti allogenici.3) Sviluppo di nuove strategie, tra cui la terapia genica, per modulare la risposta immunitariapost-trapianto e per prevenire il rigetto acuto e cronico del trapianto d’organo; studio di possibilivie immunologiche che portino alla tolleranza dell’organo trapiantato.4) Studio delle basi molecolari e genetiche di malattie rare come la sindrome emolitico uremica/porpora trombotica trombocitopenica e la preeclampsia; valutazione di alterazioni geneticheresponsabili dello sviluppo di malattie rare e caratterizzazione di polimorfismi genetici chepredicono la risposta dei pazienti alla terapie farmacologiche per malattie mono- e poligeniche.Questi obiettivi sono perseguiti grazie all’impiego di svariati approcci metodologici:1) modelli sperimentali di malattie renali, di tipo immunologico e non, rappresentativi dimalattie umane, per studiare i mediatori vasoattivi e infiammatori e per testare nuovi farmaciche riducano la proteinuria e conferiscano renoprotezione.2) Valutazione “in vitro” dell’effetto tossico di un sovraccarico proteico su colture di cellulerenali.3) Modelli “in vitro” per studiare l’interazione delle cellule dell’endotelio vascolare conleucociti e piastrine in condizioni di flusso controllato.4) Modelli sperimentali di allotrapianto di rene per studiare i processi immunologiciresponsabili del rigetto acuto e cronico, la tossicità renale di farmaci immunosoppressori e peridentificare strategie di induzione della tolleranza.5) Trasferimento genico di costrutti virali contenenti geni per molecole immunomodulatoriecome strategia per impedire il rigetto acuto del trapianto e ridurre o evitare la terapiaimmunosoppressiva.6) Analisi di linkage, ricerca di mutazioni e studio di polimorfismi genetici per identificare igeni responsabili o predisponenti allo sviluppo di malattie genetiche rare.SCOPERTE/RISULTATI PRINCIPALILe alterazioni del citoscheletro dei podociti indotte da endotelina -1 giocano un ruolo chiavenell'ischemia glomerulare e nelle alterazioni emodinamiche della sindrome emolitico-uremica.L'eccessivo carico di proteine induce la deposizione di complemento sulla superficie dellecellule tubulari favorendone la citotossicità.L'effetto renoprotettivo del trattamento combinato con ACE inibitore e L-arginina è dovuto alripristino dell'alterata bilancia tra vasocostrittori e vasodilatatori.204RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNGli inibitori delle vasopeptidasi sono più efficaci degli ACE inibitori nel ridurre la progressionedella malattia renale grazie alla loro capacità di modulare la sintesi renale di mediatorivasoattivi.L' inibizione selettiva della espressione della nefrina è la causa della proteinuria nel diabete enella nefropatia da IgA.L'ACE inibitore limita il danno renale nel rigetto cronico del trapianto anche se somministratotardivamente, quando le lesioni sono già evidenti.La diminuzione dei livelli di arginina nella placenta sono la causa del danno e della scarsaperfusione placentare nella gravidanza complicata da preeclampsia.Nella sindrome emolitico-uremica mutazioni del Fattore H determinano un' alterata funzionalitàdella proteina riducendone l'affinità di legame per il complemento, l'eparina e per le celluleendoteliali.Identificata una mutazione nel gene per MCP, proteina che regola il complemento, resposabiledel danno endoteliale in pazienti con SEU atipica.COLLABORAZIONI NAZIONALIInternational Centre for Genetic Engineering and Biotechnology, Molecular Medicine Group,TriesteIstituto Dermopatico dell'Immacolata, RomaU.O. di Ostetricia e Ginecologia, Ospedale San Gerardo di MonzaU.O. di Ostetricia e Ginecologia, Azienda Ospedaliera -Ospedali Riuniti di BergamoUniversità di AnconaCOLLABORAZIONI INTERNAZIONALIAcademisch Ziekenhuis Maastricht, Interne Geneeskunde, Maastricht, The NetherlandsAlbert Einstein College of Medicine, Bronx, New York, USABeth Israel Deaconess Medical Center and Harvard Medical School, Boston, USAChildren's Hospital and Regional Medical Center, University of Washington, Seattle, USAErasmus University of Rotterdam, The NetherlandsHans-Knoll Institute for Natural Products Research, Jena, GermanyInselspital, University of Bern, SwitzerlandPaediatric Nephrology and Hypertension, University of Utah, USAThe Scripps Research Institute, La Jolla, CA, USAUniversity of Colorado Cardiovascular Institute, Denver, CO, USAUniversity of Groningen, The NetherlandsINSERM, Paris, FranceMax Delbruck Center for Molecular Medicine, Berlin, Germany205RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNKidney International (Ariela Benigni)PRESENZA IN COMITATI EDITORIALIAmerican Journal of Kidney DiseasesAmerican Journal of PathologyAmerican Journal of PhysiologyBlood PurificationCirculationDiabetologiaKidney InternationalJournal of American Society of NephrologyJournal of Clinical InvestigationJournal of NephrologyNephrology, Dialysis and TransplantationThrombosis and HaemostasisATTIVITA' DI REVISIONEPARTECIPAZIONE AD EVENTI CON CONTRIBUTI DELDIPARTIMENTO15th Meeting of the European Renal Cell Study Group, “Protein overload induces fractalkineupregulation in proximal tubular cells through NF-kB and p38 mark pathways”. 13-16 Marzo2003, VeneziaAmerican Transplant Congress, “Dendritic cells (DC) gentically engineered to expressdominant negative IKB kinase 2 (dnIKK2) induce T cell hyporesponse and development ofregulatory T cells”. 30 Maggio-4 Giugno 2003, Washington, USAThe American Society of Gene Therapy 6th Annual Meeting, "Dendritic cells overexpressingthe dominant negative IkB Kinase (dnIKK2) induce T cell hyporesponse and development ofregulatory cells". 4-6 Giugno, 2003, Washington, USASatellyte Symposium to the ISN-ERA/EDTA-World Congress of Nephrology 2003 onGlomerulonephritis and progression to renal insufficiency. “Inflammatory mediators andintracellular signals induced by protein overload in proximal tubular cells”. 12-15 Giugno 2003,Kloster Seeon, Bavaria, GermaniaTenth Annual Meeting of the Nantes “Institut de Transplantation et de Recherche enTransplantation”: Stem cell and transplantation. 19-20 Giugno 2003, Nantes, FranciaInternational Society on Thrombosis and Haemostasis XIX Congress and 49th Annual SSC206RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNMeeting. 13-19 Luglio 2003, Birmingham, Gran BretagnaIX European Meeting on Complement in Human Disease, “Genetic analysis of Factor H-related5 gene in Hemolytic-Uremic Syndrome”. 6-9 Settembre 2003, TriesteIX European Meeting on Complement in Human Disease, “Association between mutations andpolymorphisms of Factor H gene and Hemolytic-Uremic Syndrome”. 6-9 Settembre 2003,Trieste17th Meeting of the International Society of Haematology. “The role of vWF and vWF cleavingprotease in the pathogenesis of TTP and HUS”. 7-10 Settembre 2003, Graz , Austria3rd Annual Conference on Mesenchymal and hamatopoietic stem cells, “Mesenchymal stemcells are renotropic, help repairing the kidney and improve function in acute renal failure”. 9-11Ottobre 2003, New Orleans, USAAmerican Society of Nephrology 36th Annual Meeting, “Dendritic cells kept immature bydominant negative IkB2 kinase (dnIKK2) gene transfer generate regulatory T cells”. 12-17Novembre 2003, San Diego, USAAmerican Society of Nephrology 36th Annual Meeting, “Better renoprotection withvasopeptidase versus ACE inhibitors is related to their capacity of restoring renal ET-1/NObalance”. 12-17 Novembre 2003, San Diego, USAAmerican Society of Nephrology 36th Annual Meeting, “Shigatoxin-2 upregulates endothelin-1gene in glomerular podocytes and promotes cytoskeleton dysfunction: implications forglomerular ischemia and hemodynamic changes of HUS”. 12-17 Novembre 2003, San Diego,USA26th Congress of the Japanese Society of Thrombosis and Hemostasis. “vWF and vWF cleavingprotease in the pathogenesis of TTP and HUS”. 27-29 Novembre 2003, Tokyo, GiapponeCONTRIBUTI E CONTRATTIComitato TelethonFondazione CariploFondazione Italo MonzinoFoundation for Children with Atypical HUSRoche Organ Transplantation Research FoundationThe Nando Peretti FoundationAmgen IncAventis Pharmaceuticals IncCyclacel LtdDompè SpAGenzyme CorporationMerck Sharp & Dohme Italia SpANicox Research Institute SrlSigma Tau SpATakeda Italia Farmaceutici SpA207RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNSELEZIONE PUBBLICAZIONI SCIENTIFICHE APPARSENELL'ANNO 2003A. Benigni, C. Zoja, D. Corna, C. Zatelli, S. Conti, M. Campana, E. Gagliardini, D. Rottoli, C. Zanchi, M. Abbate, S.Ledbetter, G. Remuzzi. Add-on anti-TGF-b antibody to ACE inhibitor arrests progressive diabetic nephropathy in therat. J Am Soc Nephrol 2003;14:1816-1824.C. Zoja, A. Benigni, D. Camozzi, D. Corna, L. Longaretti, M. Todeschini, G. Remuzzi. Combining lisinopril and L-arginine slows disease progression and reduces endothelin-1 in passive Heymann nephritis. Kidney Int 2003;64:857-863.R. Donadelli, C. Zanchi, M. Morigi, S. Buelli, C. Batani, S. Tomasoni, D. Corna, D. Rottoli, A. Benigni, M. Abbate,G. Remuzzi, C. Zoja. Protein overload induces fractalkine upregulation in proximal tubular cells through nuclearfactor kB- and p38 mitogen-activated protein kinase-dependent pathways. J Am Soc Nephrol 2003;14:2436-2446.M. Noris, S. Brioschi, J. Caprioli, M. Todeschini, E. Bresin, F. Porrati, S. Gamba, G. Remuzzi for the InternationalRegistry of Recurrent and Familial HUS/TTP. Familial heamolytic uraemic syndrome and an MCP mutation. Lancet2003;362:1542-1547.T. Manuelian, J. Hellwage, S. Meri, J. Caprioli, M. Noris, S. Heinen, M. Jozsi, H.P.H. Neumann, G. Remuzzi, P.Zipfel. Mutations in factor H reduce binding affinity to C3b and heparin and surface attachment to endothelial cells inhemolytic uremic syndrome. The journal of Clinical Investigation 2003;111:1181-1190.M. Noris, M. Mister, A. Pezzotta, N. Azzolini, P. Cassis, A. Benigni, E. Gagliardini, N. Perico, G. Remuzzi. ACEinhibition limits chronic injury of kidney transplant even with treatment started when lesions are established. KidneyInternational 2003;64: 2253-2261.ALTRE PRODUZIONI EDITORIALI PUBBLICATE NEL CORSO DEL2003M. Abbate, G. Remuzzi. Renoprotection: Clues from knockout models of rare disease. Kidney Int 2003;63:764-766.C. Zoja, M. Morigi, G. Remuzzi. Proteinuria and phenotypic change of proximal tubular cells. J Am Soc Nephrol2003;14:S36-S41.M. Abbate, G. Remuzzi. Can we really lessen kidney damage to the point that the loss of renal function ofprogressive nephropathy may revert? (editorial) J Am Soc Nephrol 2003;14:1411-1414.P. Ruggenenti, M. Noris, G. Remuzzi. Thrombotic Microangiopathies. In: Therapy in Nephrology and Hypertension,2nd Edition. Edited by H.R. Brady and C.S. Wilcox. London, Saunders pp. 283-295,2003.M. Galbusera, G. Remuzzi. The role of vWF and vWF cleaving protease in the pathogenesis of TTP and HUS. In:Haematology 2003 – Proceedings of the XVII Meeting of the International Society of Haematology, Edited by W.Linkesch, Monduzzi Editore, Graz, Austria pp. 73-78, 2003.208RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNATTIVITA' DI RICERCALaboratorio di Biologia Cellulare e XenotrapiantoCellule staminali come terapia cellulare per correggere malattie genetiche"In collaborazione con il Laboratorio di Immunologia e Genetica di Malattie Rare e Trapianti"Recenti evidenze suggeriscono l’utilizzo di cellule staminali derivate da midollo osseo cometerapia alternativa al trapianto nel trattamento delle malattie genetiche. In particolare, cellulestaminali ematopoietiche isolate dal midollo osseo iniettate in topi deficienti per l’enzimafumarylacetoacetato idrolasi, un modello animale di tirosinemia ereditaria di tipo 1, erano gradodi colonizzare il fegato, differenziarsi in epatociti maturi e ristabilire la normale funzionebiochimica. La possibità di ottenere una nuova fonte di cellule staminali totipotenti attraverso ilnuclear transfer cioè il trasferimento del nucleo di una cellula somatica in oocita enucleato, haaperto nuove interessanti prospettive nell’ambito della terapia cellulare dal momento che sipotrebbero ottenere cellule staminali totipotenti da un individuo adulto. Il nostro studio si èproposto di utilizzare cellule embrionali staminali, ottenute da fertilizzazione in vitro (in futuroutilizzeremo cellule da nuclear transfer) e cellule staminali mesenchimali da midollo adulto percorreggere l’alterazione genetica che porta allo sviluppo della malattia di Fabry. Tale malattia ècaratterizzata da una alterazione dell’attività lisosomiale causata da una mutazione nel gene checodifica per l’enzima a-galattosidasi, enzima prodotto in elevata quantità dal fegato,responsabile dell’idrolisi di vari glicolipidi. Il difetto relativo a tale enzima determina unaccumulo dei glicolipidi principalmente nelle cellule endoteliali del rene, cuore, fegato e milza.Inizialmente abbiamo valutato la capacità delle cellule staminali di colonizzare il fegato, didifferenziaziarsi in epatociti maturi in topi wild type in cui era stato indotto un danno epaticoallo scopo di favorire un migliore attecchimento delle cellule. A seguito dell’infusione di celluleembrionali staminali in topi singenici con danno epatico, abbiamo osservato un chimerismo nelfegato associato però ad una massiva formazione di teratomi. In combinazione allogenica, lecellule embrionali avevano una capacità di attecchimento molto inferiore rispetto alle celluleinfuse nei topi singenici. Un discreto livello di chimerismo è stato osservato nel fegato dianimali iniettati con cellule mesenchimali staminali in combinazione singenica e allogenica.Sono in corso esperimenti per valutare l’effetto di cellule embrionali predifferenziate in vitro incellule epiteliali epatiche al fine di ridurre il loro potenziale oncogeno quando inettate in vivo incondizioni singeniche. Inoltre stiamo studiando l’associazione di farmaci immunosoppressorialla terapia con cellule embrionali allogeniche allo scopo di prevenire il rigetto e aumentare lacolonizzazione cellulare nel fegato. Sulla base di questi studi, si tenterà di utilizzare celluleembrionali da nuclear transfer per ripristinare l’attività dell’enzima a-galattosidasi nei topi chesviluppano la malattia di Fabry.La shigatoxin-2 induce l’espressione di endotelina-1 e causa ilriarrangiamento del citoscheletro in podociti in coltura. Implicazioni perl’ischemia glomerulare nella sindrome emolitico uremica“In collaborazione con il Laboratorio di Modelli Sperimentali di Malattie Renali e con l’Unitàdi Terapia Genica”L’ischemia glomerulare è una delle lesioni caratteristiche della Sindrome Emolitico Uremica(SEU) e tuttora non è chiaro perché questo danno si sviluppi a livello della microcircolazionerenale. Il principale agente infettivo nella forma tipica infantile della SEU associata a diarrea è209RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNla tossina batterica Shiga toxin (Stx). Poiché il podocita, componente cruciale della barriera difiltrazione glomerulare, possiede i recettori per Stx e produce mediatori vasoattivi, abbiamovoluto studiare gli effetti della tossina sull’espressione e produzione di un peptidevasocostrittore, l’endotelina-1 in una linea di podociti murini. Un altro scopo dello studio è statoidentificare i meccanismi intracellulari attivati dalla tossina. Podociti esposti a Stx-2 (50pM,1nM) mostravano un aumento nel tempo dei livelli di trascritto per ET-1 e della produzionedella proteina. L’esposizione dei podociti a entrambe le concentrazioni di Stx-2 per 30 mindeterminava una marcata attivazione dei fattori trascrizionali AP-1 e NF-kB. La MAPK p38,chinasi nota attivare entrambi i fattori trascrizionali, risultava essere fosforilata in podocitistimolati con Stx-2 1nM. Inoltre la tossina promuoveva una ridistribuzione di F-actina, unaproteina del citoscheletro e aumentava la formazione di spazi intercellulari indicando checambiamenti della contrattilità potrebbero regolare la retrazione glomerulare e l’alterazionedella permeabilità. L’esposizione di podociti a ET-1 portava a un riarrangiamento dei filamentidi F-actina e in parallelo un aumento della permeabilità alle proteine attraverso il monostratocellulare, suggerendo che ET-1 sia uno dei principali mediatori degli effetti indotti dalla tossina.I nostri dati documentano che i podociti sono un importante bersaglio funzionale della Stx,nuovo stimolo per la sintesi di ET-1 e per cambiamenti del citoscheletro che potrebbero avereun ruolo chiave nell’ischemia glomerulare e nelle alterazioni emodinamiche della SEU.Effetto di alte concentrazioni di proteine plasmatiche sulle capacità dellecellule tubulari prossimali di attivare il complementoIl complemento è stato recentemente indicato come un possibile mediatore nei processiinfiammatori che portano al danno tubulointerstiziale e alla progressione delle malattie renaliassociate a proteinuria. Studi precedenti hanno documentato che cellule tubulari prossimaliumane (PTEC) esposte al siero umano, utilizzato come fonte di complemento (C), attivavano ilC attraverso la via alternativa portando al deposito del MAC sulla superficie cellulare. Nelpresente studio, abbiamo valutato se in vitro le proteine plasmatiche ultrafiltrate comel’albumina, trasferrina o IgG fossero in grado nelle PTEC di potenziare l’effetto citotossico delC, noto promuovere attivazione e morte cellulare. I risultati indicano che l’esposizione dellecellule al siero umano per 1 ora induceva un effetto citotossico dose dipendente che non eramodificato dalla preincubazione delle cellule per 24 ore con albumina. La trasferrina e le IgGincubate da sole rispettivamente a pH 6 ed a pH 7 riducevano significativamente la vitalitàcellulare delle PTEC. Comunque, come per l’albumina, non siamo riusciti a osservare alcuneffetto della trasferrina o delle IgG sulla riduzione del numero di cellule vitali indotta dal sieroumano. Successivamente è stato valutato il deposito di C3 sulla superficie delle PTEC medianteanalisi quantitativa del segnale fluorescente. Cellule tubulari esposte al 25 o 50% di siero umanomostravano una marcata positività per il C3 sotto forma di depositi granulari rispetto a cellule dicontrollo che risultavano completamente negative. Il trattamento con albumina primadell’aggiunta del siero non modificava il deposito di C3. Al contrario la pre-esposizione dellePTEC alla trasferrina o all’IgG prima dell’incubazione con il siero aumentava marcatamente lapresenza di C3 sul lato apicale delle cellule. Questi dati indicano che il deposito di C3 sullasuperficie cellulare avviene in seguito a esposizione delle cellule tubulari al siero e che ilsovraccarico di trasferrina, IgG ma non albumina aumenta la capacità delle PTEC di fissare ilcomplemento.Laboratorio di Modelli Sperimentali di Malattie RenaliL’associazione di L-arginina con ACE inibitore rallenta la progressionedella malattia e riduce la sintesi renale di endotelina-1 in un modellosevero di nefropatia progressivaLa terapia attuale per le nefropatie proteinuriche croniche è rappresentata dagli inibitori210RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNdell'enzima di conversione dell'angiotensina (ACEi) che rallentano, ma possono non arrestare laprogressione della malattia e avere lo stesso grado di efficacia in tutti i pazienti. Studi del nostrolaboratorio hanno documentato che in ratti con la nefrite passiva di Heymann (PHN), unmodello severo di nefropatia membranosa, il trattamento con ACEi nelle fasi precoci dellamalattia riduceva la proteinuria e l’eccessiva sintesi renale di endotelina-1 (ET-1), importantemediatore di danno renale. L’ACEi era meno efficace se somministrato nelle fasi più tardive.Dato che la produzione di ET-1 e la sua attività biologica nel rene si contrappongono a quelladell’ ossido nitrico (NO), abbiamo valutato l’effetto della combinazione di ACEi con L-arginina, il precursore naturale di NO. I ratti con PHN hanno ricevuto ogni giorno per via orale:veicolo, lisinopril, L-arginina, lisinopril + L-arginina. I trattamenti, iniziati due mesi dopol’induzione della malattia, quando gli animali avevano severa proteinuria e segni di dannorenale, erano continuati fino al nono mese. L’aumento della pressione sistolica negli animali conPHN era limitato da L-arginina. Lisinopril e la combinazione erano più efficaci. L’ACEiriduceva la proteinuria a livelli numericamente, ma non significativamente più bassi del veicolo.L’associazione di ACEi e L-arginina era più efficace: i valori di proteinuria erano più bassi diquelli misurati prima del trattamento e persino di quelli del veicolo. Glomerulosclerosi e dannotubulare erano migliorati da ACEi da solo e ancor più dalla combinazione. L’elevata escrezioneurinaria di ET-1 nei ratti con PHN era ridotta del 23% e del 40% dopo il trattamento con l-arginina e lisinopril e del 62% dopo la somministrazione della loro combinazione. L’escrezioneurinaria di cGMP, indice indiretto della sintesi renale di NO, era parzialmente ripristinata dalisinopril ma normalizzata dalla terapia combinata. Questi dati suggeriscono che l’associazionedi L-arginina con ACEi possa rappresentare un nuovo approccio terapeutico per quei pazienti infase avanzata della malattia che non rispondono al trattamento con ACEi. Il ripristino dellabilancia tra ET-1/NO potrebbe essere di grande beneficio per arrestare la progressione dellemalattie renali.Gli inibitori delle vasopeptidasi (VIPs) hanno un effetto renoprotettivosuperiore agli ACE inibitori grazie alla loro capacità di modulare la sintesirenale di mediatori vasoattiviGli inibitori delle vasopeptidasi (VPIs) sono una classe di composti in grado di inibire sial’enzima di conversione dell’Ang II (ACE) che le endopeptidasi neutre (NEP). Studi in modellisperimentali di insufficienza renale cronica hanno dimostrato che VPIs hanno un effettorenoprotettivo superiore agli ACE inibitori poiché riducono con maggior efficienza la pressioneglomerulare. Tuttavia, non è ancora chiaro quali siano i mediatori coinvolti in questo fenomeno.Studi da noi precedentemente condotti hanno dimostrato che in un modello di riduzione dellamassa renale (RMR) nel ratto, la progressione della malattia è associata a un aumento dellasintesi renale di endotelina-1 (ET-1) e a una ridotta produzione di ossido nitrico (NO). Abbiamoconfrontato gli effetti del trattamento con VPIs e ACEi sull’escrezione urinaria di ET-1, dinitriti/nitrati, rispettivamente indici di sintesi renale di ET-1 e NO, e di cGMP, indice indirettodella sintesi del peptide natriuretico atriale renale (ANP), in ratti con RMR. Gli animali conRMR ricevevano un trattamento tardivo (da 21 a 90 giorni) per via orale con veicolo, AVE7688o enalapril. Sia AVE7688 che enalapril controllavano la pressione sistemica allo stesso livello.AVE7688 aveva un potente effetto antiproteinurico essendo in grado di ridurre il livello diescrezione urinaria di proteine dell’83% rispetto al veicolo. Enalapril riduceva la proteinuria del47%. La funzionalità renale, parzialmente ripristinata da ACEi, era significativamentemigliorata dal trattamento con VPIs. Anche le alterazioni glomerulari e tubulari eranomaggiormente ridotte da AVE7688 rispetto a enalapril. AVE7688 non solo normalizzava ilivelli di escrezione urinaria di ET-1 (riduzione del 68% contro il 49% di ACEi) ma era anchepiù efficace rispetto ad enalapril nel determinare l’aumento di nitriti/nitrati e di ANP nelle urine.In conclusione, in ratti con nefropatia progressiva l’effetto renoprotettivo superiore di AVE7688rispetto a enalapril si associa a un significativo miglioramento nel rene del rapporto tra211RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNmediatori vasocostrittori/vasodilatatori.Selettiva riduzione dell’espressione di nefrina in pazienti con nefropatiadiabeticaLe recenti scoperte di proteine podocitarie hanno chiarito i misteriosi meccanismi chegovernano la permselettività glomerulare. In questo studio abbiamo esplorato il ruolo di nefrina,CD2AP e podocina e valutato l’ultrastruttura dello slit diaphragm nella patogenesi dellaproteinuria di pazienti con diabete di tipo II associato a nefropatia. Pazienti diabetici adulti sonostati confrontati con pazienti affetti da malattia a lesioni minime e con controlli non proteinuricisottoposti a nefrectomia a causa di adenocarcinoma senza evidenze istologiche di lesioniglomerulari. L’espressione di nefrina (mRNA e proteina) è stata valutata attraverso metodichedi ibridizzazione in situ e immunoistochimica. Attraverso immunoistochimica abbiamo inoltrevalutato l’espressione di CD2AP e podocina. L’integrità dello slit di filtrazione è stata valutataattraverso analisi morfometriche al microscopio elettronico a trasmissione. L’espressione dellaporzione extracellulare della nefrina (mRNA e proteina) era marcatamente ridotta nei pazientidiabetici. Nessuna alterazione era stata evidenziata nei pazienti con malattia a lesioni minimerispetto ai controlli. Al contrario, l’espressione della nefrina intracellulare, della CD2AP e dellapodocina era comparabile in tutti i pazienti. L’analisi ultrastrutturale mostrava nei pazientidiabetici una marcata riduzione del numero degli slits con un ponte proteico integro nonostantela frequenza degli slits di filtrazione fosse comparabile a quella osservata nei controlli.L’ampiezza degli slits era comparabile in tutti i pazienti. La ridotta espressione di nefrinainsieme alla perdita dello slit diaphragm indica un nuovo meccanismo responsabile dellaproteinuria nella nefropatia diabetica. Dal momento che il traffico delle proteine a livelloglomerulare contribuisce alla progressione della malattia renale, i nostri risultati possono avereun’importante rilevanza clinica. La riduzione di nefrina in un contesto di normale espressione diCD2AP e podocina può essere considerato come uno specifico marker di malattia renale neldiabete. Terapie volte a correggere il difetto a carico della nefrina potrebbero essere utili nellacura del diabete.Selettiva riduzione dell’espressione della porzione extracellulare dellanefrina in pazienti con nefropatia a IgAL’identificazione di nefrina e CD2AP, proteine espresse prevalentemente nei podociti crucialinella modulazione della selettività glomerulare, ha permesso di chiarire i meccanismi cheportano alla fusione dei pedicelli e alla proteinuria. In questo studio abbiamo esplorato il ruolodi nefrina e CD2AP e valutato l’ultrastruttura dello slit diaphragm nella patogenesi dellaproteinuria in pazienti adulti affetti da malattie glomerulari acquisite quali malattia a lesioniminime, glomerulosclerosi focale e segmentale e nefropatia a IgA. Pazienti non proteinuricisottoposti a nefrectomia a causa di adenocarcinoma senza evidenze istologiche di lesioniglomerulari sono stati considerati come controlli. L’espressione di nefrina (mRNA e proteina), èstata valutata attraverso metodiche di ibridizzazione in situ e immunoistochimica usandospecifici anticorpi diretti contro i domini extra e intracellulari. Attraverso immunoistochimicaabbiamo inoltre valutato l’espressione di CD2AP. Analisi morfometriche al microscopioelettronico a trasmissione sono state effettuate per valutare l’intergrità degli slits di filtrazione.L’espressione della porzione extracellulare di nefrina (mRNA e proteina) risultavamarcatamente ridotta nei pazienti con nefropatia a IgA. Nessuna alterazione era stataevidenziata nei pazienti con malattia a lesioni minime e glomerulosclerosi focale e segmentale.Al contrario, l’espressione della nefrina intracellulare e della CD2AP erano comparabili in tutti ipazienti. L’analisi ultrastrutturale mostrava nei pazienti con nefropatia a IgA una marcatariduzione del numero degli slits con un ponte proteico integro nonostante la frequenza degli slitsdi filtrazione fosse comparabile a quella osservata nei controlli. L’ampiezza degli slits mostravauna tendenza a diminuire sia nella malattia a lesioni minime che nella nefropatia a IgA. Questi212RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNrisultati indicano che l’ultrastruttura dello slit di filtrazione è alterata nella nefropatia a IgAcome conseguenza della diminuita espressione della porzione extracellulare della nefrina.Ulteriori studi sono in corso per valutare il significato patofisiologico dell’anomalia dellanefrina nella nefropatia a IgA e per indagare come questa possa essere modulata da una terapiaantiproteinurica.Laboratorio di Immunologia e Genetica del Trapianto e MalattieRareL’ ACE–inibitore, anche se somministrato tardivamente, limita il dannorenale in un modello di rigetto cronicoIl rigetto cronico è una delle più importanti cause della perdita della funzionalità dell’organotrapiantato. Nonostante siano note le alterazioni funzionali e morfologiche associate al rigettocronico, non se ne conoscono ancora i meccanismi patogenetici. E’ noto che l'inibizione delsistema renina-angiotensina (RAS) con farmaci che blocchino la sintesi o l’attività biologicadell’angiotensina in modelli sperimentali previene lo sviluppo di alterazioni croniche al rene inseguito ad un allotrapianto. Tuttavia non è stato finora valutato se questo approccio terapeuticosia efficace se iniziato quando i segni di nefropatia siano già evidenti.Nel presente studio abbiamo valutato l'effetto di un trattamento tardivo con un ACE-inibitore, iltrandolapril, in un modello di trapianto allogenico di rene nel ratto. Gli animali sono stati trattatia partire da 7 fino a 13 mesi dopo il trapianto. Nonostante all’inizio del trattamento il renetrapiantato mostrasse segni di danno strutturale e una ridotta funzionalità, il trandolapril è statoin grado di riportare la funzione renale a valori basali pre-trapianto. Il trandolapril è stato anchein grado di bloccare la progressione del danno glomerulare, di ridurre l'espressione dellachemochina MCP-1 (monocyte chemoattractant protein-1) e l’infiltrazione dei linfociti T, anchese non ne ha modificato l’alloreattività contro gli antigeni del donatore.Questi risultati aprono nuove prospettive per la cura del danno renale causato dal rigettocronico. La terapia combinata di ACE inibitori e basse dosi di immunosoppressori potrebbecostituire un efficace trattamento per arrestare la progressione del danno d’organo dovuto alrigetto cronico del trapianto allogenico.La deplezione di L-arginina nella preeclampsia induce la sintetasi delmonossido d'azoto a formare specie ossidantiLa diminuzione della vasodilazione indotta dal monossido d'azoto (NO) e l'eccessivaformazione di specie reattive dell'ossigeno potrebbero spiegare la scarsa perfusione placentareche si verifica nelle donne con preeclampsia, anche se il meccanismo biochimico coinvolto nonè ancora noto. Con questo studio abbiamo verificato l'ipotesi che la ridotta attività dell'NO el'aumento di stress ossidativo nella placenta di donne con preeclampsia siano legati ad unaridotta bio-disponibilità dell’aminoacido L-arginina, precursore dell’NO. Come già osservato inun nostro precedente studio, nella placenta di donne con preeclampsia sia l’attività che i livellidi espressione dell’enzima preposto alla sintesi di NO nell’endotelio (ecNOS) sono risultatiparagonabili ai valori presenti nelle placente di donne con gravidanza normale. Nei villiplacentari, abbiamo osservato un significativo aumento sia della formazione di perossinitrito(valutato mediante esperimenti di immunoperossidasi per nitrotirosina, marker di perossinitrito)sia di stress ossidativo (valutato mediante esperimenti di immunoperossidasi per 4-idrossinonenale-lisina) solo nei campioni ottenuti da donne con preeclampsia. Mediante analisicon HPLC, abbiamo dimostrato che i livelli dell’aminoacido L-arginina, sia nel sangueombelicale che nei villi placentari, sono diminuiti nelle donne con preeclampsia rispetto a quellecon gravidanza normale. Tale diminuzione non è dovuta ad un difetto del trasportodell’aminoacido L-arginina nella placenta, poichè l'espressione genica dei suoi trasportatori213RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNCAT-1, 4F2hc e LAT-1 (valutata mediante esperimenti di real time RT-PCR) è risultatanormale. Quindi abbiamo verificato se vi fosse un coinvolgimento dell’enzima arginasi II,responsabile della degradazione di L-arginina. I dati ottenuti hanno documentano che sial'espressione genica (valutata mediante real time RT-PCR), che il contenuto proteico tissutale(valutato mediante esperimenti di immunoperossidasi e di Western blot) della arginasi-II sonorisultati significativamente più elevati nei villi delle placente di donne con preeclampsia rispettoa quelli osservati nelle placente di gravide normali. Questi risultati forniscono una spiegazionebiochimica del difetto a carico dell'attività dell'NO e del conseguente aumento di stressossidativo nella placenta di donne con preeclampsia. E’ possibile che nella placenta normaleun’adeguata concentrazione di L-arginina permetta all’enzima ecNOS di produrre livelli di NOsufficienti ad assicurare una corretta formazione e perfusione della placenta. Al contrario, nelledonne con preeclampsia la dimuzione dei livelli di L-arginina nella placenta, dovuta ad unaumento della sua degradazione da parte dell’enzima arginasi II, indirizza la ec-NOS a formareperossinitrito, causando danno tissutale e scarsa perfusione placentare.Mutazioni nel Fattore H riducono l’affinità di legame alla componente C3bdel complemento, all’eparina e alla superficie delle cellule endoteliali nellaSindrome Emolitico UremicaLa Sindrome Emolitico Uremica (SEU) è una malattia caratterizzata da anemia emoliticomicroangiopatica,trombocitopenia e danno renale acuto. Studi recenti hanno identificato unaforma di SEU causata da mutazioni geniche nella regione C-terminale del Fattore H. Il nostrogruppo ha evidenziato l’impatto di tre mutazioni (E1172Stop, R1210C a R1215G, le ultime dueidentificate in tre pazienti provenienti da famiglie diverse) sulla funzione della proteina. Tuttetre le mutazioni causano un ridotto legame alla componente centrale del complemento C3b/C3d,all’eparina e alle cellule endoteliali. Questi difetti del Fattore H spiegano la progressione deldanno delle cellule endoteliali del microcircolo nella SEU con componente genetica dovuta amutazioni del Fattore H e suggeriscono un ruolo fisiologico del Fattore H nel proteggerel’integrità del tessuto durante la formazione di trombi.Sindrome Emolitico Uremica familiare associata a una mutazione nellaproteina cofattore di membrana (MCP)Mutazioni nel Fattore H (HF1) sono state riportate in un numero elevato di casi di SindromeEmolitico Uremica diarrea-negativa, non associata a verotossina (D-SEU). Tuttavia, la maggiorparte dei pazienti non presenta mutazioni in HF1, nonostante ridotti livelli serici di C3. Perquesto motivo abbiamo studiato altre proteine regolatrici del complemento per verificare il loropossibile coinvolgimento nella patologia.Abbiamo analizzato i geni codificanti per alcune di queste proteine: Fattore H related 5 (FHR-5), recettore del complemento di tipo 1 (CR1), proteina cofattore di membrana (MCP),utilizzando il metodo della PCR-single strand conformation polymorphism (PCR-SSCP) ed ilsequenziamento diretto. L’analisi è stata eseguita in 25 pazienti affetti da D-SEU, selezionati dalnostro Registro Internazionale della SEU/PTT (Porpora Trombotica Trombocitopenica)Ricorrente e Familiare, sulla base di anomalie nel sistema del complemento e di assenza dimutazioni in HF1.Lo studio ha evidenziato, in due pazienti con storia familiare di SEU, una mutazione nel genecodificante per MCP, una proteina di membrana che regola il complemento. La mutazione causala sostituzione dei tre aminoacidi in posizione 233-235 e l’inserzione di un codone di stopprematuro; l’alterazione determina la perdita del dominio transmembrana della proteina conconseguente riduzione dell’espressione della stessa sulla superficie cellulare.I risultati dei precedenti studi condotti sul Fattore H indicano un’associazione tra anomalie inquesta proteina e la D-SEU. La scoperta di una mutazione nell’MCP suggerisce che un’alterataregolazione dell’attivazione del complemento potrebbe avere un ruolo nella patogenesi delle214RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNforme genetiche di D-SEU. L’MCP potrebbe quindi rappresentare il secondo gene candidato perla malattia. La proteina è infatti altamente espressa nel rene e riveste un ruolo molto importantenel regolare l’attivazione del C3 nei glomeruli. La nostra interpretazione dei risultati è che unaridotta espressione di MCP, in risposta a stimoli che attivano il complemento, determinaun’anormale deposizione del complemento sulle cellule endoteliali glomerulari, causando undanno della microcircolazione e del tessuto.Unità di Terapia GenicaTrasferimento genico con vettori adenovirali di seconda generazione evettori adeno-associati nel rene del donatore in un modello sperimentaledi trapianto singenico: localizzazione del transgene e valutazione dellarispostaNonostante la sopravvivenza di un organo solido a un anno dal trapianto sia notevolmentemigliorata, restano ancora da risolvere numerosi problemi. Gli attuali farmaci antirigettosomministrati per via sistemica, danneggiano a lungo termine il sistema immunitario delpaziente esponendolo ad un maggior rischio di infezioni e cancro. L’insorgenza del rigettocronico, una delle principali cause di danno all’organo trapiantato, rappresenta un ulterioreproblema nella clinica del trapianto. Trasferire all’interno dell’organo da trapiantare genicodificanti proteine che interferiscono nel legame tra cellule che presentano l’antigene e linfocitiT circolanti, potrebbe rappresentare una nuova strategia per ottenere un’inibizione selettiva dellarisposta allogenica. Abbiamo precedentemente dimostrato che la trasfezione di un allotrapiantorenale mediante un vettore adenovirale di prima generazione codificante per CTLA4Ig, unaproteina di fusione che blocca l’attivazione dei linfociti T legandosi ai recettori B71 e B72, è ingrado di prevenire il rigetto acuto senza ricorrere all’utilizzo di una terapia immunosoppressivasistemica e di prolungare la vita dell’animale ma non di indurre una sopravvivenza indefinita.Per migliorare la sopravvivenza e possibilmente indurre tolleranza del trapianto, si potrebberoutilizzare nuovi vettori adenovirali, meno immunogenici o vettori adeno-associati. A tale scopoabbiamo valutato l’efficacia di trasfezione di vettori adenovirali di seconda generazione e divettori adeno-associati (AAV), codificanti per il gene reporter β-gal, in un modello di trapiantorenale singenico in ratti. Entrambi i vettori erano in grado di trasfettare il rene e lalocalizzazione del transgene, sia con adenovirus che con AAV, è risultata la stessa: le celluleepiteliali dei tubuli prossimali. Il tempo di espressione era tuttavia diverso: mentre con gliadenovirus di seconda generazione l’espressione del transgene iniziava a 4 giorni, incrementavaa 15 ed era ancora presente a 30 giorni dal trapianto, con gli AAV l’espressione era più tardiva einiziava a 15 giorni dal trapianto ma era ancora rilevabile sia a 30 che a 60 giorni. Abbiamoinoltre valutato mediante analisi immunoistochimica l’eventuale presenza di celluleinfiammatorie infiltranti il rene trapiantato. Gli adenovirus di seconda generazione, pur avendoun genoma più deleto rispetto ai virus di prima generazione, inducevano una forte rispostainfiammatoria con accumulo sia di macrofagi che di linfociti T CD4+ e CD8+. Al contrario, laquntità di cellule infiammatorie presenti nel rene degli animali trasfettati con AAV eracomparabile agli animali di controllo.215RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMN216RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNDIPARTIMENTO DI BIOINGEGNERIAPERSONALECapo DipartimentoAndrea REMUZZI, Dr.Ing.Laboratorio di Biofisica RenaleCapo LaboratorioDaniela MACCONI, Dr.Sci.Biol.Laboratorio di Tecnologie BiomedicheCapo LaboratorioBogdan ENE IORDACHE, Dr.Bio.Ing.Unità di Ingegneria dei TessutiCapo UnitàMarina FIGLIUZZI, Dr.Sci.Biol.217RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNINTRODUZIONE ALLE ATTIVITA' DEL DIPARTIMENTOLo scopo dei programmi di ricerca del Dipartimento è l’impiego di tecniche ingegneristiche perlo studio di processi fisiopatologici e lo sviluppo di strategie terapeutiche innovative. Sonoattive all'interno del Dipartimento diverse linee di ricerca, sia di base che applicata. Glistrumenti utilizzati sono di varia natura e comprendono l’impiego di modelli teorici per l’analisidi fenomeni biologici, di serie di immagini diagnostiche e microscopiche per quantificare lestrutture tridimensionali oggetto di studio, misure dirette o indirette di parametri fisico-chimicisia a livello sperimentale che clinico, l’impiego di tecnologie informatiche per l’archiviazione el’analisi dei dati clinici e, infine, l’impiego delle tecniche di coltura cellulare per generare tessutibiologici in laboratorio. In particolare sono in corso studi in quattro settori della ricercabiomedica. Il primo è quello relativo ai meccanismi coinvolti nella progressione del dannorenale nelle nefropatie croniche. Un'altra area di interesse del programma di ricerca inbioingegneria è costituita dagli studi emodinamici in campo vascolare, con l'obiettivo dicaratterizzare l'effetto delle condizioni emodinamiche nel danno vascolare delle grosse arterie. Ilpiù recente sviluppo dei programmi del Dipartimento è legato all'ingegneria dei tessuti. Inquesto ambito siamo coinvolti nello sviluppo di un pancreas bio-artificiale e di vasi sanguignibio-artificiali. Infine, sulla base delle competenze sviluppate nell'area informatica stiamosviluppiando sistemi informativi dedicati alla gestione di dati clinici generati nell’ambito distudi controllati e nella pratica clinica convenzionale.SCOPERTE/RISULTATI PRINCIPALISono stati messi a punto programmi di calcolo che permettono la generazione automatica dimodelli tridimensionali di grossi vasi arteriosi (arteria carotide e aorta addominale) a partire daindagini TAC o RM. La precisione di questa tecnica è risultata molto elevata.Abbiamo seguito una popolazione di pazienti emodializzati per valutare la durata dell'accessovascolare. Abbiamo determinato che esiste una correlazione significativa tra durata dell'accessoe portata media di sangue. Questo risultato può contribuire a migliorare la durata dell'accessoche rimane il punto debole del trattamento emodialitico.Abbiamo dimostrato la validità dell'uso di una cartella elettronica (e-CRF) per uno studioclinico controllato che permette la raccolta dei dati, facilitando il lavoro degli investigatori. Lostrumento ha permesso di raccogliere i dati degli studi clinici senza bisogno di supportocartaceo, con notevoli vantaggi in termini di tempo di raccolta dei dati e possibilità dimonitoraggio a distanza.Abbiamo dimostrato che una terapia basata sull’antagonismo dell’angiotensina II è in grado difar regredire la malattia renale in un modello animale spontaneo di nefropatia mediante larigenerazione di tessuto glomerulare. Questa indicazione, se confermata, apre nuove prospettiveper la cura delle patologie renali progressive e dell'insufficienza renale terminale.Gli studi su podociti differenziati in coltura esposti ad angiotensina II hanno confermato il ruolofondamentale del citoscheletro nel regolare la funzione di setaccio molecolare di queste cellule ehanno permesso di chiarire il ruolo di una tirosin-chinasi quale segnale intracellulareresponsabile della riorganizzazione del citoscheletro e delle proteine di giunzione in modelli dinefropatia proteinurica.218RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNAbbiamo testato la funzionalità di un dispositivo contenente isole pancreatiche che permettel'impianto sottocute nel ratto diabetico e il controllo della glicemia per più di 20 giorni. Questericerche aprono la strada al trapianto di isole immunoisolate nell’uomo per il controllo dellaglicemia senza necessità di trattamenti farmacologici.Abbiamo messo a punto una struttura attrezzata per la separazione di isole da pancreas umani incondizioni controllate di sterilità e finalizzata ad un programma di trapianto di sole isole nelpaziente insulino-dipendente.COLLABORAZIONI NAZIONALIUnità di Radiologia, Ospedale San Paolo, MilanoDipartimento di Bioingegneria, Politecnico di Milano, MilanoFidia Advanced Biopolymers, Abano Terme, PadovaInstituto di Fisiologia Clinica CNR, PisaTecnobiomedica, RomaUnità di Anatomia Patologica, Ospedale San Paolo, MilanoCOLLABORAZIONI INTERNAZIONALIInstitute for Bioengineering and Bioscience, Georgia Institute of Technology, Atlanta GA ,USA.Massachussets Institute of Technology, Cambridge MA, USA.Politecnico Federale di Zurigo, Dept. of Material Science, ZurichIstituto di Nefrologia,Dipartimento di Biologia Cellulare, Niigata University Graduate School ofMedical and Dental SciencesPRESENZA IN COMITATI EDITORIALIDrugs of Today (Andrea Remuzzi, Associated Editor)ATTIVITA' DI REVISIONEKidney International, European Journal of Physiology, Journal of the American Society ofNephrology, Medical & Biological Engineering & Computing, IEEE Transactions in MedicalImaging.219RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNORGANIZZAZIONE DI EVENTI27 Gennaio 2003Seminario del Dipartimento di Biongegneria:Ricostruzione geometrica di vasi arteriosi per analisi fluidodinamica a livello del singolopaziente18 Aprile 2003Dipartimento di Bioingegneria, Politecnico di Milano:Studi sperimentali per l'ingegnerizzazione della cartilagine23 Luglio 2003Laboratorio di Tecnologie BiomedicheIstituto Mario Negri:Quantificazione delle alterazioni strutturali nei pazienti affetti da rene policistico18 Dicembre 2003Unità di Ingegneria TessutaleIstituto Mario Negri:Ottimizzazione del metodo di separazione di isole pancreatiche e delle tecniche diimmunoisolamentoPARTECIPAZIONE AD EVENTI CON CONTRIBUTI DELDIPARTIMENTO22rd AIDPIT Workshop, Igls (Austria), 26-28 Gennaio 2003Comunicazione orale: "Bovine exocrine tissue is a source of stem cells"22rd AIDPIT Workshop, Igls (Austria), 26-28 Gennaio 2003Poster: "Use of an immunoisolation device for the transplantation of bovinepancreatic islets indiabetic rats"BIONOVA 2003, Padova, 18-20 maggio 2003Comunicazione orale: "Ingegneria del tessuto vascolare"2nd Annual Meeting of the European Tissue Engineering SocietyGenova, 3-6 Settembre 2003Comunicazione orale: "In vitro generation of pancreatic islets from exocrrine tissue"2nd Annual Meeting of the European Tissue Engineering SocietyGenova, 3-6 Settembre 2003Poster: "Vascular smooth muscle cells on hyaluronic acid: culture and mechanicalcharacterization of an engineered vascular construct "220RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNCONTRIBUTI E CONTRATTIFresenius Medical Care, Bad Homburg, GermanyMinistero dell’Istruzione, dell’Università e della Ricerca (MIUR)Fondazione CARIPLOSELEZIONE PUBBLICAZIONI SCIENTIFICHE APPARSENELL'ANNO 2003Antiga L, Ene-Iordache B, Remuzzi A. Computational geometry for patient-specific reconstruction and meshing ofblood vessels from MR and CT angiography.IEEE Trans Med Imaging. 2003 May;22(5):674-84.Ene-Iordache B, Mosconi L, Antiga L, Bruno S, Anghileri A, Remuzzi G, Remuzzi A. Radial artery remodeling inresponse to shear stress increase within arteriovenous fistula for hemodialysis access.Endothelium. 2003;10(2):95-102.Ruggenenti P, Flores C, Aros C, Ene-Iordache B, Trevisan R, Ottomano C, Remuzzi G. Renal and metabolic effectsof insulin lispro in type 2 diabetic subjects with overt nephropathy.Diabetes Care. 2003 Feb;26(2):502-9.Campbell R, Sangalli F, Perticucci E, Aros C, Viscarra C, Perna A, Remuzzi A, Bertocchi F, Fagiani L, Remuzzi G,Ruggenenti P. Effects of combined ACE inhibitor and angiotensin II antagonist treatment in human chronicnephropathies.Kidney Int. 2003 Mar;63(3):1094-103.Remuzzi A, Ene-Iordache B, Mosconi L, Bruno S, Anghileri A, Antiga L, Remuzzi G. Radial artery wall shear stressevaluation in patients with arteriovenous fistula for hemodialysis access.Biorheology. 2003;40(1-3):423-30.SELEZIONE PUBBLICAZIONI DIVULGATIVE APPARSENELL'ANNO 2003Antiga L, Ene-Iordache B, Remuzzi A. Personalized Blood Flow Simulations. Fluent News fall 2003.ATTIVITA' DI RICERCALaboratorio di Biofisica RenaleStudio del ruolo dell'angiotensina nell'alterata funzione della barrieraglomerulareIl trattamento con farmaci che bloccano l'angiotensina II (Ang II) migliora la funzione dellabarriera glomerulare rallentando la progressione del danno renale o addirittura inducendo221RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNregressione. I meccanismi molecolari di questa protezione non sono chiari. Studi condotti invitro hanno permesso di stabilire che l'Ang II ha un effetto diretto sulla funzione del podocitache è il componente fondamentale della barriera glomerulare. Attraverso il riarrangiamento delcitoscheletro, l'Ang II altera la distribuzione di alcune proteine del podocita legate all'actina(ZO-1, alfa actinina e catenine) che interagiscono con proteine transmembrana localizzate nellegiunzioni intercellulari tra podociti adiacenti. La perdita del contatto podocita-podocita,aumenta il passaggio dell'albumina attraverso il monostrato cellulare. Esperimenti condotti inreni isolati eperfusi di ratto, un sistema che consente di studiare l'effetto diretto dell'Ang II sulla funzionedella parete del capillare glomerulare, hanno confermato che la proteinuria indotta dall'infusionedi Ang II si associa ad alterazioni nella distribuzione glomerulare della proteina ZO-1. In vivoabbiamo studiato l'espressione della nefrina, una proteina transmembrana localizzata nellagiunzione intercellulare, in ratti MWF durante la progressione della malattia renale in relazionealla proteinuria, al grado di sclerosi glomerulare e al numero di podociti per glomerulo.Studio dei meccanismi coinvolti nella regressione delle malattie renaliproteinuricheE' stato ormai dimostrato che farmaci che antagonizzano l'azione dell'angiotensina II, sono ingrado di ridurre la pressione arteriosa sistemica e sono anche efficaci nel ridurre la velocità diprogressione del danno renale verso l'insufficienza terminale. Recentemente abbiamo osservatoche un trattamento intensivo con inibitori dell'enzima di conversione dell'angiotensina nel rattoha fatto regredire il danno renale a livello strutturale e funzionale. Per approfondire lacomprensione dei fenomeni alla base di questo risultato abbiamo studiato l'effetto di questotrattamento in ratti spontaneamente affetti dal danno renale (il ratto MWF). Abbiamo valutatol’effetto del trattamento sulla funzione renale e sulla struttura del tessuto glomerulare. Mediantequesto trattamento, ratti affetti da danno renale importante, perché di età avanzata, hannocomunque mostrato una quasi completa regressione della proteinuria. L’osservazionemorfologica ha permesso inoltre di documentare una consistente regressione delle lesionisclerotiche e la comparsa di tessuto glomeruare normale, molto probabilmente dovuto afenomeni di rigenerazione. Questi risultati spingono ad approfondire i meccanismi con cui èpossibile ottenere la rigenerazione del tessuto danneggiato dalla patologia al fine di poterutilizzare una nuova importante strategia nella cura di queste patologie, non solo nell’arrestarela progressione della malattia ma nel farla regredire.Modellizzazione teorica del passaggio di proteine attraverso membraneper emodialisiIl trattamento emodialitico è oggi molto diffuso nei Paesi industrializzati e permette di sostituirecon successo la funzione renale. Le tecniche impiegate per questo eseguire questo trattamentodel sangue si sono molto evolute negli anni e hanno permesso di ottenere risultati moltoimportanti in termini di sopravvivenza del paziente e di qualità della vita. Si sta comunquecercando di minimizzare quelle che sono ritenute le complicanze di questi trattamenti, attraversol'uso di membrane che oltre a essere biocompatibili devono anche espletare una funzionefiltrante molto selettiva. L'obiettivo è quello di rimuovere il più possibile la beta-2microglobulina ma di ritenere nel circuito extracorporeo proteine come l'albumina. In questoambito ci siamo occupati dello sviluppo di modelli teorici e di tecniche numeriche per indagarele proprietà selettive di nuove membrane a fibra cava per emodialisi realizzate in polisulfone.Queste metodologie hanno permesso di illustrare il meccanismo attraverso il quale unamembrana di nuova generazione riesce a filtrare una maggior quantità di beta-2 microglobulinae al tempo stesso a ritenere in modo efficace l'albumina. Le tecniche numeriche hanno anchepermesso di visualizzare l’interazione a livello molecolare delle proteine in studio e dei pori cheperforano la membrana del filtro.222RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNStudio dell'effetto di farmaci antipertensivi sulla selettività della paretecapillare glomerulareLe malattie renali proteinuriche progrediscono spesso verso l’insufficienza renale terminale. Ilnostro gruppo di ricerca ha formulato l’ipotesi che la perdita di selettività alle macromolecoledella membrana glomerulare sia il passo iniziale nel processo patologico che porta alla necessitàdel trattamento dialitico o del trapianto d'organo. Lo studio dei meccanismi responsabili deldanno renale richiede un’attenta valutazione della funzione selettiva della membrana capillareglomerulare. L’obiettivo dei nostri studi in questo ambito è stato di valutare sperimentalmente leproprietà selettive della membrana glomerulare in pazienti affetti da varie forme di nefropatie edi studiare se trattamenti farmacologici in grado di antagonizzare l’effetto dell’angiotensina IIsono in grado di migliorare le proprietà selettive della membrana capillare glomerulare. Letecniche impiegate in questi studi sono basate sulla determinazione della clearance renale diopportuni traccianti per determinare la selettività della membrana glomerulare a macromolecoleneutre circolanti di diversa grandezza. Mediante l’impiego di modelli teorici abbiamo anchestimato alcuni parametri che descrivono la funzione selettiva della membrana in termini didistribuzione dei raggi di ipotetici fori. Gli studi eseguiti hanno permesso di confrontarel'effettiva azione di diversi trattamenti farmacologici sulla funzione selettiva della membranaglomerulare, in diverse patologie renali croniche progressive.Laboratorio di Tecnologie BiomedicheRicostruzione tridimensionale e analisi geometrica di segmenti vascolarimediante indagini TAC e RML'evidenza che le placche aterosclerotiche si formano principalmente nelle ramificazioni delcircolo arterioso ha portato a ipotizzare che condizioni emodinamiche “disturbate” favoriscanol’insorgenza dell’aterosclerosi. Data l'influenza della forma del vaso sull’emodinamica, èimportante disporre di metodi accurati e veloci di ricostruzione geometrica. Le tecnicheangiografiche moderne, come la tomografia assiale computerizzata (TAC) e la risonanzamagnetica (RM), permettono di ottenere informazioni dettagliate sulla struttura dei vasi. Nelnostro laboratorio abbiamo sviluppato tecniche per la ricostruzione tridimensionale, l'analisigeometrica e la generazione di mesh per il calcolo numerico di tratti arteriosi da angiografieTAC e RM. Le immagini TAC e RM, trasferite dalle apparecchiature di acquisizione sucalcolatore, vengono processate con algoritmi di modellazione per generare superficitridimensionali che riproducono l'interfaccia tra parete vascolare e lume del vaso. L'accuratezzadella ricostruzione è stata validata sperimentalmente. Sul modello generato vengono poieffettuate misure accurate utilizzando algoritmi di geometria computazionale. Le stesse tecnichesono impiegate per la generazione di mesh per il calcolo fluidodinamico agli elementi finiti.Tutte le procedure sono state sviluppate con l’obiettivo di minimizzare l'interventodell'operatore e massimizzare l'accuratezza dei risultati.Analisi numerica computazionale del moto del sangue in segmentivascolari arteriosiNumerosi studi hanno dimostrato uno stretto rapporto fra le condizioni emodinamiche locali e laformazione di placche aterosclerotiche. Il danno vascolare insorge preferenzialmente inprossimità delle ramificazioni, dove lo shear stress (la forza di scorrimento indotta sulla paretedel vaso dal moto del sangue) è basso e oscillante durante il ciclo cardiaco. Lo shear stress non èmisurabile direttamente, ma viene calcolato come prodotto della derivata della velocità delsangue in direzione normale alla parete e la viscosità del sangue. Per calcolarlo si utilizzanotecniche numeriche di "computational fluid dynamics" (CFD). Lo scopo di questo progetto é223RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNquello di simulare tramite CFD le condizioni emodinamiche sulla parete vascolare a livello delsingolo paziente. Abbiamo studiato alcuni segmenti vascolari, ricostruiti a partire da angiografieTAC o RM, e abbiamo simulato il moto del sangue al loro interno. Per le simulazioni numerichevengono usate come condizioni al contorno le velocità del sangue misurate mediante echocolor-Dopplerdel paziente. Obiettivo di queste ricerche è quello di mettere a punto tecniche chepermettano di studiare le relazioni tra lo sforzo di taglio indotto dal moto del sangue e il dannovascolare che si sviluppa.Indagine fluidodinamica della fistola arterovenosa nel pazienteemodializzatoE’ stato ipotizzato che lo sforzo di scorrimento (shear stress) medio nel tempo indotto dal motodel sangue sulla parete vascolare influenzi la funzione delle cellule endoteliali che sembranoagire come dei recettori meccanici. Abbiamo effettuato il presente studio per investigare larelazione fra lo shear stress pulsatile ed il rimodellamento dell’arteria radiale dopo un aumentocronico della portata ematica, dovuto alla creazione di una fistola arterovenosa nei pazientiemodializzati. Mediante ecografia è stato misurato il diametro dell’arteria radiale e l’andamentodella velocità al centro del vaso. In concomitanza con l’ecografia è stato eseguito un prelievo disangue per determinare la concentrazione di proteine plasmatiche e l’ematocrito, usate percalcolare la viscosità del sangue. Abbiamo effettuato rilevazioni prima e dopo l’interventochirurgico, ad una settimana, un mese e tre mesi. Sulla base delle misure effettuate abbiamocalcolato mediante un modello analitico (Womersley) l’andamento dello shear stress nel temposulla parete dell’arteria radiale. I risultati hanno evidenziato una stretta relazione tra ilrimodellamento e le caratteristiche dello sforzo di taglio alla parete, e indicato un nuovomeccanismo di risposta alle variazioni emodinamiche croniche.Sviluppo di sistemi computerizzati per la realizzazione di Studi CliniciControllatiNumerosi studi clinici sono in corso al Centro di Ricerche Cliniche per le Malattie Rare “Aldo eCele Daccò”, in collaborazione con altri gruppi di ricerca nazionali o internazionali. Questi trialdevono essere svolti secondo le linee guida di Good Clinical Practice (GCP) e richiedono un'altaqualità nella raccolta e nella gestione dei dati clinici. Ogni trial clinico richiede dei case reportform (CRF) cartacei per la registrazione dei dati. Tali dati devono essere poi archiviati inmaniera elettronica in database appositamente predisposti. Nel nostro laboratorio abbiamorealizzato sistemi informatici di raccolta dati per gli studi clinici, utilizzando databasetradizionali di tipo relazionale (RDBMS). Usando il linguaggio Visual Basic abbiamosviluppato programmi finalizzati all’elaborazione, validazione ed all'estrazione dei dati perl’analisi statistica. Recentemente abbiamo sviluppato un sistema innovativo di raccolta datiusando CRF elettronici anziché cartacei. Il sistema è basato sull’utilizzo di computer portatili indotazione agli investigatori e permette di evitare completamente l’uso della modulisticacartacea.Ingegneria del tessuto vascolareLe protesi vascolari sintetiche possono essere impiegate nei pazienti solo se di grosso calibro.Protesi artificiali di piccolo calibro sono soggette ad elevato rischio trombotico. Per questomotivo si cerca di sviluppare un sostituto vascolare biologico con capacità di risposta funzionaleagli stimoli che derivano dalle variazioni di portata ematiche e/o di sostanze circolantivasoattive. Queste proprietà possono essere ottenute con una protesi biologica, ossia una protesirealizzata con la tecnica dell'ingegneria dei tessuti.Le ricerche effettuate nei nostri laboratori sono state rivolte all’utilizzo di una matrice di acidoialuronico esterificato come materiale biodegradabile per la generazione di costrutti vascolari.Abbiamo utilizzato la tecnica messa a punto precedentemente che permette la semina di cellule224RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNmuscolari lisce sul biomateriale e la generazione di un costrutto tubolare di diametro interno diquattro millimetri. Abbiamo valutato l'effetto di particolari fattori di crescita e condizioni disollecitazione meccanica controllata sulle proprietà meccaniche dei costrutti in termini diresistenza ed elasticità. Abbiamo anche valutato l'espressione di matrice cellulare, l'apoptosicellulare e la morfologia del tessuto generato.*In collaborazione con il laboratorio di Biologia della cellula e XenotrapiantoSviluppo di un dispositivo per il trapianto di isole pancreaticheimmunoisolateIl trapianto di isole pancreatiche immunoisolate è una valida strategia per il trattamento deldiabete insulino-dipendente perché le isole possono garantire un’appropriata produzione diinsulina e i sistemi di immunoisolamento sono in grado di prevenire il rigetto perchéimpermeabili alle cellule del sistema immunitario dell’ospite Nei nostri laboratori abbiamosviluppato due sistemi di immunoisolamento: uno basato sull’utilizzo di microcapsule di gel dialginato e l’altro costituito da fibre cave di polisulfone. Abbiamo impiantato microcapsule diarginato contenenti isole pancreatiche bovine nella cavità peritoneale di ratti diabetici. Neglianimali abbiamo osservato un pronto abbassamento della glicemia e la condizione dinormoglicemia si è mantenuta stabile e costante per diverse settimane. Per valutare lafunzionalità di isole bovine immunoisolate nel dispositivo a fibre cave abbiamo impiantato idispositivi sottocute sul dorso in ratti diabetici. Le condizioni di normoglicemia sono statemantenute sino a 20 giorni dopo l’impianto. I risultati fino ad ora ottenuti hanno dimostrato chei dispositivi di immunoisolamento permettono un adeguato scambio di glucosio ed insulinaanche se per un periodo limitato. L’obiettivo che ci proponiamo è quello di ottenere unamaggiore durata dei dispositivi impiantati tramite l’impiego di nuovi materiali per larealizzazione di membrane per immunoisolamento.Programma di trapianto di isole pancreatiche nel paziente diabeticoinsulino-dipendenteRecenti studi clinici hanno dimostrato che il trapianto di isole pancreatiche in pazienti diabeticipuò indurre la normoglicemia evitando la somministrazione di insulina e i frequenti controllidella glicemia richiesti dal trattamento convenzionale Questo tipo di trapianto è molto efficacese viene impiantato un numero sufficiente di isole pancreatiche. La nostra ricerca è stata quindifinalizzata al miglioramento delle tecniche di isolamento per ottenere il maggior numero di isoleda un solo pancreas umano Abbiamo utilizzato la metodica di isolamento automatizzato checonsiste di una camera di digestione collegata ad un circuito di perfusione che permette ilricircolo delle soluzioni di digestione. Con questa tecnica possiamo controllare in modo efficacele fasi del processo di digestione e siamo in grado di isolare più di 300.000 isole da un pancreasumano. Le procedure di separazione di isole pancreatiche umane avvengono in ambientecontrollato (classe nominale 10.000) che permette di mantenere condizioni di assoluta sterilitàverificate con opportuni controlli microbiologici del materiale ottenuto. Nei prossimi mesiprevediamo di ottimizzare la tecnica di purificazione del tessuto pancreatico per poter ottenereisole quasi completamente pure. E’ inoltre in programma un processo di certificazione delsistema di isolamento e coltura del materiale cellulare per uso clinico.Differenziazione di cellule del pancreas precursori delle cellule betaIl diabete di tipo I è caratterizzato da distruzione autoimmnune delle cellule beta delle isolepancreatiche, con conseguente deficit di insulina e completa dipendenza dalla somministrazionedi insulina esogena. La scarsità di donazioni di pancreas ha portato allo sviluppo di terapie disostituzione delle cellule beta. Una importante prospettiva viene offerta dallo sviluppo di betacellulesostitutive a partire da cellule staminali. Scopo del progetto è di valutare se, partendo da225RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNtessuto esocrino di pancreas bovino, si possono ottenere cellule in grado di differenziarsi incellule che contengono insulina. La frazione di tessuto esocrino normalmente scartata dallepreparazioni di isole pancreatiche bovine viene indotta alla differenzazione con l’aggiunta alterreno di coltura di idonei fattori di crescita. Le cellule modificano la loro struttura e dopo circa2-3 settimane in coltura, si addensano e formano aggregati tridimensionali, con struttura moltosimile a quella delle isole. L’analisi immunoistochimica e un’analisi di RT-PCR degli aggregatihanno evidenziato che queste cellule contengono insulina anche se in quantità minore rispettoalle isole pancreatiche. Questi risultati indicano che il tessuto esocrino può essere fonte dicellule beta. L’obiettivo che ci proponiamo è quello di ottenere un maggior numero di cellulecontenenti insulina tramite l’utilizzo di nuovi fattori di differenziazione.226RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNCentro di Ricerche Clinicheper le Malattie RareAldo e Cele Daccò Ranica (Bg)RAPPORTIATTIVITA’ 2003dipartimenti227RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMN228RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNDIPARTIMENTO DIMEDICINA RENALEPERSONALECapo DipartimentoPiero RUGGENENTI, Dr.Med.Chir.Laboratorio di BiostatisticaCapo LaboratorioAnnalisa PERNA, Dr.Sci.Stat.Unità di Monitoraggio dei FarmaciCapo UnitàGiulia GHERARDI, Dipl.Liceo ScientificoLaboratorio di Farmacocinetica e Chimica ClinicaCapo LaboratorioFlavio GASPARI, Dr.Chim.Laboratorio di Fasi Avanzate dello Sviluppo dei Farmaci nell’UomoCapo LaboratorioNorberto PERICO, Dr.Med.Chir.Unità di Fasi Precoci dell’Utilizzo dei Farmaci nell’UomoCapo UnitàAneliya PARVANOVA, Dr.Med.Chir.229RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNINTRODUZIONE ALLE ATTIVITA' DEL DIPARTIMENTOIl Dipartimento di Medicina Renale è stato istituito nel 1999 presso il Centro di RicercheCliniche per le Malattie Rare “Aldo e Cele Daccò” – Villa Camozzi, Ranica per coordinare leattività di tre laboratori e due unità.Il Dipartimento si dedica in principal modo allo studio dei meccanismi di progressione dellenefropatie croniche e alla definizione di nuove strategie di prevenzione/trattamento dellanefropatia diabetica, delle nefropatie croniche non diabetiche, della nefropatia cronica deltrapianto, delle complicanze cardiovascolari del paziente diabetico, nefropatico, dializzato otrapiantato e delle microangiopatie trombotiche.Gli obiettivi principali di queste attività sono:1. Identificare strategie di screening e intervento atte a prevenire l’insorgenza della nefropatia edi altre complicanze croniche nel paziente diabetico e/o iperteso2. Definire strategie di intervento per prevenire o rallentare la progressione delle nefropatiecroniche ed eventualmente ottenere una remissione/regressione del danno renale3. Ottimizzare i protocolli di terapia immunosoppressiva nel trapianto col fine ultimo di ottenerela tolleranza dell’organo trapiantato e identificare nuovi criteri di selezione dei donatori peraumentare il pool di organi disponibili.Questi obiettivi vengono perseguiti attraverso le seguenti modalità operative principali:1. studi pilota di fisiopatologia e farmacologia clinica realizzati interamente presso il Centro diRicerche Cliniche per testare nuove ipotesi patogenetiche e nuove modalità di intervento;2. realizzazione di network e coordinamento di trial multicentrici nazionali e internazionali perverificare l’efficacia di nuovi trattamenti identificati nelle fasi di cui in 1.3. metanalisi e sviluppo di modelli probabilistici per testare fattori di rischio e trattamenti sugrandi campioni di pazienti e verificarne il valore predittivo e l’efficacia a livello individuale.Molte di queste attività si avvalgono di una stretta collaborazione con il Dipartimento diMedicina Molecolare, il Dipartimento di Bioingegneria e il Dipartimento Pubblico-Privato diMedicina Specialistica e dei Trapianti col fine ultimo di programmare le attività di ricercaclinica del Dipartimento alla luce delle conoscenze che derivano dalla ricerca di base e delleproblematiche che emergono dalla attività clinica di routine.SCOPERTE/RISULTATI PRINCIPALIDefinizione e validazione di nuovi protocolli integrati di trattamento atti a rallentare laprogressione e/o ottenere la remissione/regressione delle nefropatie croniche diabetiche e nondiabetiche;Caratterizzazione dell’effetto antiproteinurico, nefroprotettivo e cardioprotettivo dell’inibizionemassimale e polifarmacologica del sistema renina angiotensina;Identificazione di fattori di rischio acquisiti o congeniti per lo sviluppo di complicanze cronichedel diabete;Definizione e validazione di trattamenti specifici per la nefropatia membranosa idiopatica e lasindrome emolitico uremica associata a deficit di fattore H;Definizione e validazione di nuove metodiche di laboratorio e di modelli predittivi per ilmonitoraggio e ottimizzazione della terapia immunosoppressiva nel trapianto;230RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNOttimizzazione di procedure di diagnostica e monitoraggio ecodoppler delle complicanzevascolari del paziente trapiantato ed emodializzato;Finalizzazione ed avvio di trials clinicici multicentrici finalizzati alla prevenzione dellanefropatia diabetica, della progressione delle nefropatie croniche proteinuriche e del rigettoacuto e cronico del trapianto e alla identificazione di fattori di rischio e promotori di dannod’organo;Computerizzazione delle procedure di acquisizione e monitoraggio dei dati nella conduzione ditrials clinici controllati.COLLABORAZIONI NAZIONALILombardia- Ospedale Fenaroli, Alzano Lombardo (BG)- Azienda Ospedaliera OO.RR., Bergamo- Ospedale Caduti Bollatesi, Bollate (MI)- Azienda Ospedaliera Spedali Civili, Brescia- Ospedale San Biagio, Clusone (BG)- Ospedale S. Anna, Como- Ospedale di Desio (MI)- Ospedale Briolini, Gazzaniga (BG)- Azienda Ospedaliera di Melegnano, Melegnano – Vizzolo Predabissi (MI)- Ospedale San Leopoldo Mandic, Merate (LC)- Ospedale Maggiore Policlinico, Milano- Ospedale Provinciale San Carlo Borromeo, Milano- Azienda Ospedaliera - Polo Universitario L. Sacco, Milano- Ospedale Fatebenefratelli, Milano- Ospedale Niguarda Ca' Granda, Milano- Clinica Pediatrica “G. e D. De Marchi’, Milano- Ospedale San Raffaele, Milano- Ospedale Pediatrico di Montichiari, Montichiari (BS)- Ospedale San Gerardo, Monza (MI)- Università degli Studi di Pavia, Dipartimento di Medicina Interna e Terapia Medica, Pavia- Centro Antidiabetico, Ponte San Pietro (BG)- Azienda Ospedaliera Ospedale Treviglio Caravaggio, Romano di Lombardia (BG)- Istituto clinico Humanitas, Rozzano (MI)- Ospedale Bolognini, Seriate (BG)- Azienda Ospedaliera Ospedale Treviglio Caravaggio, Treviglio (BG)- Ospedale Regionale di Circolo Fondazione Macchi, Varese- USL 60, Unità Operativa di Nefrologia e Dialisi, Vimercate (LC)Piemonte- Azienda Ospedaliera Santa Croce e Carli, Cuneo- Ospedale Civile, Ivrea (TO)- Azienda Ospedaliera San Giovanni Battista, Torino- Ospedale Mauriziano Umberto I, Torino- Ospedale Regina Margherita, Torino231RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMN- Ospedale Martini, Torino- Ospedale Luigi Einaudi, TorinoVeneto, Trentino Alto-Adige e Friuli Venezia Giulia- Ospedale Civile, Belluno- Ospedale S. Giacomo Apostolo, Castelfranco Veneto, Treviso- Ospedale Provinciale Umberto I, Mestre (VE)- Ospedale Giustinianeo, Padova- Università degli Studi di Padova, Istituto di Anatomia Patologica, Padova- Ospedale Civile, Padova- Ospedale S. Camillo dé Lellis, Schio (VI)- Ospedale Regionale Santa Maria dei Battuti, Treviso- Ospedale Civile Maggiore Borgo Trento, Verona- Ospedale Policlinico Borgo Roma, Verona- Ospedale Civile San Bortolo, Vicenza- Ospedale Santa Chiara, Trento- Istituto Scientifico per l'infanzia Burlo Garofalo, Trieste- Ospedale S. Antonio, S. Daniele del Friuli, Udine- Università degli Studi di Udine, Centro Trapianti Fegato-Rene-Pancreas, UdineLiguria, Emilia Romagna e Toscana- Azienda Ospedaliera San Martino, Genova- Istituto “G. Gaslini”, Genova- Ospedale S. Orsola Malpighi, Bologna- Ospedale Policlinico, Modena- Istituto di Clinica Medica e Nefrologia, Parma- Ospedale Santa Maria delle Croci, Ravenna- Arcispedale Santa Maria Nuova, Reggio Emilia- Ospedale Santa Maria Annunziata, Bagno a Ripoli, Firenze- Azienda Ospedaliera Careggi-Monna Tessa, Firenze- Ospedale Nuovo “S. Giovanni di Dio”, Firenze- Azienda Ospedaliera Meyer, Firenze- Ospedale di S. Miniato, S. Miniato (FI)Marche- Ospedale Regionale Torrette, Torrette di Ancona, Ancona- Azienda Ospedaliera S. Salvatore, PesaroLazio, Basilicata e Campania- Ospedale Polispecializzato, Anzio, Roma- Ospedale Fatebenefratelli, Roma- Ospedale Pediatrico Bambino Gesù, Roma- Policlinico Gemelli, Roma- Ospedale Policlinico Umberto I, Roma- Ospedale San Camillo Forlanini, Roma- Università Cattolica del Sacro Cuore, Roma- Dipartimento di Biopatologia Umana, Università La Sapienza, Roma- Ospedale Grande degli Infermi, Viterbo- Ospedale Riuniti, Matera- Azienda Ospedaliera Ospedale Civile, Caserta (NA)- Università Federico II di Napoli, Cattedra di Nefrologia, Napoli- Azienda Ospedaliera “S. G. di Dio e Ruggi d’Aragona”, Salerno232RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNAbruzzo- Ospedale G. Bernabeo, Ortona, Chieti- Presidio Ospedaliero “San Massimo”, Penne (PE)- Presidio Ospedaliero "G.Mazzini", TeramoPuglia, Calabria, Sicilia e Sardegna- Ospedale Regionale “Miulli”, Acquaviva delle Fonti, Bari- Ospedale Pediatrico “Giovanni XXIII”, Bari- Ospedale Policlinico, Bari- Azienda Ospedaliera V.Fazzi, Lecce- Ospedale Casa Sollievo dalla Sofferenza, S.Giovanni Rotondo (FG)- Presidio Ospedaliero di Martina Franca, Martina Franca, Taranto- A.U.S.L. TA/1 - Presidio Ospedaliero, Taranto- Azienda Ospedaliera Ospedale Pugliese Ciaccio, Catanzaro- Ospedale dell'Annunziata, Cosenza- Centro di Fisiologia Clinica del CNR, Divisione di Nefrologia, Reggio Calabria- Azienda Ospedaliera “Bianchi-Melacrino-Morelli”, Reggio Calabria- Ospedale “N. Giannettasio”, Rossano Calabro, Cosenza- Nuovo Presidio Ospedaliero, Acireale, Catania- Azienda Ospedaliera "Ferrarotto", Catania- Ospedale Zonale Maggiore, Modica (RG)- Ospedale Civico, Palermo- Ospedale “V. Cervello”, Palermo- Azienda Ospedaliera "Umberto I", Siracusa- Azienda Sanitaria G. Brotzu, Ospedale San Michele, Cagliari- Istituto di Clinica e Biologia dell’Età Evolutiva, Cagliari- Ospedale A. Segni, Ozieri, Sassari- Ospedale SS. Annunziata, Sassari- Ospedale Policlinico, SassariCOLLABORAZIONI INTERNAZIONALI- University Hospital Ziekenhuius, Edegem Antwerpen, Belgio- Clinique de Nephrologie-Dialyse Chu Brugmann, Bruxelles, Belgio- University Ziekenhuius Gent, Gent, Belgio- U.Z. Gasthuisberg, Leuven, Belgio- General Hospital Maria Middelares, Sint Niklaas, Belgio- University of Groningen, AV Groningen, Olanda- Academisch Ziekenhuis, Maastricht, Olanda- Thracian University, Stara Zagora, Bulgaria- The Birmingham Children's Hospital, Birmingham, Inghilterra- Guy’s Hospital, London, Inghilterra- Manchester Children's Hospital, Manchester, Inghilterra- Nottingham City Hospital, Nottingham, Inghilterra- Aalborg Hospital, Aalborg, Denmark- Nephrological Department, University of Copenaghen, Copenaghen, Danimarca233RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMN- Steno Diabetes Center, Gentofte, Danimarca- Department of Nephrology, Odense University Hospital, Odense, Danimarca- Department of Nephrology, Sahlgrenska University Hospital, Goteborg, Svezia- Ospedale San Giovanni, Bellinzona Svizzera- Department of Nephrology, University of Wien, Wien, Austria- Carl Thiem Klinikum, Cottbus, Germania- Klinikum der Johann Wolfgang, Frankfurt am Main, Germania- Arbeitsgruppe fyr Biomolekulare Medizin, Hamburg, Germania- Univeristatklinik Heidelberg, Heidelberg, Germania- Medizinische Klinik, Mannheim, Germania- Luitpold Krankenhaus Med. Universitatklinik/Dialyse, Wurzburg, Germania- Hospital Ntra Sra. de Sonsoles, Avila, Spagna- Hospitalet de Llobregat, Institut Català de la Salut, Barcellona, Spagna- Fundacion Jimenez Diaz, Madrid, Spagna- Hospital Clinico Martin Logas, Madrid, Spagna- Hospital 12 de Octubre, Madrid, Spagna- Hospital Gregorio Maranon, Madrid, Spagna- Hospital La Paz, Madrid, Spagna- Hospital Puerta de Hierro, Madrid, Spagna- Hospital Ramon y Cajal, Madrid, Spagna- Hospital Severo Ochoa, Leganes, Madrid, Spagna- Hospital Universitario de Tarragona Joan XXIII, Tarragona, Spagna- Hospital Garcia de Orta, Almada, Portugal- Brigham & Women's Hospital, Boston, USA- Hennepin County Medical Center, Minneapolis, USA- SIU School of Medicine, Springfield, USA- The Toronto Hospital, Toronto, Canada- INCUCAI, Buenos Aires, Argentina- Hospital Italiano de Buenos Aires, Buenos Aires, Argentina- Hospital Regional de Valdivia, Valdivia, Cile- Soroka Medical Center, Beer Sheva, IsraelePRESENZA IN COMITATI EDITORIALIJournal of the American Society of Nephrology (Piero Ruggenenti)Journal of Nephrology (Piero Ruggenenti)American Journal of Kidney DiseaseAmerican Journal of PathologyATTIVITA' DI REVISIONE234RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNAmerican Journal of TransplantationBlood PurificationDiabetes CareExperimental opinion on pharmacotherapyJournal of American Society of NephrologyJournal of HypertensionJournal of Internal MedicineJournal of NephrologyKidney InternationalNature MedicineNephrologyNephrology Dialysis and TransplantationPediatric NephrologyPharmacogenomicsThe LancetThe New England Journal of MedicinePARTECIPAZIONE AD EVENTI CON CONTRIBUTI DELDIPARTIMENTOI° Corso di Aggiornamento continuo in Nefrologia. "Fisiopatologia della nefropatia diabetica".7-8 Febbraio 2003, TarantoI° Corso Interattivo di Aggiornamento sulla Ipertensione Arteriosa. "L'ipertensione in corso dinefropatia con insufficienza renale cronica". 13-14 Marzo 2003, BolognaTop Seminar. Rene e Ipertensione. "Terapia antipertensiva e nefroprotezione: conta più ilfarmaco o il controllo pressorio? Il farmaco". 28-29 Marzo 2003, Reggello, FirenzeSeminario. U.O. Nefrologia e Dialisi, Ospedali Riuniti di Bergamo. "Confronto tra la metodicaDIMENSION e la metodica in HPLC per la determinazione dei livelli ematici di ciclosporina inpazienti sottoposti a trapianto renale". 3 Aprile 2003, BergamoESA Meeting. "Which role of fenoldopam in critically ill patients?". 7-10 Aprile 2003,Glasgow, UKMaster in Medicina del Trapianto. "Farmacocinetica degli Immunosoppressori" 16 Maggio2003, Università degli studi di Milano-Bicocca, Ospedali Riuniti di BergamoSymposium - Diabetes and the kidney. "ACE inhibitors calcium channel blockers andaldosterone antagonists in diabetic nephropathy". 5-7 Giugno 2003, Dusseldorf, GermaniaISN COMGAN Conference in World Nephrology. "Research and prevention". 6-8 Giugno2003, Berlino, GermaniaEuropean Hematology Association. "Thrombotic thrombocytopenic purpura". 12-15 Giugno2003, Lyon, FranciaHypertension, diabetes and chronic renal disease: epidemiology, mechanisms, complications235RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNand strategies to achieve remission and regression. "Incidence, prevalence and costs". 18-19Giugno 2003, Ranica, BergamoHypertension, diabetes and chronic renal disease: epidemiology, mechanisms, complicationsand strategies to achieve remission and regression. "Smoking". 18-19 Giugno 2003, Ranica,BergamoHypertension, diabetes and chronic renal disease: epidemiology, mechanisms, complicationsand strategies to achieve remission and regression. "Dyslipidemia and oxidative stress". 18-19Giugno 2003, Ranica, BergamoHypertension, diabetes and chronic renal disease: epidemiology, mechanisms, complicationsand strategies to achieve remission and regression. "Lessons from clinical trials: Nephropathy oftype 1 and type 2 diabetes". 18-19 Giugno 2003, Ranica, BergamoHypertension, diabetes and chronic renal disease: epidemiology, mechanisms, complicationsand strategies to achieve remission and regression. "Cardiovascular complications". 18-19Giugno 2003, Ranica, BergamoConvegno. Nefropatie croniche e complicanze cardiovascolari: epidemiologia, patogenesi,prevenzione e trattamento. "Implicazione cliniche, sociali ed economiche". 3-4 Luglio 2003,Ranica, BergamoConvegno. Nefropatie croniche e complicanze cardiovascolari: epidemiologia, patogenesi,prevenzione e trattamento. "Predittori di progressione e prevenzione del rischio individuale". 3-4 Luglio 2003, Ranica, BergamoConvegno. Nefropatie croniche e complicanze cardiovascolari: epidemiologia, patogenesi,prevenzione e trattamento. "Modelli di progressione e quantificazione dell'end-point". 3-4Luglio 2003, Ranica, BergamoConvegno. Nefropatie croniche e complicanze cardiovascolari: epidemiologia, patogenesi,prevenzione e trattamento. "La diagnostica eco-Doppler". 3-4 Luglio 2003, Ranica, BergamoConvegno. Nefropatie croniche e complicanze cardiovascolari: epidemiologia, patogenesi,prevenzione e trattamento. "Il filtrato glomerulare". 3-4 Luglio 2003, Ranica, BergamoConvegno. Nefropatie croniche e complicanze cardiovascolari: epidemiologia, patogenesi,prevenzione e trattamento. "Dislipidemia e sindrome metabolica". 3-4 Luglio 2003, Ranica,BergamoConvegno. Nefropatie croniche e complicanze cardiovascolari: epidemiologia, patogenesi,prevenzione e trattamento. "Prevenzione e trattamento della nefropatia diabetica e dellecomplicanze cardiovascolari: ACE inibitori o antagonisti dell'angiotensina?". 3-4 Luglio 2003,Ranica, BergamoRoche Glomerular Disease Roundtable Meeting. "Mechanism of Action". 16-17 Luglio 2003,New York, USA4th Congress European Federation of Internal Medicine. "Current treatment of acute heartfailure membranous nephropathy: focussing on new pathophysiology findings and treatments".10-13 Settembre 2003, Berlino, Germania236RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNConvegno. Giornata Vastese delle malattie renali. "Remissione e regressione delle malattierenali croniche, una strada poco frequentata". 18-19 Settembre 2003, Vasto, ChietiConvegno. Nefropatie croniche e complicanze cardiovascolari: epidemiologia, patogenesi,prevenzione e trattamento. "Implicazioni cliniche, sociali ed economiche". 25-26 Settembre2003, Ranica, BergamoConvegno. Nefropatie croniche e complicanze cardiovascolari: epidemiologia, patogenesi,prevenzione e trattamento. "Predittori di progressione e prevenzione del rischio individuale".25-26 Settembre 2003, Ranica, BergamoConvegno. Nefropatie croniche e complicanze cardiovascolari: epidemiologia, patogenesi,prevenzione e trattamento. "Modelli di progressione e quantificazione dell'end-point". 25-26Settembre 2003, Ranica, BergamoConvegno. Nefropatie croniche e complicanze cardiovascolari: epidemiologia, patogenesi,prevenzione e trattamento. "La diagnostica eco-Doppler". 25-26 Settembre 2003, Ranica,BergamoConvegno. Nefropatie croniche e complicanze cardiovascolari: epidemiologia, patogenesi,prevenzione e trattamento. "Il filtrato glomerulare". 25-26 Settembre 2003, Ranica, BergamoConvegno. Nefropatie croniche e complicanze cardiovascolari: epidemiologia, patogenesi,prevenzione e trattamento. "Dislipidemia e sindrome metabolica". 25-26 Settembre 2003,Ranica, BergamoConvegno. Nefropatie croniche e complicanze cardiovascolari: epidemiologia, patogenesi,prevenzione e trattamento. "Prevenzione e trattamento della nefropatia diabetica e dellecomplicanze cardiovascolari: ACE inibitori o antagonisti dell'angiotensina?". 25-26 Settembre2003, Ranica, BergamoCongresso. Il trapianto di rene in Italia e in Sicilia: aspetti organizzativi e scientifici. "Ilrazionale della terapia immunosoppressiva nel trapianto di rene". 26 Settembre 2003,Cannizzaro, CataniaConvegno. Antibioticoterapia...dalla teoria alla pratica..."La cinetica degli antibiotici". 25Ottobre 2003, SondrioMeeting. Roche Glomerular Advisory Board meeting. "The possible role of MMF in glomerulardisease: rationale and mechanisms". 3 Dicembre 2003, New Jersey, USAConvegno. Il percorso del sangue: dalla donazione all'utilizzo nei trapianti di organi. "Trapiantid'organo: dai primi esperimenti ai progetti futuri". 5 Dicembre 2003, Ranica, BergamoConvegno. La prevenzione primaria e secondaria delle malattie cardiovascolari ecerebrovascolari. "Disfunzioni renali e malattie cardiovascolari". 13 Dicembre 2003, Seriate,BergamoConvegno. La prevenzione primaria e secondaria delle malattie cardiovascolari ecerebrovascolari. "Dislipidemia e sindrome metabolica - trattamento farmacologico". 13Dicembre 2003, Seriate, Bergamo237RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNAbbott GmbH & Co.Aventis Pharma SAChiesi Farmaceutici SpAFarmaceutici Damor SpAGlaxo SmithKlineMerck Sharp & Dohme Italia SpANicox SANovartis FarmaRoche SpASangstatScheringWyeth LederleCONTRIBUTI E CONTRATTISELEZIONE PUBBLICAZIONI SCIENTIFICHE APPARSENELL'ANNO 2003R. Campbell, F. Sangalli, E. Perticucci, C. Aros, C. Viscarra, A. Perna, A. Remuzzi, F. Bertocchi, L. Fagiani, G.Remuzzi, P. Ruggenenti. Effects of combined ACE inhibitor and angiotensin II antagonist treatment in humanchronic nephropathies. Kidney Int 2003;63:1094-1103.B.D. Dimitrov, A. Perna, P. Ruggenenti, G. Remuzzi. Predicting end-stage renal disease: Bayesian perspective ofinformation transfer in the clinical decision-making process at the individual level. Kidney Int 2003;63:1924-1933P. Ruggenenti, N. Mise, R. Pisoni, F. Arnoldi, A. Pezzotta, A. Perna, D. Cattaneo, G. Remuzzi. Diverse effects ofincreasing lisinopril doses on lipid abnormalities in chronic nephropathies. Circulation 2003;107:586-592E. Gotti, N. Perico, A. Perna, F. Gaspari, D. Cattaneo, R. Caruso, S. Ferrari, N. Stucchi, G. Marchetti, M. Abbate, G.Remuzzi. Renal transplantation: can we reduce calcineurin inhibitor/stop steroids? Evidence based on protocol biopsyfindings. J Am Soc Nephrol 2003;14:755-766.P. Ruggenenti, A. Perna, G. Remuzzi on behalf of the Investigators of the GISEN Group . Retarding progression ofchronic renal disease: the neglected issue of residual proteinuria. Kidney Int 2003;63:2254-2261.P. Ruggenenti, C. Chiurchiu, V. Brusegan, M. Abbate, A. Perna, C. Filippi, G. Remuzzi. Rituximab in idiopathicmembranous nephropathy: a one-year prospective study. J Am Soc Nephrol 2003;14:1851-1857.The BENEDICT Group. The Bergamo NEphrologic Diabetes Complications Trial (BENEDICT): design and baselinecharacteristics. Controlled Clinical Trials 2003;24:442-461.P. Ruggenenti, C. Flores, C. Aros, B. Ene-Iordache, R. Trevisan, C. Ottomano, G. Remuzzi. Renal and metaboliceffects of insulin lispro in type 2 diabetic subjects with overt nephropathy. Diabetes Care 2003;26:502-509.S. Bruno, S. Ferrari, G. Remuzzi, P. Ruggenenti. Doppler ultrasonography in posttransplant renal artery stenosis: areliable tool for assessing effectiveness of revascularization? Transplantation 2003; 76:147-153.T.H. Jafar, C.H. Schmid, P.C. Stark, R. Toto, G. Remuzzi, P. Ruggenenti, C. Marcantoni, G. Becker, S. Shahinfar,P.E. de Jong, D. de Zeeuw, A-L. Kamper, S. Strangaard, A.S. Levey for the AIPRD Study Group. The rate ofprogression of renal disease may not be slower in women compared with men: a patient-level meta-analysis. NephrolDial Transplant 2003;18:2047-2053.238RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNB.D. Dimitrov, P. Ruggenenti, R. Stefanov, A. Perna, G. Remuzzi. Chronic Nephropathies: individual risk forprogression to end-stage renal failure as predicted by an integrated probabilistic model. Nephron Clin Pract2003;95:c47-c59.ALTRE PRODUZIONI EDITORIALI PUBBLICATE NEL CORSO DEL2003C. Chiurchiu, A. Firrincieli, M. Santostefano, M. Fusaroli, G. Remuzzi, P. Ruggenenti. Adult non-diarrhea hemolyticuremic syndrome associated with shiga toxin Escherichia coli 0157:H7 bacteremia and urinary tract infection. Am JKidney Dis 2003;41:E4N. Perico, P. Ruggenenti, M. Scalamogna, G. Remuzzi. Tackling the shortage of donor kidneys: how to use the bestthat we have. Am J Nephrol 2003;23:245-259.P. Ruggenenti, M. Noris, G. Remuzzi. Thrombotic Microangiopathies. In: Therapy in Nephrology and Hypertension,2nd Edition. Edited by H.R. Brady and C.S. Wilcox. London, Saunders pp. 283-295,2003.A. Schieppati, P. Ruggenenti, A. Perna, G. Remuzzi. Nonimmunosuppressive therapy of membranous nephropathy.Sem in Nephrol 2003;23:333-339.G. Laverman, P. Ruggenenti, G. Remuzzi. Angiotensin-converting enzyme inhibition or angiotensin receptorblockade in hypertensive diabetics? Curr Hypertens Rep 2003;5:364-367.G.D. Laverman, G. Remuzzi. Antihypertensive therapy in chronic renal disease: a place for sympathicolytic agents? JHypertens 2003;21:1625-1626.G. Remuzzi, P. Boccardo. Disorders of hemostasis in dialysis patients. In: Principles and Practice of Dialysis, 3rdEd., Edited by W.L. Henrich, Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia pp. 453-463, 2003.ATTIVITA' DI RICERCALaboratorio di BiostatisticaIl Trial multicentrico Bergamo Nephrologic Diabetes Complications(BENEDICT)Le analisi preliminari sono iniziate dopo il completamento della fase A dello studioBENEDICT, un trial multicentrico, randomizzato, in doppio-cieco che ha coinvolto 1209soggetti con diabete di tipo II e ipertensione. Inizialmente è stato eseguito un confronto tra i datidel database dello studio e i dati relativi al database di farmacovigilanza con lo scopo diricercare eventuali discrepanze tra le due banche dati, per poi procedere alla decodifica di tutti iparametri clinici dello studio. Successivamente è stato raccolto il materiale necessario per loSteering Committee e sono state caratterizzate e identificate le variabili da prendere inconsiderazione per l’analisi statistica; tutte queste operazioni sono state eseguite primadell’apertura dei codici che identificano la terapia utilizzata per ogni paziente. I risultati diquesto studio potranno avere importanti ripercussioni nel trattamento precoce delle complicanzemicro- e macrovascolari associate al diabete.239RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNRiduzione degli end point in soggetti con diabete non insulino dipendentetrattati con losartan, un antagonista recettoriale di angiotensina II (studioRENAAL): analisi post-hocL’accessibilità al database dello studio RENAAL, uno trial multicentrico, randomizzato indoppio-cieco, ci ha permesso di eseguire nuove analisi statistiche in aggiunta a quelle eseguiteimmediatamente dopo il termine dello studio. Questo trial era stato originariamente disegnatoper studiare l’effetto dell’inibizione del sistema renina-angiotensina in 1513 soggetti affetti dadiabete di tipo II con nefropatia incipiente provenienti da 250 centri europei. In questa nuovaanalisi i due gruppi di trattamento (losartan verso placebo) sono stati comparati per: incidenza diuremia terminale (ESRD), numero di ricoveri per problemi cardiaci, numero di pazienti uscitidallo studio per eventi avversi e livelli di proteine urinarie, stratificando i pazienti nei duegruppi in terzili basati sui livelli di creatinina sierica (2.1-3.6 mg/dL; 1.6-2.0 mg/dL; 0.9-1.6mg/dL). Queste analisi hanno dimostrato che i pazienti trattati con losartan avevano un rischiodi sviluppare ESRD ridotto del 24.6%, 26.3% e 35.3% rispettivamente nel terzile a creatininasierica maggiore, intermedia e minore. La sospensione per eventi avversi e il numero diospedalizzazioni per danni cardiaci è stato comparabile in tutti i terzili. I livelli di proteinuria sisono significativamente ridotti nei pazienti trattati con losartan. I risultati ottenuti hannodimostrato che nei soggetti diabetici di tipo II con proteinuria clinica il trattamento con losartanè stato ottimamente tollerato e ha determinato una riduzione importante della progressione versol’uremia terminale e una riduzione degli eventi cardiovascolari, aprendo quindi una nuovastrada nel trattamento di questo tipo di pazienti.Comparazione tra dialisi notturna ed emodialisi convenzionaleL’emodialisi notturna eseguita giornalmente a casa sembra ridurre più efficacemente lapressione arteriosa rispetto all’emodialisi tradizionale, tuttavia questa pratica sembra presentareproblemi logistici. Da questo punto di vista l’emodialisi notturna eseguita 3 volte la settimana incentri specializzati potrebbe rappresentare una valida alternativa. Questo studio ha preso inconsiderazione pressione sistolica, diastolica e pressione di pulsazione in 6 pazienti sottopostiper 12 mesi a sedute emodialitiche notturne, comparando i valori pressori con quelli ottenuti inprecedenza quando gli stessi pazienti erano sottoposti a schemi emodialitici convenzionali. Lostudio ha avuto inizio nel Gennaio 2000 ed è stato eseguito nell’Unità di Dialisi degli OspedaliRiuniti di Bergamo. Ogni trattamento dialitico notturno prevedeva una dialisi di 8 ore, eseguitadalle 22 alle 6.00, ripetuta 3 volte la settimana, con misurazioni pressorie eseguite all’inizio e altermine di ogni ciclo emodialitico. I dati ottenuti da questo studio preliminare dimostrano che ladialisi notturna è in grado di controllare meglio i livelli pressori rispetto al trattamentoconvenzionale. Inoltre questa tecnica è stata ben tollerata da pazienti e da personale medico einfermieristico. Se i risultati verranno confermati in un numero più ampio di pazienti, questo sitradurrà in una migliore qualità di vita nei soggetti emodializzati.Studio di modelli predittivi per il ridimensionamento del numero disoggetti richiesti nei trial clinici randomizzati attraverso l’identificazione dipazienti con un elevato rapporto beneficio-rischioI trial clinici randomizzati sono il metodo migliore per testare l’efficacia e la tollerabilità di unnuovo trattamento. Tuttavia queste analisi comparative spesso richiedono un numero elevato disoggetti, seguiti per un lungo periodo di follow-up attraverso un numero limitato di valutazionicliniche periodiche. Nei trial clinici che coinvolgono pazienti con danno renale cronico gli endpoint primari spesso possono essere parzialmente controllati da terapie già disponibili nellapratica clinica, complicando quindi l’interpretazione dei dati relativi a nuovi trattamenti. Inquesti casi, una selezione mirata di pazienti a maggior rischio di sviluppare eventi e in cui laterapia che si vuole valutare è di maggior beneficio, potrebbe aumentare il potere delle analisistatistiche permettendo quindi di ridurre la numerosità dello studio. Lo studio RENAAL è un240RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNtrial prospettico, randomizzato che ha testato l’efficacia e la tollerabilità di losartan in 1500pazienti con diabete di tipo II e nefropatia incipiente. Lo scopo di questo studio è stato didefinire i criteri in grado di identificare inequivocabilmente i pazienti a rischio elevato diprogredire verso l’uremia terminale (ESRD) che potessero trarre maggior beneficio daltrattamento con losartan, al fine di verificare se le analisi eseguite nei pazienti identificati conquesti criteri avessero un potere comparabile con le analisi eseguite sull’intera popolazione dipazienti coinvolti nel trial RENAAL e verificare se i criteri di selezione scelti potessero essereapplicati anche all’intera popolazione di soggetti diabetici con nefropatia incipiente. I pazientidello studio RENAAL sono stati suddivisi casualmente in un gruppo di studio (1060 soggetti) ein un gruppo indipendente di controllo (453 soggetti). L’identificazione dei pazienti arischio/beneficio maggiore, scelti utilizzando l’approccio bayesiano, è avvenuta utilizzandocome criteri di scelta i livelli di creatinina sierica e il rapporto urinario albumina/creatinina.Sulla base di questi parametri è stato calcolato un indice di rischio renale individuale (IRRI) ingrado di predire il rischio di progressione verso ESRD. Nella seconda fase dello studio verràidentificato un sottogruppo di pazienti con rapporto beneficio/rischio più elevato. Le curve ROCe le curve di sopravvivenza in questi pazienti verranno successivamente comparate con quelledegli altri pazienti del gruppo di validazione (quelli con basso rapporto beneficio/rischio).Questo confronto servirà per verificare la capacità degli indici IRRI di identificare eventualidifferenze tra il gruppo di pazienti trattati con placebo e il gruppo di pazienti trattati conlosartan. Infine verrà testata la predittività di IRRI nell’intera popolazione di pazienti diabeticicon nefropatia incipiente. I risultati di questo studio potrebbero cambiare radicalmente lanumerosità richiesta nei futuri trial clinici.Nefropatia diabetica e cronobiologia della pressione sanguigna (studioBENEDICT)La nefropatia diabetica è una delle cause più frequenti di uremia terminale (ESRD) nel mondo.C’è quindi un notevole interesse nella ricerca di strategie di trattamento che permettano diprevenire o ritardare la progressione della nefropatia diabetica verso ESRD. In quest’ottica imodelli statistici in grado di predire la progressione della malattia rappresentano uno strumentomolto importante nell’ottimizzazione delle risorse disponibili, permettendo inoltre di anticiparel’efficacia dei diversi trattamenti farmacologici (ACE inibitori, calcio-antagonisti, ecc..) oggidisponibili. Diversi ricercatori hanno ipotizzato che la misurazione della pressione arteriosagiornaliera potrebbe meglio predire la progressione delle nefropatie rispetto alla misurazioneeseguita a livello ambulatoriale. Per questo motivo abbiamo pianificato uno studio con lo scopodi testare se la misura delle variazioni pressorie nell’arco dell’intera giornata (24 ore) potessepredire la progressione della nefropatia diabetica e l’efficacia del trattamento ipertensivo in ungruppo di soggetti diabetici (tipo II) ipertesi. Lo studio prevede la randomizzazione di 40pazienti normo- e microalbuminurici, in cui verranno valutati i principali markers pressoridipendenti dal ritmo circadiano e i markers di progressione del danno renale (GFR, AER). Unavolta concluso, questo studio potrà fornire un nuovo strumento terapeutico nel trattamento dellenefropatie diabetiche.Laboratorio di Farmacocinetica e Chimica ClinicaOttimizzazione dell’uso di ciclosporina (Neoral) mediante monitoraggiofarmacocinetico: confronto tra diverse strategie di campionamentoLa ciclosporina è il farmaco di riferimento nella terapia immunosoppressiva per la prevenzionedel rigetto dell’organo trapiantato. È tuttavia caratterizzata da un indice terapeutico ristretto e dasignificative variazioni interindividuali nei livelli ematici. Per questi motivi è necessariomonitorare l’esposizione del singolo paziente al farmaco (definita dall’area sotto la curvaconcentrazione-tempo, AUC) come guida all’ottimizzazione della terapia con CsA per241RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNminimizzare la tossicità a carico del rene. Questa strategia è, tuttavia, costosa e laboriosa.Abbiamo studiato il profilo farmacocinetico completo in 58 pazienti con trapianto di rene daalmeno un anno con l’obiettivo di valutare se l’AUC potesse essere predetta dalla misura disingoli campioni ematici di CsA. Lo studio ha dimostrato che la concentrazione a 2 ore dallasomministrazione di CsA (C2) correla meglio con l’esposizione giornaliera al farmaco. Peggiorisono i risultati utilizzando la concentrazione di CsA in campioni ematici raccolti prima dellasomministrazione del farmaco(C0). L’errore di predizione dell’AUC associato al C2 è tuttaviainaccettabile per il 35% delle valutazioni. Inoltre, l’analisi multivariata ha dimostrato che ilivelli di C0, e non quelli di C2, sono predittori significativi di peggioramento della funzionedell’organo trapiantato. Questi risultati suggeriscono che il campionamento basato sui livelli C2non può essere utilizzato come predittore universale di esposizione a CsA e di outcome del renetrapiantato.Confronto tra i livelli ematici di ciclosporina misurati con la metodicaACMIA e con una metodica in HPLC-UV in pazienti sottoposti a trapiantodi reneIl monitoraggio terapeutico dei livelli di ciclosporina (CsA) viene eseguito solitamenteutilizzando delle metodiche immunoenzimatiche oppure sfruttando la cromatografia liquida adelevate prestazioni (HPLC), come nel nostro Centro. L’HPLC viene solitamente considerato ilmetodo di riferimento, essendo in grado di determinare selettivamente la ciclosporinadiscriminandola dai suoi metaboliti. Tuttavia, questa metodica è piuttosto laboriosa e quindi didifficile applicazione nelle analisi cliniche di routine. Sebbene i saggi immunoenzimatici piùcomuni presentino una buona specificità in vitro per CsA, spesso succede che questi test dianorisultati errati nei campioni biologici, specialmente in presenza di concentrazioni elevate dimetaboliti di CsA, che possono dare reattività crociata con gli anticorpi utilizzati nelle diversemetodiche immunoenzimatiche. In collaborazione con il Laboratorio di Analisi Cliniche degliOspedali Riuniti di Bergamo, che utilizza il saggio immunoenzimatico ACMIA per analizzare ilivelli ematici di ciclosporina, abbiamo misurato oltre 300 campioni ematici di CsA utilizzandoentrambe le metodiche, al fine di testare la performance del metodo ACMIA. Nonostante unabuona correlazione tra le due serie di dati, nessuno dei diversi campionamenti testati e misuraticon il dosaggio immunoenzimatico rientrava nelle specifiche fissate a livello internazionale.Utilizzando la metodica in HPLC è stato inoltre identificato un caso di falso positivo in unpaziente che aveva sospeso CsA da tempo precedentemente dosato con ACMIA. I risultati diquesto lavoro, attualmente in corso di pubblicazione su riviste internazionali, potrebbero avereimportanti ripercussioni nel monitoraggio dei livelli di farmaco nella comune pratica clinica.Studio delle potenziali interazioni farmacocinetiche tra sirolimus e altrifarmaci antirigettoIl rischio di interazioni farmacologiche aumenta significativamente all’aumentare del numero difarmaci utilizzati. I pazienti sottoposti a trapianto di rene, costretti ad assumere cronicamenteanche 3 farmaci diversi per prevenire il rigetto dell’organo, sono più a rischio di interazionifarmacologiche. Significativi cambiamenti nell’esposizione a un farmaco possono avereconseguenze cliniche rilevanti, sia in termini di efficacia del trattamento che di tossicità. Ilsirolimus (SRL) è un nuovo farmaco antirigetto introdotto di recente nella pratica clinica.Questo farmaco viene metabolizzato dal sistema citocromiale 3A4, una via metabolicacondivisa da altri farmaci immunosoppressori come tacrolimus e ciclosporina. Questo comportaun aumentato rischio di interazioni farmacologiche potenziali che potrebbero alterare i livelli diSRL con conseguenze cliniche rilevanti. In passato abbiamo sviluppato una metodica incromatografia liquida a elevate prestazioni (HPLC) che ci ha permesso di misurare i livelliematici di SRL provenienti da oltre 40 centri di trapianto italiani, per un totale di 2658determinazioni. Utilizzando queste misurazioni abbiamo cercato di studiare l’effetto della242RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNconcomitante terapia immunosoppressiva sui livelli basali di SRL, come indice indiretto diesposizione del paziente al farmaco. L’analisi ha dimostrato che i livelli di SRL eranosignificativamente più elevati nei soggetti trattati con SRL e ciclosporina rispetto a quelli trattaticon SRL e micofenolato mofetil con o senza corticosteroidi. La variabilità intra- ed interpazientedei livelli di SRL si è dimostrata essere elevata soprattutto nel primo periodo posttrapianto.In aggiunta, abbiamo testato un algoritmo che potesse essere utilizzato nella sceltadella dose ottimale di SRL al fine di mantenere i livelli di farmaco entro range terapeuticiprestabiliti. Questi risultati suggeriscono che la scelta di diverse terapie antirigetto puòinfluenzare significativamente i livelli di SRL. Poiché il farmaco è caratterizzato da un indiceterapeutico ristretto, l’utilizzo di strategie capaci di ridurre la variabilità di esposizione alfarmaco potrebbe avere delle ripercussioni cliniche importanti.Misura dei livelli ematici di everolimus: sviluppo di una metodica analiticain HPLCEverolimus (RAD) è un nuovo farmaco antirigetto, attualmente ancora in fase diesperimentazione (fase III). Alcuni studi hanno evidenziato la stretta relazione traconcentrazioni di RAD nel sangue ed efficacia immunosoppressiva o tossicità del farmaco. Datala finestra terapeutica ristretta del farmaco, è necessario il monitoraggio accurato dellabiodisponibilità di RAD per ottimizzare il rapporto rischio/beneficio della terapia con RAD.Tutte le metodiche oggi disponibili in letteratura prevedono l’utilizzo della spettrofotometria dimassa, una strumentazione spesso non disponibile nei comuni laboratori clinici, e quindi dilimitato utilizzo nella pratica clinica. Per questi motivi abbiamo sviluppato una metodica incromatografia liquida a elevate prestazioni (HPLC) che potesse sfruttare un detector conlampada a luce ultravioletta (facilmente reperibile nei diversi laboratori). Il campione ematicoviene purificato precipitando la matrice biologica con zinco solfato, mentre RAD viene estrattocon acetone e ulteriormente purificato sfruttando un'estrazione di tipo solido-liquido. Questametodica non è influenzata da picchi interferenti derivanti da farmaci di solito utilizzati neipazienti sottoposti a trapianto, inoltre il range di linearità è ampio, e con livelli di riproducibilitàe sensibilità adeguati. Questa procedura di estrazione semplificata permette di analizzare almeno60-70 campioni per ogni singola analisi. La metodica è stata utilizzata con successo nelladeterminazione dei livelli ematici di RAD in pazienti sottoposti a trapianto di cuore che hannofatto parte di studi registrativi del farmaco. Lo step successivo di questo progetto prevederà ladeterminazione periodica dei livelli di RAD in un numero elevato di pazienti al fine di definirefinestre terapeutiche entro cui mantere i livelli di farmaco.Approccio farmacogenomico per predire l’esposizione giornaliera aciclosporina e outcome clinico in pazienti sottoposti a trapianto di reneL’introduzione di ciclosporina (CsA) - il farmaco antirigetto più utilizzato nella prevenzione delrigetto d’organo – nella pratica clinica ha migliorato la sopravvivenza del paziente dopotrapianto d’organo. Tuttavia questo farmaco è caratterizzato da un indice terapeutico ristretto, unassorbimento irregolare e una serie di effetti collaterali gravi. Data la notevole variabilità neilivelli ematici e nella risposta clinica dopo assunzione di dosi fisse di CsA, negli ultimi annisono stati eseguiti molti studi per trovare la dose ottimale di CsA che permettesse diminimizzare la tossicità da farmaco con conseguente miglioramento del rapportorischio/beneficio. In passato diversi Autori, ma non tutti, hanno dimostrato una strettacorrelazione tra parametri farmacocinetici di CsA e outcome clinico. Oggi, nonostante oltrevent’anni di utilizzo del farmaco nella pratica clinica, c’è ancora notevole disaccordo su qualesia il modo migliore di utilizzare CsA. L’avvento dell’era genomica ha determinato la nascita dinuove aree di ricerca tra cui la farmacogenomica, una scienza che studia il legame tra lafarmacologia e il patrimonio genetico di ogni individuo. La farmacogenomica si occupa dellostudio delle differenze genetiche ereditarie che possono influenzare la risposta a un dato243RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNfarmaco (assorbimento, distribuzione, metabolismo e bersaglio farmacologico). CsA vienemetabolizzata dai sistemi citocromiali CYP3A4 e CYP3A5, due famiglie di enzimicaratterizzati da un’attività globale complementare. Recentemente sono state scoperte dellevarianti geniche in entrambi gli enzimi, spesso associate a una ridotta attività metabolizzante.Per questo motivo, lo screening alle ricerca di queste mutazioni in soggetti sottoposti a trapiantod’organo e in terapia con CsA, potrebbe essere estremamente importante nel predirel’esposizione al farmaco. La disponibilità di CsA dopo somministrazione orale può essereinfluenzata anche dalla glicoproteina P (P-gp), una proteina prodotta dal gene MDR1. Questaproteina funziona da pompa di efflusso in grado di rimuovere molecole lipofile come CsA dallospazio intracellulare. Attualmente solo pochi gruppi di ricerca hanno studiato l’impattopotenziale di queste varianti geniche sulla biodisponibilità dei diversi farmaci antirigetto.Inoltre, la maggior parte di questi studi sono stati effettuati in un numero ridotto di pazienti conrisultati spesso contrastanti. In particolare dati relativi a studi di farmacogenomica in pazientitrattati con ciclosporina sono scarsi. Abbiamo perciò attivato uno studio di farmacogenomica diCsA come parte di un trial multicentrico MY.S.S. (mycophenolate steroid sparing study) inpazienti sottoposti a trapianto di rene. Utilizzando un singolo prelievo per ogni paziente verràstudiata la frequenza di distribuzione di tutte le varianti genetiche menzionate in precedenza. Loscopo di questo progetto è di verificare se le mutazioni nei geni che codificano per CYP3A4,CYP3A5 e MDR1 siano associate all’espozione a CsA e possano eventualmente predirel’otucome clinico in ogni paziente. Questo progetto è stato presentato a tutti i centri Italianicoinvolti nello studio MY.S.S. alla fine di maggio del 2003.Modelli di predizione della funzione renale in pazienti sottoposti atrapianto di reneIn passato sono state sviluppate diverse formulazioni per stimare la funzione renale (espressacome velocità di filtrazione glomerulare o GFR) utilizzando semplici parametri biochimici odati demografici e antropometrici. Scopo di questo studio è stato di comparare in 81 pazientisottoposti a trapianto di rene partecipanti allo studio MY.S.S. (mycophenolate mofetil steroidsparing) GFR stimato utilizzando 12 equazioni predittive disponibili in letteratura con i valori diGFR ottenuti attraverso la misura della clearance plasmatica dello ioexolo, una tecnicauniversalmente considerata come metodo di riferimento per la predizione della funzione renale.I confronti sono stati eseseguiti a 6, 9 e 21 mesi dal trapianto. Tutte le equazioni consideratehanno evidenziato una tendenza a sovrastimare i livelli basali di GFR. Inoltre, queste equazionihanno evidenziato una velocità di caduta del filtrato significativamente più elevata rispetto aquanto calcolato con la clearance dello ioexolo. In conclusione, questo studio ha dimostrato chele equazioni oggi disponibili per stimare il GFR non permettono di predire in modo rigoroso lafunzione renale in pazienti sottoposti a trapianto di rene. Per questo motivo, la funzione renalein questi pazienti dovrebbe essere determinata con la clerance dello ioexolo. I risultati di questostudio potranno avere importanti implicazioni per il monitoraggio della funzione renale inpazienti sottoposti a trapianto di rene.Studio prospettico randomizzato per stabilire se in pazienti con trapiantodi rene è possibile ridurre o eliminare gli inibitori della calcineurina o losteroide a distanza dall’intervento chirurgico in base ai risultati di biopsiarenale.Non è ancora definitivamente stabilito quale sia la miglior combinazione di farmaci antirigetto eneppure quale sia la dose ottimale di steroidi e di inibitori della calcineurina oltre il primo annodal trapianto di rene che permetta un’adeguata immunosoppressione minimizzando gli effetticollaterali. In questo studio abbiamo randomizzato pazienti con trapianto di rene in terapia consteroide, ciclosporina (CsA) e azatioprina a sottoporsi a biopsia renale “per protocollo” o a nonbiopsia a distanza di 1 o 2 anni dal trapianto. In base al riscontro bioptico, i pazienti244RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNsospendevano lo steroide o riducevano la dose di CsA; l’obiettivo era stabilire l’incidenza dirigetto acuto e monitorare la funzione dell’organo nei successivi 3 anni di follow-up. Al terminedello studio i pazienti sono stati sottoposti ad una seconda biopsia. L’analisi delle biopsie basalieseguite “per protocollo” hanno dimostrato l’assenza di lesioni (nel gruppo randomizzato asospendere lo steroide), la presenza di nefropatia da CsA (pazienti randomizzati a riduzione diCsA) o rigetto cronico (pazienti che hanno continuato con terapia standard). La sospensione o lariduzione di farmaci ha diminuito l’incidenza degli effetti collaterali rispetto a quanto osservatoin pazienti rimasti in terapia standard. Gli steroidi sono stati eliminati senza che vi fosseroepisodi di rigetto acuto o che venisse compromessa la funzione dell’organo trapiantato. Ladiminuzione della dose di CsA - cosi da ottenere livelli ematici molto più bassi della norma (da30 a 70 ng/mL) - non si è associata nè a rigetti acuti nè a compromissione della funzione renale.L’analisi della seconda biopsia eseguita al termine dello studio ha escluso la comparsa di lesionistrutturali in pazienti che avevano sospeso lo steroide e ha dimostrato un quadro istologicosostanzialmente invariato in chi era stato randomizzato a ridurre la dose giornaliera di CsA.Esequire una biopsia “per protocollo” ad oltre un anno dal trapianto di rene è una procedurasicura per valutare le eventuali modifiche della terapia immunosoppressiva e per diminuire ilrischio di effetti collaterali legati all’uso cronico di farmaci antirigetto.Livelli ematici di ciclosporina misurati nell’immediato post-trapianto sonocritici nel predire i rischi di rigetto acuto: analisi del trial multicentricoMY.S.S.L’organo trapiantato esprime antigeni che vengono riconosciuti direttamente da cellule Tspecifiche. Il processo di riconoscimento è critico nella comparsa di rigetto. Quanto prima vieneinibita l’attivazione delle cellule T da parte della ciclosporina (CsA), tanto più dovrebbe essereridotto il rischio di rigetto. Abbiamo studiato questa possibilità in un numero elevato di pazienticon trapianto “de novo” di rene arruolati in un trial clinico multicentrico denominato“Mycophenolate Steroid Sparing (MY.S.S.) study”. L’obiettivo principale dello studio è statodeterminare il valore predittivo della misurazione seriata di livelli basali di CsA (C0) e di quellimisurati a distanza di 2 ore dalla somministrazione del farmaco (C2), considerati singolarmenteo in combinzione, e di identificare quale fosse la misurazione critica dopo il trapianto sulla basedella quale modificare la terapia con CsA per minimizzare il rischio di rigetto acuto. I livelli diCsA misurati il giorno 2 dopo il trapianto sono risultati il migliore predittore di rigetto nelperiodo di follow-up di 6 mesi. Livelli ematici di farmaco tra 300 e 440 ng/mL si associano aminor rischio di rigetto acuto, mentre per livelli inferiori a 300 ng/mL il rischio di rigetto acutoè più che raddoppiato. I livelli di C2 non sono predittivi di rigetto acuto. I risultati dello studioindicano che la misurazione dei livelli di CsA eseguita al giorno 2 post-trapianto sono un indicevalido per predire i successivi episodi di rigetto. Questi risultati evidenziano la necessità dimodulare la terapia con CsA nell’immediato post-trapianto con l’obbiettivo di inibirerapidamente l’attivazione delle cellule T all’interfaccia tra il sangue del paziente e l’organotrapiantato, laddove prende inizio la risposta alloimmune.Mycophenolate mofetil o azatioprina nella prevenzione dei rigetti acuti inpazienti sottoposti a trapianto di rene: risultati del trial MycophenolateSteroid Sparing (MYSS)Globalmente il micofenolato mofetil (MMF) sembra aver sostituito l’azatioprina nelle diversecombinazioni di farmaci antirigetto utilizzate per prevenire il rigetto d’organo. Tuttavial’efficacia di MMF rispetto ad azatioprina è stata dimostrata solo in trials registrativi in cuiquesti farmaci venivano utilizzati in associazione con la vecchia formulazione di ciclosporina(CsA) e steroidi. Lo studio MYSS - un trial multicentrico, prospettico, randomizzato – ha presoin considerazione gli episodi di rigetto acuto e gli eventi avversi nei primi 6 mesi dal trapiantoin soggetti trattati con MMF o azatioprina in associazione con la nuova formulazione in245RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNmicroemulsione di CsA e steroidi (fase A). La fase successiva dello studio (fase B) ha preso inconsiderazione un periodo addizionale di 15 mesi dopo la completa sospensione di steroidi inentrambi i gruppi di trattamento. Nel corso della fase A l’incidenza di rigetto acuto nei 336pazienti è stata del 34% nel gruppo MMF e 35% nel gruppo azatioprina, di cui il 18% è statoconfermato dalla biopsia nel gruppo MMF e il 23% nel gruppo azatioprina. L’incidenza dirigetto nella fase B è stata del 16% nel gruppo MMF e 12% nel gruppo azatioprina, mentrel’incidenza di rigetti verificati con biopsia renale è stata il 7% in entrambi i gruppi. Anchel’incidenza di tossicità da farmaco è risultata comparabile nei due gruppi per tutta la durata dellostudio. Questo studio dimostra che in pazienti sottoposti a trapianto di rene e trattati con laformulazione in microemulsione di CsA, MMF non offre vantaggi sostanziali rispetto adazatioprina nel prevenire gli episodi di rigetto acuto.Due protocolli finalizzati alla prevenzione del rigetto acuto e cronico neltrapianto renaleIl rigetto acuto e quello cronico continuano a rappresentare i principali ostacoli per lasopravvivenza e breve e lungo termine del trapianto renale. La terapia immunosoppressivaattuale è infatti in grado di limitare solo parzialmente il rischio di entrambe le forme di rigetto,esponendo inoltre il paziente a pesanti effetti collaterali. Nuove strategie sono state proposte perprevenire il rigetto acuto e cronico; al fine di testarne il bilancio rischio/beneficio, abbiamodisegnato due trial prospettici. Il primo è uno studio monocentrico finalizzato alla valutazionedella possibilità di indurre tolleranza attraverso l’infusione pre-trapianto di un anticorpo anti-CD52. Il secondo è invece un trial multicentrico randomizzato che valuta la possibilità diprevenire il rigetto cronico attraverso un trattamento non-immunosoppressivo finalizzato alcontrollo dei fattori di rischio per la progressione delle nefropatie croniche, come ipertensione,l’iperfiltrazione glomerulare, la proteinuria e la dislipidemia. i due studi interesseranno,rispettivamente, 20 e 120 pazienti. La fase di reclutamento di entrambi gli studi è già iniziata eterminerà entro il 2004. Quando saranno completati, questi studi potranno avere importantiripercussioni nella scelta della terapia farmacologica più adatta per ogni paziente.Laboratorio di Fasi Avanzate dello Sviluppo dei Farmacinell'UomoEffetto antiproteinurico relativo di antagonisti recettorialidell’angiotensina II (ATA) e inibitori dell’enzima di conversione (ACEi) dasoli e in combinazione e di calcio antagonisti diidropiridinici (dCCBs)nella nefropatia conclamata del diabete mellito di tipo 2I farmaci che inibiscono il Sistema Renina Angiotensina (RAS), come gli inibitori dell’enzimadi conversione (ACEi) e gli antagonisti recettoriali dell’angiotensina (ATA) – diminuisconoefficacemente l’escrezione urinaria delle proteine e rallentano la progressione della nefropatiadiabetica sia nell’animale che nell’uomo. Studi recenti hanno dimostrato che gli inibitori deirecettori dell’angiotensina II, che bloccano i recettori di tipo 1 (AT-R1) ma non quelli di tipo 2(AT-R2), chiaramente riducono il rischio di malattia renale terminale in pazienti con diabetetipo 2 e nefropatia conclamata. Hanno anche dimostrato che AT1-inibitori hanno un effettorenoprotettivo che è analogo a quello osservato con gli inibitori dell’enzima di conversione(ACEi) nel diabete di tipo 1. Sfortunatamente, perchè gli inibitori dell’enzima di conversione(ACEi) non sono stati usati in questi studi, un paragone diretto delle due classi di farmaci èimpossibile. Per studiare i loro effetti abbiamo compiuto uno studio prospettico, randomizzato,in gruppi paralleli mirato a comparare l'effetto antiproteinurico di due trattamenti della durata didue mesi con ATA losartan (100 mg/giorno) da solo ACEi Enalapril 20 mg/giorno da solo o laloro combinazione, o il farmaco antipertensivo in uso che non interferisce direttamente con246RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNl’attività del RAS come un calcio antagonista diidropiridinico (dCCB) Felodipina (10mg/giorno) in 39 pazienti con diabete mellito di tipo 2 e nefropatia conclamata.Per evitare l'effetto confondente di una maggiore riduzione della pressione arteriosa, il dosaggiodell’ACEi e dell’ATA è stato dimezzato nei pazienti con terapia combinata. Alla fine delperiodo del trattamento la proteinuria si è ridotta più efficacemente con Enalapril da solo(54.5%) che con Losartan da solo (25.8%) o Felodipina (37.1%) da sola. Il trattamentocombinato non ha dimostrato un effetto antiproteinurico additivo (33%). Tutti i trattamenti sonostati ben tollerati. Pertanto, nella nefropatia diabetica conclamata, gli ACE inibitori hanno uneffetto antiproteinurico maggiore rispetto ad ATA e dCCBs. Questo effetto non è modificatosignificativamente dall’aggiunta degli ATA. Questi risultati aprono una linea nuova di ricercafinalizzata a verificare se il superiore effetto antiproteinurico degli ACEi rispetto a quello degliATA o di altri farmaci antiipertensivi che non interferiscono direttamente con l’attività di RAS,si traduce anche in un superiore effetto renoprottetivo a lungo termine.La resistenza all’insulina e il rischio di retinopatia proliferante: uno studiocaso-controllo trasversale in 115 pazienti con diabete mellito tipo 2Pazienti diabetici possono essere colpiti da due diverse forme di retinopatia: una forma semplice(background, non proliferante), molto frequente ma relativamente benigna, e una formaproliferativa che colpisce solo un sottogruppo (più del 25% di pazienti con più di 25 anni didiabete) e spesso conduce a una riduzione dell’acuità visiva e a cecità. Il motivo per cui laretinopatia proliferante colpisce solo un sottogruppo di pazienti diabetici rimane sconosciuto.L’evidenza che la retinopatia proliferante è associata con l’incremento dell’albuminuria e dellamorbilità cardiovascolare che spesso accompagnano la riduzione della sensibilità all’insulina, ciha condotto a vagliare la possibile associazione tra retinopatia proliferante ed insulinoresistenza. A tal fine abbiamo eseguito uno studio caso-controllo trasversale in 3 gruppi dipazienti di cui 28 con retinopatia proliferante, 29 con retinopatia background e 58 senzaevidenza di retinopatia, tutti paragonabili per fattori confondenti come età, sesso, durata deldiabete, body mass index e filtrato glomerulare. Lo studio mostrava che l’insulino resistenza erasignificamente più severa in pazienti con retinopatia proliferante che in quelli con retinopatiasemplice o senza retinopatia. Un modello statistico di comparazione multipla fra tutti i gruppistudiati, ha rivelato che la durata del diabete, il filtrato glomerulare e la creatinina sierica eranocomparabili, mentre la resistenza all’insulina era il solo parametro che ha mostrato unadifferenza significativa con potenziale valore predittivo (Kruskal-Wallis test, p=0.019).All’analisi di regressione multivariata, fra i pazienti con retinopatia, la resistenza all’insulina erail solo marcatore indipendente di PDR (p=0.016). Questi risultati possono suggerire che neldiabete di tipo 2, la resistenza all’insulina è un fattore di rischio indipendente per la retinopatiaproliferativa e può caratterizzare i pazienti ad aumentato rischio di cecità, i quali possono trarremassimo beneficio da uno screening precoce e da un intervento terapeutico. Questi risultati sonostati sottoposti per essere pubblicati sul Giornale di Endocrinologia Clinica e Metabolismo.Il ruolo dell’Endothelina-1, dell’Adiponectina, della Leptina e Sensitivitàall’Insulina nella Nefropatia Diabetica (sottoprogetto EDNALIS)La nefropatia diabetica è una delle cause più frequenti di insufficienza renale terminale (ESRD)in tutto il mondo. La patogenesi della nefropatia diabetica non è conosciutà completamente.Alcuni studi sperimentali e clinici hanno suggerito che diversi peptidi, derivati dall’endotelio edai tessuti adiposi come l’endothelina-1 (ET-1), l’adiponectina e la leptina, rispettivamente,sono coinvolti nella patogenesi e nella progressione della nefropatia diabetica. Endothelina-1,Nefropatia Diabetica, Adiponectina, Leptina e Sensitività all’Insulina (EDNALIS) è unsottoprogetto dello studio Delapril e Manidipina per la Nefroprotezione nel Diabete(DEMAND), mirato a valutare in modo prospecttico la relazione tra endotelina, adiponectina,leptina, resistenza all’insulina e l’incidenza/la progressione delle complicanze croniche del247RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNdiabete sia renali che non renali - come retinopatia e neuropatia in 50 normo- e 50 microalbuminuricicon diabete mellito tipo 2, randomizzati nello studio clinico DEMAND. Piùspecificamente, la relazione tra diversi polimorfismi dei geni dell'endotelina-1, il suo recettore(ETAR) dell’adiponectina e i principali parametri clinici saranno valutati. Nel 2003 sono statirandomizzati 74 pazienti e ci si aspetta che la fase di reclutamento si completi entro la fine del2004. I risultati aiuteranno a migliorare la conoscenza dei meccanismi della nefropatia diabeticae degli effetti renoprotettivi attesi dai trattamenti valutati nello studio principale (DEMAND).Insulino sensibilità come marker di nefropatia nel diabete mellito tipo 2:uno studio trasversale su 173 pazienti con diabete mellito tipo 2La nefropatia diabetica è la principale causa di insufficienza renale terminale nei PaesiOccidentali, dove contribuisce per più di un terzo del totale dei pazienti in terapia sostitutiva.Perchè la nefropatia diabetica colpisca solo un sottogruppo di pazienti (quasi il 25% di loro),rimane comunque sconosciuto. Una predisposizione genetica potrebbe spiegare un aumentatorischio di nefropatia in questo sottogruppo, e una diminuita sensibilità all'azione dell’insulina(insulino resistenza) potrebbe essere un marker di tale predisposizione. Per testare questa ipotesiabbiamo studiato in maniera trasversale, la relazione tra sensibilità all’insulina, misurata conclamp iperinsulinemico euglicemico, e nefropatia diabetica in un grande gruppo di pazientidiabetici di tipo 2 con livelli diversi di coinvolgimento renale, corretto per età, sesso, body-massindex e la presenza o assenza dell’ipertensione arteriosa. Lo studio ha mostrato che la diminuitasensibilità all’insulina si associa indipendentemente con l’incremento dell’albuminuria(considerata come marcatore di nefropatia diabetica) ed è relativamente indipendente dal gradodi insufficienza renale. E’ interessante notare che la diminuita sensibilità all'insulina si associaanche con l’ipertrigliceridemia, un altro componente della sindrome metabolica e noto fattore dirischio cardiovascolare. I nostri risultati recenti hanno suggerito che una più severa resistenzaall’insulina nei pazienti con diabete mellito di tipo 2 e albuminuria anormale non è unepifenomeno della nefropatia diabetica, ma può essere correlata alla patogenesi e allaprogressione della malattia. Il peggioramento della funzionalità renale può inoltre aumentare laresistenza all’insulina, che può alimentare un circolo viziozo che alla fine accelera laprogressione della malattia. Così, lo screening precoce per l'insulino resistenza può servire adidentificare dei pazienti ad alto-rischio che possono trarre beneficio dalla maggior parte degliinterventi provati e sperimentali di tipo preventivo e terapeutico includendo il miglioramentodella sensibilità all’insulina.Monitoraggio dell’emodinamica cardiovascolare in risposta a differentitrattamenti farmacologiciLa patologia cardiovascolare è frequente nei pazienti affetti da insufficienza renale cronica. Pertestare la severità e la progressione della malattia cardiovascolare abbiamo valutato morfologiae funzionalità cardiache mediante esami ripetuti ecocolorDoppler in sottogruppi rappresentatividi pazienti affetti da nefropatie diabetiche e non diabetiche arruolati in numerosi studi finalizzatia valutare gli effetti renoprotettivi di diversi trattamenti farmacologici quali gli inibitoridell’enzima di conversione dell’angiotensina, gli antagonisti recettoriali dell’angiotensina II, lestatine, la nitroaspirina ed altri. I risultati di questi studi saranno utili per capire se la terapiarenoprotettiva può aiutare a ridurre il drammatico eccesso di morbidità e mortalitàcardiovascolare associato all’insufficienza renale cronica.Effetti cardiaci secondari al confezionamento di una fistola arterovenosaper emodialisiLa malattia cardiovascolare è la causa principale di morbidità e mortalità nei pazienti in dialisi.Alcuni studi hanno dimostrato che lo scompenso cardiaco potrebbe essere indotto dalconfezionamento della fistola artero-venosa la quale, mediante un ridotto tempo di transito248RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNcircolatorio ed un aumentato ritorno venoso, aumenta cronicamente il carico di lavoro cardiaco.Abbiamo valutato prospetticamente la correlazione tra flusso della fistola e funzione cardiacamediante valutazioni ecocolorDoppler del flusso dell’arteria radiale e dei volumi telesistolici etelediastolici, della frazione d’eiezione, della gittata sistolica e dell’indice cardiaco prima, 30 e90 giorni dopo il confezionamento della fistola. I risultati preliminari hanno mostrato che neipazienti che iniziano la terapia emodialitica sostitutiva per uremia terminale, lo shunt arterovenosonon ha effetti negativi sulla performance cardiaca. Inoltre, la risposta emodinamica alconfezionamento della fistola sembra diversa in relazione alla presenza o meno di insufficienzaventricolare sinistra. E’ interessante notare che, nei pazienti con funzione ventricolare sinistraconservata, la performance cardiaca non viene significativamente alterata dallo shunt, mentre inquelli con insufficienza ventricolare sinistra la performance cardiaca tende a miglioraremediante meccanismi che sembrano non essere correlati alla rimozione delle tossine uremiche ealla correzione dell’anemia secondaria all’insufficienza renale.Complessivamente, questi risultati mostrano che, diversamente da quanto si crede, la fistola peremodialisi non contribuisce al progressivo deterioramento cardiaco tramite un cronico aumentodella gittata cardiaca.Affidabilità della tecnica eco-doppler nel monitorare l’efficacia dellarivascolarizzazione nella stenosi dell’arteria renale del trapiantoLa stenosi dell’arteria renale, una ben nota, ma potenzialmente trattabile complicanza del posttrapianto,è solitamente trattata mediante angioplastica e posizionamento di stent, ma l’efficaciadella riperfusione dell’organo trapiantato è difficile da stabilire sul piano clinico. Abbiamorecentemente dimostrato che l’ecoDoppler è un affidabile, non invasivo, e facilmente reperibilestrumento per monitorare l’efficacia della procedura di rivascolarizzazione. Questi risultati sonostati pubblicati sul Giornale della Società Americana di Nefrologia durante l’anno in corso.Un nuovo programma di ricerca finalizzato a valutare se lo stesso approccio può essereutilizzato per monitorare l’efficacia della rivascolarizzazione della stenosi arteriosa renale neireni nativi è stato recentemente avviato.La malattia ischemica del rene è una delle cause più frequenti di insufficienza renale e diaumento di morbidità e mortalità cardiovascolare nei pazienti con insufficienza renale cronica.Il trattamento ottimale di questa patologia non è stato ancora chiaramente dimostrato. Ladisponibilità di una metodica affidabile, ripetibile, non invasiva e a costi relativamente bassiaiuterà a caratterizzare meglio la malattia e ad identificare i pazienti che potrebbero trarrebenefici dalle procedure di rivascolarizzazione.Ramipril e Nefrina in nefropatia diabeticaRecenti ricerche hanno caratterizzato i componenti molecolari delle giunzioni intercellulari deipodociti in quanto alcuni tra questi sono funzionalmente necessari per l’integrità del filtroglomerulare. La Nefrina è stata proposta come costituente di una struttura zipper-like la qualepreviene la perdita di molecole della dimensione dell’albumina. Mutazioni nel gene umano dellaNefrina provocano la mancanza del slit diaframma e danno origine a proteinuria massiva.Un’espressione ridotta della Nefrina extracellulare è stata riscontrata in pazienti diabetici connefropatia conclamata. Inoltre gli inibitori del sistema Renina-Angiotensina riducono in modoefficace la proteinuria in tali pazienti, almeno in parte tramite un miglioramento dellapermeselettività glomerulare.Attualmente stiamo studiando dieci pazienti con diabete di tipo I e II e proteinuria > 0.5 g/die alfine di verificare se questo effetto benefico è associato a una reversibilità dei cambiamentistrutturali del glomerulo nell’espressione della Nefrina. Le valutazioni effettuate prima e dopo iltrattamento includono la morfologia renale e parametri emodinamici (flusso plasmatico renale,resistenze vascolari renali e frazione di filtrazione) e la permeselettività glomerulare. Lo scopo èquello di studiare i cambiamenti strutturali, che possono spiegare l’effetto renoprotettivo degli249RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNinibitori del sistema Renina-Angiotensina nelle malattie renali croniche con l’obiettivo piùgenerale di migliorare sempre più la nostra comprensione degli effetti dei farmaci renoprotettiviutilizzati in questa categoria di pazienti.Effetti a lungo termine dell’associazione di un ACE inibitore con unantagonista recettoriale nell’indice di filtrazione glomerulare,emodinamica renale e permeselettività glomerulare nelle nefropatiecroniche proteinuricheL’entità della proteinuria predice la progressione della malattia renale e la sua riduzione tramitegli inibitori dell’enzima di conversione dell’angiotensina (ACEi) o gli antagonisti recettorialidell’angiotensina II (ARA) ha un effetto renoprotettivo. Nello studio DIO-I-05 l’associazionedei suddetti farmaci a breve termine ha dimostrato di essere più efficace nella riduzione dellaproteinuria rispetto ai farmaci usati singolarmente nonostante gli effetti siano simili nelcontrollo della pressione arteriosa; questo suggerirebbe una maggiore preservazione del filtratoglomerulare a lungo termine. Quest’effetto benefico sembra sia dovuto principalmente a fattoriemodinamici renali piuttosto che a un effetto sulla permeselettività glomerulare. Abbiamoquindi intrapreso uno studio osservazionale, prospettico e aperto, volto a valutare l’effetto alungo termine (24 mesi) dell’associazione ACEi ed ARA su velocità di filtrazione glomerulare,diversi parametri emodinamici renali (flusso plasmatico renale, frazione di filtrazione eresistenze vascolari renali) e permeselettività glomerulare, nei pazienti che hanno partecipatoallo studio DIO-I-05. Ogni paziente (caso) sarà accoppiato (a seconda di età, sesso, proteinuriabasale e funzionalità renale) con 2 pazienti (controlli) dello studio REIN sottoposti a terapia conramipril. Questo servirà a confrontare i risultati ottenuti con la terapia combinata ACEi e ARA econ terapia singola con ACEi. L’individuazione di un maggiore effetto benefico renale conterapia combinata fornirebbe la prova che potenziare l’inibizione del sistema Renina-Angiotensina tramite l’associazione di ACEi e ARA fornisce una renoprotezione maggiorerispetto all’inibizione ottenuta tramite ACEi o ARA utilizzati singolarmente. Questo può avereimportanti implicazioni cliniche nel trattamento di pazienti con malattia renale cronicaIl rituximab nella nefropatia membranosa idiopaticaLa nefropatia membranosa idiopatica rappresenta la più frequente causa di sindrome nefrosica epuò progredire verso l’insufficienza renale terminale nel 30-40% dei casi. Il trattamento consteroidi e farmaci immunosoppressivi è poco efficace e notevolmente tossico. Vista lapotenziale implicazione, nella patogenesi di questa malattia, dei linfociti B, ci siamo proposti distudiare gli effetti del trattamento con rituximab (375 mg/m2) in unica somministrazionesettimanale per quattro settimane consecutive. Il farmaco in sperimentazione, un anticorpomonoclonale dell’antigene di superficie CD20 delle cellule B, è stato somministrato in ottopazienti affetti da nefropatia membranosa idiopatica con persistente proteinuria nefrosica. Lostudio ha mostrato che alla quarta e alla ventesima settimana di follow-up, la proteinuria siriduceva in media (ES) da 8.6 g/24h (1.4) a 3.8 (0.8) e 3.7 (0.9), rispettivamente (p

IRFMNpermeselettività glomerulare al fine identificare la relazione esistente tra cambiamentimorfologici e funzionali indotti dalla terapia con rituximab. Lo studio può fornire informazioniutili a capire meglio i meccanismi della malattia e della risposta all’inibizione dei linfociti BCD20 nella nefropatia membranosa idiomatica.Studio clinico volto a valutare gli effetti renali e metabolici di untiazolidinedione (rosiglitazone) in pazienti con trapianto renale eproteinuriaNei pazienti con trapianto di rene, in terapia immunosoppressiva con steroidi e inibitori dellacalcineurina come ciclosporina A e tacrolimus, molto spesso si osservano una ridotta sensibilitàall’insulina (insulino-resistenza), alterata tolleranza al glucosio e dislipidemia. Queste anomaliemetaboliche, associandosi ad altri ben noti fattori di rischio cardiovascolare quali ipertensione ealbuminuria, possono favorire la riduzione della funzione renale accelerando il processo cheporta all’insufficienza renale terminale e possono anche aumentare il rischio di morbiditàcardiovascolare e morte prematura. I tiazolidinedioni (glitazoni) sono una nuova classe di agentiantidiabetici orali che potrebbero aumentare la sensibilità all’insulina. Questi farmaci inoltre,migliorando la sensibilità all’insulina, potrebbero anche migliorare la tolleranza al glucosio e ladislipidemia. In particolare, uno di questi farmaci, il rosiglitazone, è in grado di ridurre lapressione e l’albuminuria in pazienti con diabete di tipo 2 e nefropatia e questo ha portato aformulare l’ipotesi che questo farmaco possa avere specifici effetti reno- e cardio-protettivi. Ilrosiglitazone potrebbe esercitare tale effetto anche in pazienti con trapianto di rene edisfunzione cronica dell’organo trapiantato nei quali quindi i glitazoni, oltre a determinare unmiglioramento dell’insulino-resistenza, della tolleranza al glucosio e della dislipidemia,potrebbero ridurre l’albuminuria e migliorare il controllo pressorio. La recente osservazione chei glitazoni migliorano lo stato di insulino resistenza indotta dagli steroidi in soggetti sani,fornisce un ulteriore razionale per studiare gli effetti metabolici e renali dei glitazoni in pazienticon trapianto di rene e in terapia steroidea cronica. Abbiamo quindi disegnato e programmatouno studio pilota volto a valutare il profilo rischio/beneficio a breve termine del rosiglitazone inpazienti con trapianto renale e disfunzione cronica dell’organo trapiantato. A dieci pazientiverrà valutata la sensibilità all'insulina, la tolleranza al glucosio, il profilo lipidico,l’emodinamica renale e l’albuminuria in condizioni basali, alla fine del trattamento (2 mesi diterapia con rosiglitazone 8 mg/die) e due mesi dopo la sospensione. Se questo studio pilotamostrerà un effetto benefico del rosiglitazone, verrà disegnato un trial prospettico erandomizzato al fine di verificare gli effetti cardio- e renoprotettivi a lungo termine diquest’innovativa terapia in pazienti con trapianto renale e disfunzione dell’organo trapiantato.Studio randomizzato, multicentrico, in doppio cieco, in cross-over, conimpiego di placebo, di fase IIa per valutare l'effetto di ACT-058362 sull’albuminuria e la pressione arteriosa in pazienti con diabete di tipo 2,ipertesi, nefropatici , in terapia cronica con un antagonista recettorialedell'angiotensina II o con un inibitore dell'enzima di conversionedell'angiotensinaLa malattia renale cronica (CRF) determina una progressiva perdita della funzionalità renalefino a uno stadio terminale (ESRD) nel quale si può intervenire solo con la dialisi e il trapianto.Il diabete è diventato la principale causa di ESRD nel mondo, in quanto i pazienti affetti dadiabete, soprattutto di tipo 2, sono sempre di più e vivono più a lungo. La più precoce evidenzaclinica di danno renale nel diabete è rappresentata dalla microalbuminuria, cioè dalla comparsadi piccole, ma significative, quantità di albumina nelle urine. Farmaci che inibiscono il sistemarenina angiotensina, gli ACE-inibitori (ACEI) e gli antagonisti recettoriali dell’angiotensina(ARA), sono in grado non solo di ridurre la pressione arteriosa, ma anche la proteinuria inpazienti con nefropatia conclamata, e sono efficaci nel prevenire lo sviluppo di251RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNmacroalbuminuria e normalizzare l’escrezione urinaria di proteine in pazientimicroalbuminurici, riducendo in modo significativo la morbidità e la mortalità in questisoggetti. L’urotensina e il suo recettore sono up-regolati in vari modelli sperimentali e in alcunepatologie nell’uomo, suggerendo che il sistema U-II svolge un ruolo in queste patologie. Losviluppo di un programma clinico per l’impiego di ACT-058 362 nell’insufficienza renale èsupportato da dati clinici e pre-clinici. I livelli di U-II sono elevati nei pazienti con insufficienzarenale. In modelli sperimentali di ratto con insufficienza renale acuta o cronica ACT-058362previene lo sviluppo dell’insufficienza renale migliorando l’emodinamica renale e la funzioneglomerulare senza modificare la frazione di filtrazione, la pressione sistemica o la frequenzacardiaca. Si tratta di uno studio internazionale, multicentrico, randomizzato, di fase IIa, indoppio cieco, in cross-over, con l’impiego di placebo. Lo studio è così suddiviso: Screening £ 2settimane; Periodo di run-in: 4 settimane; Trattamento 1: 4 settimane; Periodo di wash-out: 6settimane; Trattamento 2: 4 settimane; Follow-up: 4 settimane. Lo scopo dello studio èdimostrare che ACT-058 362 riduce l’albuminuria in pazienti con diabete di tipo 2, ipertensionee nefropatia, in terapia cronica con un antagonista recettoriale dell'angiotensina II (ARA) o conun inibitore dell'enzima di conversione dell'angiotensina (ACEi).Se il risultato di questo studio pilota dimostra un effetto benefico di ACT 058 362, una terapiacronica con antagonisti dell’urotensina potrebbe essere offerta a pazienti diabetici di tipo 2 connefropatia conclamata allo scopo di valutare gli effetti renoprotettivi a lungo termine di questotrattamento innovativo in associazione al blocco cronico del sistema renina-angiotensina.Realizzazione di uno studio prospettico, randomizzato, multicentricomirato a valutare gli effetti di Delapril e Manidipina in 342 normo-omicroalbuminurici con diabete mellito tipo 2: Studio Delapril e Manidipinaper la Nefroprotezione nel Diabete (DEMAND)Studi sperimentali e clinici dimostrano che gli inibitori dell’enzima di conversione (ACEi) e icalcio antagonisti (CCBs) hanno effetto renoprotettivo specifico che potrebbe aumentare quandoi due farmaci si usano in combinazione. Per testare questa ipotesi abbiamo disegnato lo studioDelapril e Manidipina per la Nefroprotezione nel Diabete (DEMAND), uno studio prospettico,randomizzato, in doppio cieco mirato a paragonare la velocità di perdita della funzione renale(definita come diminuzione della velocità di filtrato glomeulare) in 342 normo- e microalbuminuricicon diabete mellito tipo 2, randomizzati a 3 anni di trattamento con l’ACEiDelapril (30 mg/giorno), da solo o combinato al CCB Manidipina (10 mg/giorno), oppure aterapia convenzionale (non ACEi, non CCB). Si sono disegnati anche dei sottoprogetti mirati aesplorare l’impatto di tali trattamenti sulle altre complicanze croniche (come neuropatiadiabetica e retinopatia diabetica) e il ruolo della diminuita insulino sensibilità e/o l’aumentataattività dell’endotelina in queste complicanze. Nel 2003 sono stati randomizzati 187 pazienti eci si aspetta che la fase di reclutamento si completerà entro la fine del 2004. Lo studio ècoordinato dal Centro di ricerche Cliniche per le Malattie Rare Aldo e Cele Daccò, VillaCamozzi, Ranica, dove verranno raccolti e analizzati tutti i dati e i campioni biologici. L’ultimopaziente randomizzato effettuerà la visita finale nel 2007.Studio clinico volto a valutare gli effetti ipolipemizzanti di valsartan,fluvastatina e la loro combinazione in pazienti con trapianto renaleRecenti ricerche hanno evidenziato che molteplici fattori di rischio cardiovascolare sonopresenti in trapiantati renali tra cui il Diabete, l’Ipertensione, la Sindrome Nefrosica, l’Obesità,l’Insufficienza renale. In tali malattie, l’incidenza e la prevalenza di eventi cardiovascolari, sononettamente aumentati. La presenza di proteinuria, sia come “microalbuminuria” che come“macroalbuminuria” conferisce un ulteriore elemento di danno cardiovascolare. Inoltre ladislipidemia, comune nei pazienti con trapianto renale, associata a un'alterazione del profilolipoproteico, gioca un ruolo nello sviluppo della glomerulosclerosi e del danno252RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNtubulointerstiziale, portando a una progressiva perdita della funzionalità renale e aumentandosostanzialmente il rischio cardiovascolare. I pazienti sono trattati con dosi crescenti diAntagonista recettoriale dell’Angiotensina II e statine, dopo aver seguito un periodo di Washoutdi 6 settimane se precedentemente in trattamento con farmaci antiipertensivi appartenentialle suddette classi o con farmaci ipolipemizzanti. I soggetti, che dopo gli accertamenti inizialinon evidenziano motivi di possibile esclusione, sono posti in trattamento con: Valsartan 80 mgfino a 160 mg, Fluvastatina da 40 mg fino a 80 mg/dia e l’associazione di loro due. Se i risultatimostreranno un benefico effetto della terapia combinata con Antagonista recettoriale e statinasulla funzione renale e sul profilo lipidico, questo regime terapeutico potrà essere praticatocronicamente da pazienti con trapianto renale, col fine di limitare o prevenire la ben nota elevatamorbilità e mortalità cardiovascolare, migliorando inoltre la sopravvivenza a lungo terminedell’organo trapiantato.Studio randomizzato, in doppio cieco, crociato per valutare gli effettirenali e sistemici di NCX4016, comparato ad aspirina, in pazienti affetti dadiabete tipo II e nefropatia diabetica incipiente.L’aspirina è un farmaco comunemente utilizzato in corso di dolore/infiammazione e di patologiacardiovascolare. Il suo impiego è limitato dagli effetti gastrolesivi. Recenti ricerche evidenzianocome aggiungere un derivato dell’ ossido nitrico alla molecola dell’aspirina permetta dimantenere gli effetti terapeutici e limitare gli effetti indesiderati dell’aspirina stessa. L’ossidonitrico è in grado di aumentare le difese della mucosa gastrica: regolando il flusso sanguigno, lasecrezione di muco e favorendo la riparazione epiteliale. E’ stato dimostrato che NCX4016, underivato dell’acido acetilsalicilico associato a NO, mantiene le propietà analgesiche,antiinfiammatorie e antitrombotiche dell’aspirina, con minor gastrolesività. Dati sperimentalimostrano che NCX4016 migliora la sensibilità all’insulina in topi con compromissione dellaproduzione endoteliale di NO.Scopo dello studio è valutare l’attività di NCX4016, verso aspirina, sulle disfunzionidell’endotelio glomerulare e sulla sensibilità all’insulina, in pazienti affetti da diabete noninsulino dipendente (NIDDM). Noi stiamo valutando l’attività di NCX4016, paragonato a dosiequiattive di aspirina, sulle disfunzioni della perme-selettività glomerulare e sulla sensibilitàall’insulina, in 12 pazienti affetti da diabete tipo 2 e nefropatia diabetica incipiente. Risultatiincoraggianti porteranno al disegno di un trial prospettico per verificare se un prolungatotrattamento con NCX4016 sia in grado di ridurre la morbilità renale e cardiovascolare inpazienti affetti da diabete tipo II e nefropatia diabetica.Studio aperto di fase IIa volto a valutare gli effetti di CYC202 in pazientiaffetti da neropatia a IgALa nefropatia a IgA, o malattia di Berger, è una condizione clinico-patologica caratterizzatadalla presenza di ematuria micro- e macroscopica e da depositi mesangiali di IgA, che spessoconduce ad insufficienza renale. La patogenesi della malattia è tuttora sconosciuta e oltre il 35%dei pazienti sviluppa a lungo termine insufficienza renale terminale. La terapia conservativa conl’utilizzo di ACEi per un rigoroso controllo della pressione arteriosa, è efficace nel minimizzareil declino della funzione renale e nel ridurre la proteinuria. Tuttavia nella nefropatia a IgA taletrattamento non influenza in modo specifico la componente proliferativa ed infiammatoria dellamalattia. In realtà non esiste attualmente nessun trattamento efficace nella cura della malattia diBerger. Corticosteroidi e agenti immunosopressivi sono stati utilizzati con scarsi benefici eimportanti effetti collaterali. CYC202 è un potente e selettivo inibitore delle kinasi ciclinadipendenti(CDK), efficace nel prevenire la proliferazione cellulare e inibirne ladifferenziazione. In modelli animali di nefropatia a IgA, CYC202 ha ridotto la proliferazionedelle cellule mesangiali, l’azoto ureico nel sangue e la proteinuria. Studi di tollerabilità insoggetti sani hanno mostrato una minima tossicità correlata a tale farmaco. Abbiamo quindi253RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNprogettato uno studio pilota volto a valutare il profilo di sicurezza e tollerabilità di tale farmacoin pazienti affetti da nefropatia a IgA con l’obiettivo futuro di valutare l’efficacia di tale terapiain questa categoria di pazienti. Tuttavia lo studio è stato interrotto prematuramente a causa diuna inaspettata tossicità epatica. I meccanismi responsabili di tale effetto collaterale sono ancoraoggetto di studio. La ricerca in questo campo si fermerà fino a quando tali meccanismi nonsaranno totalmente chiariti.Uno studio prospettico, randomizzato, multicentrico, volto a valutarel'effetto antiproteinurico delle Statine in associazione a terapia combinatacon ACE-inhibitori e Antagonisti Recettoriali dell’Angiotensina nellenefropatie croniche proteinuriche: Lo studio europeo di prevenzione dellainsufficienza renale terminale tramite agenti ipolipemizzanti e ACEinibitori: Lo studio ESPLANADEL’insufficienza renale terminale è in progressivo aumento nel mondo. I pazienti con uremiaterminale presentano inoltre elevata morbidità e mortalità, principalmente dovuta a un’elevataincidenza di patologie cardiovascolari. Quindi, impedire o limitare la progressione dellenefropatie croniche, oltre a limitare l'incidenza dell'uremia terminale, può anche portare a unprolungamento della sopravvivenza di questi pazienti. A lungo termine i farmaci che inibisconoil sistema renina-angiotensina, quali gli Inibitori dell’enzima di conversione (ACEi) e gliAntagonisti recettoriali dell’Angiotensina II (ATA), hanno un chiaro effetto reno- e cardioprotettivo.Sono inoltre disponibili dati preliminari che attribuiscono proprietà reno-protettivespecifiche anche alle Statine. Nel corso di quest’anno abbiamo quindi progettato e iniziato lostudio ESPLANADE, il cui scopo principale è valutare se la terapia con statine, oltre a limitarela morbidità e la mortalità cardiovascolare, è anche in grado di amplificare gli effetti renoprotettividi ACEi ed ATA.ESPLANADE è uno studio multicentrico, prospettico, a gruppi paralleli nel quale dopo duemesi di trattamento con ACEi ed ATA, due gruppi di 90 pazienti, con o senza diabete tipo 2,vengono sottoposti o meno a terapia con Fluvastatina (40 o 80 mg/die) per 6 mesi. Allo studioaderiscono venti Centri Italiani di Nefrologia e il reclutamento dei pazienti è già iniziato. Lostudio sarà interamente coordinato dal Centro di Ricerche Cliniche per le Malattie Rare Aldo eCele Daccò, Villa Camozzi, Ranica. I risultati finali sono attesi per la fine del 2004. Il risultatodi questo studio preliminare potrà rappresentare la base per un trial prospettico, internazionale,su larga scala, volto a valutare se la terapia combinata con statine e antagonisti del sistemarenina-angiotensina possono ridurre apprezzabilmente la morbilità e mortalità renale ecardiovascolare in pazienti affetti da malattie renali croniche.Effetti a breve e a lungo termine del controllo pressorio intensificato inpazienti con nefropatie croniche proteinuriche: L'efficacia del Ramiprilnelle Nefropatie 2: Lo studio REIN 2Lo studio REIN, che valutava l’efficacia del Ramipril nelle nefropatie croniche progressive, hamostrato che a livelli paragonabili di controllo pressorio, gli inibitori dell’enzima di conversionedell'Angiotensina (ACEi) sono più efficaci di altri agenti antipertensivi nel rallentare laprogressione delle nefropatie croniche verso l’uremia terminale. Lo studio relativo allemodificazioni della dieta nelle malattie renali (MDRD) ha mostrato inoltre che anche uncontrollo intensificato della pressione arteriosa può avere uno specifico effetto reno-protettivo.Nello studio REIN 2 abbiamo voluto verificare se un controllo intensificato della pressionearteriosa, ottenuto tramite l’utilizzo di Calcio antagonisti in associazione con ACE inibitori, è ingrado di incrementare l’effetto renoprotettivo attribuibile al controllo convenzionale dellapressione arteriosa, ottenuto semplicemente con ACE inibitori. Il REIN 2 è uno studiomulticentrico, randomizzato, nel quale 356 pazienti selezionati in trenta centri di NefrologiaItaliani, Spagnoli, Svizzeri e Bulgari, vengono randomizzati a un trattamento con ACE inibitore254RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMN(ramipril 5 mg/die) da solo o in associazione ad un Calcio antagonista (felodipina 10 mg/die) alfine di ottenere due differenti target di controllo pressorio, convenzionale (pressione diastolica

IRFMN256RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNLABORATORIO DIEPIDEMIOLOGIA CLINICAPERSONALECapo LaboratorioGuido BERTOLINI, Dr.Med.Chir.257RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNINTRODUZIONE ALLE ATTIVITA' DEL LABORATORIOL’obiettivo generale delle attività del Laboratorio di Epidemiologia Clinica è quello dicontribuire al miglioramento dell’assistenza sanitaria in diversi ambiti disciplinari. Due sono leprincipali direttrici seguite: aiutare gli operatori a utilizzare al meglio le conoscenze e le risorsedisponibili; contribuire alla produzione di nuove conoscenze utili alla pratica clinica. Gli ambitiassistenziali in cui il Laboratorio è particolarmente attivo sono quello della rianimazione eterapia intensiva e quello delle malattie rare in generale.SCOPERTE/RISULTATI PRINCIPALIIl progetto Margherita sulla valutazione della qualità dell’assistenza in Terapia Intensiva, al suosecondo anno di attività, ha visto un aumento del 28% delle TI partecipanti, che sono passate da95 a 122. I pazienti reclutati nel 2003 sono stati complessivamente 30.000. Questo ha permessodi sviluppare un modello di predizione della mortalità del paziente critico, ancora più precisorispetto a quello dell'anno precedente. Ogni TI partecipante ha ricevuto un rapporto generale euno personalizzato. In quest'ultimo, oltre a una dettagliata descrizione della casistica, abbiamofornito alla singola TI il confronto della sua performance clinica con quella di tutte le altre, reseconfrontabili proprio a partite dal modello di predizione della mortalità.Abbiamo dimostrato che il costo del lavoro per paziente (ovvero il costo del tempo dedicatoesclusivamente ai pazienti della TI) diminuisce quasi linearmente all'aumentare del numero deiletti della TI, fino a circa 8 letti. Oltre i 12 letti il costo del lavoro per paziente rimane pressochécostante. Questo indica che le TI con meno di 8 posti letto non sono efficienti.In uno studio sull'uso di analgesici e sedativi in TI, abbiamo dimostrato che la partecipazione auno studio clinico che consenta a ogni partecipante di rivedere i propri dati migliora la praticaclinica.I risultati di un nostro studio randomizzato sulla nutrizione artificiale nel paziente critico hannomostrato che la immunonutrizione è verosimilmente associata a un aumento di mortalità neipazienti con sepsi severa o shock settico.Abbiamo dimostrato che la mortalità media di una TI, aggiustata per la gravità dei pazienti,diminuisce all'aumentare del volume di pazienti a elevata complessità trattati dalla TI stessa.Abbiamo sviluppato un sistema esperto per assistere il medico nella difficile diagnosi diembolia polmonare, che ha dimostrato ottime caratteristiche di validità.Abbiamo mostrato che in Italia, nella stragrande maggioranza dei casi, l'anestesista che visita ilpaziente non è lo stesso che praticherà l'anestesia e che questo contrasta con linee guidainternazionali, con la volontà dei pazienti e con le preferenze degli stessi medici.Abbiamo chiarito il ruolo di alcuni specifici anticorpi come fattori di rischio per la sindrome daantifosfolipidi.Abbiamo contribuito alla realizzazione di una rete europea per lo studio dei pazienti consindromi paraneoplastiche.COLLABORAZIONI NAZIONALIDipartimento di Neurologia, Clinica Medica II, Azienda ULSS 16, Università di Padova258RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNCOLLABORAZIONI INTERNAZIONALIMedical Economics and Research Centre (MERCS), Royal Hallamshire Hospital, Sheffield, UKBloomsbury Institute of Intensive Care Medicine, Institute of Biomedical Research, UniversityCollege London, UKMedical Intensive Care Unit, Hôpital Henri Mondor & Université Paris, FPRESENZA IN COMITATI EDITORIALIRicerca & Pratica (Guido Bertolini)Dedalo. Gestire i sistemi complessi in sanità (Guido Bertolini)British Medical JournalCritical Care MedicineIntensive Care MedicineATTIVITA' DI REVISIONEPRESENZA IN COMMISSIONI NAZIONALI E INTERNAZIONALIResearch Group on Cost-Effectiveness, European Society of Intensive Care MedicineORGANIZZAZIONE DI EVENTICongresso, Meeting GiViTI,15-17 ottobre, PesaroCorso, "Statistica applicata alla ricerca biomedica", febbraio-luglio, Ranica (BG)PARTECIPAZIONE AD EVENTI CON CONTRIBUTI DELLABORATORIOCorso, VII Corso di Aggiornamento in Rianimazione e Anestesia Cardiotoracica, “Filestatistici”, 9-11 Ottobre, SalsomaggioreWorkshop, ESICM Cost-effectiveness Working Group, “Differences between ICUs and RICUsin the cost of caring for patients with exacerbation of COPD”, Marzo, Bruxelles, BelgioCorso, Sepsis Campus, “Metodologia clinica” Aprile, giugno, settembre, Bergamo259RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNCorso, Scuola di specializzazione in Anestesia e Terapia Intensiva Università degli studi diMilano Bicocca, “Leggere un articolo scientifico”, Aprile, BergamoCongresso, Meeting di Neuroanestesia e Neurorianimazione ’03, “How can we demonstrate theefficacy? The methodological framework”, Aprile, SienaCongresso, Meeting di Neuroanestesia e Neurorianimazione ’03, “Shortage of organs fortransplantation”, Aprile, SienaCongresso, SMART (Simposio Mostra Anestesia Rianimazione e Terapia Intensiva), “ARDS inEuropa. Risultati dello studio Alive”, Maggio, MilanoConferenza, Ricerca e salute, ”Il caso della ricerca in Terapia Intensiva”, Maggio, Ranica,BergamoWorkshop, European Symposium “Methodological aspects of clinical trials in rare diseases”,“Bayesian methods”, Settembre, BergamoConvegno, Conferenza nazionale. Quale innovazione possibile nella stagione dell’incertezza?Le strade dell’e-learning, “Educazione continua in medicina”, Ottobre, BolognaCongresso, XI Congresso nazionale SINPE (Società Italiana di Nutrizione Parenterale adEnterale), “RCT e metanalisi in NA: quando i risultati sono contradditori”, Settembre, MilanoAstraZeneca ItaliaSEVIT S.p.A.Azienda ULSS 16, Padova - ItaliaSanofi-Synthelabo ItaliaCONTRIBUTI E CONTRATTISELEZIONE PUBBLICAZIONI SCIENTIFICHE APPARSENELL'ANNO 2003Bertolini G, Rossi C, Brazzi L, Simini B. Local clinical research and changes in local clinical practice. Anaesthesia2003; 58:199-200.Bertolini G, Iapichino G, Radrizzani D, Facchini R, Simini B, Bruzzone P, Zanforlin G, Tognoni G. Early enteralimmunonutrition in patients with severe sepsis. Results of an interim analysis of a randomized multicentre clinicaltrial. Intensive Care Med 2003; 29: 834-840.Luciani D, Marchesi M, Bertolini G. The role of Bayesian Network in the diagnosis of pulmunary embolism. JThromb Haemost 2003; 1: 698-707.Simini B, Bertolini G. Should same anaethesist do preoperative anaesthetic visit and give subsequent anaeshetic?Questionnaire survey of anaesthetists. BMJ 2003; 327: 79-80.Bertolini G, Latronico N, Brazzi L, Radrizzani D. Insulin dose or glycemic control for the critically ill? Crit CareMed 2003; 31: 2565-2566.260RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNGalli M, Luciani D, Bertolini G, Barbui T. Lupus anticoagulants are stronger risk factors for thrombosis thananticardiolipin antibodies in the antiphospholipid syndrome: a systematic review of the literature. Blood2003;101:1827-1832.Galli M, Luciani D, Bertolini G, Barbui T. Anti-beta 2-glycoprotein I, antiprothrombin antibodies, and the risk ofthrombosis in the antiphospholipid syndrome. Blood 2003;102:2717-2723.Iapichino G, Bertolini G, Pezzi A, Rossi c, Melotti R, Valdambrini F, Albicini M, Di Mauro P. Use of sedative andanalgesic drugs in the first week of ICU stay in high-level-of-care. Minerva Anestesiol 2003; 69: 765-774.Bertolini G, Rossi C, Brazzi L, Radrizzani D, Rossi G, Arrighi E Simini B. The relationship between labour cost perpatient and the size of intensive care units: a multicentre prospective study. Intensive Care Med 2003; 29: 2307-2311.Giacomini M, Iapichino G, Cigada M, Minuto A, Facchini R, Noto A, Assi E. Short-term noninvasive pressuresuppport ventilation prevents ICU admittance in patients with acute cardiogenic pulmonary edema. Chest 2003; 123:2057-2061SELEZIONE PUBBLICAZIONI DIVULGATIVE APPARSENELL'ANNO 2003Bertolini G, Cattaneo M. Formazione in medicina generale: ECM e dintorni. Ricerca & Pratica 2003;19:23-26.Bertolini G. Didatticismo e pedagogia in medicina. L’Arco di Giano 2003; 37: 139-146.Bertolini G. Verso l’accreditamento formativo della ricerca clinica. Ricerca & Pratica 2003;19:225-226.Bertolini G. Educazione continua in medicina. In: Canevaro A (a cura di) Quale innovazione possibile nella stagionedell’incertezza? Le strade dell’e-learning. Bologna: Dip. Scienze dell’Educazione Università di Bologna, 2003:119-127ALTRE PRODUZIONI EDITORIALI PUBBLICATE NEL CORSO DEL2003Rossi C, Stella A, Bertolini G. (a cura di) Progetto Margherita. Promuovere la ricerca e la valutazione in TerapiaIntensiva. Rapporto 2002. Bergamo: Ed. Sestante, 2003ATTIVITA' DI RICERCAAppropriatezza in Terapia IntensivaQuesta linea di ricerca è orientata a valutare l'appropriatezza di utilizzo di specifiche procedure,nonché più in generale delle risorse umane e materiali, nelle Terapie Intensive italiane.Si tratta di un progetto pluriennale promosso all'interno del gruppo collaborativo GiViTI(Gruppo italiano per la Valutazione degli interventi in Terapia Intensiva), coordinato dalLaboratorio. Fulcro di queste attività è il Progetto Margherita. Si tratta di un progetto divalutazione continua della qualità dell’assistenza, basato su un software di raccolta datiappositamente sviluppato all’interno del Laboratorio e distribuito gratuitamente a tutte le261RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNTerapie Intensive iscritte. Il software è stato realizzato con una struttura modulare, che permettedi integrare facilmente la raccolta dati di base (il "core" della Margherita) con raccolte datirelative a progetti di ricerca specifici (i "petali" della Margherita).Insufficienza d’organo nel paziente criticoQuesta linea di progetti è volta a comprendere meglio i meccanismi che portano allo sviluppo,nel paziente critico, di insufficienze d’organo, nonché a migliorare gli strumenti diagnostici eterapeutici. I progetti di questo gruppo per il 2003 sono stati: ALIVE, CRIMYNE e NUTRI. Ilprimo è uno studio di coorte per la descrizione epidemiologica dell’occorrenza e del trattamentodell’ARDS (Acute Respiratory Distress Syndrome) in Europa. Il secondo (CRIMYNE –CRitical Illness MYopathy and NEuropathy) è un progetto volto a studiare la storia naturaledella polimiopatia e polineuropatia del paziente critico nonché a precisare il rapporto conl’insufficienza multipla d’organo. Il terzo progetto (NUTRI) è un trial clinico randomizzato cheha confrontato l’efficacia di due diversi approcci di nutrizione artificiale nel paziente critico nelprevenire sepsi, insufficienze d’organo e mortalità.Epidemiologia clinica delle malattie rare e della medicina orfanaGli obiettivi di questo ambito di attività sono quelli di individuare e descrivere i problemi apertiper la ricerca e la clinica, nonché i bisogni assistenziali dei pazienti, relativamente a patologierare o ad aspetti trascurati di malattie più comuni.Di questa linea di ricerca fanno parte due progetti specifici: "Epidemiologia della malattia diTakayasu in Italia" e "PNS - Euronetwork".Il primo è un progetto multicentrico volto a descrivere la storia naturale della malattia diTakayasu (una rara forma di vasculite che colpisce le grosse arterie) in Italia, nonché l'assistenzaricevuta nel nostro Paese da chi ne è affetto. Il secondo è un progetto europeo, finanziato nelcontesto del quinto programma quadro della Comunità Europea, che ha gli obiettivi di:realizzare una rete di centri di riferimento per queste patologie con un database comune;organizzare una banca dati di siero e di liquido cerebrospinale per mettere a punto i miglioriindicatori anticorpali per la diagnosi e la prognosi di questi pazienti; realizzare progetti diricerca sul trattamento di questa sindrome.262RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNCOORDINAMENTO, INFORMAZIONEE DIAGNOSI DELLE MALATTIE RAREPERSONALECapo LaboratorioArrigo SCHIEPPATI, Dr.Med.Centro di Informazione per le Malattie RareCapo UnitàErica DAINA, Dr.Med.263RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNINTRODUZIONE ALLE ATTIVITA' DEL LABORATORIOLe malattie rare possono essere definite come condizioni patologiche a bassa prevalenza eincidenza.Con l’obiettivo di introdurre un criterio rigoroso, il Working Group on Rare Diseases - istituitodalla Comunità Europea - ha stabilito si possa considerare rara una malattia con prevalenzainferiore a 5 casi per 10.000 abitanti. Per la maggior parte delle malattie rare mancano peraltrodati epidemiologici; per pochissime di esse esiste infatti un sistema di notifica dei casi a livellonazionale o internazionale. Pur interessando ciascuna un piccolo numero di individui, soloapparentemente le malattie rare sono un problema di pochi: l’Organizzazione Mondiale dellaSanità stima ve ne siano almeno 5.000 e nel loro insieme rappresenterebbero il 10% dellapatologia umana.Uno dei primi problemi che una persona colpita da malattia rara si trova ad affrontare è che lasua condizione venga riconosciuta; spesso la diagnosi giunge con notevole ritardo. Anchequando la diagnosi è tempestiva, i pazienti - o i loro familiari - incontrano molte difficoltànell’ottenere esaurienti informazioni. Anche i ricercatori e i clinici interessati allo studio dellemalattie rare incontrano obiettive difficoltà; fra esse la scarsa probabilità di riceverefinanziamenti. Non è tuttavia solo un problema di risorse. Spesso mancano adeguati modellianimali; per definizione infine le malattie rare colpiscono pochi individui in una popolazione; èdunque verosimile che i pazienti siano dispersi su un'ampia area, a dimensione nazionale oaddirittura sovranazionale. E’ complesso realizzare un progetto di ricerca anche perchè èdifficile localizzare i pazienti da studiare.Le malattie rare comprendono patologie molto eterogenee e coinvolgono praticamente tutte learee di interesse medico. Un programma di ricerca clinica sulle malattie rare di livello adeguatopresuppone pertanto un approccio molto articolato, multidisciplinare.Dal 1992 è iniziato un progetto pilota che ha l'obiettivo di contribuire ad aumentare leconoscenze e le possibilità di cura delle malattie rare.Il Laboratorio ha costituito un Centro di Informazione per pazienti e operatori sanitari, svolgeprogetti di ricerca mirati per alcune malattie rare ed è attivo nel campo della divulgazione edella formazione.SCOPERTE/RISULTATI PRINCIPALINel Database del Centro di Informazione sono contenuti i dati relativi a oltre 8.716 pazientiaffetti da 680 diverse malattie rare. Ciò rende possibile, per alcune delle malattie segnalate, larealizzazione di progetti di ricerca clinica.Nella Banca di materiale biologico sono raccolti e conservati campioni relativi a 500 pazienticon malattie rare e loro familiari.Il Centro ha stabilito contatti con oltre 260 Associazioni Italiane di pazienti e loro familiari.I pazienti affetti da 74 malattie rare per le quali non esiste ancora un' Associazione dedicata,hanno potuto incontrarsi tra loro.Dal Luglio 2000 la Commissione Europea ha riconosciuto al Laboratorio ruolo di "Postgraduatetraining on rare diseases" (contract No. QLK4-1999-50547).Dal Dicembre 2001, con Delibera della Giunta Lombarda N.7328, il Centro è stato individuato264RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNquale sede del "Coordinamento della Rete Regionale per le Malattie Rare".COLLABORAZIONI NAZIONALIIstituto Superiore di SanitàItalian Takayasu's Arteritis Study Group - ITAKA GroupLaboratori di Biotecnologie, IRCCS Policlinico San Matteo, PaviaRegione Lombardia, Assessorato alla SanitàStudio Multicentrico Italiano sulla Malattia di Anderson-Fabry, SMIMAFUniversità degli Studi di Bergamo, Facoltà di Scienze dell'EducazioneUniversità degli Studi di Torino, Scuola di Specializzazione in Patologia Clinica, Facoltà diMedicina e ChirurgiaCOLLABORAZIONI INTERNAZIONALIComunità EuropeaInternational Registry for Hemolytic Uremic Syndrome and Thrombotic ThrombocytopenicPurpuraPRESENZA IN COMMISSIONI NAZIONALI E INTERNAZIONALICommissione per gli Interventi Urgenti a Sostegno delle Persone Affette da Malattie Rare(Decreto Ministeriale 6/6/2002).Gruppo di Lavoro con funzioni di coordinamento operativo e di condivisione di strategiecomuni per la prevenzione, la sorveglianza, la diagnosi, la terapia delle malattie rare, ai sensi delD.M. 18/5/2001, N°279, istituito dalla Regione Lombardia (Delibera Regione LombardiaN°7328, 11/12/2001).ORGANIZZAZIONE DI EVENTIEuropean Symposium “Methodological aspects of clinical trials in rare diseases”, ClinicalResearch Center for Rare Diseases – Mario Negri Institute, Ranica (Bergamo), July 10, 2003Convegno “Infermieri di ricerca in Italia: realtà o fantasia?”Centro di Ricerche Cliniche per le Malattie Rare Aldo e Cele Daccò – Istituto Mario Negri,Ranica (Bergamo), 27 Novembre 2003265RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNPARTECIPAZIONE AD EVENTI CON CONTRIBUTI DELLABORATORIO6° Convegno “Patologia Immune e Malattie Orfane”“Malattie rare: stato dell’arte – Il modello lombardo”Torino, 17 Gennaio 2003Tavola rotonda “Malattie rare e farmaci orfani”“L’approccio alle malattie rare: esempio di coordinamento regionale”Portogruaro, 1 Febbraio 2003Convegno “La Sclerosi Laterale Amiotrofica: attualità e problematiche locali”“Malattie rare: novità normative”A. O. Ospedali Riuniti, Bergamo, 12 Aprile 2003Convegno Nazionale sulle Malattie Rare“L’assistenza ai pazienti con malattia rara: esempio di coordinamento regionale”Università degli Studi, Catania, 26 Aprile 2003IXth European Meeting on Complement in Human Diseases“Association between mutations and polymorphisms of factor H gene and Hemolytic UremicSyndrome”Trieste, 6-9 Settembre 2003In collaborazione con il Laboratorio di Immunologia e Genetica del Trapianto e Malattie RareSeminario Interdisciplinare sulla malattia di Anderson-Fabry: studio multicentrico italiano“Valutazione funzionale renale e multiorgano in regime di Day Hospital”Firenze, 25 settembre 2003XVIII Meeting Annuale – Gruppo Italiano Studi Epidemiologici in Dermatologia“I registri clinici di malattie rare e lo sviluppo di clinical network”.Centro Congressi Giovanni XXIII, Bergamo, 26-27 Settembre 2003Convegno “Prospettive di cura e qualità di vita nelle malattie reumatiche”“Le malattie rare, quali agevolazioni per il malato, chi ne beneficia”Policlinico Borgo Roma, Verona, 27 settembre 2003Corso di aggiornamento su: Patologie Rare: Biotecnologie e Farmaci Orfani“Il Centro di Coordinamento della Regione Lombardia”MOSAN EuroSalute 2003, Milano, 7 Novembre 2003I ° Corso “Malattie Rare; dal sospetto diagnostico agli aspetti socio-sanitari”Istituto Superiore di Sanità, Roma, 12-14 Novembre 200312th Telethon Scientific Convention “Complement genetic alterations in Hemolytic UremicSyndromes”Riva del Garda, 23-25 Novembre 2003In collaborazione con il Laboratorio di Immunologia e Genetica del Trapianto e Malattie Rare266RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNCONTRIBUTI E CONTRATTICommissione EuropeaComitato "Trenta Ore per la Vita""Associazione Ricerca Malattie Rare", BergamoMinistero della SaluteSELEZIONE PUBBLICAZIONI SCIENTIFICHE APPARSENELL'ANNO 2003Schieppati A., Ruggenenti P., Perna A., Remuzzi G.Nonimmunosoppressive therapy of membranous nephropathySeminars in Nephrology. 2003, No. 23, pp. 333-39Taruscio D., Seyoum Ido M., Daina E., Schieppati A.Tackling the problem of rare disesases in public health: the italian approachCommunity Genetics. 2003, No. 6, pp 123-4Noris M., Brioschi S., Caprioli J., Todeschini M., Bresin E., Porrati F., Gamba S., Remuzzi G.Familial haemolytic uraemic syndrome and an MCP mutationThe Lancet. 2003, Vol. 362, pp. 1542-47Caprioli J., Castelletti F., Bucchioni S., Bettinaglio P., Bresin E., Pianetti G., Gamba S., Brioschi S., Daina E.,Remuzzi G,. Noris N.Complement factor H mutations and gene polymorphisms in haemolytic uraemic syndrome: the C-257T, the A2089Gand the G2881T polymorphisms are strongly associated with the disease.Human molecular genetics. 2003, Vol. 12, No. 24, pp. 3385-95Schieppati A., Perico N., Remuzzi G.Preventing end-stage renal disease: the potential impact of screening and intervention in developing countriesKidney International. 2003, 63: pp. 1948-50Gamba S., Cicci L., Stefanov R.The quality of life of patients with rare diseases: the experiences of the nurses of the research centre for rare diseasesAldo e Cele Dacco’Assistenza Infermieristica e Ricerca. July-September 2003, Vol. 22 No. 3, pp. 144-50Schieppati A., Remuzzi G.The June 2003 Barry M. Brenner Comgan lecture. The future of renoprotection: frustration and promises.Kidney International. December 2003, 64(6), pp. 1947-55ALTRE PRODUZIONI EDITORIALI PUBBLICATE NEL CORSO DEL2003Schieppati A., Remuzzi G.Il rene policistico - per saperne di più.Divisione EDIMES, Edizioni Medico Scientifiche, Pavia 2003267RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNATTIVITA' DI RICERCACentro di Informazione per le Malattie RareNel 1992 presso il Centro di Ricerche Cliniche per le Malattie Rare Aldo e Cele Daccò, è statoistituito il Centro di Informazione per le Malattie Rare.Il Centro è a disposizione dei pazienti affetti da malattie rare, dei loro familiari e dei loromedici. Fornisce gratuitamente informazioni, aggiornamenti e indirizzi utili per cercare dirisolvere almeno in parte alcuni dei problemi che chi è colpito da una malattia rara si trova adaffrontare.Nel corso degli anni la fisionomia dell'attività del Centro si è venuta gradualmentetrasformando: da punto di smistamento di notizie aggiornate sulle malattie rare, a vero e proprioCentro di documentazione e di cultura su tutti i problemi relativi a queste malattie. La banca daticontenente notizie relative a numerose malattie rare è andata configurandosi come un vero eproprio patrimonio di dati che possono e potranno diventare utilissimi nella programmazionedegli studi clinici.Sebbene la natura delle malattie rare non consenta - per definizione - l'accumularsi di numeririlevanti di casi, si è verificata già per oltre 170 patologie la possibilità di disporre di piccolecoorti di pazienti con la stessa diagnosi.Banca di materiale biologico e caratterizzazione delle nefropatie ereditarieL’obiettivo del progetto è quello di raccogliere dati clinici e campioni di materiale biologicorelativi a pazienti affetti da alcune malattie genetiche rare e ai rispettivi familiari. Per realizzarlosono stati creati un Archivio informatizzato dei casi segnalati e una Banca per la raccolta e laconservazione dei campioni biologici. La disponibilità dei dati clinici e dei campioni biologicirelativi ai casi raccolti, consente di eseguire test biochimici e genetici nell’ambito di progetti diricerca finalizzati a comprendere sempre meglio la patogenesi delle malattie e a definire itrattamenti che più efficacemente potrebbero prevenirle o curarle.L’attenzione è focalizzata in particolare sulle malattie genetiche rare del rene. Al pazienteaffetto da nefropatia ereditaria (es. sindrome di Alport, malattia di Fabry, Glomerulosclerosifocale familiare, malattia cistica della midollare) che si rivolga al Centro viene offerta unavalutazione clinica comprendente raccolta dei dati anamnestici, visita medica, ecografia renale,esami di laboratorio (del sangue e delle urine). In tale occasione viene inoltre offerta unaconsulenza genetica, e ricostruita la storia familiare nonchè l’albero genealogico. Previoconsenso informato scritto sono infine raccolti campioni di sangue, dai pazienti e familiari, chevengono etichettati con appositi codici e conservati nella Banca di materiale biologico. Per lenefropatie ereditarie di cui sono noti i geni responsabili (sindrome di Alport, malattia di Fabry),i campioni di sangue vengono inviati ai Laboratori di riferimento. Per le altre nefropatie, di cui èrecente o ancora in corso l’identificazione dei geni implicati, i campioni di sangue vengonoconservati con l’obiettivo di utilizzarli nell’ambito di progetti di ricerca.Proposta di impiego di MMF, da confrontare con la terapia convenzionale,in pazienti con nefrite secondaria a LESLa nefrite lupica è la più comune complicanza viscerale del Lupus Eritematoso Sistemico (LES)e rappresenta una delle maggiori cause di morbidità e mortalità. I pazienti con glomerulonefriteproliferativa diffusa sono candidati ad una pesante terapia immunosoppressiva avente l’obiettivodi controllare l’infiammazione intrarenale. Essi ricevono alte dosi di cortisonici con effetticollaterali di rilievo. I protocolli di trattamento che prevedono l’associazione di farmacicitotossici sono più efficaci rispetto al solo cortisonico nel controllare la nefrite e nel ridurre ilrischio di insufficienza renale terminale, tuttavia non si sono dimostrati in grado di migliorare lasopravvivenza dei pazienti. Tra i trattamenti con farmaci citotossici, quello basato sull’impiego268RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNdella ciclofosfamide presenta l’indice terapeutico più favorevole. I pazienti trattati concitotossici possono tuttavia sviluppare importanti effetti collaterali. Lo studio (aperto,multicentrico, randomizzato) mira a verificare i possibili vantaggi offerti dalla terapia con unfarmaco immunosoppressore di recente introduzione, il micofenolato mofetile (MMF) neipazienti con nefrite lupica proliferativa diffusa.Valutazione dell'efficacia della terapia enzimatica sostitutiva nella malattiadi FabryLa malattia di Fabry è una rara malattia metabolica legata al cromosoma X, causata dal deficitdell’enzima lisosomiale alfa-galattosidasi A, e caratterizzata dall’accumulo progressivo edisseminato di glicosfingolipidi in vari organi e tessuti.Si manifesta prevalentemente ed in modo più grave nei maschi emizigoti e le manifestazionicliniche principali sono a carico di cute, reni, cuore, occhi, sistema nervoso.Attualmente è disponibile una terapia enzimatica sostitutiva per la malattia di Fabry. I risultatipreliminari sono incoraggianti, sia in termini di tollerabilità che di efficacia. Lo scopo di questostudio è valutare l’efficacia a lungo termine della terapia enzimatica sostitutiva nei pazienti conmalattia di Fabry e coinvolgimento renale.Si prevede di arruolare 20 pazienti (uomini e donne) afferenti al Registro dello StudioMulticentrico Italiano sulla Malattia di Anderson-Fabry (SMIMAF).Proposta di impiego di MMF in pazienti con Arterite di Takayasu resistenteal trattamento con cortisoneLa malattia di Takayasu è una rara infiammazione delle arterie, le cui cause sono ancorasconosciute. I vasi maggiormente colpiti sono l’aorta e i suoi rami principali che, proprio acausa della malattia, possono restringersi fino all’occlusione completa o dilatarsi in più punti.Ad ammalarsi sono più spesso donne giovani, tra i 20 e i 30 anni. L’obiettivo del trattamento èquello di fermare l’infiammazione delle arterie e nel 50% dei casi è possibile utilizzando altedosi di cortisone. Il restante 50% non trova beneficio dalla terapia, presenta ricadute dellamalattia o non può mai sospendere il trattamento con cortisone. E' stato dimostrato chel’aggiunta di altri farmaci come la ciclofosfamide e il methotrexate alla terapia con cortisone,può facilitare la remissione della malattia. Il rischio di tossicità per l’uso prolungato diciclofosfamide o metotrexate è però ben noto. E' quindi necessario studiare nuove strategieterapeutiche che offrano un equivalente se non un migliore effetto sul controllo della malattia,ma che siano meno tossici per i pazienti. Il micofenolato mofetile (MMF) potrebbe avere questecaratteristiche e l'obiettivo dello studio è valutarne l'utilità di impiego in pazienti con Arterite diTakayasu resistente al trattamento con cortisone.Registro Internazionale per la Sindrome Emolitico Uremica e la PorporaTrombotica TrombocitopenicaLa Sindrome Emolitico Uremica (SEU) è una malattia rara caratterizzata da anemia emolitica ediminuzione del numero delle piastrine, con prevalente coinvolgimento dei reni. Nella suaforma tipica si manifesta con un evento acuto seguito da una guarigione senza conseguenzenell’80-90% dei casi; ciò può avvenire spontaneamente (come in molti casi di SEU infantile)oppure dopo infusione di plasma o plasmaferesi. Alcuni pazienti vanno invece incontro a unaremissione transitoria, seguita da ricadute che comportano lo sviluppo di danni neurologici orenali permanenti. In queste forme, chiamate ricorrenti, si ipotizza l’esistenza di un fattoregenetico che predisponga allo sviluppo della malattia. Esistono inoltre varianti estremamenterare di SEU, quelle denominate familiari in cui sono colpiti almeno due soggetti nella stessafamiglia.Il Laboratorio coordina il Registro Internazionale per la Sindrome Emolitico Uremica e laPorpora Trombotica Trombocitopenica. Tale iniziativa ha permesso di raccogliere un rilevante269RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNnumero di casi segnalati da 65 Centri Italiani e da 28 Centri stranieri (Europei ed extra Europei)e di impostare specifici progetti di ricerca in collaborazione con il Laboratorio di Immunologia eGenetica del Trapianto e Malattie Rare.Analisi di linkage della malattia policistica renale autosomica dominanteLa malattia policistica renale autosomica dominante (ADPKD) é una malattia geneticamenteeterogenea, che può essere causata da mutazioni di geni diversi. Finora sono stati identificatidue geni responsabili della malattia: il gene PKD1, localizzato sul cromosoma 16, mutatonell’85% dei pazienti, e il gene PKD2, localizzato sul cromosoma 4, mutato nel 10% circa deipazienti. La principale manifestazione renale é rappresentata dalla formazione bilaterale di cisti,che aumentano di numero e dimensioni con l’età causando una progressiva perdita dellafunzione renale. Nei pazienti PKD1 la malattia é più severa con un esordio più precoce e un'etàmedia di sopravvivenza renale di 54 anni, comparata ai 73 anni nei pazienti PKD2. L’ecografiarenale, che è certamente l’esame diagnostico di scelta per riconoscere i soggetti a rischio(familiari di un soggetto affetto), è ritenuta attendibile solo dopo i 20 o 30 anni. L’introduzionedella diagnostica molecolare ha migliorato l’identificazione presintomatica delle persone affette.Il Laboratorio ha attivato un progetto di screening dei pazienti con ADPKD afferenti all'Unità diNefrologia e Dialisi degli Ospedali Riuniti di Bergamo. Nelle famiglie ADPKD verrà effettuatal’analisi di linkage, in collaborazione con il Laboratorio di Immunologia e Genetica deltrapianto e malattie rare, allo scopo di distinguere le famiglie PKD1 dalle famiglie PKD2 e diindividuare all'interno di ciascuna famiglia i soggetti a rischio (diagnosi presintomatica).Modello per il coordinamento regionale per la diagnosi delle malattiegenetiche rare e lo sviluppo di progetti di ricercaScopo del presente progetto è quello di affiancare ai compiti di sorveglianza epidemiologicaprevisti dalla attuale normativa in tema di malattie rare (Decreto Ministeriale n.279 18/05/2001),un’attività coordinata di raccolta di dati e campioni biologici che consenta lo svolgimento diprogetti di ricerca mirati sulle malattie genetiche rare. Al lavoro partecipano: RegioneLombardia Sanità; Istituti Clinici di Perfezionamento, Milano; Spedali Civili, Brescia; IstitutoNeurologico C. Besta, Milano; Ospedale San Raffaele, Milano; Istituto Neurologico C.Mondino, Pavia; Policlinico San Matteo, Pavia.Durante il primo anno di attività sono stati realizzati:- Censimento a livello regionale di tutti i Servizi per la diagnostica delle malattie genetiche rare;- Predisposizione del sito Internet dedicato http://malattierare.marionegri.it/, accessibile dallahome page della Regione Lombardia Sanità http://www.sanita.regione.lombardia.it/ alla voce“Rete Regionale Malattie Rare” (sul sito è disponibile il report intermedio relativo al progetto);- Database contenente informazioni relative a Registri di Malattia e Archivi di materialebiologico;- Proposta per uniformare il sistema di archiviazione di dati clinici e campioni biologici;- Revisione dell’attuale elenco ministeriale delle malattie rare esentate dalla partecipazione allaspesa sanitaria.Sviluppo di un modello di consulenza genetica integrata per le malattieereditarie a esordio tardivoLe malattie ereditarie ad esordio tardivo, poichè compatibili con il raggiungimento dell’etàadulta e quindi con il pieno sviluppo delle facoltà critiche e con la possibilità di riproduzionebiologica, pongono molti problemi di carattere clinico-biologico, esistenziale ed etico, sia a chine è affetto sia a chi le cura.L'obiettivo che il progetto di ricerca (multicentrico) persegue è la elaborazione e la validazionedi un modello di consulenza genetica per patologie ereditarie a esordio tardivo basato su unapproccio multidisciplinare integrato (genetista/clinico con supporto psicologico/psichiatrico),270RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNche:1) consenta di sostenere/aiutare il soggetto a rischio nell'elaborazione cognitiva ed emotiva delleinformazioni trasmesse nel corso del processo che accompagna l'esecuzione del test predittivo;2) accresca e valorizzi le competenze professionali e le motivazioni del gruppo curante al fine dimigliorare la qualità del servizio reso.Il Laboratorio partecipa al progetto di ricerca, coordinato dai Laboratori di Biotecnologie –IRCCS Policlinico San Matteo – Pavia, con l’obiettivo di elaborare un modello di consulenzagenetica specifico per la malattia di Fabry. Si tratta di una rara malattia metabolica X-linked,causata dal deficit dell’enzima alfa-galattosidasi A, e caratterizzata dal progressivo accumulo diglicosfingolipidi in vari organi e tessuti. La recente introduzione della diagnosi molecolarepermette l’identificazione, tra i familiari di ogni paziente, di soggetti in fase presintomaticadestinati a sviluppare la malattia e di donne che possano trasmetterla.271RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMN272RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNCESAVCentro di Economia Sanitaria A. e A. ValentiPERSONALECapo LaboratorioLivio GARATTINI, Dr.Econ.Comm.273RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNINTRODUZIONE ALLE ATTIVITA' DEL CENTROIl CESAV, Centro di Economia Sanitaria Angelo e Angela Valenti, localizzato a Ranica (BG)presso la Villa Camozzi ed esistente dal 1992, svolge attività di ricerca nel settore sanitario, alcui sviluppo offre il proprio contributo in materia di economia e di management. In particolare,il centro sviluppa la propria attività nelle aree di ricerca riguardanti la valutazione economica(cioè l'analisi dei costi e dei benefici di possibili alternative in sanità) e l' analisi comparativa(cioè lo studio di sistemi sanitari esteri, per poter individuare possibili innovazioni da proporreal SSN e, più in generale, a livello europeo).SCOPERTE/RISULTATI PRINCIPALINel 2003, gli studi di valutazione eonomica hanno riguardato stime sui costi sanitari del diabete,Takayasu, linfomi cutanei (due malattie rare).Gli studi inerenti l’analisi comparativa, concentrata esclusivamente su Paesi dell’UnioneEuropea per una maggiore integrazione futura anche in campo sanitario, hanno riguardatosoprattutto l’analisi sul mercato dei farmaci generici.COLLABORAZIONI NAZIONALIAIES (Associazione Italiana di Economia Sanitaria).Collaborazione con enti pubblici nazionali (Ministero della Sanità, Assessorati Regionali,Aziende Sanitarie Locali, AA.OO.).Collaborazioni con enti privati (aziende del settore e associazioni di categoria).COLLABORAZIONI INTERNAZIONALICES (Collège del Economistes de la Santé)Istituto WidO di BonnUniversità di HannoverUniversità di YorkUniversità “Pompeu Fabra” di BarcellonaUniversità “Erasmus” di RotterdamPRESENZA IN COMITATI EDITORIALIApplied Health Economics and Health Policy (Livio Garattini)Economia e Politica del Farmaco (Livio Garattini)Eurohealth (Livio Garattini)FarmacoEconomia News (Livio Garattini)Farmeconomia e Percorsi Terapeutici (Livio Garattini)274RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNJournal of Medical Economics (Livio Garattini)PharmacoEconomics Italian Research Articles (Livio Garattini)The European Journal of Health Economics (Livio Garattini)View & Review (Dr. Livio Garattini)Applied Health Economics and Health PolicyThe European Journal of Health EconomicsPharmacoEconomicsPharmacoEconomics Italian Research ArticlesATTIVITA' DI REVISIONEORGANIZZAZIONE DI EVENTIRanica, 20 Maggio. Workshop di Economia Sanitaria.- I costi indiretti- Gli studi farmacoeconomia nella politica del farmaco: l’esperienza olandese- Utilizzo della valutazioni economiche nelle linee-guida cliniche- La politica del farmaco in GermaniaPARTECIPAZIONE AD EVENTI CON CONTRIBUTI DEL CENTROLisbona, 27-30 Gennaio – Congresso.Parallel Trade in Europe- “European Pricing and Reimbursement”.“Reforms in Italy: a never ending story”.Parigi, 6 Febbraio – Congresso.“General process for the functioning of EURO NHEED” (incontro partecipanti progettoeuropeo EURONHEED).Ranica, 17 Marzo – Workshop.“La determinazione del prezzo e della rimborsabilità dei farmaci: l’esperienza tedesca”.Capri, 5 Aprile – Congresso.“Economia sanitaria e Psichiatria”.“I costi della psichiatria”.“I farmaci generici: Le potenzialità dei generici nel mercato farmaceutico”.“Il mercato dei farmaci generici in Europa”.“Il generico in Italia:realtà e prospettive”.Milano, 10 Aprile – Workshop.“ Le nuove politiche di pricing per i farmaci”.275RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNAbano Terme, 11-12 Aprile – Congresso.“Metodo Clinico e Scelte Terapeutiche in Medicina di Famiglia” (9° Congresso NazionaleAIMEF).“La prescrizione dei generici nell’attuale panorama farmaceutico”Ghent, 24 Aprile – Workshop.“Regulations and market for ambulatory Long Term Oxygen in Belgium”.“Overview of the ambulatory oxygen market in different European countries”.Cambridge, 15-16 Maggio – Workshop.“Opportunities in 2003 and Beyond”.“Italy: recent reforms in the Italian healthcare system”.Milano, 21-22 Maggio – Congresso.2° Congresso Nazionale di Farmacoeconomia:1a giornata: “La farmacoeconomia: quale presente?- 2a giornata: “ La politica del farmaco fraStato e Regioni”.“Gli studi completi di farmacoeconomia in Italia: una revisione critica”.“La politica del farmaco fra Stato e Regioni”.“Federalismo sanitario e politica del farmaco”.Bologna, 6-8 Giugno – Congresso.“Corsi ECM per Farmacisti- Economia Sanitaria e Farmaci Generici: tra teoria e realtà”.“Concetti base di economia sanitaria e peculiarità del settore farmaceutico sotto il profiloeconomico”.“Il farmaco generico: normativa, trasparenza e risparmio per il Servizio Sanitario Nazionale”.“L’esperienza dei farmaci generici in altri Paesi Europei”.Milano, 25 Giugno – Workshop.“Razionalizzare la spesa farmaceutica: modelli ed esperienze di misurazione e controllo deicosti”.“L’analisi farmacoeconomica come strumento di misurazione dei costi e della qualitàdell’assistenza sanitaria”.Ranica, 27 Giugno – Workshop.“L’utilizzo degli studi di Farmacoeconomia per la determinazione del prezzo e dellarimborsabilità dei farmaci: l’esperienza olandese”.York, 30 Giugno-3 Luglio – Workshop.Organizzazione: CES.“Training session for the functioning of EURONHEED” (incontro partecipanti progetto europeoEURONHEED).Roma, 15-19 Settembre – Workshop.“Valutazione Economica in Sanità” (corso relativo alla valutazione economica in ambitosanitario).“L’analisi costo-efficacia”; “Presentazione del case-study”.Ranica, 19 Settembre – Workshop.“L’esperienza inglese nel controllo della spesa, prezzi e rimborsabilità dei farmaci: spunti diriflessione per la realtà italiana”.276RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMN“Tendenze e Focus sulla spesa farmaceutica a livello regionale nell’anno 2003”.Parigi, 22 Settembre – Workshop.“General process for the functioning of EURONHEED” (incontro partecipanti progetto europeoEURONHEED).Agrigento, 5 Ottobre – Congresso.“Economia Sanitaria e peculiarità del settore farmaceutico”.“Generici e prezzo di riferimento: impatto sul mercato italiano”.Genova, 15 Ottobre – Conferenza stampa.“Gli stent medicati, passato, presente e futuro”.“Benefici per i pazienti e impatto economico delle terapie innovative. Una scelta difficile per ilmedico?”.Foligno, 17 Ottobre – Corso.Corso di Formazione “Vita del farmaco dalla ricerca alla commercializzazione”.Ranica, 22-23 Ottobre - Workshop.“Economia e Politica del farmaco”.Bergamo, 30 Ottobre – Congresso.“Governo Clinico e appropriatezza in medicina: realtà o utopia?”“Cenni teorici di economia sanitaria”.Salsomaggiore, 4 Novembre – Congresso.“Solidarietà e Salute” (55° Congresso Nazionale FIMMG).“Il Disease Management” (2° Congresso Nazionale SIMeF).“Il Disease Management nel Servizio Sanitario Nazionale”.Barcellona, 9 Novembre – Workshop.“EUROMET 2003/ The influence of Economic Evaluation Studies on Medical and Health CareFunding Decision Making”.Milano, 14 Novembre – Congresso.“La regolazione dell’informazione medico-scientifica. Un’analisi comparata tra i principaliPaesi UE”.“La regolazione dell’informazione medico-scientifica in Italia”.Milano, 30 Novembre-3 Dicembre – Congresso.“22° Congresso Nazionale della Società Italiana di Chemioterapia”.“Individualizzazione dei trattamenti farmacologici: costo o guadagno?” (facente parte del piùampio argomento del programma “Farmacologia e Farmacogenetica Clinica. Dalla ricerca dibase al letto del malato”).Segrate, 2 Dicembre – Corso.“Principi generali di Farmacoeconomia”.CONTRIBUTI E CONTRATTI277RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNAbbottLifescanNovartisNovo NordiskPharmacia & UpjohnSanofi-SynthélaboVivisolUnione EuropeaSELEZIONE PUBBLICAZIONI SCIENTIFICHE APPARSENELL'ANNO 2003Garattini S, Garattini L “Drug sales in four European countries still differ” (2003) BMJ 327: 1404-1405.SELEZIONE PUBBLICAZIONI DIVULGATIVE APPARSENELL'ANNO 2003De Compadri P, Polese G, Viscarra C (2003) “I costi della broncopneumopatia cronica ostruttiva (BPCO): unarevisione critica della letteratura” FarmacoEconomia News 1:3-13.Martina S, Cornago D, Garattini L, Castelnuovo E (2003) “Il costo medio per tipologia di prestazione nei centritrasfusionali” Farmeconomia e percorsi terapeutici 4(1): 51-56.De Compadri P, Cisternino A (2003) “Incontinenza urinaria: una rassegna della letteratura recente”FarmacoEconomia News 3:3-11.Garattini L, Castelnuovo E, Lanzeni D, Viscarra C (2003) “Durata e costo delle visite in medicina generale: ilprogetto DYSCO” Farmeconomia e percorsi terapeutici 4(2): 109-114.ATTIVITA' DI RICERCAAttività di formazioneL'attività di formazione è sviluppata solo se collegata ai progetti di ricerca, al fine di offrirecontributi originali che supportino in modo naturale gli obiettivi della ricerca stessa.Valutazione Economica in SanitàL'obiettivo di questa linea di ricerca è valutare i costi delle patologie e i rapporti costo-efficaciadelle alternative diagnostico-terapeutiche disponibili. I tipi di analisi si differenziano a secondache si tratti di studi osservazionali di costi della patologia, oppure di studi di valutazioneeconomica in senso stretto (tipicamente analisi costo-efficacia). Nel primo caso, il metodoutilizzato è quello di seguire coorti di pazienti affetti dalla stessa patologia per un periodosignificativo di tempo, al fine di verificare i relativi consumi sanitari la cui monetizzazione278RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNimplica l'individuazione dei costi unitari delle singole prestazioni. A livello ospedaliero,l'obiettivo è quello di stimarne i costi reali, analizzando i dati di contabilità per centri di costoladdove disponibili.Nel caso delle analisi costo-efficacia, vengono anche valutati distintamente i costi e l'efficaciadelle alternative prese in esame (si raccolgono, quindi, informazioni anche di carattere clinicosulle terapie analizzate).Analisi dei sistemi sanitariL'obiettivo di questa linea di ricerca è studiare l'organizzazione dei sistemi sanitari per trarredelle indicazioni dai confronti sistematici fra gli stessi. Le scelte dei legislatori nazionali, afronte di problemi comuni in ogni Paese, variano molto da una nazione all'altra e siconcretizzano in trend di spesa sempre crescenti. L'intervento pubblico è presente in ogninazione, poichè il servizio sanitario non possiede meccanismi regolatori di mercato collegatialle leggi economiche della domanda e dell'offerta; pertanto, l'analisi comparativa di tali scelte alivello internazionale è utile per verificare il livello di razionalità perseguito da ogni politicasanitaria nazionale.Lo schema d'indagine del CESAV prevede un approfondimento dell'assetto istituzionale, deiprincipali servizi erogati e della gestione finanziaria del sistema sanitario indagato perricostruirne una monografia il più possibile esaustiva e per trarne, perciò, indicazioni siapositive che negative del relativo funzionamento.279RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMN280RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNCentro Ricerche TrapiantiChiara Cucchi De Alessandri eGilberto CrespiIl Centro Ricerche Trapianti (CRT) è nato nel 2002 per sostenere e promuovere il lavoro deimigliori ricercatori di tutto il mondo e per portare a termine importanti programmi di ricercanell'ambito della trapiantologia.Il Centro ha sede a Villa Camozzi (Ranica), presso l'Istituto Mario Negri di Bergamo ed ègestito in collaborazione con l'Istituto stesso.Lo staff del CRT è composto prevalentemente da ricercatori senior e junior che si sono formatinei Laboratori dell'lstituto Mario Negri di Bergamo nell'ambito dell'immunologia del trapianto,della ricerca di farmaci immunosoppressori meno tossici e di nuove tecniche di terapia genicaper prevenire il rigetto acuto del trapianto d'organo.Informazioni sulle attività di ricerca del Centro sono presenti nelle attività dei Dipartimenti diMedicina Molecolare (Laboratorio di Immunologia e Genetica del Trapianto e Malattie Rare) edi Medicina Molecolare (Laboratorio di Farmacocinetica e Chimica Clinica).281RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNL’ATTIVITA’ DIDATTICADirettore della Scuola - Mario SalmonaL’attività didattica dell’Istituto si svolge nel campo delle scienze biomediche, è inseritanell’ambito dei programmi di formazione professionale della Regione Lombardia ed è costituitada un percorso formativo per la specializzazione di tecnici di laboratorio, per la specializzazionepost-dottorale di laureati che intendono dedicarsi alla ricerca e per il diploma di Infermiereprofessionale in ricerca clinica (presso il Centro di Ricerche Cliniche per le Malattie Rare “Aldoe Cele Daccò” di Ranica, Bg). Dal 1999 l’Istituto ha anche attivato un corso di Ph.D (Dottoratodi Ricerca) in collaborazione con la Open University di Londra. Il diploma rilasciato ha valorelegale in tutta Europa e Stati Uniti.Tutti gli allievi dei corsi dopo tre mesi di preparazione fruiscono di borse di studio dell’Istituto,che dal 1963 al 2003 ne ha erogate 5.648 di cui 639 a ricercatori stranieri. L’Istituto favoriscel’inserimento nel mondo del lavoro degli allievi dopo il conseguimento del diploma.La caratteristica metodologica essenziale dei corsi consiste nel fatto che tecnici e ricercatori siformano "sul campo". Essi partecipano infatti, a tempo pieno, a programmi di ricerca di altolivello scientifico, impiegando strumenti e tecnologie avanzati e collaborando con ricercatori divari Paesi: praticano cioè una ricerca altamente formativa anche a livello di rapporti personali.Gli allievi svolgono la loro attività di specializzazione prevalentemente in un determinatolaboratorio dell’Istituto e sono progressivamente inseriti nei programmi di ricerca in corso. Essisono tenuti a frequentare lezioni, seminari, corsi e convegni e a utilizzare la biblioteca interna.L’Istituto fornisce a tutti gli allievi la possibilità di utilizzare Internet per l’accesso alle basi didati di biomedicina e stampare in linea gli articoli delle principali riviste scientifiche. Gli allievidevono essere disponibili a recarsi all’estero per partecipare a corsi e congressi.I diplomi di “Specialista in Ricerca Farmacologica” e di “Tecnico in Ricerca Biochimica” sonorilasciati ufficialmente dalla Regione Lombardia e dall’Istituto di Ricerche Farmacologiche“Mario Negri” e hanno valore legale in tutto il territorio della Repubblica Italiana. Essi possonoessere riconosciuti nei concorsi pubblici e contribuire alla formazione dei relativi punteggi.Infine, i diplomi rilasciati dall’Istituto “Mario Negri” vengono unanimamente considerati unagaranzia di ottima formazione teorica e pratica.Il titolo di Ph.D ha valore legale in tutta Europa e USA ed è equivalente al titolo di Dottorato diRicerca. Una volta ottenuto il Diploma regionale oppure il titolo di Ph.D gli allievi che voglionoproseguire la loro attività nella ricerca possono ottenere delle borse di studio per trascorrereall’estero uno o due anni di ulteriore specilizzazione presso rinomati istituti stranieri.282RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNI corsi attualmente tenuti sono:• Corso triennale per laureati, che porta al conseguimento del diploma di “SPECIALISTA INRICERCA FARMACOLOGICA”.• Corso triennale per diplomati, che porta al conseguimento del diploma di “TECNICO INRICERCA BIOCHIMICA”.• Corso di Ph.D. (Dottorato di Ricerca) nell’ambito di un accordo siglato con la Open Universitydi Londra.• Corso biennale per infermieri professionali che porta al conseguimento del diploma di“INFERMIERE PROFESSIONALE IN RICERCA CLINICA” (presso il Centro Daccò diRanica, Bg).Altre attività formative• TESI DI LAUREAE’ possibile preparare la tesi di laurea in materie scientifiche presso l’Istituto previaapprovazione delle rispettive Facoltà. E’ necessario frequentare l’Istituto per almeno 2 anni.• SUMMER STUDENTSL’Istituto accoglie, nei mesi di giugno e luglio, un certo numero di studenti degli ultimi due annidelle scuole superiori nell’ambito degli stage formativi “scuola-lavoro”.283RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMN284RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNORGANIGRAMMAUnità organizzativeUffici e Servizi285RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMN286RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNMario Negri MilanoDirezioneDirettoreProf. Silvio GARATTINI, Dr. Med.AmministrazioneMaria Grazia PEZZONI, Capo Servizio AmministrativoUfficio StudiArmanda JORI, Dr. Farm.Ufficio StampaIsabella BORDOGNA, Dr. FilosofiaUfficio Relazioni EsterneClaudio PANTAROTTO, Comm., Chim.Servizio Prevenzione e ProtezioneEmilio BENFENATI, Dr. Chim.Annamaria SEGALINI, Dr. Fisica, ResponsabileEnglish Style EditorJudi BAGGOTTManutenzione GeneraleAlessandro CAMPOSARCONEServizio FotograficoFelice DE CEGLIEUfficio AcquistiEufrasia COVIELLOSegreteria di DirezioneRosanna MAPELLI, Capo SegreteriaSegreteria GeneraleRaffaella BERTAZZI, Capo SegreteriaCustodiElisabetta e Romano BERTOLI287RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNLaboratori Negri BergamoDirezioneDirettoreProf. Silvio GARATTINI, Dr. Med.Coord. Ricerche Giuseppe REMUZZI, Dr. Med.Segretario Scientifico Ariela BENIGNI, Dr. Sci. Biol., Ph. D.Progetti di Ricerca/Assistenza AmministrazioneDaniela MELACINI, Dr. Sci. Biol.Servizio Grafico ScientificoAntonella PICCINELLI, Dr. Sci. Biol.Servizio Prevenzione e ProtezioneResponsabile Annamaria SEGALINI, Dr. Fisica,Flavio GASPARI, Dr. Chim.BibliotecaResponsabileAnna BOZZALEValeria MIGLIOLIManutenzione GeneraleGiancarlo GASPARIUfficio AcquistiLuciana PROMETTISegreteria di DirezioneAntoinette van ENGELEN, Capo Segreteria288RAPPORTO ATTIVITA’ 2003

IRFMNCentro Aldo e Cele Daccò Ranica (Bg)DirezioneDirettoreProf. Silvio GARATTINI, Dr. Med.Coord. Ricerche Giuseppe REMUZZI, Dr. Med.Segretario Scientifico Ariela BENIGNI, Dr. Sci. Biol., Ph. D.Direttore Sanitario Norberto PERICO, Dr. Med.Affari RegolatoriPaola BOCCARDO, Dr. Sci. Biol.Servizio Prevenzione e ProtezioneResponsabile Annamaria SEGALINI, Dr. Fisica,Paola BOCCARDO, Dr. Sci. Biol.Biblioteca ‘Mansueto Astori’Responsabile Anna BOZZALEMonica MINALIUfficio AcquistiMonica MINALIAffari RegolatoriPaola BOCCARDO, Dr. Sci. Biol.Segreteria di DirezioneDaniela RICEPUTI, Capo SegreteriaSara PERACCHI, Assitente Studi CliniciManutenzione Generale/CustodeGiovanni GERVASONI289RAPPORTO ATTIVITA’ 2003