Patologia Clinica Lezione 1 Dott.ssa Samantha ... - Docente.unicas.it

Qu ic k Tim e e u nde c om pre s s ore TIFF (Non c om pre s s o )s o no nec es s ari per v is uali z z a re q ues t' im m a gin e.Patologia ClinicaLezione 1Dott.ssa Samantha MessinaModulo: Patologia clinicaAnno accademico 2011/2012II° anno, I° semestreCdL Infermieristica, Facoltà di Medicina e Chirurgia Università degli Studidel Molise

Caratteristiche di un esamedi laboratorio•Materiali biologici•Unità di misura•Valori di riferimento•Valori critici

Materiali biologici• Sangue intero, plasma o siero (vene, arterie o capillari)• Urine• Feci• Liquido cerebro-spinale• Liquido amniotico• Liquido seminale• Latte materno• Saliva• Sudore• Capelli• Succo gastrico• Secreti: faringeo, nasale, da ferita etc

Materiali biologiciSu ognuno di questi materiali possono essere dosatevarie sostanze (ANALITI)A titolo di esempio si ricordi che il glucosio è dosatonon solo nel sangue intero ma anche nel plasma,nel siero,nelle urine, nel liquido cerebro-spinaleGli analiti dosati in un laboratorio clinico ammontanoalcune centinaia e gli esami complessivamente superanoil migliaio

Valori di riferimentoOltre agli analiti dosati e al materiale biologicosul referto sono riportatiLe unità di misuraIl risultatoI valori di riferimento

Valori di riferimentoL’interpretazione dei dati di laboratorio è un esempiodi DECISIONE PER CONFRONTOValori normaliValori di riferimento

Valori di riferimentoValori normali: si intendono i valori più frequentementeriscontrati negli individui sani della specie umana(valori teorici)Valori di riferimento: sono i valori riscontrati in un campioneDi persone con caratteristiche omogenee alla popolazioneNormalmente servita dal laboratorio (Population-basedReferences values)

Valori di riferimentoA noi interessa la probabilità con la quale, adogni intervallo di valori osservati, si puòassociare una determinata malattia

I principali fattori che possono influenzare i valoridi riferimento- Genetici: anomalie del metabolismo trasmesse in manierarecessiva non presentano manifestazioni patologiche.Gruppi sanguigni AB0- Fisiologici: età (azotemia, colesterolo); sesso (sideremia,acido urico); eccesso di peso (colesterolo, trigliceridi)- Esogeni: alimentazione, attività fisica

I valori critici- Sono risultati di laboratorio fuori dai limiti di riferimentoa livelli tali da indicare una condizione potenzialmentepericolosa per il pazienteTabella

VARIABILITA’ INPATOLOGIACLINICA

CORRETTA INTERPRETAZIONE DEIRISULTATI• “POSIZIONE DEL RISULTATO”RELATIVAMENTE AI VALORI DIRIFERIMENTO• VARIABILITA’ DEL RISULTATO

2 CAUSE DELLAVARIABILITA’VARIABILITA’ TOTALEVARIABILITA’ ANALITICAVARIABILITA’BIOLOGICAPRE-ANALITICAANALITICAPOST-ANALITICAINTRAINDIVIDUALEINTERINDIVIDUALE

LA VARIABILITA’è uno dei problemi centralinell’utilizzo dei dati di laboratorioda parte del clinico

VARIABILITA’ BIOLOGICA• VARIABILITA’ INTRA-INDIVIDUALE: a caricodello stesso individuo• VARIABILITA’ INTER-INDIVIDUALE: fradiversi individui

PRINCIPALI FONTI DELLAVARIABILITA’ INTRA-INDIVIDUALE• Ritmi circadiani• Variazioni stagionali• Dieta• Periodo mestruale• Gravidanza

PRINCIPALI FONTI DELLAVARIABILITA’ INTER-INDIVIDUALE• Sesso• Età• Razza• Massa corporea• Fumo• Alcool• Farmaci

VARIABILITA’ ANALITICApre-analiticapost-analiticaanalitica

VARIABILITA’ NELLA FASEPRE-ANALITICA• Modalità di raccolta e conservazionedel campione• Attribuzione del campione al paziente• Idoneità del materiale• Accorgimenti per stabilizzare gli analiti

VARIABILITA’ NELLA FASE ANALITICA• Procedure standardizzate• Controlli interni• Verifica di risultati con valori elevati

VARIABILITA’ NELLA FASEPOST-ANALITICA• Lettura comprensibile del referto• Consegna referto in tempi brevi

VARIABILITA’ ANALITICAASSOCIATA A PRELIEVO VENOSOPRELIEVO tecnica sottovuotoprincipio della siringaEmolisi invitroEMOLISI: colorazione rossa del plasma o del sierodopo centrifugazione

MAGGIORI CAUSE DI EMOLISI1) Ago di piccolo calibro2) Presenza di disinfettante sul sito del prelievo3) Prelievo in zone edematose4) Aspirazione forzata in siringa5) Forte pressione nel travasare il sangue in provetta6) Violento mescolamento del campione di sangue intero

SCELTA E UTILIZZO DEGLI ANTICOAGULANTI• La maggior parte delle analisi è effettuata su siero• Analisi su sangue interoparti figurate del sangueanalisi singole componenti del plasma• Il plasma contiene delle sostanze che non sono presentinel siero o che sono presenti in concentrazioni differenti• Il plasma è da reputare il liquido che più si avvicina allacomposizione reale del sangue circolante

ANTICOAGULANTI sangue fluido (scoagulazione)PlasmaParte corpuscolataIl non corretto utilizzo degli anticoagulanti è una delle più frequenti cause dierrore preanaliticoCHELANTI DEL CALCIO•EDTA•SALI BISODICO O TRIPOTASSICO•CITRATO DI SODIO•OSSALATO DI AMMONIO E DI POTASSIO

SISTEMA DELLA COAGULAZIONEANTITROMBINA III

EPARINAMucopolisaccaride acido il cui peso molecolare varia nelle diverse preparazioniIN COMMERCIO ESISTE SOTTO FORMA DI SALI K, Na ma vieneabitualmente usato il SALE DI Li E AMMONIOLEGA ANTITROMBINA IIICOMPLESSOEPARINA - ANTITROMBINA III - TROMBINAINATTIVONON IMPIEGATO:STUDI MORFOLOGICI DELLE CELLULE EMATICHETEST DI COAGULAZIONETEST DI ATTIVAZIONE DELLA TROMBINADOSAGGIO DEL LITIO (o AMMONIO) PLASMATICO

ALTRI ADDITIVIINIBIZIONE DELLA DEGRADAZIONE DEL GLUCOSIOconsumo di glucosio pari al 50% in 5 oreFluoruro di sodio: enolasiIodoacetato di litio: gliceraldeide-3-fosfato deidrogenasi3 ore per far effettoefficacia di 3 giorniMannosio: esocinasiprecoce ma breve durataINIBIZIONE DELLA AGGREGAZIONE PIASTRINICACitrato trisodico + piridossalfosfato + trisidrossimetilamminometanoCONSERVAZIONE DEI GLOBULI ROSSISoluzioni contenenti destrosio

IDENTIFICAZIONE DEI CONTENITORICODICE COLORE: quanto riguarda le provette con anticoagulante, tutte le ditte utilizzano lo stessocolore (norme ISO 9000 e ISO 6710). I colori cambiano per le provette contenenti, oltreall’anticoagulante, anche un gel separatore.tabella

TRASPORTO DEL PRELIEVO ALLABORATORIO• Entro 45 minuti dal prelievoprocedere allacentrifugazione e separazione dei campioni entro 1h• Test su fattori della coagulazione• Esame emocromocitometrico• VESE’ molto importante che i tempi non siano eccessivi perchéinfluenzano la stabilità del materiale e quindi l’accuratezzadella misuranon oltre 24htempi molto più brevientro 7hGLUCOSIO: a tutte le temperature (metabolizzato)K + : per lisi eritrocitaria e piastrinica

Ogni campione devegiungere allaboratorio giàaccuratamenteetichettato• indicati Nome e Cognome delpaziente; se ricoverato in ospedale ancheil reparto, la camera ed il numero delletto• inchiostro indelebile su etichetta benadesa al tubo (MAI sul tappo o sulcoperchio del recipiente).• indicati data e ora del prelievo• non etichettati o etichettati inmodo improprioIl laboratorio puòrifiutare i campioni• subito danno durante il trasporto• non raccolti e conservaticorrettamente• contaminati esternamente

CONSERVAZIONE DEI CAMPIONI IN LABORATORIOPer diversi motivi vi è la necessità in laboratoriodi conservare per tempi più o meno lunghi icampioni da analizzare o già analizzatiRAFFREDDAMENTO (4°C)conservazione dei campioni per 2-3 gg, almassimo una settimanaCONGELAMENTO (-20°C / -80°C)conservazione per tempi più lunghi. Il metodomigliore è l conservazione di piccole aliquotecongelate rapidamente in azoto liquido econservate a -80°C

Enzimologia clinica

Scopo• valutare la concentrazione degli enziminei fluidi corporei a fini diagnostici• Enzimi: catalizzatori biologici aumentanola velocità di una reazione senzaalterarne la stechiometria

Cinetica EnzimaticaE + S ES EP E + P• Enzimi a substrato singolo– Es. Amilasi, lipasi• Enzimi a substrati multipli

Velocità di reazione• Influenzata da– concentrazione disubstrato– concentrazione di enzima– temperatura– pH– cofattori– coenzimi– attivatori– inibitori

Legge di Michaelis-Menten• Basse concentrazioniReazione di primo ordine• Alte concentrazioniReazione di ordine 0• Costante di Michaelis-Menten– è la concentrazione disubstrato checorrisponde ad unavelocità di reazione parial 50% del massimo

Enzimi: specificità disubstrato

Localizzazione Enzimatica• Liberi nelle cellule didiversi tessuti ed organi• Confinati in particolaristrutture all’internodelle cellule stesse• In un determinatotessuto od organospecifico (enzimiorgano-specifici)

Gli enzimi nel sangue• spesso non hanno un ruolo fisiologico• presenti anche in situazioni normali– invecchiamento fisiologico– turnover cellulare• eliminati da– sistema reticolo endoteliale– Rene (es. amilasi)• livello di attività normale nel siero è funzione di– velocità di rilascio– clearance• emivita– 2 ore– 170 ore

Aumento degli enzimi nel plasma:necrosi o danno cellularecitolisi fuoriuscita enzimi– Fattori tossici– Ischemiaaumentato turnover cellulare– Accrescimento– Rigenerazione cellulare– Neoplasie– GravidanzaInduzione enzimatica– Farmaci (es.Fenobarbital, alcool)– Patologie (colestasi)Il quadro dell’aumento puòessere sufficientementetipico da avere un valorediagnostico nel caso di unparticolare organo

Liberazione enzimi nelcircolo• la velocità di comparsanel sangue dipende da– passaggio nel sangue• diretto• attraverso il circololinfatico– localizzazioneintracellulare• citoplasmatica• mitocondriale

Fluidi utilizzati• siero• sangue• plasma• orine• versamenti• fluidi extracellulari

usipatologie epatiche (Transaminasi ALT e AST, bilirubina)patologie cardiache (creatin chinasi totale CPK)patologie muscolaripatologie pancreatichepatologie autoimmuni (ELISA e RIA)

Queste diapositive sono state realizzate per il Corso Integrato di Farmacologia ediagnostica di laboratorio, Modulo di Patologia clinica, CdL Infermieristica, Facoltàdi Medicina e Chirurgia, Università del MoliseNel caso riscontraste errori o inesattezze potete inviare una e-mail all’indirizzos.messina@unicas.it Nel caso voleste utilizzare queste diapositive per i vostri corsi visaremmo molto grati se lo segnalaste allo stesso indirizzo di posta