bibliografia - Università degli Studi di Ferrara

dietilamminoetil-sefarosio (DEAE-Sepharose). La colonna è stata lavata con iltampone, poi con una soluzione di NaCl 0.2 M sempre in tampone fosfato a pH6.5, quindi l’enzima AAS è stato eluito con una concentrazione di NaCl 0.4 M(Fig. 1).Figura 1. Profilo di eluizione di AAS da DEAE-SepharoseLe frazioni attive sono state concentrate e desalate per ultrafiltrazione; quindidiluite con tampone fosfato 50 mM a pH 7.0 e caricate su una colonna diidrossiapatite equilibrata con lo stesso tampone. La colonna è stata lavata conconcentrazioni di fosfato crescenti e l’enzima è stato eluito con unaconcentrazione pari a 120 mM (Fig. 2).Purtroppo il metodo generalmente utilizzato per l’analisi dell’attività degli enzimitiammina difosfato-dipendent,i basato sull’ossidazione degli -idrossichetoniprodotti ad opera del 2,3,5-trifeniltetrazolo, con formazione del rispettivo186