Vol. 79, supplement to no. 2, March-April 1994 - Supplements

DISCUTIAMONE INSIEMEANALISI DELLA t(15;17) NELLA LEUCEMIA ACUTA PROMIELOCITICAMEDIANTE IBRIDAZIONE IN SITULETIZIA LONGO, PIER GIUSEPPE PELICCIIstituto di Clinica Medica I, Policlinico Monteluce, PerugiaFino ad oggi una serie di anomalie cromosomiche sono state identificate come anomalieacquisite in disordini ematologici correlate con specifiche caratteristiche cliniche, morfologicheed immunofenotipiche. L’analisi citogenetica svolge un importante ruolo nella diagnosiclinica e nella prognosi di pazienti ematologici. Comunque, uno studio citogenetico convenzionale,talvolta, non può fornire informazioni complete solo sulla base dell’interpretazionedel bandeggio cromosomico. La tecnica di ibridazione in situ ha permesso di superare alcunedifficoltà dell’analisi citogenetica.Mediante esperimenti di ibridazione in situ radioattiva abbiamo studiato finemente il puntodi rottura sul cromosoma 17, della traslocazione 15;17, specifica delle leucemie acute promielocitiche(LAP).La regione cromosomica del 17 coinvolta nella rottura è la banda q11-21. In questa bandacromosomica sono localizzati molti geni potenzialmente coinvolti nella traslocazione: c-erbA-1, c-erbB-2, G-CSF, RARa ed MPO, ed il nostro scopo era di identificare i geni più vicini alpunto di rottura.Prima di tutto, sono stati selezionati dei casi di leucemie mieloidi acute (LMA) con riarrangiamentidel cromosoma 17 nella banda q11-21. Mediante esperimenti di ibridazione in situogni gene suddetto è stato localizzato su questi mutanti citogenetici. In questo modo siamoriusciti ad identificare la posizione relativa dei geni rispetto al punto di rottura e stabilirequindi che i due geni a cavallo della rottura sono: c-erbB-2, centromerico, e RARa, telomerico.Con esperimenti di Southern blot si è poi stabilito che il gene rotto dalla traslocazione èRARa.Esperimenti di ibridazione in situ su preparati cromosomici sono stati essenziali anche perstabilire la presenza di una micro-traslocazione, citogeneticamente non identificabile, in alcunicasi di LAP con cariotipo normale. Per questo studio è stata adoperata una tecnica di ibridazionein situ non radioattiva, che prevede l’uso di sostanze fluorescenti per stabilire la localizzazionedi un gene. Questa metodica, estremamente più sensibile di quella radioattiva, hapermesso di identificare la presenza del gene RARa sul cromosoma 15 e del gene PML sul cromosoma17 in due casi di LAP con cariotipo normale. Questa analisi è stata confermata anchea livello molecolare.21