Vol. 79, supplement to no. 2, March-April 1994 - Supplements

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DISCUTIAMONE INSIEMEVantaggi e limiti della FISHUna disamina delle potenzialità della FISH in ematologia non può prescindere dalla considerazionedi fondo che questa tecnica affianca la citogenetica classica, ma non può sostituirla.Infatti la FISH può essere applicata qualora si conosca, sulla base dei risultati dell’analisi citogenetica,cosa andare a cercare.I principali vantaggi derivanti dalla applicazione della FISH sono qui riassunti:– possibilità di analizzare la presenza di una determinata anomalia nel nucleo in interfase intutte le neoplasie con basso indice mitotico, eliminando il problema della scarsità di metafasianalizzabili. La FISH ha trovato ad oggi ampia applicazione nello studio della leucemia linfaticacronica, ove questa tecnica consente di dimostrare la presenza di trisomia 12 in pazientinormali all’analisi citogenetica.La sensibilità della FISH è generalmente elevata: occorre notare tuttavia che fino ad un 10%di cellule in interfase può mostrare falsa monosomia nel soggetto normale. Ciò impone cautelanell’impiego di questa tecnica nello studio della malattia minima residua di soggetti portatoridi delezione parziale o totale di un cromosoma.L’introduzione in commercio di sonde riconoscenti le sequenze geniche coinvolte nelle principalitraslocazioni consentirà una larga applicazione di questa tecnica nello studio e nelmonitoraggio clinico delle leucosi acute e nei linfomi;– possibilità di analizzare rapidamente un grande numero di cellule in interfase. Non vieneeliminato, qualora si vogliano analizzare cellule in metafase, il problema del gettito mitotico edella ricerca microscopica della metafase; analizzatori di imnagine possono essere di aiuto inquesta fase;– possibilità di visualizzare direttamente su preprato citologico o istologico la presenza diuna determinata anomalia cromosomica numerica in cellule riconoscibile mediante colorazioneimmunocitochimica. Questa applicazione non è di semplice ed immediata esecuzione.In conclusione, la FISH rappresenta una metodica di grande utilità, in grado di migliorare lasensibilità degli studi citogenetici e di permettere una più esatta definizione del cariotipo dellacellula neoplastica.Lo sviluppo della tecnologia del DNA ricombinante e dei sistemi automatizzati di visualizzazioneforniranno nei prossimi anni le sonde necessarie per la analisi di molte anomalie cromosomichee garantiranno il possibile impiego simultaneo di sonde multiple coniugate afluorocromi diversi.Grazie a questi progressi la FISH, che ha già iniziato ad espandere la sua potenzialità applicativadal campo della ricerca sperimentale a quello della pratica clinica, affiancherà la citogeneticaclassica nella diagnosi e nel monitoraggio citogenetico delle malattie neoplastiche dipertinenza ematologica.18
DISCUTIAMONE INSIEMESTUDIO DELLE ABERRAZIONI CROMOSOMICHE NUMERICHE ESTRUTTURALI NELLE NEOPLASIE EMATOLOGICHE MEDIANTE IBRIDA-ZIONE IN SITU FLUORESCENTEIWONA WLODARSKACenter for Human Genetics, Catholic University of Leuven, BelgiumLa tecnica citogenetica convenzionale presenta limiti interpretativi legati al potere risolutivodel bandeggio ed alla necessità della presenza di cellule in mitosi.Lo sviluppo delle tecniche di ibridizzazione di sequenze di DNA ai cromosomi in metafaseed ai nuclei in interfase ha consentito di affiancare l’ibridazione in situ (FISH) alla citogeneticaconvenzionale nella definizione del cariotipo delle neoplasie ematologiche.Oggi sono disponibili per la FISH i cosiddetti cosmid probes, probes da YAC (yeast artificialchromosomes), miscele di probes riconoscenti diverse sequenze dislocate lungo un intero cromosoma(ottenute da whole chromosome libraries) oltre a sonde di DNA specifiche per leregioni paracentromeriche di ciascun autosoma.La FISH si presta molto bene dunque alla 1) definizione esatta del punto di rottura delle traslocazioni,2) alla rilevazione e definizione di anomalie strutturali, quali gli isocromosomi, icromosomi ad anello, cromosomi marcatori complessi, homogeneously staining regions (HSR);3) allo studio delle anomalie numeriche.Recentemente l’applicazione combinata della tecnica FISH e della marcatura immunologicadel fenotipo di membrana ha inoltre permesso di visualizzare direttamente il citotipo dellacellula in esame.Queste diverse applicazioni della FISH verranno illustrate con esempi relativi allo studio danoi condotto su cellule leucemiche e linfomatose, confermando l’importanza di questa tecnicanello studio e nel monitoraggio clinico delle aberrazioni cromosomiche nelle neoplasie ematologiche.19
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