(Pitzurra, 1997) SAS (Orpianesi et al., 1983) GIUDIZIO ... - Cannizzaro
(Pitzurra, 1997) SAS (Orpianesi et al., 1983) GIUDIZIO ... - Cannizzaro
(Pitzurra, 1997) SAS (Orpianesi et al., 1983) GIUDIZIO ... - Cannizzaro
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M<strong>et</strong>odi di campionamento e<br />
monitoraggio degli ambienti<br />
(MAM)<br />
• La contaminazione microbica è dovuta princip<strong>al</strong>mente<br />
a due fattori: la contaminazione dir<strong>et</strong>ta da parte di<br />
presidi non sterili e la contaminazione indir<strong>et</strong>ta da parte<br />
di agenti microbici aerodispersi. La sorgente di<br />
contaminazione è rappresentata soprattutto d<strong>al</strong>l’uomo<br />
e dai sistemi di ventilazione.<br />
• Per garantire condizioni di sicurezza è quindi necessario<br />
eff<strong>et</strong>tuare controlli sistematici su aria e superfici di un<br />
ambiente a rischio.<br />
• Sulla base di t<strong>al</strong>i considerazioni si è andato sviluppando<br />
nel tempo il conc<strong>et</strong>to di MAM (Monitoraggio<br />
Microbiologico Ambient<strong>al</strong>e), un sistema che si prefigge<br />
di quantificare la carica microbica in un ambiente<br />
confinato.
Il Monitoraggio Microbiologico Ambient<strong>al</strong>e –<br />
MAM - è una m<strong>et</strong>odica che si compone di due<br />
momenti:<br />
• il controllo dell’aria<br />
• il controllo delle superfici<br />
•L’aria è il veicolo tramite il qu<strong>al</strong>e gli agenti microbici (legati a<br />
particelle inerti di <strong>al</strong>meno 10 mµ di diam<strong>et</strong>ro) si muovono<br />
nell’ambiente, raggiungono le superfici e vi si depositano.<br />
•Il monitoraggio delle superfici è essenzi<strong>al</strong>e per conoscere il f<strong>al</strong>l<br />
- out microbico, cioè quella parte di bioaerosol e di<br />
microrganismi in esso presenti che si deposita sulle superfici<br />
costituendo un potenzi<strong>al</strong>e veicolo di infezione.
Il MAM costituisce quindi un primo fondament<strong>al</strong>e passo<br />
verso la bonifica degli ambienti di lavoro a biorischio<br />
rivelandosi uno strumento prezioso nel controllo e nella<br />
prevenzione delle infezioni in ambito osped<strong>al</strong>iero.<br />
Linee guida<br />
• MAM: uno strumento guida nella misura e prevenzione del<br />
rischio biologico indoor.<br />
• In It<strong>al</strong>ia l’importanza del MAM relativo <strong>al</strong>le s<strong>al</strong>e operatorie è<br />
ribadita d<strong>al</strong>l’ ISPESL (Istituto Superiore per la Prevenzione e<br />
Sicurezza del Lavoro) che ha emanato le “Linee Guida per<br />
la definizione degli standard di sicurezza e di igiene<br />
ambient<strong>al</strong>e dei reparti operatori” (Luglio 1999) e recepita d<strong>al</strong>la<br />
Regione Sicilia che con la Circolare Amministrativa C.A.<br />
n°1047 del 27 marzo 2001, suggerisce t<strong>al</strong>e indagine per il<br />
controllo delle infezioni nosocomi<strong>al</strong>i.
Fattori che influenzano la sopravvivenza<br />
dei microrganismi nell’aria nell aria<br />
a) resistenza propria del microrganismo<br />
b) umidità relativa dell’aria<br />
c) temperatura dell’aria e luce solare<br />
d) composizione dell’aerosol<br />
e) mod<strong>al</strong>ità di campionamento dell’aerosol
I controlli ambient<strong>al</strong>i: l’aria l aria<br />
� L’aria può essere veicolo di contaminazione di<br />
semilavorati e del prodotto finito.<br />
� Per questo motivo molte aree nelle aziende sono<br />
dotate di sistemi di filtrazione dell’aria a vari livelli di<br />
efficienza che minimizzano la presenza di microrganismi.<br />
� E’ dunque necessario un controllo costante di t<strong>al</strong>i aree<br />
per v<strong>al</strong>utare l’efficacia dei sistemi di filtrazione.<br />
� Occorre v<strong>al</strong>idare il sistema di filtrazione dell’aria e<br />
garantirne il buon funzionamento con il monitoraggio
I controlli ambient<strong>al</strong>i: l’aria<br />
V<strong>al</strong>idazione: Consiste nell’eff<strong>et</strong>tuare per 3 mesi consecutivi<br />
in zone critiche prefissate, campionamenti d’aria<br />
s<strong>et</strong>timan<strong>al</strong>i per ottenere un dato statisticamente<br />
significativo che risp<strong>et</strong>ti i limiti previsti d<strong>al</strong>le Norme di Buona<br />
Fabbricazione.<br />
Il monitoraggio ambient<strong>al</strong>e prevede controlli mensili
Param<strong>et</strong>ri microbiologici che vengono gener<strong>al</strong>mente<br />
d<strong>et</strong>erminati nel corso del monitoraggio<br />
Carica Batterica Tot<strong>al</strong>e a 36°C 36 C (batteri mesofili): mesofili):<br />
temperatura<br />
ottim<strong>al</strong>e di sviluppo fra 25 e 40 °C. In questa categoria si collocano i<br />
batteri patogeni convenzion<strong>al</strong>i o opportunusti e tutti i batteri che<br />
costituiscono la flora norm<strong>al</strong>e dell’uomo.<br />
Carica Batterica Tot<strong>al</strong>e a 20°C 20 C (batteri psicrofili<br />
psicrofili): temperatura di<br />
15 – 30 °C. In questa categoria sono compresi tutti i microrganismi<br />
saprofiti che sono in grado di compiere il proprio ciclo vit<strong>al</strong>e a spese di<br />
sostanze organiche in decomposizione, per cui sono in grado di<br />
colonizzare il suolo e gli ambienti umidi.<br />
Carica mic<strong>et</strong>ica tot<strong>al</strong>e: i funghi di interesse comprendono muffe e<br />
lieviti. La d<strong>et</strong>erminazione del param<strong>et</strong>ro mic<strong>et</strong>ico nei campioni ambient<strong>al</strong>i<br />
è necessaria poiché la loro presenza è spesso correlata <strong>al</strong>la presenza di<br />
polvere e può essere considerevole in presenza di elevata umidità.<br />
Staphylococcus spp.:<br />
Staphylococcus spp.: sono cocchi Gram positivi e sono<br />
numericamente i più rappresentati nella popolazione microbica norm<strong>al</strong>e<br />
della cute e dell’orofaringe dell’uomo.
I batteri più comuni degli ambienti confinati sono:<br />
Bacillus,<br />
Pseudomonas,<br />
Staphylococcus,<br />
Micrococcus,<br />
M<strong>et</strong>hylobacterium,<br />
Flavobacterium.<br />
T<strong>al</strong>i germi fanno parte della norm<strong>al</strong>e flora microbica degli<br />
ambienti confinati e la loro presenza in gener<strong>al</strong>e non deve<br />
creare <strong>al</strong>larmismo. Dei batteri riscontrati maggiormente,<br />
Staphylococcus spp. è un indicatore di buone pratiche di<br />
pulizia e potenzi<strong>al</strong>e patogeno.
I controlli ambient<strong>al</strong>i: le superfici<br />
Le superfici degli impianti destinati <strong>al</strong>la produzione ed <strong>al</strong><br />
confezionamento dei prodotti devono essere mantenute in<br />
perf<strong>et</strong>te condizioni igieniche <strong>al</strong> fine di evitare lo sviluppo di<br />
microrganismi che potrebbero d<strong>et</strong>erminare una contaminazione<br />
dei semilavorati e dei prodotti finiti.<br />
Il campionamento si eff<strong>et</strong>tua con la:<br />
Tecnica Swab: eff<strong>et</strong>tuato il lavaggio delle attrezzature con<br />
l’impiego del d<strong>et</strong>ergente del sanitizzante idoneo, si sfrega un<br />
tampone su una superficie ben definita da campionare.<br />
Tecnica del lavaggio<br />
Tecnica delle membrane di nitrocellulosa (per 30’’ e incubati<br />
<strong>al</strong>le T° idonee e su diversi terreni di coltura)<br />
AM: accumulo microbico<br />
INDICI INDICI DA DA VALUTARE:<br />
VALUTARE:<br />
AMO: accumulo microbico orario
M<strong>et</strong>odi di campionamento e<br />
monitoraggio dell’aria<br />
I m<strong>et</strong>odi adottati per il controllo microbiologico<br />
dell’aria ambient<strong>al</strong>e si basano sui seguenti<br />
campionamenti:<br />
• CAMPIONAMENTO PASSIVO<br />
• CAMPIONAMENTO ATTIVO
CAMPIONAMENTO PASSIVO<br />
• impiego di piastre P<strong>et</strong>ri di sedimentazione.<br />
Viene tolto il coperchio della capsula P<strong>et</strong>ri<br />
contenente il terreno di coltura agarizzato<br />
sterile, in modo che la superficie dell’agar<br />
rimanga esposta <strong>al</strong>l’aria per un tempo<br />
definito. Al termine si richiude la piastra e si<br />
procede <strong>al</strong>l’incubazione a 37°C per 48 ore e<br />
a 25° C per <strong>al</strong>tre 24 ore.<br />
• Si conta il numero di colonie cresciute,<br />
ciascuna delle qu<strong>al</strong>i rappresenta una<br />
particella trasportante microrganismi caduta<br />
sulla superficie dell’agar.<br />
• I risultati vengono espressi nell’ unità di<br />
misura: UFC (=Unità Formante Colonia)/m 2 /ora<br />
(oppure anche UFC/dm 2 / ora).
M<strong>et</strong>odo di campionamento passivo<br />
INDICE DI CONTAMINAZIONE MICROBIOLOGICA DELL’ ARIA<br />
Standard da seguire:<br />
•Piastra: 1 m da terra<br />
•Durata esposizione: 1 ora<br />
IMA<br />
•Terreno di coltura: PCA Agar<br />
•T° e durata incubazione: 37°C per 48 ore<br />
Il numero delle UFC trovate è l’ indice IMA
CLASSE<br />
IMA<br />
1<br />
2<br />
3<br />
4<br />
5<br />
INDICE<br />
IMA<br />
0 - 5<br />
6 - 25<br />
26 - 50<br />
51 - 75<br />
› 76<br />
Classi IMA<br />
IGIENE<br />
ARIA<br />
OTTIMA<br />
BUONA<br />
MEDIOCRE<br />
CATTIVA<br />
PESSIMA<br />
GRUPPO<br />
A<br />
RISCHIO<br />
MOLTO<br />
ALTO<br />
ALTO<br />
MEDIO<br />
BASSO<br />
NULLO<br />
ESEMPIO DI<br />
UTILIZZO<br />
-ULTRA CLEAN ROOM<br />
-IMPIANTI E TRAPIANTI<br />
-OPERAZIONI ASETTICHE<br />
-REPARTO INTENSIVO<br />
-PICCOLA CHIRURGIA<br />
- AMBIENTI CON<br />
PARTICOLARE RILEVANZA<br />
D’ IGIENE AMBIENTALE<br />
- AMBIENTI SENZA<br />
PARTICOLARE RILEVANZA<br />
D’ IGIENE AMBIENTALE<br />
- ALTRI AMBIENTI
V<strong>al</strong>ori limite IMA (UFC/piastra) – Le quattro classi di contaminazione microbica<br />
dell’aria definite d<strong>al</strong>l’IMA variano in relazione <strong>al</strong>la tipologia dell’ambiente:<br />
Tipologia di ambiente (UFC/piastra)<br />
Ambienti ad <strong>al</strong>tissimo rischio<br />
Ultra clean room, isolamento prot<strong>et</strong>tivo, s<strong>al</strong>e<br />
operatorie per protesi auricolari, <strong>al</strong>cune<br />
lavorazioni dell’industria el<strong>et</strong>tronica e<br />
farmaceutica<br />
Ambienti ad <strong>al</strong>to rischio<br />
Clean room s<strong>al</strong>e operatorie per chirurgia<br />
gener<strong>al</strong>e, rianimazione, di<strong>al</strong>isi, <strong>al</strong>cune<br />
lavorazioni dell’industria el<strong>et</strong>tronica e<br />
farmaceutica, laboratori di microbiologia<br />
Ambienti a medio rischio<br />
Ambulatori, laboratori, industrie <strong>al</strong>imentari,<br />
cucine, ristoranti, opifici<br />
Ambienti a basso rischio<br />
Corsie d’osped<strong>al</strong>i, servizi, uffici 75<br />
5<br />
25<br />
50
MINISTERO DELLA SANITA’<br />
Istituto Superiore per la Prevenzione e la Sicurezza del Lavoro (ISPESL)<br />
LINEE GUIDA PER LA DEFINIZIONE DEGLI STANDARD<br />
DI SICUREZZA E DI IGIENE AMBIENTALE DEI REPARTI OPERATORI<br />
Tipo di<br />
campionamento<br />
Aria (CFU/m 3 )<br />
Situazione s<strong>al</strong>a<br />
operatoria<br />
S<strong>al</strong>a pronta (a riposo)<br />
S<strong>al</strong>a in attività<br />
(flusso turbolento)<br />
V<strong>al</strong>ori limite<br />
ISPESL (IMA)<br />
< 35<br />
CAMPIONAMENTO ATTIVO<br />
• attraverso l’uso di una apparecchiatura<br />
“<strong>SAS</strong> Surface Air System” portatile una<br />
quantità misurata di aria è aspirata in un<br />
coperchio sotto il qu<strong>al</strong>e è collocata una<br />
capsula p<strong>et</strong>ri contenente terreno agarizzato.<br />
• Le piastre P<strong>et</strong>ri vengono incubate a 37°C<br />
per 48 ore e a 25° C per <strong>al</strong>tre 24 ore.<br />
• Le colonie cresciute sulla superficie<br />
dell’agar vengono contate e i risultati<br />
espressi in UFC/m3 in rapporto <strong>al</strong> volume<br />
d’aria aspirato ed an<strong>al</strong>izzato.
La conta tot<strong>al</strong>e delle colonie batteriche delle piastre di TSA<br />
(Triptic Soy Agar), di MSA (Mannitol S<strong>al</strong>t Agar) e di SAB<br />
(Sabouraud Agar) eff<strong>et</strong>tuata dopo incubazione è stata<br />
espressa in CFU/m 3 ed è stata c<strong>al</strong>colata nel seguente modo: il<br />
numero tot<strong>al</strong>e (N) delle colonie cresciute è stato diviso per il<br />
volume d’aria campionato (V, espresso in litri), e il risultato<br />
moltiplicato per 1000 (1 m 3 =1000 l).<br />
CFU/m 3 = (N / V) x 1000<br />
• Le piastre di TSA sono state incubate a 22°C e a 36°C per<br />
48h. Le piastre di MSA sono state incubate a 36°C per 48h. I<br />
risultati delle l<strong>et</strong>ture sono stati espressi in CFU/m 3
V<strong>al</strong>ori di carica batterica e v<strong>al</strong>utazione<br />
della qu<strong>al</strong>ità dell’aria<br />
(European Collaborative Action, 1993)<br />
Categoria di<br />
inquinamento<br />
microbiologico<br />
(batterica)<br />
Case<br />
UFC/m 3<br />
Ambienti<br />
non<br />
industri<strong>al</strong>i<br />
(UFC/m3 )<br />
Molto bassa < 100
METODI DI RILEVAZIONE DELLA<br />
CONTAMINAZIONE MICROBICA DELL’ARIA<br />
CAMPIONAMENTO<br />
ATTIVO PASSIVO<br />
S.A.S. I.M.A.
METODI DI RILEVAZIONE DELLA<br />
CONTAMINAZIONE MICROBICA DELL’ARIA<br />
CAMPIONAMENTO<br />
I.M.A. – Indice Microbico Aria<br />
Esposizione <strong>al</strong>l’aria<br />
di Piastre P<strong>et</strong>ri contenenti agar,<br />
per un tempo di 1 ora<br />
a 1 m di <strong>al</strong>tezza<br />
a 1 m da ogni ostacolo<br />
Particelle > 10 µm<br />
PASSIVO<br />
I.M.A.
METODI DI RILEVAZIONE DELLA<br />
CONTAMINAZIONE MICROBICA DELL’ARIA<br />
CAMPIONAMENTO<br />
PASSIVO<br />
I.M.A.
METODI DI RILEVAZIONE DELLA<br />
CONTAMINAZIONE MICROBICA DELL’ARIA
METODI DI RILEVAZIONE DELLA<br />
CONTAMINAZIONE MICROBICA DELL’ARIA<br />
ATTIVO<br />
S.A.S.<br />
CAMPIONAMENTO<br />
Surface Air System:<br />
Campionatore ad impatto<br />
convoglia l’aria aspirata<br />
dir<strong>et</strong>tamente su agar.<br />
Flusso 180 L/min<br />
1,5 m di <strong>al</strong>tezza<br />
1,5 m d<strong>al</strong> paziente
METODI DI RILEVAZIONE DELLA<br />
CONTAMINAZIONE MICROBICA DELL’ARIA<br />
ATTIVO<br />
S.A.S.<br />
CAMPIONAMENTO
METODI DI RILEVAZIONE DELLA<br />
CONTAMINAZIONE MICROBICA DELL’ARIA
METODI DI RILEVAZIONE DELLA<br />
CONTAMINAZIONE MICROBICA DELL’ARIA<br />
I.M.A.<br />
(<strong>Pitzurra</strong>, <strong>1997</strong>)<br />
S.A.S.<br />
(<strong>Orpianesi</strong> <strong>et</strong> <strong>al</strong>., <strong>1983</strong>)<br />
<strong>GIUDIZIO</strong> I.M.A. (ufc/ dm 2 /h) ufc/m 3<br />
ottimo 0 ÷ 9<br />
param<strong>et</strong>ri di v<strong>al</strong>utazione<br />
buono 10 ÷ 39 0 ÷ 125<br />
mediocre 40 ÷ 84 126 ÷ 250<br />
cattivo 85 ÷ 124 251 ÷ 375<br />
pessimo > 124 > 375
CONTAMINAZIONE MICROBIOLOGICA<br />
VALORI DI NORMATIVA<br />
Raccomandazioni ISPESL – strumento di misura <strong>SAS</strong><br />
A s<strong>al</strong>a operatoria “at rest” ≤ 35 CFU/m3 -<br />
A s<strong>al</strong>a operatoria “in<br />
operation”<br />
A s<strong>al</strong>a operatoria “in<br />
operation”<br />
≤ 180 CFU/m3 Flusso<br />
turbolento<br />
≤ 20 CFU/m3 Flusso laminare
H 2O<br />
qu<strong>al</strong>che conc<strong>et</strong>to di base sulle<br />
diluizioni:
L’acqua potabilizzata può<br />
contenere una flora microbica<br />
“autoctona” e ”<strong>al</strong>loctona”, capace<br />
di resistere ai trattamenti di<br />
potabilizzazione.<br />
Alcuni di questi microrganismi<br />
possono trovare condizioni<br />
favorevoli <strong>al</strong> loro mantenimento<br />
in r<strong>et</strong>e.
BIOFILM<br />
Comunità batterica, <strong>al</strong>tamente<br />
stratificata, adesa ad una<br />
superficie, circondata da una<br />
matrice extracellulare di natura<br />
organica e inorganica dove i<br />
microrganismi sono organizzati<br />
in una comunità funzion<strong>al</strong>e.
Formazione di un biofilm costituito<br />
da più specie microbiche<br />
Batteri:<br />
(cariche positive)<br />
cariche --<br />
(cariche +)
Protocollo<br />
�� disconnessione della r<strong>et</strong>e idrica e<br />
applicazione di un sistema di<br />
<strong>al</strong>imentazione indipendente.<br />
�� modifiche tecniche <strong>al</strong> circuito per<br />
renderlo compatibile con i<br />
trattamenti.<br />
�� trattamento dei circuiti.<br />
�� ricollegamento <strong>al</strong>la r<strong>et</strong>e idrica.
Processo di bonifica dei riuniti già gi in uso<br />
Trattamento:<br />
• D<strong>et</strong>ergente D<strong>et</strong>ergente acquoso<br />
acquoso<br />
30% <strong>et</strong>anolo<br />
5 % tensioattivo anionico<br />
(2’ flusso, 10’ pausa)<br />
• Disincrostante<br />
Disincrostante<br />
7 % acido ortofosforico<br />
1% tensioattivo anionico<br />
(2’ flusso, 10’ pausa)<br />
• Disinf<strong>et</strong>tante<br />
Disinf<strong>et</strong>tante<br />
Acqua ossigenata 12-15%<br />
(2’ flusso, 10’ pausa)
FOTOGRAFIE IN MICROSCOPIA ELETTRONICA<br />
5000 X<br />
Par<strong>et</strong>e del condotto<br />
idrico del riunito<br />
prima della bonifica<br />
Par<strong>et</strong>e del condotto<br />
idrico del riunito<br />
dopo la bonifica
- Param<strong>et</strong>ri chimici, fisici e microbiologici (batteriologici)<br />
- Tra i microganismi (batteri e protisti, es. Giardia intestin<strong>al</strong>is)<br />
- Dai risultati delle an<strong>al</strong>isi → Punteggio → Livelli di inquinamento<br />
Param<strong>et</strong>ro<br />
100- 100 OD( %<br />
sat) sat<br />
BOD 5 (O<br />
mg/L)<br />
(O 2<br />
COD (O 2<br />
mg/L)<br />
NH 4 (N mg/L)<br />
NO 3 (N mg/L)<br />
P (mg/L)<br />
Escherichia<br />
coli<br />
(UFC/100 ml)<br />
Punteggio<br />
Microbiologia: an<strong>al</strong>isi delle acque<br />
Livello 1<br />
>10<br />
< 2.5<br />
DILUIZIONI SERIALI E CONTA DEI MICRORGANISMI
SPATOLAMENTO SU PIASTRA DEI MICRORGANISMI E INCLUSIONE IN AGAR
2) Sospensione del campione e diluizioni seri<strong>al</strong>i<br />
a) Prelevare 10ml d<strong>al</strong> campione mediato e m<strong>et</strong>terli in 90ml di soluzione<br />
fisiologica sterile preparata in una beuta di v<strong>et</strong>ro. In questo modo si<br />
ottiene la diluizione 10 -1<br />
b) M<strong>et</strong>tere la beuta ad agitare per 15 minuti<br />
9 ml<br />
c) Preparare delle prov<strong>et</strong>te sterili<br />
1 ml 1 ml<br />
d) Fare le diluizioni: prelevare 1 ml di soluzione d<strong>al</strong>la<br />
9 ml<br />
Diluizioni seri<strong>al</strong>i<br />
beuta di partenza (diluizione10 -1 ) e m<strong>et</strong>terlo in una<br />
prov<strong>et</strong>ta contenente 9 ml di soluzione fisiologica;<br />
procedere in successione fino ad ottenere la diluizione<br />
10 -6<br />
contenenti 9 ml di soluzione fisiologica
3) Conta su piastra<br />
a) Per i batteri, d<strong>al</strong>le diluizioni 10 -3 , 10 -4 , 10 -5 prelevare sterilmente 0,1 ml,<br />
versarlo sulla piastra e spargere la coltura con un'ansa sterile<br />
b) Per i funghi procedere <strong>al</strong>lo stesso modo ma considerare le diluizioni 10 -2 ,<br />
10 -3 , 10 -4 , 10 -5 ; 10 -6<br />
c) Inoculare 2 piastre per ciascuna diluizione per la conta<br />
batterica<br />
N.B. Ricordarsi di indicare su ciascuna piastra il tipo di terreno utilizzato<br />
specifico per batteri o funghi, il campione, la diluizione e la data.<br />
d) Incubare a 37°C e a 28°C per circa 24-48h; procedere con la conta<br />
delle colonie cresciute sulle piastre inoculate e registrare i dati raccolti<br />
per la successiva elaborazione
CONTA DEI MICRORGANISMI
•Per "an<strong>al</strong>isi microbiologica delle acque" si intende<br />
l'individuazione dei microrganismi presenti in esse,<br />
gener<strong>al</strong>mente congiunta <strong>al</strong>la loro v<strong>al</strong>utazione<br />
quantitativa.<br />
•Nel caso particolare delle acque superfici<strong>al</strong>i, siano<br />
esse adibite a b<strong>al</strong>neazione, piuttosto che ad <strong>al</strong>tri usi,<br />
attraverso l'an<strong>al</strong>isi microbiologica se ne definisce la<br />
qu<strong>al</strong>ità.<br />
•Controlli microbiologici vengono eff<strong>et</strong>tuati ovviamente<br />
anche su acque destinate <strong>al</strong>l'approvvigionamento<br />
idrico-potabile e su acque reflue che, con il loro<br />
apporto inquinante, influenzano e modificano le<br />
caratteristiche del corpo idrico rec<strong>et</strong>tore (fiume, lago,<br />
mare).
1. D<strong>al</strong>la difficoltà di utilizzare di routine tecniche<br />
fin<strong>al</strong>izzate <strong>al</strong>la ricerca di tutti i possibili microrganismi<br />
patogeni, é sorta la necessità di ricercare, per la<br />
definizione della qu<strong>al</strong>ità qu<strong>al</strong>it di un'acqua, un'acqua microrganismi<br />
indicatori di contaminazione, la cui presenza può<br />
essere indice della presenza di patogeni.<br />
2. Un efficace indicatore microbiologico di<br />
contaminazione deve:<br />
a) poter sopravvivere sufficientemente a lungo<br />
nell'ambiente per consentire la sua evidenziazione<br />
b) deve poter essere identificato con m<strong>et</strong>odologie<br />
poco complesse e sufficientemente rapide.
Sistema delle membrane filtranti: quantitativo e qu<strong>al</strong>itativo<br />
Volume prestabilito di acqua da saggiare<br />
Risultato UFC/ml di H 2O filtrata
Microbiologia: m<strong>et</strong>odo delle membrane filtranti<br />
M<strong>et</strong>odo delle membrane filtranti<br />
N Colonie/100 ml =<br />
(N colonie contate/ volume campione filtrato)<br />
*100
Microbiologia: an<strong>al</strong>isi delle acque<br />
- Conta dei coliformi tot<strong>al</strong>i (UFC/ml)<br />
- Conta dei coliformi fec<strong>al</strong>i (UFC/ ml)<br />
- Conta delgi Streptococchi fec<strong>al</strong>i<br />
CONTA<br />
BATTERICA<br />
TOTALE<br />
COLIFORMI<br />
TOTALI<br />
COLIFORMI<br />
FECALI<br />
STREPTOCOCCHI<br />
FECALI<br />
TERRENO DI<br />
COLTURA<br />
PCA<br />
(Plate Agar<br />
Count)<br />
Membrane endo<br />
agar less<br />
Membrane<br />
faec<strong>al</strong> coliform<br />
KF streptococcus<br />
T° INC.<br />
22°C<br />
36°C<br />
36°C<br />
44°C<br />
36°C<br />
TEMPO INC.<br />
72h<br />
48h<br />
24h<br />
24h<br />
48h
Microbiologia: Coliformi tot<strong>al</strong>i. Chi sono e come si “cercano”<br />
-“Coliforme”: simile ad Escerichia coli, fam. Enterobacteriaceae.<br />
- Aerobi o anaerobi facoltativi, G-, non sporigeni, lattosio-fermentanti<br />
-“Organismi indicatori" e in genere non sono patogeni<br />
- Generi : Klebsiella, Enterobacter, Escherichia, Citrobacter spp.<br />
-Colore rosso scuro, nel caso di riflesso m<strong>et</strong><strong>al</strong>lico verdastro<br />
- Escherichia coli….
Microbiologia: Coliformi fec<strong>al</strong>i<br />
- Sinonimo di Coliformi termoresistenti<br />
- Fermentano il lattosio a 44.5-45 °C
- Gram positivi<br />
Microbiologia: Streptococchi fec<strong>al</strong>i<br />
- Indicatori di inquinamento non recente (vita media>)<br />
- Terreno BEA<br />
- Sodio azide (inibitore di <strong>al</strong>tri microrganismi)<br />
- Colonie scure con <strong>al</strong>one attorno
Microbiologia: Streptococchi fec<strong>al</strong>i<br />
- Chi sono e come si “cercano”<br />
Species<br />
Enterococcus faec<strong>al</strong>is<br />
Enterococcus hirae<br />
Enterococcus equinus<br />
Streptococcus pyogenes<br />
Streptococcus ag<strong>al</strong>actiae<br />
Lactobacillus plantarum<br />
Escherichia coli<br />
Enterobacter cloacae<br />
Pseudomonas aeruginosa<br />
Colonia rossa<br />
+<br />
+ (poor)<br />
+ (poor)<br />
-<br />
-<br />
-<br />
Alone gi<strong>al</strong>lo<br />
+<br />
+<br />
+<br />
-<br />
-<br />
-
Caratteristiche dell’acqua di processo
inquinamento<br />
fisico<br />
radioattivo<br />
biologico<br />
chimico<br />
Controllo<br />
ambient<strong>al</strong>e<br />
benessere<br />
attività<br />
temperatura<br />
velocità aria<br />
umidità
Sospensione<br />
di terreno<br />
10- 1<br />
10- 2<br />
1<br />
1 ml<br />
2<br />
1 ml<br />
3<br />
10 -<br />
3<br />
10 -<br />
4<br />
4 10 -<br />
An<strong>al</strong>isi microbiologica dei campioni<br />
1 ml<br />
1 ml<br />
5<br />
1 ml<br />
6<br />
10- 6<br />
10- 7<br />
10 -<br />
8<br />
1 ml<br />
M<strong>et</strong>odo delle<br />
diluizioni di<br />
sospensioni di suolo<br />
Ecologia delle popolazioni microbiche del suolo<br />
���� M<strong>et</strong>odi di rilevamento<br />
5<br />
7<br />
8<br />
1 ml<br />
Il numero delle cellule microbiche nel suolo<br />
può essere d<strong>et</strong>erminato:<br />
Tecnica del v<strong>et</strong>rino interrato<br />
Se la superficie del v<strong>et</strong>rino è<br />
pulita, non è sel<strong>et</strong>tiva, e<br />
agisce come le particelle<br />
miner<strong>al</strong>i del suolo<br />
Conte dir<strong>et</strong>te <strong>al</strong> microscopio ottico<br />
o <strong>al</strong>l’epifluorescenza o el<strong>et</strong>tronico a scansione<br />
V<strong>al</strong>ori in dif<strong>et</strong>to V<strong>al</strong>ori in eccesso
Il numero dei batteri c<strong>al</strong>colato con m<strong>et</strong>odi coltur<strong>al</strong>i è di circa 10 6 -10 8 batteri<br />
per grammo di terra secca, mentre quello ottenuto per microscopia dir<strong>et</strong>ta è<br />
di circa 10-100 volte superiore.<br />
Conte dir<strong>et</strong>te<br />
I v<strong>al</strong>ori sono approssimati per eccesso in<br />
quanto vengono c<strong>al</strong>colate anche le cellule<br />
morte<br />
Colorazioni vit<strong>al</strong>i<br />
Perm<strong>et</strong>tono di distinguere le cellule<br />
ancora in grado di respirare da quelle che<br />
non m<strong>et</strong>abolizzano più.<br />
Conte batteriche in cam pioni di suolo ottenute con m <strong>et</strong>odi diversi<br />
Cam pione Conta dir<strong>et</strong>ta Conta vit<strong>al</strong>e<br />
A 5.0 x 10 8<br />
B 1.1 x 10 9<br />
C 2.0 x 10 9<br />
3.1 x 10 7<br />
6.2 x 10 7<br />
1.7 x 10 8