Capitolo 2 - Omero

Derivatizzazione post-colonna: gli amminoacidi presentinell'idrolizzato vengono separati su una colonna ascambio ionico. I tipi di resina solitamente utilizzatisono scambiatori cationici forti costituiti dapolistireni solfonati. Gli amminoacidi vengonosolubilizzati in un tampone a pH 2 e la colonnacromatografica viene equilibrata con un tampone allostesso pH, in modo che tutti gli amminoacidi si trovinoad un valore di pH inferiore al loro punto isoelettrico esiano quindi carichi positivamente. In queste condizionitutti gli amminoacidi si legano alla resina. L'eluizioneviene condotta in gradiente aumentando sia la forzaionica che il pH. In questo modo vengono eluiti prima gliamminoacidi acidi, quindi gli amminoacidi neutri edinfine quelli basici. Gli amminoacidi eluiti dallacolonna passano in un coil di reazione in cui vengonomiscelati a 100°C con la ninidrina che reagisce sia con igruppi amminici primari che quelli secondari. Si formanodue diversi tipi di cromofori, che possono essererilevati rispettivamente a 570 nm (amminoacidi; coloreblu-porpora) e 440 nm (imminoacidi; colore gialloarancio). L'assorbanza di ciascun picco è proporzionalealla concentrazione dell'amminoacido.