Capitolo 2 - Omero

‣ Separazione dei peptidi ottenuti: la scelta delmetodo di separazione dei peptidi, ottenutidalla scissione di una proteina, dipende dalnumero e dalle dimensioni dei peptidi. Si puòscegliere una separazione cromatografica oelettroforetica. I peptidi possono essereseparati in HPLC o FPLC utilizzando un qualsiasitipo di cromatografia, scelta i base allecaratteristiche chimico-fisiche dei peptidi:fase inversa, scambio ionico, gel filtrazioneetc. Nel caso si sia ottenuto un numero limitato dipeptidi con dimensioni abbastanza elevate (inseguito ad esempio ad una digestione chimica ouna digestione enzimatica controllata), questipossono essere separati anche medianteelettroforesi in SDS su gel di poliacrilammide.I peptidi separati possono essere poi recuperatimediante elettroeluizione o elettroblotting. Isequenziatori automatici sono infatti in gradodi sequenziare anche un peptide trasferito suuna membrana di nylon o di PVDF.