Cromatografia su colonna - Università dell'Insubria
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Fasi in <strong>su</strong>ccessione:2) Separazione dei componenti la miscelaDopo l’isolamento della miscela daanalizzare, se ne devono separare isingoli componenti applicando alcuni deipiù comuni metodi di separazionecromatografica:‣ <strong>Cromatografia</strong> <strong>su</strong> strato sottile (TLC)‣ <strong>Cromatografia</strong> <strong>su</strong> <strong>colonna</strong>gravitazionale (varie fasi stazionarie)‣ <strong>Cromatografia</strong> <strong>su</strong> <strong>colonna</strong> ad altaefficienza (HPLC)‣ Gas-<strong>Cromatografia</strong> (GC)
METODI CROMATOGRAFICISi distinguono in base alla fase mobile eluenteliquida (LC) o gassosa (GC).• CROMATOGRAFIA LIQUIDA (LC)• Adsorbimento Liquido-Solido(TLC, Colonne)• Ripartizione Liquido-Liquido(HPLC)• Scambio Ionico• Esclusione molecolare(Gel permeation)• AffinitàGAS-CROMATOGRAFIA (GC)• Adsorbimento Gas-SolidoRipartizione • Gas-Solido
TIPI di CROMATOGRAFIE 1
TIPI di CROMATOGRAFIE 2
PRINCIPI di BASE delle SEPARAZIONICROMATOGRAFICHEIl più comune principio alla base delletecniche cromatografiche èla competizione tra forzeche tendono a “legare” alla fasestazionaria (fase fissa) i singolicomponenti della miscela da analizzare eforze che tendono a “staccare” ed eluirequesti componenti con la fase mobile(eluente).I diversi componenti della miscela sarannotrattenuti ed eluiti in modo diverso e quindiseparati lungo il sistema cromatograficoprescelto.
CROMATOGRAFIE LIQUIDEFasi mobili (liquidi organici) sia per‣ <strong>Cromatografia</strong> <strong>su</strong> strato sottile (TLC)‣ <strong>Cromatografia</strong> <strong>su</strong> <strong>colonna</strong>‣ <strong>Cromatografia</strong> <strong>su</strong> <strong>colonna</strong> ad altaprestazione (HPLC)La polarità della fase mobile determina laforza e quindi la velocità con cui un singolocomponente, della miscela da separare,viene eluito dal sistema cromatografico(viene cioè “staccato” dalla fase stazionariae “trascinato” con la fase mobile).E’ quindi determinante per differenziaredagli altri il movimento di ogni singoloprodotto da separare nel sistemacromatografico utilizzato.
SERIE ELUOTROPICASingoli solventi o miscele a varie composizioni.
TECNICHE CROMATOGRAFICHE<strong>Cromatografia</strong> pianaSu CartaLCLiquidoCromSu Strato Sottile (TLC)<strong>Cromatografia</strong> <strong>su</strong> <strong>colonna</strong>LiquidoCrom(LC)a Pressione Atmosferica(colonne gravitazionali)a Pressione Elevata (HPLC)Gas Crom(GC)Colonne ImpaccateColonne Capillari
TIPI di CROMATOGRAFIE :<strong>Cromatografia</strong> pianaLa cromatografia piana <strong>su</strong> strato sottile (TLC),o <strong>su</strong> carta, è una cromatografia liquida diadsorbimento liquido-solidosistema ascensionale: l’eluente liquido (lafase mobile) sale per capillarità <strong>su</strong>lla fasefissa solida (carta, silice o allumina<strong>su</strong>pportata <strong>su</strong> vetro o alluminio), nel <strong>su</strong>omovimento ascensionale scioglie, e quindistacca dall’interazione con la fase fissa,preferenzialmente le sostanze più solubili inesso, spostandole più in alto nella “lastrina”.Comunemente, sostanze meno polari“corrono” verso il fronte dell’eluente, mentrele più polari restano assorbite in basso.R f= retention factorR fè diverso per uno stesso prodotto aseconda dell’eluente utilizzato. Percaratterizzare in TLC un prodotto bisognaindicare accanto al <strong>su</strong>o R fil sistema eluentecon cui questa separazione è stata ottenuta.
<strong>Cromatografia</strong> <strong>su</strong> strato sottile (TLC)Piana, Liquido Crom.,Adsorbimento Solido-liquidoR f= retention factor è il parametro che mi<strong>su</strong>ra la“corsa” di ogni singolo prodotto rispetto alla“corsa” dell’eluente.
TIPI di CROMATOGRAFIE :Cromatografie <strong>su</strong> ColonnaLa cromatografia <strong>su</strong> <strong>colonna</strong> è un sistemaanalogo alla TLC, ma gravitazionale per cuile sostanze che “corrono” di più si trovanonel basso della <strong>colonna</strong> e vengono eluiteper prime.Vari tipi: gravitazionale, HPLC, GC.Caratteristica principale della GC è la fasemobile inerte: gas di trasporto, e dellaHPLC la pressione di esercizio.
<strong>Cromatografia</strong> <strong>su</strong> <strong>colonna</strong>Gravitazionale Liquido Crom.,Adsorbimento Solido-liquido
<strong>Cromatografia</strong> <strong>su</strong> <strong>colonna</strong> e TLC