Cromatografia su colonna - Università dell'Insubria

Fasi in successione:2) Separazione dei componenti la miscelaDopo l’isolamento della miscela daanalizzare, se ne devono separare isingoli componenti applicando alcuni deipiù comuni metodi di separazionecromatografica:‣ Cromatografia su strato sottile (TLC)‣ Cromatografia su colonnagravitazionale (varie fasi stazionarie)‣ Cromatografia su colonna ad altaefficienza (HPLC)‣ Gas-Cromatografia (GC)

METODI CROMATOGRAFICISi distinguono in base alla fase mobile eluenteliquida (LC) o gassosa (GC).• CROMATOGRAFIA LIQUIDA (LC)• Adsorbimento Liquido-Solido(TLC, Colonne)• Ripartizione Liquido-Liquido(HPLC)• Scambio Ionico• Esclusione molecolare(Gel permeation)• AffinitàGAS-CROMATOGRAFIA (GC)• Adsorbimento Gas-SolidoRipartizione • Gas-Solido

TIPI di CROMATOGRAFIE 1

TIPI di CROMATOGRAFIE 2

PRINCIPI di BASE delle SEPARAZIONICROMATOGRAFICHEIl più comune principio alla base delletecniche cromatografiche èla competizione tra forzeche tendono a “legare” alla fasestazionaria (fase fissa) i singolicomponenti della miscela da analizzare eforze che tendono a “staccare” ed eluirequesti componenti con la fase mobile(eluente).I diversi componenti della miscela sarannotrattenuti ed eluiti in modo diverso e quindiseparati lungo il sistema cromatograficoprescelto.

CROMATOGRAFIE LIQUIDEFasi mobili (liquidi organici) sia per‣ Cromatografia su strato sottile (TLC)‣ Cromatografia su colonna‣ Cromatografia su colonna ad altaprestazione (HPLC)La polarità della fase mobile determina laforza e quindi la velocità con cui un singolocomponente, della miscela da separare,viene eluito dal sistema cromatografico(viene cioè “staccato” dalla fase stazionariae “trascinato” con la fase mobile).E’ quindi determinante per differenziaredagli altri il movimento di ogni singoloprodotto da separare nel sistemacromatografico utilizzato.

SERIE ELUOTROPICASingoli solventi o miscele a varie composizioni.

TECNICHE CROMATOGRAFICHECromatografia pianaSu CartaLCLiquidoCromSu Strato Sottile (TLC)Cromatografia su colonnaLiquidoCrom(LC)a Pressione Atmosferica(colonne gravitazionali)a Pressione Elevata (HPLC)Gas Crom(GC)Colonne ImpaccateColonne Capillari

TIPI di CROMATOGRAFIE :Cromatografia pianaLa cromatografia piana su strato sottile (TLC),o su carta, è una cromatografia liquida diadsorbimento liquido-solidosistema ascensionale: l’eluente liquido (lafase mobile) sale per capillarità sulla fasefissa solida (carta, silice o alluminasupportata su vetro o alluminio), nel suomovimento ascensionale scioglie, e quindistacca dall’interazione con la fase fissa,preferenzialmente le sostanze più solubili inesso, spostandole più in alto nella “lastrina”.Comunemente, sostanze meno polari“corrono” verso il fronte dell’eluente, mentrele più polari restano assorbite in basso.R f= retention factorR fè diverso per uno stesso prodotto aseconda dell’eluente utilizzato. Percaratterizzare in TLC un prodotto bisognaindicare accanto al suo R fil sistema eluentecon cui questa separazione è stata ottenuta.

Cromatografia su strato sottile (TLC)Piana, Liquido Crom.,Adsorbimento Solido-liquidoR f= retention factor è il parametro che misura la“corsa” di ogni singolo prodotto rispetto alla“corsa” dell’eluente.

TIPI di CROMATOGRAFIE :Cromatografie su ColonnaLa cromatografia su colonna è un sistemaanalogo alla TLC, ma gravitazionale per cuile sostanze che “corrono” di più si trovanonel basso della colonna e vengono eluiteper prime.Vari tipi: gravitazionale, HPLC, GC.Caratteristica principale della GC è la fasemobile inerte: gas di trasporto, e dellaHPLC la pressione di esercizio.

Cromatografia su colonnaGravitazionale Liquido Crom.,Adsorbimento Solido-liquido

Cromatografia su colonna e TLC