Utilizzo degli adjuvanti nei vaccini per pesci (pdf 943kb)

Che cos’è un adjuvante?fi Dal latino adjuvare = aiutare.fi Amplifica la risposta immunitaria sia specificache aspecifica.fi Innesca il processo infiammatorio nel punto diinoculazione.fi Migliora l’esposizione dell’Ag.fi Amplifica l’effetto di antigeni di dimensioniridotte o difficili da produrre in grosse quantità(virus, LPS, OMP, ecc.).fi Determina un lento rilascio dell’antigeneprolungando nel tempo la copertura vaccinale.

Prime esperienze con adjuvantinei pescifi Krantz G.E., Reddecliff J.M., Heist C.E.:Development of antibodies against Aeromonassalmonicida in trout. J. Immunol., 1963, 91: 757-760.fi 1 parte di Arlacel (sorbitano sesquioleato)fi 9 parti di olio mineraleInoculato a Salmerini di fonte, trote fario e conigli.

Adjuvanti utilizzati nei pescifi Freund's complete adjuvant (CFA) *fi Freund's incomplete adjuvant *fi Potassium aluminum sulphate (alum) *fi Aluminium hydroxide*fi MineraI oil and sorbitan sesquioleate *fi Bacterial polysaccharides(L PS)fi Mycobacterium cell walls (MDP)fi Tunicate extract (ETE)fi Abalone extractfi Vegetal oil (manide oleato) *fi Titremax (USA) ** determinano effetti collaterali indesiderati

Immunostimolanti utilizzatinei pescifi Lysozyme aggregatesfi Quaternary ammonium compounds (detergents)fi Saponin (Quil A)fi Cytokines (interleukins)fi Vitamin C (ascorbic acid)fi Vitamin E (alpha-tocopherol Beta-1,3 glucans andhomologuesfi Chitosan (deacetylated chitin)fi Levamisolefi Candida utilisfi Saccharomyces cerevisiaefi FK-565 (Streptomyces olivaceogriseus sp . extract derivative )fi Immune stimulating çomplex (ISK)fi Macrogard (M-Glucan)fi Vitastim (Schizophylum commune extract)

Tipologia di vaccino con1. Water in oil (W/O)2. Oil in water (O/W)adjuvante oleoso3. Water in oil in water (W/O/W)fiUtilizzati per iniezione i.m. ma soprattuttoper i.p.fi Effetti collaterali variabili (1>3>2).fifiOlii vegetali meno irritanti dei minerali.Difficoltà di preparazione variabile.

Effetti collaterali indesiderati

Emulsione discreta(separazione inferiore al 10%)

Emulsione scorretta(inversione di fase)

Vaccini ad immersionecontenenti adjuvantifi Immunostimolante + nanoparticelle di diversodiametro (da 300 a 500 nm) (IMS Montanide)fi Utilizzato a diverse concentrazioni (5 - 7.5 e10%).fi Miscelato con Antigene (cellule batteriche intoto) in rapporto 1:1.fi Premiscela lasciata a “maturare” per 1 ora.fi Testata in carpe, trote e salmoni da 5 a 15 g.per immersione (1 minuto).fi Risultato sicuro con concentrazioni del 5 e 7.5% e tossico con concentrazioni del 10% diadjuvante.

SCHEMA VACCINALE

Esperienze IZSVe con oliminerali e vegetali

RISULTATI INFEZIONESPERIMENTALE 2004100%90%80%70%60%50%40%30%20%10%Mortalità cumulativa challenge (15/6/04) Lattococcosibiancobiancoadj 763adj 563BacterinBacterinvacc.763vacc.5630%16-giu17-giu18-giu19-giu20-giu21-giu22-giu23-giu24-giu25-giu26-giu27-giu28-giu29-giu30-giu01-lug02-lug03-lug04-lug05-lug

RISULTATI IZSVE 2004AllevamentoN. PescivaccinatiMortalità neiprimi 15 gg. (%)Mortalità finale(%)NoteA20.00010 *15.3* Episodio diVHSB28.000< 110.4Vaccinati inpresenza di L.RISULTATI IZSVE 2005A180.000-1-2Scarsi effetticollaterlaiB100.000-4-5No effetticollateraliC50.0001-2 *5* Episodio diVHSD15.000-6.5Episodio di VHSE16.000< 16-76.000 animalitrattati conmedicatoF20.00010 *15.3* Episodio diVHS

RISULTATI IZSVE 2006AllevamentoN. Pesci vaccinatiMortalità neiprimi 15 gg. (%)Mortalità finale(%)NoteA200.000adjuvante100.000 bacterin--2*8-9***Episodio diRTGE**EpisodiolattococcosiB120.000> 10*> 10*Episodio diVHSC100.000adjuvante> 10*> 10** Episodio diVHS e Mal.branchialeD70.000 adjuvante---30.000 adjuvante30 *30**trote di 30-40 g.En.d (consegnate400.000 dosicon adjuvante)n.d.n.d.n.d.Fn.d (consegnate400.000 dosicon adjuvante)n.d.n.d.n.d.

Effetti collateralifi Riscontrati fin dalle prime esperienze divaccinazione con l’utilizzo di molti adjuvanti.fi Più gravi con l’uso di idrossido di alluminio ocon olii minerali.fi Quasi assenti se si usano solo antigeni(cellula intera, bacterin, LPS, OMP, antigenidi nuova generazione, ecc.)fi Scala di Spielberg nel salmone (primotentativo di quantificare il danno).

SCALA DI VALUTAZIONE LESIONI(Spielberg modificata,2005)PUNTEGGIOLESIONI RISCONTRATE IN CAVITÀ ADDOMINALE012Assenti lesioniAderenze tra intestino terminale e pareteaddominale.Aderenze più marcate delle precedenti.3Aderenze molto marcate, coinvolgenti l'interopacchetto viscerale.4Presenza di granulomi.5Presenza di granulomi e/o pigmentazione scuranel muscolo.

PUNTEGGIO 3

PUNTEGGIO 3

PUNTEGGIO 3

PUNTEGGIO 4

PUNTEGGIO 4

PUNTEGGIO 5

PUNTEGGIO 5

PUNTEGGIO 5

LESIONI POST VACCINALI IN 150TROTE DI CIRCA 500 G.DOPO 4 MESI DALLA VACCINAZIONE50450N. soggetti403530252015123 45105011 2 3 4 5 6Tipologia punteggio

INDAGINE 2006fiEsaminati 221 soggetti.fiPeso medio: 550 g.fiTipologia: trota salmonata da filetto.fiEtà 17-20 mesi.fiData vaccinazione: 16/5/06 – 17/5/06.fiRilievo 31/8/2006.

RISULTATIPUNTEGGIONUMERO LESIONI RISCONTRATE IN CAVITÀ ADDOMINALE0 281 652 833 324 2* + 1*Lesioni riferibili alla sola parete

RISULTATIDistribuzione delle lesioni45403530%25201510500 1 2 3 4PUNTEGGIO

PRECAUZIONI PER RIDURRE ALMINIMO GLI EFFETTI COLLATERALIfi Vaccinare animali digiuni e in buono statodi salute.fi Attenzione al punto di inoculo.fi Non usare vaccini scaduti o già aperti enon utilizzati completamente.fi Buona emulsione del prodotto.fi Necessità di controlli rigidi durante laproduzione dei diversi lotti vaccinali.fi Disinfezione?! e/o cambio frequente degliaghi.fi Pulizia del fondo vasca + utilizzo direti/griglie per ridurre il contatto con losporco.