ALLERGEN Total IgE REF - Radim S.p.A.

• I campioni dei pazienti devono essere ottenuti tramite prelievo utilizzando le apposite provette o
una siringa sterile. Osservare le usuali precauzioni per il prelievo. Se si utilizza una siringa,
trasferire immediatamente il sangue nell’apposita provetta (tappo rosso piatto o separatore di
siero).
• Campioni di siero e plasma possono essere conservati per tutta la notte a 2...8°C; per periodi di
conservazione più lunghi congelare i campioni a -20°C.
• Evitare ripetuti congelamenti e scongelamenti.
9.0 PROCEDURA DEL TEST
Sia il metodo manuale che quello automatico, con strumenti Adaltis e Radim, necessitano dei seguenti
passaggi:
9.1 PREPARAZIONE DEI REAGENTI
• Lasciare che i reagenti e la micropiastra raggiungano la temperatura ambiente prima dell’uso.
• Riporre le strip non utilizzate nella confezione trasparente, con l’essiccante, richiudere
opportunamente e conservare a 2…8°C.
• Preparare la soluzione di lavaggio.
9.2 PROCEDURA DI ESECUZIONE DEL TEST
1. Preparare lo schema del dosaggio riservando i primi pozzetti per la curva di calibrazione.
2. Pipettare 150 µl di tampone di incubazione in tutti i pozzetti.
3. Pipettare 25 µl di calibratori e campioni nei pozzetti designati.
4. Agitare dolcemente la micropiastra per 10 secondi evitando di far fuoriuscire il contenuto dai
pozzetti.
5. Incubare a 37°C per 60 min. senza coprire la micropiastra.
6. Lavare 3 volte come descritto nella sezione 9.3 Note Procedurali.
7. Dispensare 100 µl di coniugato anti-IgE-Biotina nei pozzetti.
8. Incubare a 37°C per 30 min. senza coprire la micropiastra.
9. Lavare 3 volte come descritto nella sezione 9.3 Note Procedurali.
10. Dispensare 100 µl di coniugato HRP-Streptavidina nei pozzetti.
11. Incubare a 37°C per 30 min. senza coprire la micropiastra.
12. Lavare 3 volte come descritto nella sezione 9.3 Note Procedurali.
13. Dispensare 100 µl di Substrato HS nei pozzetti.
14. Incubare 15 min. a temperature ambiente.
15. Aggiungere 100 µl di Soluzione Bloccante nella stessa sequenza e frequenza adottate per
dispensare il Substrato e leggere a 450 e 405 nm con il filtro di riferimento selezionato a 620 nm.
Leggere i valori entro 60 min.
9.3 NOTE PROCEDURALI
• PROCEDURA DI LAVAGGIO. Si raccomanda l’utilizzo di un lavatore automatico per
micropiastre. Dopo il lavaggio sbattere delicatamente la micropiastra capovolta sulla carta
assorbente, per rimuovere qualsiasi residuo di liquido, nel caso in cui il lavatore non aspiri
completamente la soluzione di lavaggio. Una volta che il lavaggio è stato correttamente
programmato sugli strumenti Adaltis e Radim, questo passaggio non è necessario. Effettuare
almeno 3 lavaggi.
• TEMPERATURA DI INCUBAZIONE. La temperatura di incubazione per tutte le reazioni
immunologiche deve essere mantenuta costante a 37°C ± 1°C.
• DISPENSAZIONE DELLA SOLUZIONE DI SUBSTRATO HS
Per ottenere risultati precisi ed accurati è necessario dispensare il Substrato HS immediatamente
dopo il lavaggio.
A1002 – ALLERGEN Total IgE
M541 – Rev. 1 – 06/2010 – Pag. 6/32