ALLERGEN Total IgE REF - Radim S.p.A.

• Achtung: Proben, bei denen nicht nur Total IgE sondern auch spezifisches IgE gemessen werden
soll, sollten kein Heparin als Antikoagulans enthalten, die dies zu einer Unterschätzung der
Konzentration von spezifischem IgE führt.
• Bei Vollblutproben sollte das Serum oder Plasma so schnell wie möglich abgetrennt werden, um
eine Hämolyse zu vermeiden. Klümpchen müssen entfernt werden.
• Die Patientenproben sollten venös (ohne Verletzung) mit einem Vakuumröhrchen oder einer
sterilen Spritze entnommen werden. Dabei sollten die üblichen Vorsichtsmaßnahmen beachtet
werden. Falls eine Spritze verwendet wird, sollte die Probe sofort in ein Vakuumröhrchen
transferiert werden (flach und oben rot oder Serumseparator).
• Serum- und Plasmaproben können über Nacht bei 2-8°C gelagert werden. Zur längeren
Aufbewahrung sollten die Proben bei -20°C eingefroren werden.
• Wiederholtes Einfrieren und Auftauen vermeiden.
9.0 TESTDURCHFÜHRUNG
Sowohl die manuelle als auch die automatische Testdurchführung auf Adaltis und Radim Geräten
erfordern die folgenden Schritte.
9.1 VORBEREITUNG DER REAGENZIEN
• Alle Reagenzien und die Mikrotiterplatte auf Raumtemperatur bringen.
• Ungenutzte Teststreifen mit dem beigefügten Trockenmittel im sorgfältig verschlossenen
Plastikbeutel bei 2 - 8°C lagern.
• Die Waschlösung ansetzen.
9.2 PIPETTIER- UND INKUBATIONSSCHRITTE
1. Planung des Assay-Ansatzes: die ersten Wells für die Kalibratoren reservieren.
2. 150 µl Inkubationspuffer in alle Wells pipettieren.
3. 25 µl Kalibratoren und Proben in die entsprechenden Wells pipettieren.
4. Die Mikrotiterplatte 10 Sekunden vorsichtig schütteln, ohne dass der Inhalt aus den Wells
schwappt.
5. 60 Minuten bei 37°C inkubieren. Die Platte nicht abdecken.
6. Dreimal waschen. (Hinweise unter 9.3 beachten.)
7. 100 µl Anti-IgE-Biotin-Konjugat in alle Wells pipettieren.
8. 30 Minuten bei 37 °C inkubieren. Die Platte dabei nicht abdecken.
9. Dreimal waschen. (Hinweise unter 9.3 beachten.)
10. 100 µl HRP-Streptavidin-Konjugat in alle Wells pipettieren.
11. 30 Minuten bei 37°C inkubieren. Die Platte dabei nicht abdecken.
12. Dreimal waschen. (Hinweise unter 9.3 beachten.)
13. 100 µl Substrate HS in alle Wells geben.
14. 15 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren.
15. 100 µl Stopplösung in derselben Reihenfolge und demselben Timing wie bei der Substratzugabe
pipettieren und bei 450 nm mit einem Referenzfilter von 620 nm messen. Die Platte innerhalb
von 60 Minuten messen.
9.3 HINWEISE ZUR TESTDURCHFÜHRUNG
• DER WASCHVORGANG
Für die Waschvorgang wird der Gebrauch eines automatischen Platten-Washers empfohlen.
Nach dem Waschen die umgedrehte Platte auf saugfähigem Papier ausklopfen, um sämtliche
Flüssigkeitsreste aus den Wells zu entfernen, falls der Washer die Waschlösung nicht komplett
absaugt.
Die Adaltis und Radim Gerätes führen diese Waschschritte automatisch durch. Drei
Waschvorgänge sind erforderlich.
A1002 – ALLERGEN Total IgE
M541 – Rev. 1 – 06/2010 – Pag. 22/32