CagA IgG EIA WELL REF K6HPG - Radim S.p.A.

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− Agitare i campioni per inversione prima dell'uso. 7.1 Preparare i pozzetti per: Bianco, Calibratori e Campioni. 7.2 Dispensare 100 µL di Calibratori e Campioni precedentemente diluiti, nei rispettivi pozzetti. N.B.: i Calibratori non devono essere diluiti. 7.3 Dispensare 100 µL di Diluente dei Campioni nel pozzetto del Bianco. 7.4 Incubare per 60±5 minuti a 37±2°C, coprendo la micropiastra con il copripiastra adesivo fornito nel kit. 7.5 Effettuare 4 lavaggi con un volume di 350 µL per pozzetto, impiegando la Soluzione di Lavaggio diluita. Aspirare accuratamente il liquido da tutti i pozzetti. 7.6 Dispensare 100 µL di Coniugato Enzimatico in tutti i pozzetti. 7.7 Incubare per 30±2 minuti a 37±2°C, coprendo la micropiastra con il copripiastra adesivo fornito nel kit. 7.8 Lavare i pozzetti come al punto 7.5. 7.9 Dispensare 100 µL di Cromogeno in tutti i pozzetti. 7.10 Incubare per 15 minuti a 37±2°C al riparo dalla luce. 7.11 Dispensare 100 µL di Reagente Bloccante in tutti i pozzetti. 7.12 Leggere la densità ottica delle soluzioni a 450 nm in uno spettrofotometro preferibilmente bicromatico con lunghezza d'onda di riferimento a 620 nm (azzerando lo strumento con il Bianco). Nel caso di estinzione in overflow, utilizzare la lettura spettrofotometrica a 405 nm. La lettura deve essere effettuata entro 15 minuti dal termine del dosaggio. * Qualora si utilizzasse nel procedimento operativo uno strumento automatico per micropiastre RADIM e/o SEAC, far riferimento al relativo manuale. 8. SCHEMA DEL DOSAGGIO: vedi p. 23 9. CALCOLO DEI RISULTATI * K6HPG –CagA IgG EIA WELL M197 – Rev.9 – 06/2008 – Pag. 8/ 24
Disegnare la curva su carta millimetrata, riportando sull'asse delle ascisse le concentrazioni dei calibratori e su quello delle ordinate l'assorbanza ottenuta per ciascun calibratore. Interpolando sulla curva di calibrazione le assorbanze relative a ciascun campione, si otterranno le corrispondenti concentrazioni di IgG anti- CagA, espresse in RU/mL. − I campioni con valori inferiori a 10 RU/mL sono da considerare non reattivi per gli anticorpi IgG anti-CagA. − I campioni con valori compresi tra 10 e 15 RU/mL sono da considerare debolmente reattivi. − I campioni con valori superiori a 15 RU/mL sono da considerare reattivi per gli anticorpi IgG anti-CagA. * Nel caso si utilizzi uno strumento automatico per micropiastre RADIM e/o SEAC, la lettura spettrofotometrica è eseguita automaticamente a 3 lunghezze d'onda: 450, 405 e 620 nm, permettendo l'ampliamento del range di lettura. 9.1 Esempio di Calcolo I valori sotto riportati debbono essere considerati unicamente un esempio e non devono essere utilizzati in luogo dei dati sperimentali. Descrizione Assorbanza 450 nm IgG anti-CagA Calibratore 0 RU/mL 0.030 Calibratore 15 RU/mL 0.225 Calibratore 30 RU/mL 0.430 Calibratore 60 RU/mL 0.815 Calibratore 120 RU/mL 1.540 Calibratore 240 RU/mL 2.210 Campione 0.935 70 RU/mL Interpolando sulla curva di calibrazione, il campione dosato risulta avere un titolo di IgG anti-CagA di 70 RU/mL. 9.2 Criteri di Accettazione K6HPG –CagA IgG EIA WELL M197 – Rev.9 – 06/2008 – Pag. 9/ 24
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